مقالة منهجية

أسلوب للحصول على مقاطع سامسونج المسلسل من الكائنات المجهرية في مجهر إلكتروني

DOI:

10.3791/56235

⸱

يناير 17, 2018

 , 
1Medical Mycology Research Center, Chiba University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه الدراسة إجراءات موثوقة وسهلة للحصول على مقاطع سامسونج المسلسل من الكائنات الدقيقة دون معدات باهظة الثمن في مجهر إلكتروني.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مراقبة الخلايا ومكونات الخلية في الأبعاد الثلاثة في عالية التكبير في مجهر إلكتروني يتطلب إعداد المقاطع سامسونج التسلسلي للعينة. على الرغم من أن إعداد المقاطع سامسونج المسلسل يعتبر أن تكون صعبة للغاية، فمن السهل بدلاً من ذلك إذا تم استخدام الطريقة الصحيحة. وفي هذه الورقة نعرض إجراء خطوة بخطوة للحصول بأمان على أبواب سامسونج المسلسل من الكائنات الحية الدقيقة. النقاط الرئيسية لهذا الأسلوب: 1) استخدام جزء كبير من العينة وضبط حافة السطح وسكين العينة بحيث تكون موازية لبعضها البعض؛ 2) قطع مقاطع المسلسل في المجموعات وتجنب صعوبة في الفصل بين الفروع باستخدام زوج من خيوط الشعر عند استرداد مجموعة من مقاطع المسلسل على الشبكات الشق؛ 3) استخدام 'حلقة عقد قسم' وتجنب الخلط بين ترتيب مجموعات القسم؛ 4) استخدام 'حلقة رفع مستوى سطح الماء' وتأكد من المقاطع متوضعة في قمة المياه وأن اتصال الشبكة أولاً، بغية وضعها في الموضع المطلوب في الشبكات؛ 5) استخدام الفيلم الدعم على رف ألمنيوم وجعله أسهل لاسترداد الأقسام المتعلقة بالشبكات وتجنب التجاعيد الفيلم الدعم؛ و 6) استخدام أنبوب المصبوغة وتجنب كسر دعم الأفلام بطريق الخطأ مع ملاقط. هذا الأسلوب الجديد من الحصول على المقاطع سامسونج المسلسل دون صعوبة. الأسلوب الذي يجعل من الممكن لتحليل الهياكل الخلية من الكائنات الحية الدقيقة بدقة عالية في ثلاثي الأبعاد، والذي لا يمكن تحقيقه باستخدام أسلوب أولتراميكروتومي جمع الأشرطة التلقائية والوجه كتلة المسلسل أو تركيز أيون شعاع المسح الضوئي المجهر الإلكتروني.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأسلوب تقطيع سامسونج المسلسل السليم أمر لا غنى عنه لدراسة الخلايا ومكونات الخلية ثريديمينسيونالي على المستوى المجهري الإلكترون. لدينا دراسة ديناميات المغزل القطب الهيئة في دورة خلية من خلايا الخميرة، وكشفت عن التغييرات الشكلية لهذه أولتراستروكتوري خلال دورة الخلية والوقت من الازدواجية1،2،3، 4،5. في عام 2006، ونحن صاغ كلمة جديدة 'ستروكتومي' عن طريق الجمع بين 'هيكل' و '-ome'، ويعرف أنه 6،'معلومات كمية وثلاثي الأبعاد الهيكلية خلية كاملة على المستوى المجهري الإلكترون'7.

تحليل ستروكتومي، الأمر الذي يتطلب تقنية تقطيع سامسونج المسلسل، وجد أن خلية خميرة Saccharomyces cerevisiae و اكسوفيالا ديرماتيتيديس ريبوسوم 200,000 حوالي7،8، الإشريكيّة القولونية خلية 26,000 ريبوسوم9، خلية بكتريا السل قد 1,700 ريبوسوم10 والبكتيريا اللولبية ميوجن ريبوسوم فقط 30011. تعتبر هذه المعلومات مفيدة في تقدير معدل النمو في كل كائن حي، ولكن أيضا في تحديد الأنواع9ليس فقط.

تحليل ستروكتومي علاوة على ذلك، أدت إلى اكتشاف كائن جديد؛ تم العثور على ميوجينينسيس باراكاريون في أعماق البحار قبالة ساحل اليابان، هيكل الخلية التي كانت وسيطة بين أولئك من بدائيات النوى وحقيقيات النوى12،13،،من1415. في الوقت الحاضر، تعتبر تقنية تقطيع سامسونج المسلسل يكون من الصعب أنه سيستغرق وقتاً طويلاً لإتقان. في هذه الدراسة، قمنا بتطوير أسلوب موثوق فيه أي شخص يمكن أن تؤدي إلى تمزيقها سامسونج المسلسل دون صعوبة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: العينات المستخدمة في هذه الدراسة تم تجميد الكائنات المجهرية، سرعة تجميد البروبان في النتروجين السائل، المستبدلة في الأسيتون المحتوية على أكسيد الاوزميوم 2 في المائة، وجزءاً لا يتجزأ من الإيبوكسي الراتنج1،2،3، 4،5،،من67،،من89،10،11،12،13 ،،من1415،16،،من1718.

1-إعداد الدعم السينمائي (الشكل 1-3)

ملاحظة: مستعدة اللون الفضي فورمفار دعم الفيلم باستخدام أسلوب المدلى بها على الزجاج19.

  1. إضافة 100 مل من 1.5% فورمفار في كلوريد الإيثيلين لجهاز صنع فورمفار (الشكل 1). تراجع نصف شريحة زجاجية (76 ملم × 26 مم × 1.3 ملم) في حل فورمفار في العمود العلوي من الجهاز عن طريق الضغط على الحل مع الهواء من خلال 'أ' باستخدام كرة مطاطية19.
    1. استنزاف الحل من العمود بفتح محبس الحنفية الثلاثية والإفراج عن الهواء من خلال 'ب' لتخفيف الضغط. تأخذ الشريحة الزجاجية من الجهاز والجافة في الهواء لشكل فيلم على السطح الشريحة الزجاجية. استخدام مصباح المتوهجة التعجيل بتجفيف الفيلم فورمفار.
  2. بعد إلغاء إيقاف أربع حواف الفيلم على الشريحة الزجاجية بشفرة حلاقة (الشكل 2a)، والتنفس على شريحة لتسهيل فصل الفيلم عن شريحة20، تطفو قبالة الفيلم على المياه بغمر الشريحة الزجاجية في المياه ببطء في زاوية أفقية منخفضة (حوالي 10°، الشكل 2).
  3. حلج القطن يصل الفيلم فورمفار من الماء رف ألومنيوم (30 مم × 25 مم × 3 مم) باستخدام ذات ثقوب (قطرها 4 ملم) (الشكل 3a). الحفاظ على الرف مع الفيلم فورمفار في مجفف حتى استخدام (الشكل 3b).

2-تقليم كتلة العينة مع شفرة تشذيب بالموجات فوق الصوتية و شفرة حلاقة 21 تحت ستيريوميكروسكوبي (الشكل 4)

  1. تأكد من أن هناك خلايا على سطح الكتلة بمراقبة غيض الكتلة مع مجهر ضوء (الشكل 4 أ).
  2. جبل كتلة العينة في تشاك (كتلة حامل)، وجبل تشاك على تشذيب مرحلة21 (الشكل 4 باء). ولدى هذه المرحلة التشذيب إليه إضاءة من الجزء الخلفي العينة.
  3. تقليم كتلة إلى حجم 0.7 مم × 1.0 مم (4 أرقام ج، د 5). منذ الراتنج الإيبوكسي من الصعب جداً، تقليم كتل استخدام شفرة تشذيب بالموجات فوق الصوتية أول مرة. شفرة التشذيب بالموجات فوق الصوتية آلة أدخلت حديثا، ويتم تقسيم القطع بسهولة. ثم تقليم كتلة أخرى بشفرة حلاقة. قص الكتف واحد للاحتفال باتجاه قطع (انظر الشكل 5 د، الشكل 8).

3-تقليم كتلة العينة بسكين الماس باستخدام مبضع (الشكل 5)

  1. تعيين كتلة العينة تشاك في حامل أولتراميكروتومي عينة. ضع العينة 90 درجة عكس عقارب الساعة ضد الموقف الفعلي عند تقطيع سامسونج المسلسل إجراء (انظر الشكل 5 د).
  2. قطع سطح الكتلة بسكين تشذيب الماس (انظر الشكل 5 د). تعيين حافة سكين الماس موازية للوجه كتلة العينة، وخفض الحد الأدنى من سطح العينة حتى لا يؤدي إلى فقدان أي عينة (الشكل 5 د).
    ملاحظة: تتم هذه الخطوة لتنعيم سطح العينة. ترك الجزء من سطح العينة جزء سليم سليمة (ولهذا الجزء ليست مشرقة مثل مرآة، الرقم 5 د)، حتى لا يؤدي إلى فقدان أي جزء من العينة لتقطيع المسلسل. يرجع ذلك إلى أن يتم كشفها العينة على سطح الكتلة.
  3. ضع مرآة (قص ميسا، M) على المسرح سكين لرصد قطع كتلة العينة (الشكل 5 ج).
  4. قطع الحافة اليسرى (ويصبح هذا الجانب العلوي،، الرقم 5 دالعينة في تقطيع المسلسل) كتلة باستخدام سكين التشذيب بالتناوب مرحلة سكين 30 ° إلى اليسار (الشكل 5a).
  5. قص الوجه كتلة في حوالي 100 ميكرون من الحافة اليسرى للعينة (ويصبح هذا الجانب السفلي من العينة في تقطيع المسلسل، الشكل 5 د) عن طريق تناوب المرحلة سكين 30 درجة إلى اليمين (الشكل 5 (ب)).
    ملاحظة: سوف يتم خفض المقاطع المسلسل من الجزء ضئيلة من العينة حوالي 90 نانومتر حوالي 1 مم في الحجم. سيتم استخدام جزء كبير لضبط سطح العينة وحافة سكين مثل أن تكون متوازية. وبعد تعديل سطح العينة لتكون متوازية على حافة سكين، ستتم إزالة جزء كبير مع شفرة حلاقة. بقطع الطرفين العلوي والسفلي من العينة باستخدام مبضع، أصبح كلا الجانبين من العينة السلس والضبط موازية لبعضها البعض (الشكل 5 د)، هو أمر ضروري للحصول على مقاطع الشريط مباشرة ومتواصلة.

4-تعديل على حافة السطح وسكين العينة بحيث أنهم يواجهون موازية لبعضها البعض 21

  1. إزالة سكين التشذيب، واستدارة كتلة العينة 90° باتجاه عقارب الساعة.
  2. تعيين سكين تقطيع سامسونج إلى مرحلة السكين.
  3. ضبط سطح العينة وحافة السكين بحيث أنهم يواجهون موازية لبعضها البعض باستخدام جزء كبير من سطح العينة.
    ملاحظة: يتم استخدام جزء كبير من العينة للتكيف نظراً على وجه القطع لتقطيع المسلسل صغيرة جداً، مما يجعل من الصعب على ضبط حافة السطح وسكين العينة باستخدام هذا الجزء فقط، لا سيما في الاتجاه العمودي. وهكذا، باستخدام جزء كبير من العينة يسهل التكيف.

5-نشر الحل النيوبرين على كتلة العينة (الشكل 6)

  1. وضع تشاك العينة في نفس الموقف بالموقف الأصلي، تطبيق الشريط تشاك وحامل تشاك مبضع وقطع في الحدود (الشكل 6a).
  2. أخذ العينة تشاك من مبضع، ووضعها تحت ستيريوميكروسكوبي (الشكل 6b). اقتطاع جزء كبير من العينة مع شفرة حلاقة، تاركاً الجزء ضئيلة، من الذي سيتم الحصول على مقاطع المسلسل.
  3. استخدام ماصة باستور، إسقاط حوالي 1 ميليلتر الحل النيوبرين 0.5% (الشكل 6b) على العينة التي ستستخدم لتقطيع المسلسل، جعل لاصقة الجانبين القسم. وتشمل العينة كاملة مع الحل النيوبرين. استيعاب الحل النيوبرين الزائدة فورا بقطعة من ورق الترشيح التي وضعت بالقرب من العينة. الحصول على يط مقاطع ضروري لالتقاط صور لأقسام الخلية المسلسل، وغراء النيوبرين مفيد جداً للخلاف في الفروع معا.
  4. إعداد شبكات 3-الشق (أحجام الشقوق: الأوسط، 0.4 مم × 2.2 ملم، كلا الجانبين 0.2 مم × 2.2 مم) (الشكل 6 ج) لالتقاط المقاطع المسلسل بالانحناء مقبض الشبكات إلى 60 °، علاج الشبكات مع الحل النيوبرين 0.5%، ومما يجعل ماء بالشبكات توهج التفريغ22.

6-جعل أبواب المسلسل (الشكل 7-9)

  1. تشاك مكان كتلة العينة مرة أخرى في مبضع في نفس موقف 5.1 (الشكل 6a) بمحاذاة أجزاء مسجلة. هذا يبقى الوجه كتلة وحافة السكين موازية تماما لبعضهما البعض. ثم جلب سكين القرب من العينة.
  2. ملء القارب السكين بالماء.
  3. وتغطي مبضع مع غطاء من بلاستيك لمنع تدفق الهواء (الشكل 7).
    ملاحظة: تدفق الهواء خلال تمزيقها سامسونج واسترجاع الأقسام غالباً ما يسبب مشاكل. الغطاء من البلاستيك له ثلاث فتحات: فتحه واحدة لعدسات مجهر، واثنين من الثقوب للأسلحة للسماح للعملية بينما الغطاء على. مسند خشبي يستخدم لوضع الأسلحة أثناء القيام بالعمل الحساسة، مثل استرداد المقاطع المسلسل مع الشبكات. مسند خشبي يوضع على جداول مختلفة من الجدول مبضع (الشكل 7، أسهم)، حتى لا يؤدي إلى إحالة الاهتزاز لليدين للمشغل إلى مبضع.
  4. بدء قطع العينة على 200 نانومتر قسم سمك (الشكل 8). الإعداد في 200 نانومتر سمك سيوفر الوقت في جلب السكين على سطح العينة.
  5. بعد أن يتم قطع المقطع الأول، تعيين سمك مقطع إلى 70 نانومتر (الشكل 8).
  6. عندما يصل عدد المقاطع المسلسل إلى 20 (دقة حديثة، بعد وصول الشريط حوالي 1.8 مم؛ عدد أقسام يختلف اعتماداً على عرض المقاطع)، تعيين سمك الباب إلى 10 نانومتر (الشكل 8) مع الاستمرار في قص.
    ملاحظة: منذ مبضع لا يمكن قطع 10 نانومتر سميكة المقاطع، يظهر لا قسم جديد، وأصبح فصل المقاطع بقطع سابقا من حافة السكين. من المهم الحصول على مجموعات المقاطع المنفصلة (الشكل 9) لالتقاط مقاطع المسلسل لتجنب صعوبة في فصل المقاطع يدوياً باستخدام زوج من خيوط الشعر. نظراً لمجال الرؤية في المجهر الإلكتروني انتقال 2.0 مم، ينبغي المقاطع 1.8 مم طويل على الأكثر.
  7. تعيين سمك مقطع إلى 60 نانومتر (الشكل 8). هذا سوف ينتج 70 نانومتر المقاطع (الشكل 8) لأن الجهاز سيتم إضافة سمك nm 10 السابقة.
  8. تعيين سمك مقطع إلى 70 نانومتر (الشكل 8) ومواصلة خفض حتى يتم الحصول على مقاطع طوله 1.8 ملم.
  9. كرر 6.6-6.8 حتى يتم الحصول على خمسة أقسام طويلة 1.8 مم (الشكل 9). نحن عادة ما جعل المجموعات الخمس في القسم منذ هناك خمس العينة أصحاب في المجهر الإلكتروني انتقال المتوفرة في المختبر لدينا، ولكن خمسة ليس الحد الأقصى.

7-التقاط المقاطع المسلسل (الشكل 10-12)

  1. ضع 'قسم-عقد حلقة'23 (القطر الداخلي للحلقة: 5.0 ملم) (الشكل 10a) على مجموعة القسم الثالث (الشكل 10 باء).
    ملاحظة: من الضروري لاسترداد المقاطع حسب ترتيب على تقطيع لالتقاط الصور بالترتيب الصحيح. بيد أن هناك خمس مجموعات المقاطع على متن القارب سكين، أنه كثيرا ما يحصل الخلط بين المجموعات التي يتم فيها. عن طريق وضع الحلقة في المجموعة الثالثة، يصبح من الواضح أن هاتين المجموعتين قريبة من المشغل الأولى والثانية، وهما بعيدة من المشغل هي المجموعات الرابعة والخامسة (الشكل 10 باء). سيمنع هذا الخلط بالترتيب.
  2. ضع 'رفع مستوى سطح الماء حلقة'23 (وسرل، القطر الداخلي للحلقة: 4.0 ملم) (الشكل 11 ألف) في مرحلة سكين (الشكل 11 باء). سوف وسرل الوقوف بحزم في مرحلة سكين نظراً لأنها مجهزة بمغناطيس في الجزء السفلي.
    1. مكان الحلقة وسرل فقط فوق مقاطع المسلسل بالانتقال رمح والتعامل. أقل في الحلقة وسرل إلى سطح الماء حيث أن التكرار الحلقي يطوق المقاطع.
    2. دفع الحلقة أسفل عن طريق تحويل المسمار أسفل حيث أنه سيتم رفع سطح الماء بالتوتر السطحي (أرقام 11 ج-د). نقل المقطع إلى وسط الحلقة ووضعه على قمة المياه وضبط اتجاه المقطع باستخدام حبلا شعر21.
    3. التقاط مجموعات المقاطع التي لمسها مع عارية شق-شبكة، الذي عقد بملاقط وأبقى موازية لسطح الماء (د الشكل 11). من المهم للمقاطع اتصال الشبكة أولاً، لا الماء، لوضع المقاطع أدق على مركز الشبكة (د الشكل 11).
  3. وضع الشبكات مع الأقسام جنبا إلى جنب مع قطره صغيرة من الماء على فورمفار الدعم السينمائي16 (الشكل 12)، وإزالة المياه الزائدة باستخدام ورق الترشيح.
    ملاحظة: تجعد الفيلم الدعم مشكلة غالباً عندما يتم انتقاؤها المقاطع إلى استخدام شبكة مع دعم الفيلم لأنه يمس غشاء (المقاطع) غشاء (دعم فيلم) مباشرة. مشكلة الحصول على التجاعيد في الفيلم الدعم انخفض انخفاضا كبيرا بوضع شبكة الحاملة للقسم جنبا إلى جنب مع قطره صغيرة من الماء على الفيلم الدعم فورمفار16.

8-تلطيخ الأبواب16،24 (رقم 13)

  1. بعد المقاطع هي تجفف تماما، المسيل للدموع الفيلم فورمفار من حول الشبكات، وإزالة الشبكات إذ تضع المقاطع.
  2. تعيين الشبكات في الاخدود الأنبوبة المصبوغة16 في الترتيب الصحيح (رقم 13)، ووصمة عار الأقسام مع اليورانيل خلات والرصاص سترات24.
    ملاحظة: يوجد أخدود عميق 0.6 مم على طول محور الأنبوب الطويل قطع بشفرة حلاقة. الأنبوب مفيد لمنع الكسر العرضي لدعم الأفلام عند استخدام الملقط، نظراً للتعامل مباشرة مع شبكات ليس من الضروري أثناء عملية الغسيل والمصبوغة16.

9-مراقبة أقسام المسلسل (الشكل 14)

  1. تعيين الشبكات 5 في حامل عينات متعددة بالترتيب الصحيح (الرقم 14a)، توجيه المحور الطويل لشق شبكة متعامدة على محور صاحب العينة. لم يكن لديك المقابض (رؤوس) للشبكات أن تقطع، لأنه لا يمس 'المثبتون الشبكة' المقابض.
  2. إصلاح الشبكات مع 'الشبكة المثبتون' (الرقم 14b) وإدراج صاحب العينة في المجهر الإلكتروني الإرسال.
    ملاحظة: أنه مفيد غالباً لالتقاط صور تضخم منخفضة لجميع أقسام الخلية (الشكل 15) تجد مثيرة للاهتمام من الكائنات الدقيقة أو الخلايا في حالة جيدة مع أي تلوث ومع التثبيت جيدا، قبل التقاط الصور للخلية الهدف.
  3. التقاط صور للخلايا الهدف في جميع أقسام الخلية في التكبير عالية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا البروتوكول، استخدمت فتحه ثلاث شبكات لالتقاط مقاطع المسلسل. الشبكات مصنوعة من النيكل أو النحاس. يتم وضع المقاطع المسلسل في الشق الأوسط. الشقوق على جانبي ضرورية لعرض المقاطع عند التقاط لهم مع الشبكة. للحفاظ على الشبكات بالتوازي مع مقاطع المسلسل عند التقاط لهم مع ملاقط (د الشكل 11)، عازمة التعامل مع (الشكل 6 ج، حق). مقبض صغير مفيد لمنع الانحناء من الجزء الرئيسي للشبكة، الذي يسبب مشاكل خطيرة في التقاط المقاطع، ومنع إسقاط الأقس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتطلب الأسلوب الذي قدم هنا لا معدات غالية الثمن. أنه يتطلب فقط رف ألومنيوم (الشكل 3) وشق ثلاث شبكات (الشكل 6 ج) وقسم-عقد الحلقات (الشكل 10a)، وحلقة رفع مستوى سطح الماء (الشكل 11 ألف) وأنبوب المصبوغة (الشكل 13). وهناك العديد من الميزات لهذا الأسلوب. يتم استخدام جزء كبير من العينة لضبط حافة السطح وسكين العينة بحيث أنهم يواجهون موازية لبعضها البعض. يتم قطع المقاطع المسلسل في م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن نشكر بإخﻻص كيتا شيجييو على اقتراحات قيمة ومناقشة. ونشكر أيضا جون واكستين Sumire للقراءة الحرجة من المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
جهاز صنع FormvarNisshin EM Co. Ltd. ، طوكيو652W 180 × D 180 × H 300 مم
شريحة زجاجيةMatsunami Co. Ltd. ، أوساكا-76 × 26 × 1.3 مم
رف ألومنيوم مع ثقوب 4 ممNisshin EM Co. Ltd. ، طوكيو658W 30 × D 25 × H 3 مم ، راجع هذه الورقة
StereomicroscopeNikon Co. Ltd. ، طوكيو-SMZ645
إضاءة LED للمجههرالمجسم نيكون المحدودة ، طوكيو-SM-LW61 Ji
مرحلة التشذيبSunmag Co.Ltd. ، آلية إمالة طوكيومجهزة ، الرجوع إلى هذه الورقة
إضاءة LED لمرحلة التشذيبSunmag Co.Ltd. ، طوكيو-الرجوع إلى هذه الورقة
شفرة التشذيب بالموجات فوق الصوتيةNisshin EM Co. Ltd. ، طوكيو5240EM-240 ، الرجوع إلى هذه الورقة
سكين الماس لتقليمشركة Diatome Co. Ltd. ، سويسرا-45 درجة ؛
سكين الماس لتقسيم رقيقةجدا Diatome Co. Ltd. ، سويسرا-45 درجة ؛
UltramicrotomeLeica Microsystems ،Vienna-UltracutS
Mesa cutLeica Microsystems ، ViennaMirror
0.5٪ Neoprene W solutionNisshin EM Co. Ltd. ، طوكيو605
شبكة النيكل الخاصة ذات 3 شقوقNisshin EM Co. Ltd. ، طوكيو2458الرجوع إلى هذه الورقة
شبكة نحاسية خاصة ذات 3 شقوقNisshin EM Co. Ltd. ، طوكيو2459ارجع إلى هذه الورقة
حلقة عقد القسمNisshin EM Co. Ltd.، طوكيو526الرجوع إلى هذه الورقة
حلقة رفع سطح الماءNisshin EM Co. Ltd.، طوكيو527الرجوع إلى هذه الورقة
أنبوب تلطيخNisshin EM Co. Ltd.، طوكيو463ارجع إلى هذه
الورقة حامل متعدد العيناتJEOL Co. Ltd.،Tokyo-EM-11170
JEM-1400JEOL Co. Ltd. ،طوكيو -مجهر إلكتروني ناقل
الحركة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Yamaguchi, M., et al. The spindle pole body duplicates in early G1 phase in a pathogenic yeast Exophiala dermatitidis: an ultrastructural study. Exp. Cell Res. 279, 71-79 (2002).
  2. Yamaguchi, M., et al. The spindle pole body of the pathogenic yeast Exophiala dermatitidis: variation in morphology and positional relationship to the nucleolus and the bud in interphase cells. Eur. J. Cell Biol. 82, 531-538 (2003).
  3. Yamaguchi, M. Quantitative and dynamic ultrastructure of yeast cells by electron microscopy. Recent Res. Dev. Microbiology. 8, 219-243 (2004).
  4. Yamaguchi, M., Biswas, S. K., Ohkusu, M., Takeo, K. Dynamics of the spindle pole body of the pathogenic yeast Cryptococcus neoformans examined by freeze-substitution electron microscopy. FEMS Microbiol. Lett. 296, 257-265 (2009).
  5. Yamaguchi, M., et al. The spindle pole body of the pathogenic yeast Cryptococcus neoformans: variation in morphology and positional relationship with the nucleolus and the bud in interphase cells. J. Electron Microsc. 59, 165-172 (2010).
  6. Yamaguchi, M. Structome of Exophiala yeast cells determined by freeze-substitution and serial ultrathin sectioning electron microscopy. Curr. Trends Microbiol. 2, 1-12 (2006).
  7. Yamaguchi, M., et al. Structome of Saccharomyces cerevisiae determined by freeze-substitution and serial ultrathin sectioning electron microscopy. J. Electron Microsc. 60, 321-335 (2011).
  8. Biswas, S. K., Yamaguchi, M., Naoe, N., Takashima, T., Takeo, K. Quantitative three-dimensional structural analysis of Exophiala dermatitidis yeast cells by freeze-substitution and serial ultrathin sectioning. J. Electron Microsc. 52, 133-143 (2003).
  9. Yamada, H., et al. Structome analysis of Escherichia coli. cells by serial ultrathin sectioning reveals the precise cell profiles and the ribosome density. Microscopy. 66, 283-294 (2017).
  10. Yamada, H., Yamaguchi, M., Chikamatsu, K., Aono, A., Mitarai, S. Structome analysis of virulent Mycobacterium tuberculosis, which survives with only 700 ribosomes at density per 0.1 fl cytoplasm. PLoS ONE. 10, e0117109(2015).
  11. Yamaguchi, M., et al. High-voltage electron microscopy tomography and structome analysis of unique spiral bacteria from the deep sea. Microscopy. 65, 363-369 (2016).
  12. Yamaguchi, M., et al. Prokaryote or eukaryote? A unique microorganism from the deep-sea. J. Electron Microsc. 61, 423-431 (2012).
  13. Yamaguchi, M. Ultrathin sectioning of the Myojin parakaryote discovered in the deep sea. Cytologia. 78, 333-334 (2013).
  14. Yamaguchi, M., Worman, C. O. Deep-sea microorganisms and the origin of the eukaryotic cell. Jpn. J. Protozool. 47, 29-48 (2014).
  15. Yamaguchi, M. An electron microscopic study of microorganisms: from influenza virus to deep-sea microorganisms. JSM Mycotoxins. 65, 81-99 (2015).
  16. Yamaguchi, M., Okada, H., Namiki, Y. Smart specimen preparation for freeze-substitution and serial ultrathin sectioning of yeast cells. J. Electron Microsc. 58, 261-266 (2009).
  17. Yamaguchi, M., Biswas, S. K., Suzuki, Y., Furukawa, H., Takeo, K. Three-dimensional reconstruction of a pathogenic yeast Exophiala dermatitidis cell by freeze-substitution and serial sectioning electron microscopy. FEMS Microbiol. Lett. 219, 17-21 (2003).
  18. Kozubowski, L., et al. Ordered kinetochore assembly in the human pathogenic basidiomycetous yeast, Cryptococcus neoformans. mBio. 4, e00614-e00613 (2013).
  19. Yamaguchi, M., Adachi, K. Specimen support. Guide Book for Electron Microscopy. The Japanese Society of Microscopy, , 2nd ed, Kokusaibunkeninsatsusya, Tokyo. 52-57 (2011).
  20. Hayat, M. A. Support films. Principles and Techniques of Electron Microscopy: Biological Application. , 4th ed, Cambridge, Univ. Press. Cambridge, United Kingdom. 216(2000).
  21. Yamaguchi, M., Kita, S. Ultrathin sectioning. Guide Book for Electron Microscopy. The Japanese Society of Microscopy, , 2nd ed, Kokusaibunkeninsatsusya, Tokyo. 40-52 (2011).
  22. Yamaguchi, M., Aoyama, T., Yamada, N., Chibana, H. Quantitative measurement of hydrophilicity/hydrophobicity of the plasma-polymerized naphthalene film (Super support film) and other support films and grids in electron microscopy. Microscopy. 65, 444-450 (2016).
  23. Kita, S. Reliable method for obtaining serial ultrathin sections using new small tools. Kenbikyo. 46, in Japanese 253-257 (2011).
  24. Yamaguchi, M., Shimizu, M., Yamaguchi, T., Ohkusu, M., Kawamoto, S. Repeated use of uranyl acetate solution in section staining in transmission electron microscopy. Plant Morphology. 17, 57-59 (2005).
  25. Hayworth, K. J., Kasthuri, N., Schalek, R., Lichtman, J. W. Automating the collection of ultrathin serial sections for large volume TEM reconstructions. Microsc. Microanal. 12, Suppl . 2. 86-87 (2006).
  26. Hildebrand, D. G. C., et al. Whole-brain serial-section electron microscopy in larval zebrafish. Nature. 545, 345-349 (2017).
  27. Denk, W., Horstmann, H. Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure. PLoS Biol. 2, e329(2004).
  28. Heymann, J. A. W., et al. Site-specific 3D imaging of cells and tissues with a dual beam microscope. J. Struct. Biol. 155, 63-73 (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Serial Ultrathin SectionsTransmission Electron MicroscopyMicroorganism SpecimenSection Holding LoopWater Surface Raising LoopFormvar Support FilmUltramicrotome TechniqueDiamond Knife TrimmingNeoprene Solution ApplicationGrid Section Retrieval

مقالات ذات صلة