هي وحيدات الوسطاء هامة من أرتيريوجينيسيس في سياق أمراض الشرايين المحيطية. باستخدام مصفوفة مثل الغشاء والفحص المجهري إينترافيتال، يحقق هذا البروتوكول الوحيدات صاروخ موجه والمتصلة بورم الأوعية بعد حقن الوحيدات في نموذج موريني ربط شريان فخذي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إينترافيتال المجهري لصاروخ موجه الوحيدات والأوعية المتصلة بورم في نموذج مورين لأمراض الشرايين الطرفية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
والهدف العلاجي لأمراض الشرايين المحيطية، ومرض القلب الاقفاري زيادة تدفق الدم إلى المناطق الدماغية الناجمة عن تضيق الفسيولوجية. جراحة الأوعية الدموية خياراً قابلاً للتطبيق في حالات مختارة، ولكن للمرضى دون مؤشرات لعملية جراحية مثل التقدم بقية الألم، الاسكيمية الحرجة أطرافهم، أو اختلالات كبيرة في الحياة أو العمل، وهناك احتمالات قليلة للتخفيف من حدة المرض. خلية العلاج عن طريق نضح الوحيدات محسنة من خلال تحفيز تشكيل الجانبية واحدة من عدد قليل من الخيارات غير الغازية.
ويبحث مجموعتنا أرتيريوجينيسيس بعد زرع الوحيدات في الفئران باستخدام نموذج الاسكيمية اللكتات. سابقا، قد أثبتنا تحسن التروية اللكتات استخدام زرع الوحيدات سينجينيك حفز الكزاز. بالإضافة إلى آثار على تشكيل الجانبية، نمو الورم يمكن أن تتأثر بهذا العلاج، وكذلك. للتحقق من هذه التأثيرات، نستخدم نموذج مصفوفة الغشاء مثل ماوس عن طريق حقن المصفوفة خارج الخلية من ساركومه انجيلبريث-هولم-سرب في الجناح الماوس، بعد انسداد الشريان فخذي.
بعد الدراسات الورم الاصطناعي، نستخدم الفحص المجهري إينترافيتال للدراسة في فيفو ورم الأوعية والوحيدات صاروخ موجه داخل الشرايين الجانبية. وقد وصف الدراسات السابقة النسيجي النظر في نماذج حيوانية، الذي يفترض التحليل اللاحق للتحف بعد الوفاة . نهجنا يتصور الوحيدات صاروخ موجه إلى مجالات الضمانات الاحتياطية في تسلسل الوقت الحقيقي، من السهل القيام به، ويحقق عملية تولد الأوعية أرتيريوجينيسيس وورم في الجسم الحي.
المقدمة
أمراض القلب والأوعية الدموية، بما في ذلك أمراض القلب والشرايين أو أمراض الشرايين الطرفية، هي الأسباب الأكثر شيوعاً للوفاة على الصعيد العالمي1. خلية العلاج هو اتباع نهج واعدة لعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية، خاصة بالنسبة للأشخاص غير القادرين على الخضوع لعمليات جراحية. وهناك عدة نهج لاستخدام خلايا أو على مواد يفرزها كأداة علاجية2،3، مع الهدف العام لتحسين التروية والحفاظ على وظيفة الأنسجة الدماغية وأونديربيرفوسيد. محاولة واحدة لتحقيق هذا الهدف هو تحسين أرتيريوجينيسيس، مما يعزز تنمية الشرايين الجانبية. وحيدات نوع خلية هامة المرتبطة بالضمانات الاحتياطية. مجموعتنا ركزت على البحث في آثار وحيدات في مناطق من الالتهاب4،5، لا سيما باستخدام نموذج الاسكيمية اللكتات لحمل الاسكيمية، والتهاب اللاحقة6. الصفحة الرئيسية لمجالات التهاب وحيدات وتتسبب في الاستجابات النظامية المعقدة التي تؤدي إلى تطوير الضمانات الاحتياطية7.
مع استخدام الفحص المجهري إينترافيتال، يمكننا دراسة سلوك هذه الخلايا في الجسم الحي والاحتفال باستضافة أكثر من حقن وحيدات لمناطق التهاب. وتصف معظم الدراسات السابقة إلا بعد الوفاة من التحليلات، التي تنطوي على أضرار بما في ذلك مقدمة من التحف غذائها وإعداد كبيرة من الحيوانات اللازمة للأعمال التحضيرية. مع النهج الذي نتبعه، نحن يمكن التحقيق في العمليات المناعية ويعيش تشكيل الجانبية عن طريق التصوير في نقاط زمنية متعددة.
بالإضافة إلى وضع الشرايين الجانبية في المناطق الدماغية، وحيدات تؤثر أيضا على نمو الورم. للتحقيق في هذه العمليات، ونحن إدخال مصفوفة مثل الغشاء يستخرج من انجيلبريث-هولم-سرب ساركومه الماوس، ورم غنية في المصفوفة خارج الخلية البروتينات8، وتحليل استخدام الفحص المجهري إينترافيتال. يستخدم هذه المصفوفة لجزيئات اختبار الشاشة لتشكيل شبكة خلية بطانية أو العلاجات المضادة للسرطان عن طريق تثبيط الأوعية؛ وفي هذه الحالة، سوف نقيم إمكانيات الأوعية الورم وحيدات الخلية العلاج9،،من1011.
والهدف من هذا البروتوكول إظهار طريقة سهلة وفعالة دراسة العمليات المناعية الناجمة عن الاسكيمية في نموذج في فيفو . ونحن يمكن أن تولد بيئة اختبار أكثر واقعية مقارنة ب workup النسيجي للأنسجة العضلية بعد الوفاة .
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأجرى دراستنا بإذن الدولة لسكسونيا، لانديسفيروالتونجسامت هالي، وفقا للمادة 8 من القانون الألماني لحماية الحيوانات. (المادة 8، الفقرة 1 من القانون الألماني لحماية الحيوانات من 18.05.2016-بجبي. أنا س 1206، 1313، تيرشفيرسف § 31 من 13.08.2013).
ملاحظة: استخدمت للتجارب هنا، 8 إلى 12 أسبوع القديمة بالب/ج الفئران الذكور، واستخدمت وحيدات البشرية من المتبرعين بالدم لتصور وحيدات عبر الفحص المجهري إينترافيتال-
1. "إعداد خلية"
ملاحظة: لعزل وحيدات، الرجاء راجع لدينا الفيديو المنشورة السابقة في جوف للحصول على إرشادات: " العزلة والحقن حقن من مورين نخاع العظام المستمدة وحيدات " قبل Wagner et al. 4
ملاحظة: عند العمل مع الخلايا جميع الخطوات يجب أن تكون معقمة لتجنب التلوث.
- "خلية تلطيخ" مع 3,3 '-بيركلورات ديوكتاديسيلوكساكاربوسيانيني
- ريسوسبيند الخلايا في المصل المتوسطة الثقافة الحرة مع كثافة 1 × 10 6 خلايا/مل.
ملاحظة: يمكن فقط المصل المتوسطة الحرة تلطيخ كفاءة، حيث صبغ محبتين خلاف ذلك سوف تكون التقاطها بالفعل بمكونات محبتين للمصل. - إضافة 5 ميليلتر من 1 مم 3,3 '-بيركلورات ديوكتاديسيلوكساكاربوسيانيني في ديميثيلفورماميدي إلى 1 مل تعليق خلية وريسوسبيند بعناية-
- إينكوباتي حل الخلية عند 37 درجة مئوية عن 20 دقيقة
- الطرد المركزي الخلايا في 37 درجة مئوية و 500 غرام x للحد الأدنى 5
- إزاحة المادة طافية وريسوسبيند في الخلايا التي تحتوي على 37 درجة مئوية الحارة العجل الجنين المصل تكمل المتوسطة-
- كرر الخطوات 1.1.4 و 1.1.5 مرتين.
- عد الخلايا مع الصيغة:
- ريسوسبيند الخلايا مع محلول كلوريد الصوديوم 0.9% ميليلتر العقيمة 150-
- حقن الخلايا في هذا السياق الذيل.
- ريسوسبيند الخلايا في المصل المتوسطة الثقافة الحرة مع كثافة 1 × 10 6 خلايا/مل.
2. التخدير
- التخدير استنشاق
- تبخير isoflurane مع المساعدة من المبخر باستخدام تركيز 5% في حاوية مغلقة تحت غطاء سلامة كيميائية-
- التعامل مع الماوس بعناية ووضعه في سلة المهملات.
- التعامل مع الحيوان بالجلد من مؤخرة العنق بعد أن توقف تتحرك.
- التخدير داخل
ملاحظة: استخدام التخدير إيسوفلوراني، المذكورة في الخطوة 2-1، القيام بحقنه داخل. مع انتعاش سريع ومفعول التخدير isoflurane المخدرة المفعول القصير الأمد، من الأسهل للتعامل مع الماوس وحقن التخدير داخل.- استخدام حل 2.4 مل الكيتامين (10 في المائة) و 0.8 مل Xylazine (2%) 6.8 مل كلوريد الصوديوم (0.9%) للحقن داخل-
- وزن الحيوان قبل تطبيق مخدر.
ملاحظة: صيغة المخدر:
- استخدام حقنه الأنسولين 1 مل مع 30 غ إبرة حقن الحل في أسفل البطن الأيسر.
- ضع الماوس في قفصة والانتظار لتأثير المخدرات-
ملاحظة: يظهر تأثير المخدرات عادة ضمن 5 دقائق إذا تم الحقن بنجاح. يمكن تحديد العمق الصحيح للتخدير وغياب منعكس غطاء أو كرد فعل لقرصة أخمص القدمين، فضلا عن معدل التنفس العادية، الخاضعة للرقابة-
3. غرس مصفوفة مثل الغشاء
ملاحظة: يتم استخدام هذا الأسلوب من مجموعتنا لدراسة الأوعية الورم بعد حقن الوحيدات. اعتماداً على هذه التجارب، يمكن إضافة عوامل النمو إلى المصفوفة مثل الغشاء. ونحن إجراء ربط شريان فخذي قبل الحقن الورم في الجناح الماوس. المصفوفة يجب أن تكون درجة حرارة 4 درجة مئوية للحقن. في درجة الحرارة، وهذه المصفوفة هو السائل؛ الهلام يصلب إلى مادة صلبة في درجة حرارة الجسم (37 درجة مئوية). لرؤية أفضل لمصفوفة تحت الجلد المكونات، يحلق جلد الماوس في موقع الحقن.
ملاحظة: اختياري: إضافة 100 نانوغرام عامل النمو تنتجها الخلايا الليفية الأساسية و 300 نانوغرام الأوعية الدموية غشائي عامل النمو 26 وحدة دولية الهيبارين تحت ظروف معقمة للمصفوفة مثل الغشاء.
- تحميل 1 مل مصفوفة إلى حقنه الأنسولين 30 جرام ومخزن على الجليد حتى استخدام.
- وضع الحيوان على الطاولة وعقد جلد الماوس بجانب موقع الحقن في الجناح. حقن
- 500 ميليلتر من المصفوفة مثل الغشاء تحت الجلد.
ملاحظة: لأسباب عملية، من الضروري إدخال مصفوفة مثل الغشاء متقاربة في مكان واحد لتجنب تشتت تحت الجلد. سوف يكون من الأسهل لإزاحة الورم الاصطناعي من الأنسجة بعد التضحية بالماوس في نهاية التجربة-
4. ذيل "حقن الوريد"
ملاحظة: ممارسة حقن الوريد الذيل مع محلول كلوريد الصوديوم في اختبار الحيوانات قبل التجريب. إذا لا يمكن حقن وحيدات على نحو كاف في السياق الذيل، لن يكون هناك لا تأثير المنهجية على الضمانات الاحتياطية. وفي هذا البروتوكول، ونحن حقن وحيدات 2.5 مليون. في محاولة لحقن لا يزيد عن 5 ميليلتر/غرام من وزن الجسم.
- استخدام الحل الوحيدات أعدت في إطار خطوة 1.1.8 تحتوي على 2.5 مليون وحيدات.
- استخدام إبرة 30 جرام وحقنه الأنسولين 1 مل للحقن-
- بعناية التعامل مع الماوس، وكبح جماح هذا الحيوان في ريسترينير، وتأكد من الماوس هو لم يصب بأذى، ويحتوي على مساحة كافية للتنفس.
- وضع في ريسترينير على لوحة تدفئة حتى الذيل ويمكن الاتصال باللوحة-
- تحديد الأوردة الذيل، التي تقع على الجانب الوحشي من الذيل.
- تشغيل ذيل 90 °، حيث يظهر السياق ذيل على الجانب العلوي من الذيل.
- تطهير الجانب حقن قبل الحقن وحيدات.
- محاولة لحقن الحل الوحيدات في زاوية مسطحة بشطبه الإبرة التي تواجه المكياج.
ملاحظة: إيقاف الحقن إذا ظهر نفطة، هذا هو علامة حقن الفاشلة. محاولة هذا الإجراء مرة أخرى أكثر بروكسيمالي. - وقف النزيف في موقع الحقن بتطبيق ضغط لطيف على الذيل لحوالي 60s.
- مراقبة الحيوانات لمدة 30 دقيقة لرصد الآثار الجانبية الجهازية ووضع الماوس في قفصة بعد الحيوان وتعافي تماما.
5. مجهر إينترافيتال
- إعداد
- ضع الماوس أنيسثيتيزيد على لوحة تدفئة (37 درجة مئوية) للحفاظ على درجة حرارة ثابتة وإصلاح الكفوف في المكان مع شريط لاصق.
- تطهير الجلد في موقع المحطة أو الجناح الذي يتم استخدامه للفحص المجهري.
- حلق منطقة الاهتمام لمعالجة أفضل وتجنب التدخل في الشعر.
- المكوس الجلد بدون مشرط معقم والملقط الجميلة في منطقة مربعة من 0.5 × 0.5 سم.
ملاحظة: من المهم أن تبقى منطقة الاهتمام رطبة؛ وبخلاف ذلك، سوف يتعرض للخطر نوعية الصور والأنسجة. يمكن استخدام محلول كلوريد الصوديوم لترطيب المنطقة. - وضع ساقه بين طابعين قابل للتعديل ووضع تغطية زجاج على رأس هذه الطوابع.
- ضمان النسيج الرطب وهو على اتصال بالزجاج- اينج
- إلخ 50 ميليلتر والرودامين ديكستران خلف المقلة في نظام وريدي لرؤية أفضل للسفن-
- بدء تشغيل الفحص المجهري وضبط موضع الساق إذا لزم الأمر-
- إعدادات الفحص المجهري إينترافيتال
- بدوره على المجهر، والكمبيوتر، والواجهات الإلكترونية، وأشعة الليزر-
- تشغيل وحدة تدفئة غرفة الحضانة و/أو التدفئة المرحلة (لوحة/لوحة)، وتعيين درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية.
- ابدأ شراء البرمجيات. إذا المجهر مجهز بماسح ضوئي رنانة، حدد هذا وضع المسح السريع-
- انتظر حتى تصل درجة الحرارة إلى مستوى ثابت (35-37 درجة مئوية)
ملاحظة: درجة حرارة مستقرة مهم عن: (أ) الماوس، والتي لا يمكن التحكم في درجة حرارة الجسم، والانجراف المحورية (ب) تجنب أو التقليل إلى أدنى حد على الأقل تحت التخدير. يمكن أن يستغرق هذا ح 1 لعدة ساعات، تبعاً للظروف المحيطة بها (مثلاً، نظام تكييف الهواء والعدد من مصادر الحرارة في الغرفة، بما في ذلك الشعب). إذا استخدمت الأهداف الغمر، منطقة الاتصال بين العدسة وتغطية الزجاج (أو الأنسجة) مصدر عدم استقرار نموذجية. قد يساعد في تدفئة العدسة مع سخان موضوعية؛ وبدلاً من ذلك، ينصح مجهر مع نظام ضبط تلقائي. - حدد عدسة تكبير مع فتحه الأرقام عالية التي يفي بمتطلبات القرار التجربة (انظر الملاحظة في نهاية هذا القسم)-
- تحسين إعدادات المجهر فيما يتعلق بكسب إعدادات قناة، سرعة المسح الضوئي، بكسل، حجم العمق، خطوة والحجم المتوسط قبل أن يضع الحيوان التجريبي في المرحلة-
- مسح bidirectionally لتقليل وقت الامتلاك.
- ضع الماوس أنيسثيتيزيد على المسرح مجهر بريوارميد بعد المجهر وصلت إلى أوضاع مستقرة وقد تم اختبار الإعدادات بمساعدة دمية.
- تجلب منطقة الاهتمام داخل المصفوفة مثل الغشاء في التركيز باستخدام إضاءة الضوء الساطع وتفتيشها بإيجاز الشعيرات الدموية بالأشعة فوق البنفسجية مع إعدادات عامل التصفية المناسبة ل fluorophores التطبيقية.
- قم بالتبديل إلى وضع؛ المسح بدء المسح الضوئي في وضع منخفض الدقة 256 × 256 وتعزيز المكاسب والليزر السلطة حتى يتم ملاحظة إشارة على الشاشة-
- التركيز على الهيكل للفائدة. تكبير حتى جميع تفاصيل مرئية.
- تعريف " ابدأ " و " نهاية " المواقف في اتجاه محوري.
- إيقاف المسح الضوئي-
- تحديد حجم التنقل (مثلاً، 0.5 ميكرومتر) وعدد الطائرات المحورية (مثلاً، 10-20)-
- التبديل إلى القرار النهائي بكسل (512 × 512 أو 1,024 x 1,024) تبعاً لسرعة نقل الهياكل سوبسيلولار أو الخلايا وحدد المسح السرعة (تردد المسح) الذي يناسب بشكل أفضل للحركات. مسح ثنائي الاتجاه المستحسن أن يثبت الحصول على مكدسات.
ملاحظة: حدد أعلى معدل المسح الضوئي المسح الضوئي الذي يعطي جودة الصورة كافية. الماسحات الضوئية نقطة نموذجية توفر سرعات بين 400 هرتز و 1.4 كيلو هرتز. الماسحات الضوئية الرنانة توفير إضافية 8 كيلو هرتز أو 12 كيلو هرتز. يمكن بتقليل عدد الأسطر في الاتجاه-ص، زيادة معدل المسح كذلك (القيم النموذجية 512 × 512 أو 256 512 × 512 × 200 بكسل). اعتماداً على نسبة الإشارة إلى الضجيج، واحد يمكن محاولة تحسين جودة الصورة عن طريق إضافة خط متوسط بين 2 و 4. بشكل عام، إعداد 512 × 200 مع أية نتائج المتوسط في اكتساب وقت/إطار من 18 مرض التصلب العصبي المتعدد في وضع ثنائية الاتجاه مع الماسح ضوئي مدوية 8 كيلوهرتز؛ 512 × 200 و 4 × المتوسط، فإنه يبطئ وصولاً إلى 56 مرض التصلب العصبي المتعدد لكل إطار.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يمكن أن يساعد الفحص المجهري إينترافيتال لفحص الأورام والنمو السفينة الجانبية الناجمة عن وحيدات تكشف عن جوانب جديدة في الآليات الجزيئية لورم الأوعية وأرتيريوجينيسيس. يجب أن يكون مستعدا الخلايا وحقنها بعناية باستخدام خطوات البروتوكول. الاختلافات يمكن أن تؤدي إلى اختلافات بين التجارب واحدة. يجب حقنها وحيدات في النظام الوريدي (الشكل 1) للحفاظ على الآثار النظمية وتجنب انصمام، الذي يمكن أن يحدث إذا كان يجري الحقن في النظام الشرياني.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الأسلوب الموصوفة هنا يلقي الضوء على وضع الشرايين الجانبية، سلوك وحيدات في هذه السفن، وعملية أرتيريوجينيسيس. الخطوات اللازمة لتطبيق هذا البروتوكول سهلة التعلم ويمكن استخدامها في مجالات أخرى من العلوم. وعلى الرغم من هذه المزايا، هناك بعض العيوب. على سبيل المثال، مطلوب معدات مجهرية لتنفيذ الأساليب الموصوفة. الحصول على المعدات اللازمة لتجربة واحدة لا يمكن تحمله، ولذلك من المهم أن تتعاون مع مؤسسات أخرى لمشاركة الأجهزة.
وهناك صعوبات أخرى متصلة بهذا البروتوكول التي يمكن تجنبها مع الممارسة. في البداية...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.
شكر وتقدير
هذا العمل كان يدعمها ELSE-كرنر-ستيفتونغ و DFG (دويتشه الأوقيانوغرافية، مؤسسة البحوث الألمانية) SFB 854 (سونديرفورشونجسبيريتش، مركز البحوث التعاونية). خاص بفضل هانس-هولغر Gärtner، ميدينزينتروم أوديوفيسويليس، وجامعة أوتو-فون-غيريكا ماجدبورج، ماجدبورج، ألمانيا، لتقديم الدعم التقني.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10٪ مصل ربلة الساق الجنينية (FCS) | سيجما ألدريتش ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| 1٪ بنسلين / ستربتومايسين | سيجما ألدريتش ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| 1 مل حقنة إنسولين Omnifix -F | B. Braun ، Melsungen AG ، Melsungen ، ألمانيا | ||
| حقنة 50 مل ؛ | Fresenius Kabi AG ، باد هومبورغ ، ألمانيا | حقنة حقنة 50 مل مع كانول | |
| 6 ألواح ربط منخفضة | Corning Incorporated ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| 8-12 أسبوعا ، ذكر ، C57BL / 6 ، BalbC الفئران ؛ | نهر تشارلز ، سولزفيلد ، ألمانيا | ||
| شريط لاصق | TESA SE ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| برنامج الاستحواذ | Leica ، Wetzlar ، Deutschland ؛ | مجموعة تطبيقات Leica التألق المتقدم (LAS AF) ؛ الإصدار: 2.7.3.9723 | |
| Canules | B. Braun ، Melsungen AG ، Melsungen ، ألمانيا | 29G ، 30G | |
| طبق ثقافة الخلايا | Greiner Bio-One GmbH ، Frickenhausen ، ألمانيا | ||
| وسط زراعة الخلايا | تم تصنيعها من قبل مجموعتنا بمكونات | مفردة Medium199 ، مصل عجل الجنين 10٪ ، مضاد حيوي 1٪ (بنسلين / ستربتومايسين) | |
| جهاز طرد مركزي | Beckman Coulter GmbH ، Krefeld ، ألمانيا | Allegra X-15R الطرد المركزي | |
| كريم إزالة الشعر | Veet ، مانهايم ، ألمانيا | ||
| DiO | Invitrogen Eugene ، أوريغون ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| عامل التطهير | Sch & uuml ؛ lke& Mayr GmbH ، Norderstedt ، ألمانيا | ||
| مشرط يمكن التخلص منه رقم 10 ؛ | Co.Ltd شفرة حلاقة السلامة من الريش, أوساكا, اليابان | ||
| EDTA | Sigma Aldrich ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| قارورة Erlenmeyer | GVB ، Herzogenrath ، ألمانيا | ||
| الإيثانول 70٪ | Otto Fischar GmbH und Co KG ، Saarbrü. cken ، ألمانيا | ||
| مصل عجل الجنين | Sigma Aldrich ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| ملقط Fine | Rubis ، Stabio ، سويسرا | ||
| Flurophor / Rhodamindextran | Thermo Fischer Scientific ، Waltham ، MA الولايات المتحدة الأمريكية | Katalognummer: D-1819 | |
| قفازات | R & ouml ؛ sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, ألمانيا | ||
| وسادة التدفئة | Labotect GmbH ، G & ouml. ttingen, Germany | صفيحة ساخنة 062 | |
| عامل تحفيز مستعمرة البلاعم البشرية | سيجما ألدريتش ، هامبورغ ، ألمانيا | SRP3110 | |
| مرشحات الكريات البيض الإنسانية | حاضنة حفظ | ||
| Ewald Innovationstechnik GmbH ، Bad Nenndorf ، ألمانيا | |||
| Isoflurane | Baxter Deutschland GmbH ، Unterschlei & szlig ؛ heim ، ألمانيا | ||
| كيتامين (10٪) | Ketavet ، Pfizer Deutschland GmbH ، برلين ، ألمانيا | ||
| أنابيب فصل الكريات البيض (أنابيب مع مرشح) ؛ | Bio one GmbH, Frickenhausen, ألمانيا | ||
| مجهر ضوئي | Carl Zeiss SMT GmbH ، Oberkochen ، ألمانيا | Axiovert 40 C | |
| فصل الخلايا الليمفاوية LSM1077 | GE Healthcare ، Pasching ، النمسا | ||
| Matrigel ؛ | بيكتون ، ديكنسون وشركاه ، بحيرات فرانكلين ، نيو جيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| المتوسطة M199 ؛ | PAA Laboratories GmbH ، Pasching ، النمسا | ||
| مقعد العمل الميكروبيولوجي | Thermo Electron ، LED GmbH ، Langenselbold ، ألمانيا | شريحة المجهر الآمن | |
| Hera Carl Roth GmbH + Co. KG ، Karlsruhe | Art. Nr. 1879 | ||
| حامل مجهر مع حاضنة ووحدة تسخين | ؛ Leica DMI 6000 ، Pecon ، ألمانيا | ||
| عازلة غسيل أحادية | الخلايا تم تصنيعها من قبل مجموعتنا بمكونات | مفردة PBS ، 0,5٪ BSA ، 2 مللي متر EDTA | |
| ماوس مقشر | مجهر متعدد | ||
| الفوتون ؛ | Leica, Wetzlar, Deutschland | مجهر Leica SP5 متحد البؤر ، Cameleon ، | |
| كلوريد الصوديوم المتماسك (0,9٪) | Berlin Chemie AG ، برلين ، ألمانيا | ||
| غرفة العد Neubauer ؛ | Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-Kö nigshofen, Germany | ||
| Objective | Leica, Wetzlar, Deutschland | Leica HC PL APO 10x / 0.4 CS | |
| PBS | Life technologies GmbH ، دارمشتات ، ألمانيا | ph 7,4 | |
| Penicillin / Streptomycin | معقم Sigma Aldrich ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| Percoll | تم تصنيعها من قبل مجموعتنا بمكونات | 90٪ Percoll ، 10٪ 1،5M NaCl ، & rho ؛ = 1،064 جم سم -3 | |
| حل | Percoll GE Healthcare ، Bio-Science AB ، أوبسالا ، السويد | ||
| Pipettes | Eppendorf AG ، هامبورغ ، ألمانيا | 10 & micro ؛ L / 100 & micro ; L / 200 & L / 1000 & L | |
| Pipettes serological | Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany | Cellstar2 مل ، 5 مل ، 10 مل | |
| رؤوس ماصات | Eppendorf AG ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| Pipetus | Eppendorf AG ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| أنبوب البوليستيرول | Celltar ، Greiner Bio-One GmbH ، Frickenhausen ، ألمانيا | ||
| Scissor | Word Precision Instruments، Inc. ، ساراسوتا ، مقياس الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| Mettler PM4800 Delta Range و Mettler-Toledo GmbH و Gie & szlig ؛ en ، ألمانيا | |||
| وحدة الشفط | Integra bioscience ، Fernwald ، ألمانيا | مقص جراحي Vacusafe | |
| Precision Instruments، Inc. ، ساراسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية | |||
| محلول تريبان الأزرق 0.4٪ | Sigma Aldrich ، هامبورغ ، ألمانيا | ||
| أنابيب مع غطاء | Greiner Bio-One GmbH ، Frickenhausen ، ألمانيا | 15 مل ، 50 مل Cellstar | |
| Xylazine (2٪) | Ceva Tiergesundheit GmbH, Dü سلدورف ، ألمانيا |
المراجع
- World Health Organization. WHO | The top 10 causes of death. World Health Organization. , http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/. (2017).
- Volz, K. S., Miljan, E., Khoo, A., Cooke, J. P. Development of pluripotent stem cells for vascular therapy. Vascular pharmacology. 56 (5-6), 288-296 (2012).
- Henry, T. D., et al. The VIVA trial: Vascular endothelial growth factor in Ischemia for Vascular Angiogenesis. Circulation. 107 (10), 1359-1365 (2003).
- Wagner, M., et al. Isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes. Journal of visualized experiments JoVE. (94), (2014).
- Herold, J., et al. Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth. Human gene therapy. 15 (1), 1-12 (2004).
- Ito, W. D., Arras, M., Scholz, D., Winkler, B., Htun, P., Schaper, W. Angiogenesis but not collateral growth is associated with ischemia after femoral artery occlusion. The American journal of physiology. 273 (3 Pt 2), H1255-H1265 (1997).
- Herold, J., et al. Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth. Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611(2014).
- Matrigel Matrix. , https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html (2017).
- Eubank, T. D., Galloway, M., Montague, C. M., Waldman, W. J., Marsh, C. B. M-CSF induces vascular endothelial growth factor production and angiogenic activity from human monocytes. Journal of immunology (Baltimore, Md. 1950). 171 (5), 2637-2643 (2003).
- Fridman, R., et al. Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel. Journal of the National Cancer Institute. 83 (11), 769-774 (1991).
- Woodman, S. E., et al. Caveolin-1 knockout mice show an impaired angiogenic response to exogenous stimuli. The American journal of pathology. 162 (6), 2059-2068 (2003).
- Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation. American journal of translational research. 5 (2), 155-169 (2013).
- Houthuys, E., Movahedi, K., Baetselier, P., de Van Ginderachter, J. oA., Brouckaert, P. A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes. J. Immunol. Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).
- Berthold, F. Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation. Blut. 43 (6), 367-371 (1981).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
