مقالة منهجية

تسجيلات ماكروباتش المحورية للتيارات متشابك من الوصلات العصبية العضلية اليرقات المورفولوجية

DOI:

10.3791/56493

⸱

سبتمبر 25, 2017

 , 
1Department of Neurology, School of Medicine, Wayne State University, 2Department of Anatomy and Cell Biology, School of Medicine, Wayne State University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن تسجيل التيارات متشابك فوكالي من تصور boutons متشابك في الوصلات العصبية العضلية يرقات الطور المورفولوجية الثالثة. هذا الأسلوب يتيح رصد نشاط بوتون واحد متشابك.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الوصلات العصبية العضلية المورفولوجية (NMJ) نظام نموذجا ممتازا لدراسة انتقال متشابك جلوتاماتيرجيك. يصف لنا هذا أسلوب تسجيلات ماكروباتش المحورية للتيارات متشابك من تصور بتونس في NMJ اليرقات المورفولوجية . يتطلب هذا الأسلوب تلفيق مخصصة لتسجيل ميكروبيبيتيس، فضلا عن مجهر المجمع مجهزة بتكبير عالية والهدف غمر المياه البعيدة المدى والبصريات التباين (DIC) التدخل التفاضلية ونيون مرفق. يتم وضع مسرى التسجيل على رأس بوتون متشابك محدد تصور مع DIC البصريات، وبرنامج التحصين الموسع-الأسفار، أو كليهما. وميزة هذا الأسلوب أنه يتيح رصد النشاط متشابك لعدد محدود من المواقع للإفراج. مسرى التسجيل التي يبلغ قطرها عدة ميكرون، والإفراج عن المواقع المتمركزة خارج حافة القطب لا تؤثر كثيرا على التيارات المسجلة. التيارات متشابك مسجل حركية سريعة ويمكن حلها بسهولة. هذه المزايا ذات أهمية خاصة لدراسات المسخ خطوط الطيران مع تعزيز النشاط متشابك عفوية أو غير متزامن.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المورفولوجية نظام نموذجا ممتازا دراسة الآليات الجزيئية السيطرة على انتقال متشابك. النظام العصبي العضلي في المورفولوجية جلوتاماتيرجيك، وذلك يمكن استخدام الوصلات العصبية العضلية المورفولوجية (NMJ) لدراسة ملامح مصانة من الإصدار جلوتاماتيرجيك. منذ يان وجان الدراسة1، استخدمت يرقات الطور الثالث على نطاق واسع لدراسة انتقال متشابك مقولة والعفوية عن طريق رصد إمكانات مفرق ضادات (ايبس) أو التيارات (إيكس). عادة يتم تسجيل ايبس إينتراسيلولارلي مع مايكرو زجاج حادة-قطب كهربائي، وأنها تعكس نشاط NMJ كاملة، بما في ذلك جميع boutons جعل نقاط الاشتباك العصبي في الألياف العضلية معين.

على النقيض من ذلك، يمكن تسجيل النشاط على عدد محدود من المواقع لإطلاق سراح فوكالي عن طريق وضع تلميح ميكروبيبيتي قرب المحطات العصبية أو varicosities متشابك. واستخدمت هذا الأسلوب أصلاً كاتز وميليدي2، والتسجيلات خارج الخلية المحورية قد استخدمت بنجاح في الأعمال التحضيرية NMJ عدة، بما في ذلك الضفدع3،،من45، الماوس6 , 7 , 8و القشريات9،10،11،،من1213،،من1415،16 المورفولوجية17،،من1819،20،21،،من2223. كذلك وضع هذا النهج دوديل، الذين الأمثل إعادة ترميز أقطاب24،25ماكروباتش. في التنفيذ دوديل، تتطابق هذه التقنية طريقة فضفاضة-التصحيح-المشبك26.

NMJ اليرقات المورفولوجية حددت بوضوح boutons متشابك، وخطوط المحورة وراثيا مع العلامات الفلورية العصبية المشفرة جينياً (انظر الجدول للمواد) متوفرة بسهولة. هذه المزايا مكنتنا من تسجيل اجكس وميجكس من21،20،بوتون متشابك محدد22. هنا، يمكننا وصف هذا الأسلوب بالتفصيل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-"تصنيع أقطاب تسجيل"

بروتوكول
  1. سحب أقطاب الزجاج
    1. استخدام ما يلي ساحبة ميكرويليكترودي (انظر الجدول للمواد):
      1. 1 خط: الحرارة سحب 510-السرعة 30 مرة 250؛ السطر 2: الحرارة سحب 490-السرعة 30 مرة 250-
        ملاحظة: وحدات الوقت تناظر 0.5 مللي ثانية كل وحدة؛ وحدات أخرى النسبية. وينبغي تعديل قيمة الحرارة لكل خيوط بعد إجراء اختبار الانحدار.
    2. استخدام مجهر (35 x التكبير) للتأكد من أن القطر الداخلي لمسرى سحبت في حدود 7-10 ميكرون ( الشكل 1A). تخزين الشعيرات الدموية في حاويات مغلقة بأحكام لمنع تراكم الغبار.
  2. النار لتلميع
    1. النار البولندية الشعيرات الدموية (80-90% قيمة الحد الأقصى من الحرارة s 1-2) استخدام الصغرى-فورج (انظر الجدول للمواد). تأكد من القطر الداخلي النهائي القطب مصقول 5 ميكرومتر ( الشكل 1A) 27-
  3. الانحناء
    ملاحظة: الانحناءات اثنين مصنوعة من أجل موقف مسرى أعلى عضلة تحت هدف تكبير عالية.
    1. استخدام الجهاز المبين في الشكل 1 باء. الإصلاح الكهربائي في المناور وضع الطرف الخيط، لمس عدم إجرائه.
    2. مجموعة الحرارة القيمة إلى 60-70 في المائة من الحد الأقصى، واضغط على دواسة الصغرى-فورج ل s 1-2 (انظر الجدول للمواد) لتسخين الشعيرة. استخدام إبرة على شكل L لهدم بلطف غيض من قطب كهربائي ( الشكل 1B الموسع). جعل منعطف في حوالي 90 س ( الشكل 1).
    3. عقد مسرى على لهب الشعلة باليد باستخدام الملقط وجعل منحنى الثانية على مسافة 7-10 ملم من أول منعطف وزاوية حوالي 120 o ( الشكل 1).

figure-protocol-1
الرقم 1. الخطوات النهائية لتصنيع ميكروبيبيتي. نصائح القطب (A) بعد سحب والتلميع النار. (باء-1) الإعداد لنصيحة الانحناء. ويرد (باء-2) منطقة محاصر الموسع على الحق. مسرى والشعيرة ثابتة حيث يكون تلميح القطب وضعه أعلى قليلاً من الأسلاك وعدم لمس. (جيم 1) مسرى التسجيل. ويرد (جيم 2) منطقة محاصر الموسع على الحق. أول منعطف بزاوية 90 درجة تقريبا، والمسافة بين أول منعطف وتلميح القطب حوالي 1 مم-مقياس بار = 3 مم- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

2-"خطوات تحضيرية إضافية"

  1. تحضير مثل هياموليمف (HL3) الحل (مم): كلوريد الصوديوم 70, 5 بوكل و 20 مجكل 2، 10 NaHCO 3، 5 تريهالوسي، السكروز 115، هيبيس 5 و 1 مم كاكل 2؛ ضبط درجة الحموضة إلى 7.3- 7.4. يبقى الحل في الثلاجة وجعلها جديدة كل أسبوع.
    2. جعل
  2. بيبيتس التحفيز نفس الطريقة كتسجيل الزجاج بيبيتس، إلا أن هناك لا ضرورة ينحني لهم.
    ملاحظة: إعداد أقطاب التحفيز يرد بالتفصيل في 28 و 27. قطر نهائي بعد التلميع النار ينبغي أن تكون في حدود 5-7 ميكرون.
  3. إدراج متصلاً ماصة تحفيز في حامل ميكروليكترودي حقنه.
  4. تصنيع لوحات التشريح من أطباق بيتري صغيرة (35 × 10 مم) مغلفة بالمطاط سيليكون الإيبوكسي (انظر الجدول للمواد) كما هو موضح في 28-
    ملاحظة: يجب أن يكون تصلب تماما قبل استخدام المطاط سيليكون.
  5. بيك يرقات الطور الثالث تجول وتشريح كما هو موضح في 27 ، ، من 28 29 ، 30-
    ملاحظة: لتصور بوتونس، استخدام سلالة يطير CD8-التجارة والنقل (انظر الجدول للمواد)
    1. استخدام الملقط (انظر الجدول للمواد)، اختيار يرقات الطور rd 3 من قنينة.
    2. دبوس اليرقات، وضع دبوس الأول الخلفي وآخر دبوس الأمامي (قريبة من خطاطيف الفم)-
    3. الحل إضافة HL3-
    4. جعل خفض استخدام مقص الربيع (انظر الجدول للمواد) على طول الطريق من دبوس أعلى إلى أسفل أحد في الجهة الظهرية من اليرقات.
    5. دبوس فيليه اليرقات، وضع دبابيس إضافية 2 على الجانبين الأيمن والأيسر من اليرقات.
    6. إزالة الشجاعة واستخدام الملقط تراتشياس.
    7. قص الأعصاب خارج الحبل البطني العصب باستخدام مقص الربيع-

3. التسجيلات الكهربائية من إيكس

figure-protocol-2
الرقم 2. إعداد تسجيل. نموذج NMJ المثبتة السيليكون وضع طبق بتري المغلفة (السهم) عبر المرحلة منقولة من المجهر مجمع تستقيم مزودة بقدرات ابيفلوريسسينسي وهدفا تضخم عالية، وهما ميكرومانيبولاتورس. وتتمركز المجهر على طاولة المضادة اهتزاز. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. تسجيل
    1. مكان طبق بيتري مع إعداد على المسرح المجهر ( الشكل 2). إدراج مرجع مسرى في الحمام-
    2. ملء مسرى التسجيل مع الحل HL3. تحت الهدف 10 x (انظر الجدول للمواد)، تزج قطب كهربائي في الحمام ووضعه على عضلات 6 و 7 من شرائح البطن 2 أو 3 أو 4 باستخدام ميكرومانيبولاتور ((انظر الجدول للمواد) الشكل 3 ألف-1 وألف-2)-
    3. التبديل الهدف إلى 60 x (انظر الجدول للمواد). التركيز على مجال الاهتمام باستخدام برنامج التحصين الموسع-الأسفار أو البصريات DIC. ضع طرف القطب على رأس بوتون متشابك ( الشكل 3 باء-1-3)-
      4. اضغط
    4. الكهربائي بلطف جداً على العضلات. قد تلحق الضرر NMJ الضغط المفرط أو الحث على زيادة في نشاط متشابك عفوية. تأكد من غيض مسرى ليس انسداد--إذا كان، يستعاض عن ذلك
    5. التبديل على مكبر للصوت والمجلس A/D، والكمبيوتر-
    6. اختيار وضع المشبك الجهد على مكبر للصوت.
    7. بدء تشغيل البرنامج اقتناء واختيار ' خالية من الفجوة ' الوضع.
    8. مراقبة مظهر ميكس على شاشة الكمبيوتر.
    9. التأكد من أن السعة ميكس في حدود 0.2-0.7 na.
      ملاحظة: تشير إلى أصغر إيكس أن مسرى تسجيل العيوب أو أن عدم وضعها بشكل صحيح.

figure-protocol-3
الرقم 3. تصور boutons متشابك. صورة برايتفيلد (A) A قطعة هيمي تحت 10 x التكبير (أ-1) ومنطقة محاصر الموسع عرض عضلات 6 و 7 (ألف-2، يمثل السهم مسرى التسجيل). شريط المقياس = 50 ميكرومتر. (ب) boutons متشابك هي تصور في خط المورفولوجية مع علامة العصبية مشفرة جينياً (CD8-التجارة والنقل) باستخدام برنامج التحصين الموسع-الأسفار التصوير (باء-1) أو DIC البصريات (باء-2). يتم أخذ صور مع 60 × الهدف والمكعب تصفية للتصوير بالتجارة والنقل (انظر الجدول للمواد). سينابتييتم وضع علامة بتونس ج مع الأسهم، ويظهر تراكب الفلورسنت والصور DIC في باء-3. شريط المقياس = 10 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. التحفيز
    1. باستخدام ميكرومانيبولاتور، تحت عنصر تحكم visual، ضع التحفيز الكهربائي قرب إكسون إينيرفاتينج شرائح البطن 2-4-
    2. تطبيق ضغط سلبي عن طريق سحب المكبس للمحاقن متصلاً بصاحب القطب، بحيث أن يتم سحبها في إكسون داخل قطب كهربائي ( الشكل 2).
    3. بدوره على مشجعا. أدر في وحدة العزل (انظر الجدول للمواد) لتعيين صفر الحالي، وثم بلطف زيادة، حتى تظهر إيكس (أو حتى يتم التوصل إلى العتبة).
    4. إجراء التحفيز في نظام سوبراثريشولد، مع تحفيز الحالي ازدادت حوالي مرتين، مقارنة بالحد الأدنى لمراقبة اجكس.
      ملاحظة: في تجربتنا، مثل كثافة التحفيز الأمثل لتجنب فشل إمكانات العمل وإمكانات عمل إطلاق النار. على سبيل المثال، إذا اجكس تظهر في التحفيز الحالية 0.2 mA، استخدام تيار 0.4 mA طوال التجربة.
  2. ختم المقاومة
    1. قياس المقاومة ختم القطب ماكروباتش التسجيل قبل تشغيل التبديل المقاومة الكهربائي من مكبر للصوت إلى " ختم اختبار " الموقف. ملاحظة أنه سيتم عرض قيمة ختم المقاومة في GΩ في " الحالية " النافذة.
      2. تأكد من ختم المقاومة في حدود 0.5-2 م
    2. Ω. قيم خارج هذا النطاق تشير إلى أن مسرى مصقول غير صحيح أو غير صحيح المتمركزة.
    3. رصد المقاومة الختم خلال التسجيل، والتأكد من أنها تظل ثابتة طوال التجربة.

4. تحليل

  1. تحليل تسجيلات توظيف تخصيص برامج لتحليل (انظر الجدول للمواد)-
    ملاحظة: لدينا مختبر يستخدم برامج داخلية كوانتان 31، التي يتم تخصيصها للكشف عن إيكس وسجلت فوكالي ميكس ( الشكل 4). هذا البرنامج يتضمن عامل تصفية رقمية ضبابي ويتيح الكشف عن قمم كانتال في تداخل الأحداث المتعددة كانتال ( الشكل 4 أ). نهوج أخرى موصوفة في 17-

figure-protocol-4
الرقم 4. تحليل كانتال. الكشف عن ميكس (A) وايكس (ب) بالبرمجيات كوانتان. منطقة الحدث يتسم باللون الأخضر، وتميزت قمم رؤوس الأسهم الحمراء. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تسجيلات ماكروباتش المحورية تمكين رصد النشاط متشابك من boutons متشابك مختارة (الشكل 5). عندما يتم وضع مسرى على الجزء العلوي بوتون متشابك (الشكل 5A، موقع 1)، ميكس مسجل (الشكل 5، موقع 1) الاتساع إلى حد كبير يتجاوز مستوى الضوضاء وحادة ارتفاع مراحل (في مجموعة فرعية ميلي ثانية واحدة). عندما مسرى التسجيل هو ابتعد عن بوتون متشابك من عدة ميكرون (الشكل 5A، الموقع 2)، ستريك الانخفا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المورفولوجية يمثل كائن نموذج مفيد لدراسة انتقال متشابك. وقد استخدمت العديد من تكوينات التسجيل في NMJ اليرقات، بما في ذلك تسجيلات داخل الخلايا من إمكانات متشابك، تسجيلات تيارات متشابك مع قطب هما الجهد المشبك33،34، والتنسيق ماكروباتش تسجيلات متشابك التيارات الموصوفة هنا. يسمح هذا الأسلوب الأخير القياس الكمي الدقيق لانتقال متشابك في تصور بتونس.

نجاح البروتوكول وصف نقديا يعتمد على القدرة على تصور وضوح مجال الاهتمام وتخصيص إعداد تس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تدعمه المنحة R01 MH 099557 المعاهد الوطنية للصحة

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Sutter P-97أداة SutterP-97مجتذب القطب الكهربائي
الدقيق Narishige MF-830NarishigeMF-830Microforge
WPI MF200WPIMF200Microforge
Capilaries GlassWPIB150-86-10Capilaries الزجاج
Microtorch 1WG61Grainer1WG61Microtorch
Sylgard 184 مجموعة مطاط من السيليكونداو كورنينجسيلجارد 184سيليكون لإعداد لوحات التشريح
دبابيس التشريح دبابيسأمازونB00J5PMPJAلوضع اليرقات
ملاقطWPIINC500342ملاقط لوضع المسامير وإزالة الشجاعة والقصبة الهوائية.
مقصWPIINC501778مقص لقطع بشرة اليرقات والأعصاب.
أوليمبوس BX61WIأوليمبوسBX61WIمجهر مستقيم
أوليمبوس لومبلان FL N 60xأوليمبوسUPLFLN 60Xهدف المجهر 60X
أوليمبوس UPlan FL N 10xأوليمبوسUplanfl N 10Xهدف المجهر الهدف 10X
Narishige MicromanipulatorNarishigeMHW-3ثلاثي المحاور المياه الهيدروليكية Micromanipulator
npi Electronic GmbH ELC-03XSnpi Electronic GmbHELC-03XSمكبر للصوت الكهربية
A.M.P.I MASTER 8A.M.P.I.ماستر 8محفز كهربائي
A.M.P.I ISO-FLEXA.M.P.I.عازل التحفيزIso-Flex
TMC الجدول المضاد للاهتزازTMC63-9090الجدول المضاد للاهتزاز
TMC Faraday قفصTMC81-333-90قفص فاراداي
Digidata 1322AAxon InstrumentsDigidata 1322ADigidata
ComputerDellDimension 5150كمبيوتر مع حامل
القطب الكهربائيWPIMEH3SWحامل القطب
الكهربائي مرشح بصريأوميغا بصريXF 115-2مكعب مرشح للكشف عن البروتين الفلوري الأخضر (GFP)
pCLAMP 8Axon Instruments8.0.0.81برنامج لتسجيل الإشارات
Quantanبرنامج داخليلمعالجة الإشارات
Canton-S (Wildtype)مركز بلومنجتون للمخزون64349خط الذبابة التحكم
cpx SH1هدية سخية من خطالذبابة بالضربة القاضية JT Littleton-Complexin مع زيادة إفراز
CD8-GFPBloomington Stock Center5137خط الطيران مع علامة الفلورسنت العصبي (GFP)
Win XP OS الخلايا التلقائي

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila melanogaster. J Physiol. 262 (1), 189-214 (1976).
  2. Katz, B., Miledi, R. The effect of temperature on the synaptic delay at the neuromuscular junction. J Physiol. 181 (3), 656-670 (1965).
  3. Macleod, G. T., Gan, J., Bennett, M. R. Vesicle-associated proteins and quantal release at single active zones of amphibian (Bufo marinus) motor-nerve terminals. J Neurophysiol. 82 (3), 1133-1146 (1999).
  4. Macleod, G. T., Farnell, L., Gibson, W. G., Bennett, M. R. Quantal secretion and nerve-terminal cable properties at neuromuscular junctions in an amphibian (Bufo marinus). J Neurophysiol. 81 (3), 1135-1146 (1999).
  5. Zefirov, A., Benish, T., Fatkullin, N., Cheranov, S., Khazipov, R. Localization of active zones. Nature. 376 (6539), 393-394 (1995).
  6. Macleod, G. T., Lavidis, N. A., Bennett, M. R. Calcium dependence of quantal secretion from visualized sympathetic nerve varicosities on the mouse vas deferens. J Physiol. 480 (Pt 1), 61-70 (1994).
  7. Samigullin, D., Bill, C. A., Coleman, W. L., Bykhovskaia, M. Regulation of transmitter release by synapsin II in mouse motor terminals. J Physiol. 561 (Pt 1), 149-158 (2004).
  8. Coleman, W. L., Bykhovskaia, M. Rab3a-mediated vesicle recruitment regulates short-term plasticity at the mouse diaphragm synapse. Mol Cell Neurosci. 41 (2), 286-296 (2009).
  9. Atwood, H. L., Parnas, H., Parnas, I., Wojtowicz, J. M. Quantal currents evoked by graded intracellular depolarization of crayfish motor axon terminals. J Physiol. 383, 587-599 (1987).
  10. Parnas, H., Dudel, J., Parnas, I. Neurotransmitter release and its facilitation in crayfish. I. Saturation kinetics of release, and of entry and removal of calcium. Pflugers Arch. 393 (1), 1-14 (1982).
  11. Wojtowicz, J. M., Marin, L., Atwood, H. L. Activity-induced changes in synaptic release sites at the crayfish neuromuscular junction. J Neurosci. 14 (6), 3688-3703 (1994).
  12. Zucker, R. S. Crayfish neuromuscular facilitation activated by constant presynaptic action potentials and depolarizing pulses. J Physiol. 241 (1), 69-89 (1974).
  13. Zucker, R. S. Changes in the statistics of transmitter release during facilitation. J Physiol. 229 (3), 787-810 (1973).
  14. Worden, M. K., Bykhovskaia, M., Hackett, J. T. Facilitation at the lobster neuromuscular junction: a stimulus-dependent mobilization model. J Neurophysiol. 78 (1), 417-428 (1997).
  15. Bykhovskaia, M., Hackett, J. T., Worden, M. K. Asynchrony of quantal events in evoked multiquantal responses indicates presynaptic quantal interaction. J Neurophysiol. 81 (5), 2234-2242 (1999).
  16. Bykhovskaia, M., Polagaeva, E., Hackett, J. T. Mechnisms underlying different facilitation forms at the lobster neuromuscular synapse. Brain Res. 1019 (1-2), 10-21 (2004).
  17. Cooper, R. L., Stewart, B. A., Wojtowicz, J. M., Wang, S., Atwood, H. L. Quantal measurement and analysis methods compared for crayfish and Drosophila neuromuscular junctions, and rat hippocampus. J Neurosci Methods. 61 (1-2), 67-78 (1995).
  18. Stewart, B. A., Atwood, H. L., Renger, J. J., Wang, J., Wu, C. F. Improved stability of Drosophila larval neuromuscular preparations in haemolymph-like physiological solutions. J Comp Physiol A. 175 (2), 179-191 (1994).
  19. Pawlu, C., DiAntonio, A., Heckmann, M. Postfusional control of quantal current shape. Neuron. 42 (4), 607-618 (2004).
  20. Akbergenova, Y., Bykhovskaia, M. Synapsin maintains the reserve vesicle pool and spatial segregation of the recycling pool in Drosophila presynaptic boutons. Brain Res. 1178, 52-64 (2007).
  21. Akbergenova, Y., Bykhovskaia, M. Enhancement of the endosomal endocytic pathway increases quantal size. Mol Cell Neurosci. 40 (2), 199-206 (2009).
  22. Vasin, A., Volfson, D., Littleton, J. T., Bykhovskaia, M. Interaction of the Complexin Accessory Helix with Synaptobrevin Regulates Spontaneous Fusion. Biophys J. 111 (9), 1954-1964 (2016).
  23. Wong, K., Karunanithi, S., Atwood, H. L. Quantal unit populations at the Drosophila larval neuromuscular junction. J Neurophysiol. 82 (3), 1497-1511 (1999).
  24. Dudel, J. The effect of reduced calcium on quantal unit current and release at the crayfish neuromuscular junction. Pflugers Arch. 391 (1), 35-40 (1981).
  25. Dudel, J. Contribution of Ca2+ inflow to quantal, phasic transmitter release from nerve terminals of frog muscle. Pflugers Arch. 422 (2), 129-142 (1992).
  26. Marrero, H. G., Lemos, J. R. Loose-Patch-Clamp method. , 2 ed, Humana Press. (2007).
  27. Wu, W. H., Cooper, R. L. Physiological recordings of high and low output NMJs on the crayfish leg extensor muscle. J Vis Exp. (45), (2010).
  28. Verstreken, P., Ohyama, T., Bellen, H. J. FM 1-43 labeling of synaptic vesicle pools at the Drosophila neuromuscular junction. Methods Mol Biol. 440, 349-369 (2008).
  29. Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila larval NMJ dissection. J Vis Exp. (24), (2009).
  30. Imlach, W., McCabe, B. D. Electrophysiological methods for recording synaptic potentials from the NMJ of Drosophila larvae. J Vis Exp. (24), (2009).
  31. Bykhovskaia, M. Making quantal analysis more convenient, fast, and accurate: user-friendly software QUANTAN. J Neurosci Methods. 168 (2), 500-513 (2008).
  32. Huntwork, S., Littleton, J. T. A complexin fusion clamp regulates spontaneous neurotransmitter release and synaptic growth. Nat Neurosci. 10 (10), 1235-1237 (2007).
  33. Zhong, Y., Wu, C. F. Altered synaptic plasticity in Drosophila memory mutants with a defective cyclic AMP cascade. Science. 251 (4990), 198-201 (1991).
  34. Delgado, R., Maureira, C., Oliva, C., Kidokoro, Y., Labarca, P. Size of vesicle pools, rates of mobilization, and recycling at neuromuscular synapses of a Drosophila mutant, shibire. Neuron. 28 (3), 941-953 (2000).
  35. Melom, J. E., Akbergenova, Y., Gavornik, J. P., Littleton, J. T. Spontaneous and evoked release are independently regulated at individual active zones. J Neurosci. 33 (44), 17253-17263 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة