مقالة منهجية

التجهيز لانسجة القلب البشري تجاه المصفوفة خارج الخلية التي ذاتية تجميع المائية في المختبر و في فيفو التطبيقات

DOI:

10.3791/56419

⸱

ديسمبر 4, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, and Berlin Institute of Health, 2Berlin-Brandenburg Center for Regenerative Therapies (BCRT), 3German Center for Cardiovascular Research (DZHK), 4Deutsches Herzzentrum Berlin (DHZB), 5Department of Cardiovascular Surgery, Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, and Berlin Institute of Health

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويصف هذا البروتوكول ديسيلولاريزيشن الكامل لعضلة القلب البشري مع الحفاظ على عناصر المصفوفة خارج الخلية. الاستمرار في معالجة نتائج المصفوفة خارج الخلية في إنتاج المجهرية الدقيقة والمائية تجميع ذاتي سيتوبروتيكتيفي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الاستعدادات اللاخلوي المصفوفة خارج الخلية هي مفيدة لدراسة التفاعلات الخلية-مصفوفة وتسهيل تطبيقات العلاج خلية التجدد. تتوفر العديد من المنتجات التجارية المصفوفة خارج الخلية الهلاميات المائية أو الأغشية، ولكن هذه لا تملك أنسجة محددة النشاط البيولوجي. لأنه عادة ما ديسيلولاريزيشن التروية غير ممكن مع أنسجة قلب الإنسان، قمنا بتطوير عملية ديسيلولاريزيشن غمر الخطوة 3. شرائح احتشاء عضلة القلب البشري المشتراة خلال الجراحة أولاً تعامل مع المخزن المؤقت لتحلل الاسموليه خالية من المنظفات، تليها الحضانة مع دوديسيل كبريتات الصوديوم الأيونية المنظفات، وإتمام العملية عن طريق استغلال نشاط الدناز الجوهرية مصل الدم البقري الجنين. نتائج هذا الأسلوب في أوراق القلب المصفوفة خارج الخلية مع خلية خالية إلى حد كبير الحفاظ على تكوين النسيج الليفي العمارة وبيوبوليمير، التي عرضت تقديم منبهات بيئية محددة للسكان خلية القلب والجذعيه pluripotent الخلايا. أوراق القلب المصفوفة خارج الخلية يمكن ثم كذلك المجهزة إلى مسحوق يمثل دون تعديل المواد الكيميائية كذلك، أو، عن طريق الهضم بيبسن قصيرة الأجل، وإلى المائية مصفوفة خارج الخلية قلبية تجميع ذاتي مع الحفاظ على بيواكتيفيتي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصفوفة خارج الخلية (ECM) يوفر ليس فقط دعم الهيكلية ولكن مهم أيضا للخلية البيولوجية والأنسجة تعمل1. في القلب، ويشارك إدارة المحتوى في المؤسسة في تنظيم استجابات باثوفيسيولوجيك مثل التليف والتهاب والأوعية، والدالة الهوس كارديوميوسيتي وبقاء ومصير الخلية السلف المقيمين. بالإضافة إلى مكوناته الأولية-glycoproteins الليفي والجليكوزامينوجليكان وبروتيوجليكانس--أنه يحتوي على مجموعة من عوامل النمو يفرز، السيتوكينات، والحويصلات الغشائية التي تحتوي على الأحماض النووية والبروتينات2،3.

مؤخرا أصبح من الواضح أن اللاخلوي ECM الاستعدادات ليست فقط لا تقدر بثمن لدراسة التفاعلات الخلية-مصفوفة، بل أيضا للتطبيقات المستندة إلى الخلية العلاجية المحتملة. أهمية توفير بيئة ملائمة للمنتجات العلاجية الخلايا أو الأنسجة المهندسة هو الآن على نطاق واسع. وقد بذلت محاولات للجمع بين تعليق خلية أو المركبات النشطة مع المعرفة الهلاميات المائية بيوبوليميريك4،،من56 أو مع الكوكتيل بروتين يفرز من الخلايا ساركومه مورين (أي، ماتريجيل، جيلتريكس) 7-بيد السابقة محدودة بيواكتيفيتي، هذه الأخيرة إشكالية في عمليات برنامج الرصد العالمي-الصف، وكلاهما يفتقر بيواكتيفيتي الخاصة بأنسجة القلب ECM (الوزاري)8،،من910، 11،،من1213.

ديسيلولاريزيشن عضلة القلب كانت تؤديها سابقا نضح قلب كله عن طريق ال14،المفرج التاجية15. حين يكون ذلك ممكناً في قلوب الحيوان، قلوب البشر سليمة تتوفر إلا نادراً. ولذلك، كان يفضل عملية غمر الذي يسمح لمعالجة عينات الأنسجة التي تم الحصول عليها في غرفة العمليات. ويتضمن البروتوكول "3-خطوة" لدينا منفصلة 3 حضانة الخطوات هي تحلل، سولوبيليزيشن، وإزالة الحمض النووي. غلة ECM احتشاء عضلة القلب البشري إلى حد كبير الحفاظ على البروتين و glycosaminoglycan تكوين16،17. هذه الشرائح الوزاري السماح للدراسات في المختبر من تفاعلات الخلية-مصفوفة ولكن سيئة مناسبة للتطبيقات العلاجية المحتملة على الإنسان على نطاق. ثم تم تمديد عملية التصنيع لإنتاج المجهرية الدقيقة الوزاري المجففة بالتبريد أو المائية الوزاري18.

يسمح هذا البروتوكول ديسيلولاريزيشن لعضلة القلب البشري التي تم الحصول عليها من عينات جراحية، الحفاظ على المكونات الرئيسية للمصفوفة خارج الخلية احتشاء عضلة القلب (ECM) ونشاطهم البيولوجية. يوصي بهذا البروتوكول عندما ECM القلب البشري مع الحفاظ على الأنسجة على حدة بيواكتيفيتي مطلوب للدراسات التجريبية من تفاعلات الخلية-مصفوفة، أو عند الحاجة إلى بيئة ملائمة لنهج يستند إلى الخلية التجديد احتشاء عضلة القلب. من حيث المبدأ، من الممكن أيضا التكيف مع هذا البروتوكول إلى شروط GMP الصف، حيث أنه ينبغي استخدام الوزاري المجهزة التطبيقات العلاجية في المستقبل ممكناً.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكول الدراسة تتفق مع المبادئ الأخلاقية المبينة في "إعلان هلسنكي" ووافقت عليه لجنة المجلس والأخلاقيات استعراض المؤسسية للجامعة الطبية في مستشفى الشارتي. جميع المرضى المقدمة كتابة، المستنيرة باستخدام أنسجة القلب للدراسات التجريبية.

1. إعداد عضلة القلب البشري لتقطيع

  1. الحصول على عضلة القلب البطين الأيسر (الحجم يختلف تبعاً لنوع الجراحة) مباشرة من غرفة العمليات والنقل في برنامج تلفزيوني الباردة في حاوية معقمة.
  2. قم بإزالة جميع الأنسجة الدهنية مع مشرط معقم مع شفرة رقم 10 تحت ظروف معقمة.
  3. قطع في عضلة القلب في مكعبات حوالي 1 × 1 × 1 سم باستخدام مشرط.
  4. ضع المكعبات في أنابيب معقمة 50 مل.
    ملاحظة: لوقفه، نفذ الخطوة 1.5، وإلا تابع مع الخطوة 2، 2. تجنب دورات تجميد أذاب المتكررة لمنع تدهور البروتين وانخفاض في نوعية الأنسجة.
  5. تخزين الأنابيب التي تحتوي على المكعبات في-80 درجة مئوية. ويمكن تخزين الأنسجة لعدة أشهر.

2-تقطيع مكعبات عضلة القلب إلى شرائح

  1. أن tube(s) تتضمن المكعبات المعدة خارج الثلاجة.
  2. النقل على الجليد كريوستات.
  3. ضبط درجة حرارة الكائن والدائرة إلى-15 درجة مئوية.
    ملاحظة: درجة الحرارة المناسبة أمر حاسم لضمان تمزيقها الكمال.
  4. تشيل أنابيب فارغة 50 مل والطوابع في الدائرة أو على الثلج الجاف.
  5. قم بإضافة طبقة (حوالي 0.5-1.0 مل) من متوسطة كريوسيكشن على ختم الباردة واسمحوا أنها تجمد حتى يصبح أبيض ومتين.
  6. إضافة طبقة ثانية من كريوسيكتيون المتوسطة ووضع مكعب عضلة القلب على هذه الطبقة.
  7. تأكد من كريوسيكشن المتوسطة وعضلة القلب مجمدة تماما قبل المتابعة.
    ملاحظة: عند متوسط العينة وكريوسيكشن ليست مجمدة تقطيع ستضعف. يتحول المتوسطة كريوسيكتيون مجمدة تماما من السوائل وشفاف متين والأبيض وغير شفافة. مكعبات احتشاء عضلة القلب تحتاج إلى 30 دقيقة على الأقل حتى 1 ح تجميد تماما إذا ما تواصل مباشرة من الخطوة 1، 4. عندما يتم تجميد الأنسجة ينبغي أن لا تشوه عندما لمست/التعامل مع ملاقط.
  8. إدراج طابع مع عضلة القلب المجمدة في الحامل وتشديد جميع المسامير.
  9. تقليم سطح النسيج حتى يتم الحصول سطح حتى تقطيع.
  10. قم بتقطيع السمك إلى 300 ميكرون.
  11. قسم عضلة القلب المجمدة مع تقطيع التلقائي. وهذا يضمن أقسام قطع موحدة. يمكن شرائح حوالي 30-40 مقاطع من مكعب واحد.
  12. ضع كل شريحة بعد تقطيع فضفاضة في أنبوب 50 مل بريكوليد.
    ملاحظة: لا تضغط على شرائح أو حزمة محكم. يمكن أن تناسب شرائح تقريبا 40 في أنبوب واحد.
  13. إغلاق الأنابيب شغلها ووضع على الجليد.
    ملاحظة: لإيقاف الذهاب في الخطوة 2، 14، وإلا تابع مع الخطوة 3.2.
  14. تخزين شرائح عضلة القلب في-80 درجة مئوية. ويمكن تخزين الشرائح لعدة أشهر.

3-ديسيلولاريزيشن شرائح عضلة القلب البشري

  1. أن العدد اللازم من أنابيب 50 مل تتضمن أجزاء عضلة القلب من الثلاجة-80 درجة مئوية والنقل على الجليد.
  2. نقل الأجزاء المجمدة لكل 50 مل أنابيب من الخطوة 3.1 في كوب معقم واحد. يتم إضافة شرائح حوالي 40 للكأس الواحدة وأنبوب 50 مل. ينبغي أن يكون الكأس ثلاث مرات حجم أنابيب 50 مل؛ على سبيل المثال، على ديسيلولاريزيشن أنبوب 50 مل واحد استخدام كوب 150 مل.
  3. إضافة حل تحلل 50 مل (10 ملم تريس، 0.1% w/v يدتا، درجة الحموضة 7.4 في ح2س) في أنبوب 50 مل مع شرائح عضلة القلب.
  4. اهتزاز عضلة القلب شرائح في كوب معقم 100-150 لفة في الدقيقة بشكل مستمر ح 2 في درجة حرارة الغرفة.
  5. ضغط السائل مع شرائح الأنسجة من خلال مصفاة خشنة. نقل شرائح الأنسجة مع الملاقط كليلة لكوب عقيمة جديدة. إضافة 50 مل من الحزب الديمقراطي الصربي 0.5% في برنامج تلفزيوني لكل أنبوب الأولية 50 مل من شرائح عضلة القلب (مثلاً، استخدام 100 مل مخزونات النشر الاستراتيجي الحل عندما يتم يجري ديسيلولاريزيد أنبوبين 50 مل من أقسام احتشاء عضلة القلب).
  6. اهتز بشكل مستمر ح 6 لفة في الدقيقة 100-150 في درجة حرارة الغرفة.
  7. ضغط السائل مع شرائح الأنسجة من خلال مصفاة خشنة. نقل شرائح الأنسجة مع الملاقط كليلة لكوب عقيمة جديدة ويغسل 3 مرات مع 50 مل برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق في كل حين تهز 150 لفة في الدقيقة. يغسل بعد ذلك، بين عشية وضحاها في برنامج تلفزيوني مع 1% البنسلين/ستربتوميسين و 1% النيستاتين (برنامج تلفزيوني-P/S-N) في 100-150 دورة في الدقيقة و 4 درجات مئوية في حين تهتز.
    ملاحظة: الغسيل شامل أمر حاسم لإزالة أي بقايا الحزب الديمقراطي الصربي. بقايا من الحزب الديمقراطي الصربي مواد سامة عندما يستخدم في تركيبة مع الخلايا إدارة المحتوى في المؤسسة.
  8. إزالة الحل الغسيل وإضافة 25 مل يسخن FBS (37 درجة مئوية) مع 1% البنسلين/ستربتوميسين و 1% النيستاتين لشرائح ديسيلولاريزيد كل أنبوب الأولية 50 مل من شرائح عضلة القلب.
  9. احتضانها ح 3 في 37 درجة مئوية. في هذه الخطوة، يتم إزالة أي الحمض النووي الباقية من المصفوفة بسبب نشاط الدناز الجوهرية FBS.
  10. نقل الشرائح إلى كوب عقيمة جديدة ويغسل 3 مرات مع 50 مل برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق في كل حين تهز 150 لفة في الدقيقة.
    ملاحظة: شرائح المحتوى يمكن تخزين في برنامج تلفزيوني-P/S-N عند 4 درجة مئوية لعدة أيام. ومع ذلك، من المستحسن المضي فورا.

4-تجهيز الوزاري ديسيلولاريزيد إلى مسحوق

  1. وضع شرائح ECM فضفاضة في صفيحة 6-بئر جديدة عقيمة. تجميد ECM في-80 درجة مئوية وليوفيليزي لمدة يومين في ليوفيليزير.
    ملاحظة: يمكن وضع شريحة واحدة أو أكثر في البئر. ترتيب الشرائح تغطي كامل سطح البئر. الشرائح متداخلة لا تؤثر على نجاح نضح اللاحقة.
  2. لنضح الشريحة إدارة المحتوى في المؤسسة، أنابيب استخدام المسارات المحددة (انظر الجدول للمواد) التي تحتوي على 1.4 مم حبات السيراميك. ملء الأنابيب فضفاضة مع ECM المجففة بالتبريد باستخدام الملقط حادة معقمة. لتحقيق أفضل النتائج، ينصح وزن إجمالي لإدارة المحتوى في المؤسسة بين 10-20 ملغ.
    ملاحظة: إذا كانت معبأة إدارة المحتوى في المؤسسة مسرف في أنابيب الطحن عملية نضح سوف تتأثر سلبا.
  3. الأداة الإضافية-تجميد الأنابيب في نيتروجين سائل.
    تحذير: النتروجين السائل درجة الحرارة منخفضة للغاية، وملابس الحماية الشخصية المناسبة.
  4. إدراج أنابيب المجمدة في آلة طحن ويطحنون في إدارة المحتوى في المؤسسة.
    1. تعيين مدة 30 ق وبحد أقصى سرعة وبدء تشغيل الجهاز.
    2. بعد الانتهاء، إخراج الأنابيب وتجميد الأداة مرة أخرى في نيتروجين سائل.
    3. كرر خمس مرات.
  5. أغسل المجهرية الدقيقة من الأنابيب بإضافة 1 مل ddH2س كل أنبوب ويهز أو دوامة لإكمال سولوبيليزينج. تصفية الحل غير متجانسة من خلال شبكة 200 ميكرومتر في أنبوب 50 مل.
  6. تجميد الأنبوبة في النيتروجين السائل أو-80 درجة مئوية.
  7. استبدال غطاء الأنبوب القياسية مع عامل تصفية 0.22 ميكرومتر. غطاء عامل التصفية هذا يمنع المتدفقة من الأنبوب المسحوق ولكن يسمح دوران الهواء لتبخر الماء.
  8. إدراج هذه الأنابيب في ليوفيليزير وليوفيليزي مرة أخرى لإزالة الماء من الخطوة (الخطوة 4، 5)
    ملاحظة: ليوفيليزيشن في هذه الخطوة يمكن أن يستغرق مدة تصل إلى 3 أيام.
  9. تخزين مسحوق في-80 درجة مئوية حتى مزيد من المعالجة أو الاستمرار في الخطوة 5، 1.

5-إنزيم استناداً إلى هوموجينيزينج من الوزاري الجسيمات الدقيقة

  1. حل بيبسن الخنزير في 0.01 M HCl (pH 2.0) بتركيز 1 ملغ/مل. ضع على شاكر روتاري في درجة حرارة الغرفة حتى أنه يذوب تماما.
  2. حل مسحوق ECM البشرية المجففة بالتبريد (الخطوة 4، 8) في حل بيبسن بتركيز نهائي 10 ملغ/مل. مزيج دقيق من خلال بيبيتينج. إجمالي الحجم يعتمد على مقدار الحاجة إلى حل إدارة المحتوى في المؤسسة. على سبيل المثال، يحل 10 ملغ مسحوق ECM في 1 مل بيبسن الحل.
    ملاحظة: حل جسيمات يمكن دعم عن طريق فورتيكسينج لطيف (1,000-1,500 لفة في الدقيقة). تبقى الكتل المجهرية الدقيقة سوف تؤثر سلبا على الهضم.
  3. نقل الحل إلى أنابيب 2 مل بحجم 1 مل كل أنبوب.
  4. ضع الأنابيب في شاكر أنبوب ح 48 27 درجة مئوية و 1,200 في الدقيقة.
  5. إخراج الأنابيب من شاكر ومكان على الجليد أو حامل أنبوب تبريد مسبقاً.
  6. مزيج 1/9 حجم الحل ECM الباردة x 10 برنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4) مع 1/10 حجم الحل ECM الباردة 0.1M هيدروكسيد الصوديوم في الأنبوب بريكوليد والمكان على الجليد. هذا الخليط سوف تحييد الحل ECM هضمها ولا رجعة فيه إلغاء تنشيط في محيط.
  7. إضافة حل إدارة المحتوى في المؤسسة إلى تحييد خليط ومزيج دقيق من خلال بيبيتينج أو فورتيكسينج.
  8. تعيين في إدارة المحتوى في المؤسسة إلى التركيز المطلوب مع برنامج تلفزيوني 1 x (درجة الحموضة 7.4). يمكن التحقق من الرقم الهيدروجيني للحل مع ورقة الأس الهيدروجيني.
    ملاحظة: حساب مثال لمل 10 يهضم حل إدارة المحتوى في المؤسسة:
    إضافة 10 ملغ بيبسن الخنزير إلى 10 مل من HCl (pH 2.0).
    إضافة مسحوق 100 مغ ECM لحل بيبسن.
    ملاحظة: حساب مثال لتحييد 10 مل يهضم حل إدارة المحتوى في المؤسسة، وتعيين التركيز إلى 8 ملغ/مل:
    المجلدالنهائي = x Vol جابدأ ابدأ /جالنهائي = 10 ملغ/مل × 10 مل/8 ملغ/مل = 12.5 مل
    المجلد10xPBS = المجلدبدء تشغيل /9 = 1/9 من 10 مل = 1.11 مل 10 x برنامج تلفزيوني
    المجلدهيدروكسيد الصوديوم = المجلدبدء تشغيل /10 = 1/10 من 10 مل = 1 مل
    المجلد1xPBS = المجلد المجلدالنهائي -المجلدبدء تشغيل -10xPBS -المجلدهيدروكسيد الصوديوم = 12.5 مل-10 مل-مل.11-1 مل = 0.39 مل

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عرض البروتوكول 3-خطوة ديسيلولاريزيشن لعضلة القلب البشري هنا النتائج في إزالة شبه الكامل للمواد الخلوية، مع الحفاظ على عناصر المحتوى الرئيسية وبنية فيبريلار لإدارة المحتوى في المؤسسة. بعد ديسيلولاريزيشن، يتضح الإجمالي إزالة الخلايا من الأنسجة بتغيير اللون (الشكل 1A). وكشف التحليل النسيجي مع بقع ح & ه وماسون تريتشرومي الغياب الكامل للخلايا المتبقية سليمة (الشكل 1B). وكشفت فحوصات الكمي لمكونات فردية في إدارة المحتوى في المؤسسة إ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عند إعداد المحتوى احتشاء عضلة القلب البشري، ويهدف إلى تحقيق ما يلي: إزالة المواد الخلوية مكسبه ذات الصلة، والحفاظ على سلامة إدارة المحتوى في المؤسسة وبيواكتيفيتي، العقم، غير سمية للناتج النهائي، برنامج الرصد العالمي-عملية التوافق، و مدى ملاءمة المنتج لتطبيق محدد من حيث التعامل. عن طريق الجمع بين لدينا بروتوكول ديسيلولاريزيشن الخطوة 3 مع مواصلة تجهيزها إلى المجهرية الدقيقة أو المائية تجميع ذاتي، هو الحصول على المواد ECM القلب البشري الذي يمتلك النشاط البيولوجي محددة، من السهل التعامل معها، ولديها الإمكانات عدة تطبيقات

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكول الدراسة تتفق مع المبادئ الأخلاقية المبينة في "إعلان هلسنكي". المرضى المقدمة المستنيرة لاستخدام الأنسجة لأغراض البحث، وأقر عملية جمع النسيج "المؤسسي استعراض المجلس" ولجنة الأخلاقيات في مستشفى الشارتي-برلين Universitätsmedizin (EA4/028/12).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
BalanceDR Precisa ، Dietikon ، سويسراPrecisa XR 205SM
Blades Nr.10 Skalpell Nr.3InstrumenteNRW ، Erftstadt ، ألمانياSK-10-004
ألواح زراعة الخلايا (6 آبار)Greiner ، Frickenhausen ، ألمانيا657160
Cryostat CMLeica ، Wetzlar ، ألمانيا3050S
EDTACarl Roth ، Karlsruhe ، ألمانيا8043.3
أنابيب تفاعل إيبندورف (1.5 أو 2 مل)Greiner ، Frickenhausen ، ألمانيا616201 ، 623201
Falcon 15 مل ، 50 ملGreiner ، Frickenhausen ، ألمانيا188271 ، 227270
مصل بقري الجنين (FBS)Biochrome ، برلين ، ألمانياS 0115
نظام تجميد الجفافLabconco ، كانساس سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكية7670520
الفريزر (-80 درجة ؛ ج)Thermo Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكيةForma 900 Series
HClCarl Roth ، كارلسروه ، ألمانيا281.1
Microtome Blades Type 819Leica ، Wetzlar ، ألمانيا14035838925
Minilys HomogeniserPEQLAB Biotechnologie GmbH ، Erlangen ، ألمانيا91-PCSM
NaOHCarl Roth ، كارلسروه ، ألمانياK021.1
NystatinPAN Biotech ، Aidenbach ، ألمانياP06-07800
PBSThermo Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية14190-094
Penicillin / StreptomycinLife Technologies ، دارمشتات ، ألمانيا15140122
PepsinSigma-Aldrich ، Taufkirchen ، ألمانياP6887-1G
Precellys Keramik-Kit 1.4 ممPeqlab Biotechnolgie ، إرلانغن ، ألمانيا91-PCS-CK14
Rotamax 120 Plate shakerHeidolph ، Schwabach ، ألمانيا544-41200-00
SDSCarl Roth ، Karlsruhe ، ألمانياCN30.3
مجهر ستيريوLeica ، Wetzlar ، ألمانياM125
Steriflip-GP ، 0،22 & micro ؛ مميرك ميليبور ، دارمشتات ، ألمانياSCGP00525
ستيوارت الروك التناظري وخلاطات الأسطوانةسيجما ألدريتش ، تاوفكيرشن ، ألمانياZ675113-1EA
Tissue Tek O.C.T مركبهارتنشتاين ، فورتسبورغ ، ألمانيامجموعة نقل الدم TTEK
200 & micro ؛ مSarstedt, Nü mbrecht ، ألمانيا798.200.500
TRISCarl Roth ، كارلسروه ، ألمانيا5429.3
vedena Skalpellgriff الشكل 3 ، قياسي ، 125 مميسلط الضوء على المجالات الطبية ، Rohrdorf ، ألمانياCV102-003
Vortex-Genie2الصناعة العلمية ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكيةSI-0256

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Elliott, R., Hoehn, J. Use of Commercial Porcine Skin for Wound Dressings. Plastic and reconstructive surgery. 52 (4), 401-405 (1973).
  2. Rienks, M., Papageorgiou, A. -P., Frangogiannis, N. G., Heymans, S. Myocardial Extracellular Matrix: An Ever-Changing and Diverse Entity. Circulation Research. 114 (5), 872-888 (2014).
  3. Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction. Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).
  4. Boopathy, A. V., Martinez, M. D., Smith, A. W., Brown, M. E., Garcia, A. J., Davis, M. Intramyocardial Delivery of Notch Ligand-Containing Hydrogels Improves Cardiac Function and Angiogenesis Following Infarction. Tissue Eng Part A. 21 (17-18), 2315-2322 (2015).
  5. Gaetani, R., Yin, C., et al. Cardiac derived extracellular matrix enhances cardiogenic properties of human cardiac progenitor cells. Cell Transplant. , (2015).
  6. Kraehenbuehl, T. P., Ferreira, L. S., et al. Human embryonic stem cell-derived microvascular grafts for cardiac tissue preservation after myocardial infarction. Biomaterials. 32 (4), 1102-1109 (2011).
  7. Zhang, J., Klos, M., et al. Extracellular matrix promotes highly efficient cardiac differentiation of human pluripotent stem cells: The matrix sandwich method. Circulation Research. 111 (9), 1125-1136 (2012).
  8. Fong, A. H., Romero-López, M., et al. Three-Dimensional Adult Cardiac Extracellular Matrix Promotes Maturation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes. Tissue Engineering Part A. 22 (15-16), 1016-1025 (2016).
  9. DeQuach, J. A., Mezzano, V., et al. Simple and High Yielding Method for Preparing Tissue Specific Extracellular Matrix Coatings for Cell Culture. PLoS ONE. 5 (9), e13039(2010).
  10. Saldin, L. T., Cramer, M. C., Velankar, S. S., White, L. J., Badylak, S. F. Extracellular matrix hydrogels from decellularized tissues: Structure and function. Acta Biomaterialia. 49, 1-15 (2017).
  11. Tukmachev, D., Forostyak, S., et al. Injectable extracellular matrix hydrogels as scaffolds for spinal cord injury repair. Tissue Eng Part A. , (2016).
  12. Freytes, D. O., Martin, J., Velankar, S. S., Lee, A. S., Badylak, S. F. Preparation and rheological characterization of a gel form of the porcine urinary bladder matrix. Biomaterials. 29 (11), 1630-1637 (2008).
  13. Singelyn, J. M., Sundaramurthy, P., et al. Catheter-deliverable hydrogel derived from decellularized ventricular extracellular matrix increases endogenous cardiomyocytes and preserves cardiac function post-myocardial infarction. Journal of the American College of Cardiology. 59 (8), 751-763 (2012).
  14. Wainwright, J. M., Czajka, C. A., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix from an intact porcine heart. Tissue Eng Part C Methods. 16 (3), 525-532 (2010).
  15. Ott, H. C., Matthiesen, T. S., et al. Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart. Nature Medicine. 14, 213-221 (2008).
  16. Oberwallner, B., Anic, B. A., et al. Human cardiac extracellular matrix supports myocardial lineage commitment of pluripotent stem cells. Eur J Cardiothorac Surg. 47, 416-425 (2015).
  17. Oberwallner, B., Brodarac, A., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix scaffolds by decellularization of human myocardium. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (9), 3263-3272 (2014).
  18. Kappler, B., Anic, P., et al. The cytoprotective capacity of processed human cardiac extracellular matrix. Journal of Materials Science: Materials in Medicine. , (2016).
  19. Bashey, R. I., Martinez-Hernandez, A., Jimenez, S. A. Isolation, characterization, and localization of cardiac collagen type VI. Associations with other extracellular matrix components. Circulation Research. 70 (5), (1992).
  20. Wu, J., Ravikumar, P., Nguyen, K. T., Hsia, C. C. W., Hong, Y., Gorler, A. Lung protection by inhalation of exogenous solubilized extracellular matrix. PLOS ONE. 12 (2), e0171165(2017).
  21. Chen, W. C. W., Wang, Z., et al. Decellularized zebrafish cardiac extracellular matrix induces mammalian heart regeneration. Science Advances. 2 (11), e1600844(2016).
  22. Godier-Furnémont, A. F. G., Martens, T. P., et al. Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).
  23. Sarig, U., Sarig, H., et al. Natural myocardial ECM patch drives cardiac progenitor based restoration even after scarring. Acta Biomaterialia. 44, 209-220 (2016).
  24. Singelyn, J. M., DeQuach, J. A., Seif-Naraghi, S. B., Littlefield, R. B., Schup-Magoffin, P. J., Christman, K. L. Naturally derived myocardial matrix as an injectable scaffold for cardiac tissue engineering. Biomaterials. 30 (29), 5409-5416 (2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Cardiac Extracellular MatrixDecellularization ProcessHydrogel FormationTissue ProcessingMicroparticle PreparationPepsin DigestionLyophilization TechniqueCell free ECM SheetsIn Vitro ApplicationsIn Vivo Applications

مقالات ذات صلة