مقالة منهجية

حجم كبير، الإضاءة ذات الصلة سلوكيا أوبتوجينيتيكس في المقدمات غير البشرية

DOI:

10.3791/56330

⸱

أكتوبر 3, 2017

 ,  ,  , 
1McGovern Institute, Massachusetts Institute of Technology, 2Harvard-MIT Division of Heath Sciences and Technology, 3Department of Anesthesiology, Duke University Medical Center, 4Department of Biology, Massachusetts Institute of Technology, 5Division of Pharmacoengineering and Molecular Pharmaceutics, UNC Eshelman School of Pharmacy, University of North Carolina at Chapel Hill, 6Media Lab and Department of Biological Engineering, Massachusetts Institute of Technology, 7Department of Brain and Cognitive Sciences, Massachusetts Institute of Technology

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد وضع بروتوكول لبناء إضاءة اختراق أنسجة لإيصال الضوء على كميات كبيرة مع الحد الأدنى من القطر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويصف هذا البروتوكول إضاءة الحجم الكبير، الذي تم تطويره للتلاعب أوبتوجينيتيك في الدماغ الرئيسيات غير البشرية. هو إضاءة ألياف الضوئية بلاستيكية معدلة مع تلميح محفوراً، مثل أن يكون الضوء التي تنبعث منها مساحة السطح > 100 × من الألياف التقليدية. هذا البروتوكول بالإضافة إلى وصف بناء إضاءة كبيرة الحجم، تفاصيل معايرة مراقبة النوعية المستخدمة لضمان التوزيع حتى الخفيفة. علاوة على ذلك، يصف هذا البروتوكول تقنيات لإدراج وإزالة إضاءة الحجم الكبير. قد تكون مضيئة هياكل كل سطحية وعميقة. إضاءة هذا الحجم الكبير لا تحتاج إلى يكون جسديا بالإضافة قطب، ونظرا لأن إضاءة مصنوعة من البلاستيك، ولا من الزجاج، سوف ببساطة ينحني في الظروف عندما سوف تتحطم الألياف الضوئية التقليدية. لأن يسلم هذا إضاءة الضوء على مدى حجم الأنسجة سلوكيا ذات الصلة (≈ 10 ملم3) مع لا ضرر اختراق أكبر من ألياف الضوئية تقليدية، ويسهل الدراسات السلوكية باستخدام أوبتوجينيتيكس في المقدمات غير البشرية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أدوات أوبتوجينيتيك، والتي تسمح بتحكم العصبية دقة ميلي ثانية واحدة، ويحركها الضوء تستخدم على نطاق واسع لدراسة الفيزيولوجيا الوظيفية والسلوك في القوارض واللافقاريات. ومع ذلك، محدودة التحديات التقنية استخدام أوبتوجينيتيكس في الدماغ الرئيسيات غير البشرية، والتي لديها وحدة تخزين ~ 100 × أكبر من الدماغ القوارض 1.

لتسهيل الدراسات أوبتوجينيتيكس في المقدمات غير البشرية، صمم إضاءة لمعالجة الأهداف المتنافسة اثنين: كبر حجم الإضاءة واختراق أدنى ضرر. أن يأتي المحاولات السابقة لمعالجة أحد هذه الشواغل في تكلفة من الآخر. حزم من ألياف تضيء كميات أكبر ولكن مع زيادة القطر، ومن ثم الأضرار2،3. ألياف زجاجية مدبب تقليل أضرار الاختراق، لكن التركيز الضيق للضوء التي تنبعث منها المساحات السطحية < 100 ميكرومتر2 4،5. الإضاءة الخارجية الدماغ من خلال نافذة في دوراً تلتف التحدي المتمثل في الإيلاج الضرر ويجوز السماح لإنارة الحجم الكبير، ولكن يمكن استخدامه فقط ل مناطق الدماغ سطحية قليلة6.

لإنشاء إضاءة قطرها كبير الحجم والصغيرة (الشكل 1a)، حفرت غيض من البلاستيك البصرية الألياف هي الحرارة مدبب والكسوة وجوهر (الشكل 1، ج). خلافا لألياف مدبب أخرى أن يركز الضوء على نقطة ضيقة، يسمح النقش الخفيف للهروب بالتساوي على الجانبين من الطرف، ومن ثم، توزيع الضوء على نطاق واسع على مساحة كبيرة (الشكل 1 دوه). لأن أضرار الاختراق غير متناسب إلى القطر الاختراق، وإضاءة هذا لا أكثر ضررا من الاختراق من ألياف تقليدية، بعد فقد > 100 × الضوء التي ينبعث منها الضوء سطح المنطقة ويسلم على نطاق أوسع مع 1/100 سلطة خفيفة كثافة في دماغ وهمية (1.75% [اغروس]) (الشكل 1e). نموذج مونت كارلو (الشكل 1f) يوضح الفرق في ضوء انتشار بين ألياف تقليدية وإضاءة الحجم الكبير عندما يكون لديهم كثافات الطاقة الضوء متساوية كالضوء على انبعاث السطوح. يتم معايرة إضاءة كل على حدة استخدام مجالاً إدماج (الشكل 2 أ، ب) لضمان توزيع الضوء حتى على طول الحافة (الشكل 2 (ج)).

تم التحقق من هذا الحجم الكبير إضاءة مع التلاعب أوبتوجينيتيك السلوك وإطلاق الخلايا العصبية في المقدمات غير البشرية. يمكن تخصيص طول الألياف تلميح إلى أي منطقة في الدماغ، وإلى تعيين الحقل تقبلا الفردية كل الحيوانات. إضاءة يجوز أن يقترن قطب المخترقة لتسجيلات الخلايا العصبية التي تمتد على طول الإضاءة. علاوة على ذلك، نظراً لأنه يمكن أن تحمل هذه الألياف أي لون من الضوء المرئي، فإنه يمكن إقران مع أي من جزيئات أوبتوجينيتيك المتاحة المتوفرة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: جميع الإجراءات الحيوان تم وفقا للمبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة، وقد أقر "معهد ماساشوستس للجنة التكنولوجيا" في "العناية بالحيوان".

1-"تصنيع إضاءة"

  1. استخدام زوج من مقص حاد لقص مقطع من 250 ميكرون القطر البلاستيك الألياف الضوئية التي أطول من الطول المطلوب إضاءة إجمالي 10 سم على الأقل-
  2. إزالة 15-20 سم من البولي إيثيلين سترة من نهاية واحد من الألياف الضوئية البلاستيكية باستخدام قياس 22 سلك متجرد.
  3. آمنة القاصي معظم 3-5 سم من نهاية جردت من الألياف في المشبك القبضة جدول-
  4. عقد نهاية الألياف تغلف مشدود في يد واحدة مع سحب مطرد مستمر. الألياف بشكل مواز للكلمة، عمودي على نائب. الحفاظ على هذا التوتر المستمر على هذه الألياف في جميع أنحاء التدفئة والتبريد (خطوات 1.5 و 1.6 أدناه) حيث أن الألياف لا يزال مستقيم ومشدود كما أنه يخفف.
  5. استخدام إعداد أقل من بندقية الحرارة درجة الحرارة المزدوجة (570/1,000 درجة فهرنهايت،)، حرارة المقطع جردت من الألياف حتى أنه هو ضعفت إلى قطر من 60-100 ميكرومتر، أو حول قطر شعر الإنسان.
  6. الحفاظ على التوتر المستمر على هذه الألياف بينما يسمح للألياف لتبرد. قد يؤدي الفشل في الحفاظ على التوتر الألياف تجعيد.
    7. وتؤكد
  7. قطر طرف ضعفت تحت مجهر تشريح. بدلاً من ذلك، واحد قد استخدم الفرجار بدلاً من ذلك.
    1. إذا لم تكن الألياف رقيقة ما يكفي، كرر الخطوات من 1.4 عن طريق 1.6 حسب الحاجة لتحقيق قطر تلميح المطلوب.
    2. اختياري إذا كان إعادة سحب، وضع علامة صغيرة في الجزء أضيق من الألياف إذا كان سيتم تسخينها مرة أخرى حيث أن مركز البندقية الحرارة ويستهدف الجزء أضيق من الألياف.
    3. في حالة ضعيفة جداً الألياف، البدء من جديد-
  8. مرة واحدة كاملة قد بردت الألياف والقطر المطلوب قد تحقق، قرصه الألياف سم 3 من أضيق نقطة في أي من الجانبين. سريعة، حادة سحب على طول محور الألياف، وفصل الجانبين لإنشاء تلميح مدبب.
  9. دراسة طرف مدبب تحت سلطة منخفضة (مثلاً، 4 س) على مجهر التشريح. إذا كان التلميح متشعب أو كرة لولبية ( الشكل 1f)، تجاهل الألياف.
  10. التحضير أحفر طرف مدبب بوضع قطعة من الشريط مختبر قرب نهاية غيض، تاركة الماضي 5 مم مكشوف. الشريط يحمي الألياف من النقش أعلاه الطول المطلوب لانبعاث الضوء. واختير هذا الطول تلميح استناداً إلى سمك القشرة الرئيسيات في المنطقة المستهدفة. يمكن أن يتعرض مدة أطول أو أقصر حسب الطول المطلوب للإضاءة. إذا كان المطلوب هو بطول الحافة أحفر مختلفة، يمكن نقل حافة الشريط مختبر أقرب إلى أو أبعد من طرف مدبب.
  11. إضعاف ساحة صغيرة (~ 1 بوصة × 2 بوصة) من 5 ميكرومترات كربيد السيليكون ورقة اللف بين الإبهام والسبابة. ضع غيض الألياف بين الجانبين ورقة اللف ولطف أحفر الألياف استخدام الاقتراحات دائرية صغيرة، كما لو كان المتداول من BB بين الإبهام والسبابة. وكثيراً ما تدوير الألياف حيث أن جميع الأطراف هي محفوراً بالتساوي. وسوف يظهر تلميح الألياف “ خشن ” بالعين المجردة في المناطق التي قد تم محفوراً، بينما المناطق المحفورة الأمم المتحدة عادة ما تظهر متجانسة.
  12. كرر الخطوة 1.11 بأكسيد ألومنيوم 3 ميكرومتر اللف ورقة-
  13. إلصاق رابط في نهاية إضاءة مقابل تلميح محفوراً. وهذا ما يسمح إضاءة الاتصال بالكابل الضوئي أو الليزر-
    ملاحظة: هذا الأسلوب يختلف عن الأسلوب المفضل لتحديد الزجاج/الألياف البصرية السليكا في الحلقات, و. لأن التسليح المعدني هو أصعب من الألياف الضوئية البلاستيكية، التلميع في الألياف والتسليح كوحدة بعد الالتصاق يمكن أن تتلف الألياف الضوئية البلاستيكية كشظايا صغيرة من المعادن التي تنتج أثناء عملية الصقل يمكن تضمين أنفسهم في الألياف المشقوق مسطحة.
    1. إزالة حوالي 5 مم من البولي إيثيلين والسترة من الجهة المقابلة لإضاءة استخدام متجرد أسلاك قياس 22-
    2. قص الطرف الآخر شقة بسكين ساخنة لضمان سلاسة السطح.
    3. البولندية على الطرف الآخر شقة مع اللف أدق تباعا أوراق: 5 ميكرومتر، 3 ميكرومتر، 1 ميكرومتر و 0.3 ميكرومتر.
    4. إدراج الشقة مقابل نهاية في التسليح فولاذ المقاوم للصدأ قطرها داخلي ميكرومتر 260 حتى يتم تدفق مع نهاية التسليح.
    5. بصريا تأكيد مصقول الطرف الآخر هو بسلاسة وبشكل متساو مع مجهر ألياف.
    6. إزالة الألياف من التسليح والشريط التسليح رأسياً على حافة جدول مع الألياف مشيراً إلى أسفل.
    7. ملء حقنه 1 مل الإيبوكسي البلاستيك وإرفاقه حقنه إبرة قياس 18 كليلة.
    8. استخدام الإبرة لتطبيق الإيبوكسي أسفل إلى التسليح. ملء التسليح تماما مع الإيبوكسي.
    9. إدراج الألياف التسليح.
    10. يمسح أي الإيبوكسي الزائد من سطح مصقول من الألياف مع مسح خالية من الوبر رطبة قبل التجفيف إذا لزم الأمر. خلاف ذلك، يمكن إزالة الزائدة الإيبوكسي بعد 12-24 h.
    11. تخزين الألياف بلطف حتى المعايرة ووضع غطاء غبار أكثر التسليح.

2. إضاءة المعايرة ومراقبة الجودة

ملاحظة: تقييم هذه الأساليب للمعايرة للضوء الناتج غير الخطي على مسافات مختلفة من غيض الألياف. التفاوت في توزيع الضوء ينتج عادة عن “ وعرة ” أو “ مموج ” تفتق.

  1. إنشاء الخفيفة التدريع الحجاب الحاجز للأعلى من استخدام المجال دمج امتصاص الضوء إحباط ( الشكل 2).
    ملاحظة: ارتداء قفازات كلما الزيوت الخفيفة مناولة تستوعب إحباط لمنع الجلد من خلق البقع التي تعكس الضوء.
    1. طي أ 2 ” 4 ” قطعة من الضوء امتصاص إحباط أكثر على نفسها لتشكيل 2 ” x 2 ” ساحة. أسلوب بديل قطع 2 ” x 2 ” ساحة مع ضوء واحد على استيعاب الجانب ويعكس الجانب (أي واحد من الضوء ، جانب من رقائق الألومنيوم القياسية)؛ بيد أن الأسلوب أكثر من إضعاف أكثر أماناً لأنها توفر ميزة ممل للتعامل مع الحجاب الحاجز في الخطوة القادمة.
    2. أمثال مختبر الشريط أو الشريط الكهربائي على طول حواف المربع لربط الحواف غير مطوية. وهذا يحمل الجانبين معا ويحمي ضد التخفيضات من حواف حادة.
    3. ثقب حفرة في وسط ساحة استخدام إبرة قياس 26-
      4. إزالة المسمار كبير على الحد الأقصى من المجال دمج
    4. وتغطية الافتتاح مع الحجاب الحاجز. مكان الثقب أكثر من المركز. إذا تم إنشاء الحاجز مع أحد تمتص الضوء ويعكس الجانب الضوء واحد، وضع في ضوء استيعاب الجانب حتى والضوء الذي يعكس الجانب الأسفل، تواجه داخل مجال إدماج.
      ملاحظة: لمنع الغبار والحطام من دخول مجال التكامل، وللحفاظ على حفرة توسيط، تأمين الحجاب الحاجز إلى خارج مجال التكامل مع معمل الشريط.
  2. قياس الضوء الناتج على طول نصيحة 500 ميكرومتر زيادات استخدام ميكرومانيبولاتور أو ستيريوتاكسيك الذراع ومجال تكامل-
    ملاحظة: يجب أن تلبس نظارات واقية من الطول الموجي المناسب كلما كان الليزر على.
    1. قم بتوصيل الطرف الآخر من الألياف بالليزر أو الضوء المصدر، ولكن لا يؤدي الضوء الناتج بعد.
    2. تأمين إضاءة إلى حامل ستيريوتاكسيك (بريفرابلي مع مختبر الشريط) مع تلميح 7-10 ملم أسفل الجزء السفلي من الحامل.
    3. برغي صاحب ستيريوتاكسيك في arm. ستيريوتاكسيك
    4. محاذاة غيض إضاءة مع الثقب في وسط الحجاب الحاجز. صفر في ميكرومانيبولاتور عند الحافة الضبط نفس مستوى الحجاب الحاجز.
    5. بدوره قبالة الأنوار الغرفة وصفر في مجال إدماج.
    6. تشغيل الليزر (أو أخرى مصدر الضوء) وقياس قوة الضوء الإجمالي الإخراج باستخدام مجال التكامل-
      ملاحظة: استخدام إخراج الخفيفة أدنى إمكانية لاختبار المعايرة.
    7. السفلي الألياف 500 ميكرومتر إلى دمج المجال وكرر الخطوة 2.2.6.
    8. مواصلة خفض هذه الألياف في مجال إدماج وقياس مجموع ناتج الضوء في 500 ميكرومتر زيادات حتى الجميع مستويات إجمالي طاقة الضوء
      تنبيه: أن مستوى إجمالي طاقة الضوء بمجرد طرف كامل في المجال. عدم الاستمرار في انخفاض الألياف تلميح أكثر من 1-2 مم خارج محفوراً طول. إذا اتصل نصيحة الجزء السفلي من مجال التكامل، فإنه قد تذوب و/أو الخراب في مجال إدماج.
  3. تأكيد ألياف محفوراً بالتساوي برسم إجمالي طاقة الضوء الناتج كما خفضت دالة من مدى الألياف في مجال إدماج لتأكيد الخطي.

3-الإضاءة في فيفو

ملاحظة: هنا، تظهر هذه الأساليب باستخدام نموذج بلاستيك بدلاً من الرئيسيات غير البشرية-

  1. زرع كان مزروع دائرة تسجيل قطرها 25 ملم عبر منطقة الدماغ للفائدة قبل التجريب.
  2. أداء التشريحية التصوير بالرنين المغناطيسي (التصوير بالرنين المغناطيسي) قبل التجريب. وضع شبكة تسجيل مخصص في الدائرة وملئه مع زيوت التشحيم الجراحية المعقمة للسماح للتصور الشبكة وتحديد مستوى هياكل الدماغ دوراً والهدف-
    3. إعداد
  3. الصغرى برج محرك أقراص قبل كل جلسة الاختبار.
    1. افكس المشابك أنبوب دليل قياس 25 مع تلميح مشطوف الحواف للوسط وأقل على محرك الأقراص. وتستخدم المشابك اثنين لضمان بقاء الأنبوب دليل على التوالي. كل من هذه المشابك يمكن نقل يدوياً إذا رغبت.
      ملاحظة: يمكن epoxied أنبوب دليل أو ملحوم المشابك.
    2. تأمين إضاءة الحجم الكبير في المشبك العلوي على محرك الأقراص نفسه. هذا المشبك موصولة إلى محرك أقراص-
    3. الموضوع إضاءة كبيرة الحجم من خلال أنبوب الدليل الكامل وتأكيد أن تلميح إضاءة يمتد غيض أنبوب الدليل.
      ملاحظة: تحديد طول إضاءة يمتد الماضي غيض أنبوب دليل يساوي المسافة من دوراً إلى الهامش السفلي لمنطقة الدماغ المستهدف، كما عن طريق التصوير بالرنين المغناطيسي-
    4. نقع في أنبوب الدليل وإضاءة في محلول مطهر (مثلاً، تشلوروهيكسيديني) لتعقيم.
  4. وضع شبكة معقمة مخصصة داخل غرفة نظيفة وتأمينه في اتجاه محدد مسبقاً مع المسمار على جانب الدائرة. الشبكة المعروضة هنا قد تباعد 1 مم؛ ومع ذلك، يمكن تخصيص التباعد حسب الحاجة.
    ملاحظة: وهذا ينبغي أن تكون مطابقة للشبكة واتجاه المستخدمة في الرنين المغناطيسي التشريحية.
  5. تأمين صاحب السيارة الصغيرة المناظير باستخدام الأشعة في قاعة التسجيل في اتجاه محدد سلفا-
    6. سحب
  6. إضاءة معقمة من أنبوب الدليل عن طريق سحب إضاءة حتى باستخدام الملقط عقيمة، وغير حادة. ينبغي أن يكون غيض إضاءة 5-10 مم أعلاه غيض أنبوب الدليل.
    ملاحظة: سوف تذعن إضاءة إلى الخارج بين أنبوب الدليل والمشبك. وهذا لا ضرر إضاءة مرنة.
  7. إلصاق الصغرى-محرك الأقراص إلى الحامل ووضع أنبوب الدليل في حفرة الشبكة المستهدفة.
  8. أقل في المرحلة الدقيقة-محرك الأقراص حتى أنبوب الدليل فقط من خلال مستوى بلده دوراً-
    ملاحظة: إذا رغبت في ذلك، يمكن محرك أقراص صغيرة ثاني مع قطب كهربائي وضعها على الساحة وخفضت في حفرة شبكة مختلفة. سيعرض الحقل المحلية المحتملة على هذا القطب قطعة أثرية خفيفة تعتمد على المسافة، التي يمكن استخدامها لتأكيد وضع إضاءة.
  9. محاولة السفلي إضاءة يدوياً مع الملقط العقيمة.
    1. إذا لم يكن هناك أي مقاومة، تتراجع إضاءة 5-10 مم، انتظر 10 دقائق للسماح للأنسجة لتسوية وحاول مرة أخرى.
    2. إذا كانت لا تزال هناك مقاومة في المحاولة الثانية، سحب الحافة إضاءة في دليل أنبوب، أدنى الدليل أنبوب 0.25 مم، ثم حاول مرة أخرى.
    3. كرر حتى الشرائح إضاءة من خلال أنبوب دليل دون أي مقاومة.
    4. أقل إضاءة حتى ومشدود.
      تنبيه: لا تدفع إضاءة كل قوة ضد المقاومة. في هذه الحالات أنبوب دليل عادة قد لا اخترقت دوراً الكامل. دفع الألياف قوة يؤدي إلى ثني على نفسه، منع هذه الألياف من دخول المخ وربما تدمير التلميح ( الشكل 1 ز)-
  10. الاتصال التسليح في النهاية الأخرى لإضاءة بالبصريات أكبر إعداد أو ليزر.
  11. التأكد من أن أي ضوء مرئياً للرئيسيات غير البشرية.
    1. استخدام التدريع تعتيم أو الضوء على استيعاب إحباط ليشمل كامل أبراج التسجيل-
    2. بوضع كافة الاتصالات البصرية في مغلفات محمية من الضوء امتصاص إحباط.
    3. درع جميع كابلات التصحيح مع الضوء أما امتصاص إحباط أو الأشرطة الكهربائية أسود.
    4. كإجراء وقائي إضافي، وضع بنك أدى (الصمام) شرك من نفس اللون الخفيفة المستخدمة في التجربة وراء الرئيسيات غير البشرية وفلاش المصابيح باستمرار في 2.5 هرتز. وهذا يمنع العيون يتكيف تماما مع الظلام. إذا كان هناك تسرب الضوء غير مقصود، وميض هذا سيساعد على منع التسرب من العمل كمشغل سلوكية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإضاءة لكميات كبيرة من الدماغ في المقدمات غير البشرية يسمح للتلاعب أوبتوجينيتيك سلوكيا ذات الصلة. أكر et al. (2016) تستخدم إضاءة هذا الحجم الكبير مع تحول الأحمر هالورهودوبسين، جوز 7 لدراسة مساهمة الزمانية الحقل العين أمامي (فف) الموجهة بالذاكرة ساككاديس في اثنين من القردة الريسوسي. على وجه التحديد، تم حقن مع ناقل فيروسية التي تحتوي على جوز فف الخلايا العصبية ومضيئة ثم مع استخدام إضاءة الحجم الكبير أثناء عرض الهدف أو فترة التأخير، أو فترة إعداد السيارات مهمة saccade الموجهة بذاكرة الضوء ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بينما أوبتوجينيتيك أدوات تستخدم على نطاق واسع لدراسة الأمراض وعلم وظائف الأعضاء في القوارض، التحدي التقني منيرا الدماغ الكبيرة كميات محدودة استخدام أوبتوجينيتيكس في المقدمات غير البشرية. رائد الدراسات في القرود تستخدم كثافات الطاقة الخفيفة الكبيرة (~ 100 ميغاواط/مم2 إلى 20 واط/م2) لإلقاء الضوء على الكميات الصغيرة، وربما < 1 ملم3، والإبلاغ عن الآثار السلوكية متواضعة مع أوبسينس عليه في قشرة4، 9،،من

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتسلم LCA التمويل من زمالة ندسيج، جرفب جبهة الخلاص الوطني، وأصدقاء المعهد ماكغفرن. وتسلم الجيش الشعبي التمويل يونيس نورا آروب صندوق، فئة الصندوق آروب عام 1995 معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا، هاري والصندوق آروب معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا. حساب الضمان باء تعترف بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة 2R44NS070453-03A1، بجائزة هارفي "الاتجار الدولي في الانبعاثات"، وجائزة مؤسسة روبرتسون الخلايا الجذعية في نيويورك. وتسلم RD التمويل من EY017292 المعاهد الوطنية للصحة. مايكل وليامز ساعد الفريق على تنظيم وجمع اللوازم قبل التصوير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الألياف الضوئية البلاستيكيةالألياف البصرية الصناعيةSK-10قطر 250 ميكرون ، متجرد الأسلاك خط Super Eska
أدوات كلاين1104722 مقياس
ملزمة المشبكويلتون11104عام طاولة جبل نائب المشبك
مسدس حراري مزدوج درجةميلووكي8975-6570 / 1,000 درجة ؛ F
مختبر علامةVWR52877
مجهر تشريحVistaVision82027-156مجهر ستيريو مع ضوء متوهج مزدوج ، تكبير 2X / 4X ، متوفر من
شريط VWR LabVWR89097-9724 عبوات من اللون البنفسجي ؛ ومع ذلك ، لا يهم لون الشريط
كربيد السيليكونThorLabsLF5P5 ميكرون حصى ، 10 عبوات
لوح لف أكسيد الألومنيومThorLabsLF3P3 ميكرون حصى ، 10 عبوات
الألومنيوم اللف   ورقةThorLabsLF1P1 ميكرون حصى ، 10 عبوات
لوح لف ألومينا مكلسThorLabsLF03P0.3 ميكرون حصى ، 10 عبوات
سكين ساخنألياف بصرية صناعيةIF37001260 وات ،
نطاقفحص الألياف الثقيلةThorLabsFS201اختياري
من الفولاذ المقاوم للصدأ الطويقالألياف البصريةالدقيقة MM-FER2003SS-265 265ميكرون القطر الداخلي
1 مل حقنةBD14-823-30يفضل طرف Luer-lok لتقليل مخاطر التسرب ، ولكن ليس هناك حاجة ماسة
الايبوكسيالألياف البصرية الصناعية40 0005
18 إبرة حادةقياس BD3051801.5 بوصة
طول مناديل خالية من الوبر (KimWipe)ThorLabsKW32متاح من العديد من البائعين
رقائق امتصاص الضوءThorLabsBKF12
الشريط الكهربائي3MTemflex 1700اختياري ، قد يحل محل العلامات التجارية / الموديلات الأخرى
26 قياس إبرة حادة   ؛BD3051110.5 بوصة طول
MicromanipulatorSiskiyou70750000Eقد يحل محل العلامات التجارية / الموديلات الأخرى
ذراع SteretacticKopf1460قد يحل محل العلامات التجارية / الموديلات الأخرى
نظارات السلامة بالليزرKenTeKKCM-6012يجب أن يتم اختيارها بناء على لون الليزر المستخدم ، على سبيل المثال المعطى هنا
الليزر أو مصدر الضوء الآخرvortranStradus 473-50مثال على الليزر الأزرق
دمج المجالThorLabsS142Cعداد الطاقة المرفق ، متوفر أيضا من ThorLabs ، البند #PM100D
غرفة تسجيل UltemCrist instrumentcompany 6-ICO-J0حسب الطلب مع محاذاة الشق
برج microdrive مع المشابكNANDRTBL-CMS
أنبوب التوجيهمخصصN / Aمصنوعة من إبرة شوكية قياس 25 (BD) أو أنابيب غير حادة
NAN نظام تشغيلNAN NANDrive
تصميم شبكة مخصصمخصصةمتاحة عند الطلب
ملقط حادFischerScientific08-875-8Aملقط حاد من الفولاذ المقاوم للصدأ عام ملاقط
رقميةNeiko01407Aمتوفر على amazon.com. قد تختار الفرجار بدقة أدق لقياسات أكثر دقة.
كابل التصحيحThorLabsFG200LCC مخصصهذا أحد الأمثلة على العديد من كبلات التصحيح الممكنة. طالما أن قطر الألياف أقل من أو يساوي قطر الألياف لمصباح الحجم الكبير وطالما أن واجهة الموصلات ، فإن أي كابل تصحيح (زجاج أو بلاستيك ، تم شراؤه أو صنعه في المختبر) مناسب لهذا التطبيق.
أغطية الغبار البلاستيكية الشفافةThorLabsCAPFحزمة من 25
تزاوج منفصل من السيراميكPrecision Fiber Products، Inc.SM-CS1140S
الحرارة ورقة لف من أكسيد إلى البلاستيك شركة خطط غلاف

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Herculano-Houzel, S. The human brain in numbers: a linearly scaled-up primate brain. Front Hum Neurosci. 3, 31(2009).
  2. Tamura, K., et al. A glass-coated tungsten microelectrode enclosing optical fibers for optogenetic exploration in primate deep brain structures. J Neurosci Meth. 211 (1), 49-57 (2012).
  3. Diester, I., et al. An optogenetic toolbox designed for primates. Nat Neurosci. 14 (3), 387-397 (2011).
  4. Dai, J., Brooks, D. I., Sheinberg, D. L. Optogenetic and Electrical Microstimulation Systematically Bias Visuospatial Choice in Primates. Curr biol. 24 (1), 63-69 (2014).
  5. Ozden, I., et al. A coaxial optrode as multifunction write-read probe for optogenetic studies in non-human primates. J Neurosci Meth. 219 (1), 142-154 (2013).
  6. Ruiz, O., et al. Optogenetics through windows on the brain in the nonhuman primate. J Neurophysiol. 110 (6), 1455-1467 (2013).
  7. Chuong, A. S., et al. Noninvasive optical inhibition with a red-shifted microbial rhodopsin. Nat Neurosci. 17 (8), 1123-1129 (2014).
  8. Acker, L., Pino, E. N., Boyden, E. S., Desimone, R. FEF inactivation with improved optogenetic methods. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (46), 7297-7306 (2016).
  9. Jazayeri, M., Lindbloom-Brown, Z., Horwitz, G. D. Saccadic eye movements evoked by optogenetic activation of primate V1. Nat Neurosci. 15 (10), 1368-1370 (2012).
  10. Gerits, A., et al. Optogenetically Induced Behavioral and Functional Network Changes in Primates. Curr Biol. 22 (18), 1722-1726 (2012).
  11. Ohayon, S., Grimaldi, P., Schweers, N., Tsao, D. Y. Saccade modulation by optical and electrical stimulation in the macaque frontal eye field. J Neurosci. 33 (42), 16684-16697 (2013).
  12. Cavanaugh, J., et al. Optogenetic inactivation modifies monkey visuomotor behavior. Neuron. 76 (5), 901-907 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة