Method Article

تشريح وإعداد شريحة الاكليلية وضع الغدة النخامية الماوس

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم بروتوكولا لتشريح الغدد النخامية وإعداد أقسام الاكليلية الغدة النخامية من الفئران البلدان النامية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن. يتكون من الغدد اثنين مع أصول الجنينية منفصلة والوظائف – في نيوروهيبوفيسيس وفي أدينوهيبوفيسيس. الغدة النخامية الماوس نامية صغيرة وحساسة بشكل بيضاوي ممدود. مقطع الاكليلية هو المفضل لعرض كل من أدينوهيبوفيسيس ونيوروهيبوفيسيس في شريحة واحدة من الغدة النخامية الماوس.

والهدف من هذا البروتوكول تحقيق الأقسام الاكليلية الغدة النخامية سليمة مع أبنية الأنسجة المحفوظة جيدا من البلدان النامية الفئران. ونحن في هذا البروتوكول، تصف بالتفصيل كيفية تشريح ومعالجة الغدد النخامية بشكل صحيح من البلدان النامية الفئران. أولاً، يحدد نضح ترانسكارديال الفورمالدهايد قبل تشريح الفئران. ثم يتم تطبيق ثلاث تقنيات تشريح مختلفة للحصول على الغدد النخامية سليمة تبعاً لعمر الفئران. للفئران الجنينية سن 17.5 يوما الجنينية (ه)-18.5 وحديثي الولادة تصل إلى 4 أيام، هي تشريح لمنطقتي سيلا كامل بما في ذلك عظم وتدي والغدة تريجيمينال الأعصاب. الجراء هي تشريح عمره يوما بعد الولادة (ع) 5-14، الغدد النخامية متصلة مع الأعصاب تريجيمينال ككل. للفئران القديمة أكثر من 3 أسابيع، يتم تشريح الغدد النخامية بعناية مجانية من الأنسجة المحيطة بها. ونحن أيضا عرض كيفية تضمين الغدد النخامية في اتجاه سليم باستخدام الأنسجة المحيطة بها كمعالم للحصول على إشباع المقاطع الاكليلية. هذه الأساليب مفيدة في تحليل الملامح النسيجي واﻹنمائية الغدد النخامية في وضع الفئران.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن1،2. تشريحيا، الغدة النخامية بنية '' اثنين في واحد '' تتكون من نيوروهيبوفيسيس وأدينوهيبوفيسيس. هذه الأجزاء لها أصول جنينية مختلفة والدالة بطريقة مختلفة جداً. مشتق من الأديم الظاهر العصبي neurohypophysis وتفرز الاكسيتوسين والهرمون المضاد. Adenohypophysis تنبع من الحقيبة راثكي وهي المسؤولة عن الإفراج عن الهرمونات بما فيها هرمون النمو، البرولاكتين، – الغدة الدرقية الهرمون، جريب – الهرمون، والهرمون، وهرمون ﻫﺭﻣﻭﻧ، و الصباغية – الهرمون3،،من45.<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هي ولدت الفئران C57BL/6 في ظروف معينة خالية من مسببات الأمراض. جميع الأساليب التجريبية الحيوانية امتثالا للمبادئ التوجيهية التي أقرتها لجنة الأخلاقيات في الجامعة الطبية العسكرية الثانية ورعاية الحيوان.

1-"تسلخ من بعد الولادة تطوير الغدة النخامية"

  1. إجراء التخدير: مكان الفئران حديثي الولادة (P0-P5) على الثلج المجروش للحث على انخفاض درجة حرارة الجسم. للفئران التي مضى عليها أكثر من 5 أيام عمر، حقن يوريتان 5% (30 ميليلتر/غرام من وزن الجسم) إينترابيريتونيلي للحث على التخدير. تقييم الاستجابات للذيل/تو يقرصه. المضي قدما إلا بعد أن يكون الماوس لا يستجيب للمنبهات الضارة.
  2. تأمين الماوس في موقف ضعيف (ملقى على ظهره والوجه إلى الأعلى)....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويقدم هذا البروتوكول وسيلة تشريح الغدد النخامية من الفئران البلدان النامية. للماوس الولدان، ومنطقتي سيلا كاملة تحتوي على الغدة النخامية والأعصاب تريجيمينال، وتحت تم تشريح عظم وتدي خارجاً من قاعدة الجمجمة. الغدة النخامية صغيرة وحساسة لا تزال سليمة أثناء العملية (الشكل 1A). للفئران التي مضى عليها أكثر من 5 أيام، كانت الغدد النخامية يعلق على الأعصاب trigeminal الأفقي ثم عزلة. الهيكل الإجمالي للغدة النخامية معزولة عن P7 كذلك المحافظة على الماوس (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لوضع بيتويتاريس مورين، كان من الصعب من الناحية الفنية للحصول على أقسام الاكليلية السليمة نظراً لخصائصها صغيرة وهشة والخصائص التشريحية الفريدة6،8. ومن ثم اختيار بعض المجموعات البحثية أبواب منتصف السهمي لتحليل مورفولوجية الجنينية والوليدية الغدة النخامية11،12. على الرغم من أن القسم منتصف السهمي للغدة النخامية أيضا قادرة على عرض أمامي، والمتوسطة، والخلفي الفصوص في شريحة واحدة، قسم الاكليلية المفضل عالية كما .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل المنح "الوطنية الطبيعية مؤسسة العلوم الصينية" (31201086 و 31470759 و 31671219) و "شنغهاي مؤسسة العلوم الطبيعية" (12ZR1436900).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<قوي >أدوات / معدات < / قوي >
مقص جراحي مستقيمJinZhongJ21010يمكن شراؤه من بائعين
آخرين يمكن شراء مقص ناعم - strainghtJinZhongWA1010من بائعين آخرين يمكن
ملقط حادJinZhongJD1020من بائعين آخرين
ملقط ناعمDumontRS-5015الغدة النخامية
26G (0.45 مم)HongDaلحقنة نضح عبر القلب
(1 مل)شراء 300841دينار بحرينيمن بائعين آخرين يمكن
حقنة (10 مل)دينار بحرينيمن بائعين آخرين يمكن
430165Corningمن بائعين آخرين
يمكن شراء ورق تنظيف العدسةShuangQuanمن بائعين آخرين المجهر
التشريحيOLYMPUSSZX-ILLB2-200يمكن شراؤه من بائعين آخرين يمكن
كاسيتالتضمين Thermo Fisher22-272423من بائعين آخرين
وحدة التحكم لتضمين الأنسجةيمكن شراء KEDEEKD-BM11من بائعين
MicrotomeThermo FisherHM315Rمن بائعين آخرين يمكن
شرائح Superfrost-PlusThermo Fisher22-037-246من بائعين آخرين يمكن
غطاء زجاجThermo Fisher12-543من بائعين آخرين
مجهر مضانأوليمبوسBH2-RFCAمن بائعين
آخرين < قوي>الاسم< / strong>Company< / strong> Catalog NumberComments
Recodes
UrethaneBBIEB0448
NaClSigmaS9625for PBS
KClSigmaP9541for PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650ل PBS
K2HPO4SigmaP2222ل PBS
NaNO2Sigma237213
حقن الصوديوم الهيبارينSPHH31022051للتروية الملحية
بارافورمالالديهايد (PFA)سيجماP6148
الإيثانولSCR10009218
الزيلينSCR10023418
البارافينثيرمو فيشر8330
هيماتوكسيلينسيجماH9627لليد & تلطيخ
Eosin YSigmaE4009لليد & E تلطيخ
الأرنب هرمون النمو المضاد للنمو (GH)الهرمونللجسم
المضاد للجسمبرنامج الغدة النخامية
الأرنب المضاد للفأر GFAP الجسم المضادSigmaG9269للتلطيخ
المناعي للماعز المضاد للأرانب IgG ، HRPجاكسون111-035-003لنظام TSA
NEN منتجات علومNEL700للتلوين المناعي
ستربتافيدين ، أليكسا فلور 594ثيرمو فيشرS32356للتلوين المناعي
المضاد ل FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090للتلوين المناعي
شراء لعزل إبرة يمكن شراء شراء شراء نظام آخرينيمكن شراء شراء شراء يمكن شراء الوطني المناعي المناعي الحياة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

Related Articles