نقدم أساليب لتقييم قدرة متجولة الضامة مورين الأولية المشتقة من نخاع العظم استخدام الحطام المسمى فلوريسسينتلي المايلين وتلطيخ الحبرية داخل الخلايا الدهنية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في المختبر البلعمه حطام المايلين التي الضامة المشتقة من نخاع العظام
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المشتقة من نخاع العظم الضامة (بمدمس) هي الكريات البيضاء الناضجة التي تخدم دور حاسم فسيولوجية البالعات المهنية قادرة على مسح مجموعة متنوعة من الجسيمات. عادة، يتم تقييد بمدمس من الجهاز العصبي المركزي (CNS)، ولكن بعد إصابة، سهولة التسلل. مرة واحدة داخل أنسجة الجهاز العصبي المركزي المصابين، بمدمس هي نوع الخلية الابتدائية المسؤولة عن الإزالة الحطام الخلوية المستمدة من الأذى، بما في ذلك كميات كبيرة من الحطام المايلين الغنية الدهن. تداعيات لاثيل بمدم التسلل والمايلين البلعمه الحطام داخل الجهاز العصبي المركزي معقدة وليست مفهومة جيدا. تسمح البروتوكولات المذكورة هنا، لدراسة مباشرة في المختبر من بمدمس في سياق إصابة الجهاز العصبي المركزي. نحن تغطي مورين بمدم العزلة والثقافة وإعداد الحطام المايلين، وفحوصات لتقييم بمدم المايلين الحطام البلعمه. هذه التقنيات إلى نتائج قابلة للقياس الكمي قوية دون الحاجة إلى معدات متخصصة هامة أو المواد، ولكن يمكن تخصيصها بسهولة لتلبية احتياجات الباحثين.
المقدمة
المشتقة من نخاع العظم الضامة (بمدمس) حلقة وصل هامة بين نظم المناعة الفطرية والتكيف. مستضد تقديم الخلايا (Apc)، يمكنهم الاتصال مع الخلايا الليمفاوية عن طريق عرض كل مستضد وسيتوكين الإصدار1،،من23. ومع ذلك، وظيفتها الأساسية البالعات المهنية، لمسح مسببات الأمراض، والذين تتراوح أعمارهم بين الخلايا والحطام الخلوية1،4. بعد إصابة حبل الشوكي (علوم)، يتم إنشاء كميات كبيرة من الحطام المايلين من oligodendrocytes يحتضر، نوع الخلية مسؤولة عن الجهاز العصبي المركزي إكسون مييلينيشن5. نحن وآخرون أظهرت أن إزالة ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
الأساليب الموصوفة هنا وفي القسم 2 وافق عليها "رعاية الحيوان فلوريدا دولة جامعة المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) والمبادئ التوجيهية المنصوص عليها في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، الطبعةال 8 . جميع الحيوانات المستخدمة في هذا في هذا البروتوكول هي البيت في منشأة حيوانات مختبرية مخصصة حتى الاستخدام. وكان لا التجريب في فيفو السابقة المنجزة للتضحية. إعداد الحيوانات استندت إلى ضرورة تجريبية باستخدام متوسط الخلية ومجموعات المايلين كدليل من أجل الحد من استخدام.
ملاحظة: يصف هذا البروتوكول توليد الضامة المشتقة من نخاع العظم (بمدمس) (الجزء 1)، إعداد الحطام المايلين المستمدة من الدماغ المسمى فلو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
علاج بمدمس مع كفسي المسمى الحطام المايلين ينبغي أن تسفر عن استيعاب واضح (الشكل 2). في حين وقت تفاعل 3 ساعات غير كافية من أجل بمدمس البلعمه الحطام المايلين وأضاف كافية للكشف عن المصب قوية، يمكن ملاحظة تراكم داخل الخلايا مع أقل من 1 ساعة للتفاعل. ومع ذلك، بعض الحطام المايلين قد يكون موجودة على سطح الخلية بعد الغسيل. قد يكون هذا بسبب الغسيل غير كافية، أو جسيمات لا يجري استيعابه تماما خلال المراحل المبكرة من البلعمه.
بينما يمكن استيعاب بمدمس سرعة الحطام المايلين، مطلو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
استخدام الإجراءات المذكورة هنا CNS الخام الطازج معزولة المايلين الحطام والضامة الأولية المستمدة من نخاع العظام. لتقليل النفقات الحيوانية، نوصي بأن كلا العقول وأن تحصد خلايا نخاع العظام من كل الماوس في وقت التضحية. ويمكن إعداد اثنين من الباحثين يعملون معا كل من المواد في نفس الوقت. وبدلاً من ذلك، يمكن تخزين العقول في-80 درجة مئوية في برنامج تلفزيوني وتستكمل مع المضادات الحيوية قبل عزلة الحطام المايلين. وكان يمكن الحفاظ على تجربتنا أن العقول في مثل هذه الظروف لمدة تصل إلى شهر واحد مع عدم فقدان ملحوظ لإمكانات توليد الحطام ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب قد لا الكشف.
شكر وتقدير
الكتاب يود أن يشكر جلين سانغر-هودجسون، "أخصائي وسائط الإعلام" في "كلية طب الاتحاد السوفياتي السابق" لكل عمله في إنتاج الفيديو وتحريرها والتعليق الصوتي.
وأيد هذا العمل "المعاهد الوطنية للصحة" (R01GM100474 و R01GM072611).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| DMEM | GE Healthcare Life Sciences | SH30243.01 | نسبة عالية من الجلوكوز مع L-الجلوتامين ، محلول بيروفات الصوديوم |
| بنسلين الستربتومايسين | Corning | 30-002-CI | 100X Solution |
| New Born Calf Serum (NCS) Rocky | Mountain Biologics | NBS-BBT-5XM | استنساخ NCTC Origin الولايات المتحدة |
| 929 [خلية L ، L-929 ، مشتق من السلالة L] ؛ | ATCC | CCL-1 | L929 خط الخلية لإعداد الوسائط المكيفة 24 |
| بئر لوحات ثقافة الخلايا | VWR | 10062-896 ؛ | |
| طبق ثقافة الخلية | Greiner Bio-One | 639960 | البوليسترين ، |
| طقم تكاثر الخلايا CFSE | مم Thermo Fisher | C34570 | DMSO ل Reconsitution المزود |
| بالفلورو هلام مع Tris Buffer ؛ | علوم المجهر الإلكتروني | 17985-11 | |
| زيت أحمر O | سيجما ألدريتش | O0625 | |
| <قوي>معدات< قوي> | |||
| <قوي>مواد | <قوي>الشركة | <قوي>رقم الكتالوج | <قوي>تعليقات |
| أنابيب الطرد المركزي الفائقة | بيكمان كولتر | 326823 | Thinwall ، بولي بروبيلين ، 38.5 مل ، 25 × 89 مم |
| SW 32 Ti جهاز طرد مركزي فائق الدوار | بيكمان كولتر | 369650 | SW 32 Ti الدوار ، دلو متأرجح ، خيط دوار يدوي من التيتانيوم |
| فيشر ساينس | 08-451-71 |
المراجع
- Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. Macrophage biology in development, homeostasis and disease. Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).
- Unanue, E. R. Antigen-presenting function of the macrophage. Annu Rev Immunol. 2, 395-428 (1984).
- Cavaillon, J. M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
