عزل السالمونيلا تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس من الضامة

Saray Gutiérrez; Martina Wolke; Georg Plum; Nirmal Robinson

doi:10.3791/56514

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل السالمونيلا تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس من الضامة

10.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/56514

⸱

أكتوبر 25, 2017

Saray Gutiérrez¹^,² , Martina Wolke² , Georg Plum² , Nirmal Robinson¹^,²

¹Institute for Medical Microbiology, Immunology and Hygiene, University of Cologne, ²Cologne Cluster of Excellence in Cellular Stress Responses in Aging-Associated Diseases (CECAD), University of Cologne

في هذه المقالة

ملخص

يصف لنا هنا طريقة بسيطة وسريعة لعزل السالمونيلا تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس من الضامة بطلاء البكتيريا مع البيوتين وستريبتافيدين.

الملخص

Typhimurium السالمونيلا هو بكتيريا داخل الخلايا اختياري الذي يسبب التهاب المعدة والأمعاء في البشر. وبعد غزو بروبريا الصفيحة, S. البكتيريا تيفيموريوم يتم بسرعة الكشف عن فاجوسيتيزيد التي الضامة والواردة في حويصلات المعروفة فاجوسوميس من أجل أن يتحلل. عزل من س. تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس قد استخدمت على نطاق واسع لدراسة كيفية س. العدوى تيفيموريوم يغير عملية نضج يبلوع لمنع تدهور البكتيرية. كلاسيكي، عزل المحتوية على البكتيريا فاجوسوميس قامت به السكروز التدرج الطرد المركزي. بيد أن هذه العملية تستغرق وقتاً طويلاً، ويتطلب معدات متخصصة ودرجة معينة من المهارة. الموصوفة هنا طريقة بسيطة وسريعة لعزل س. تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس من الضامة بطلاء البكتيريا مع البيوتين-ستريبتافيدين-مترافق الخرز المغناطيسية. يمكن تعليق فاجوسوميس التي تم الحصول عليها بهذه الطريقة في أي مخزن من الاختيار، مما يتيح الاستفادة فاجوسوميس معزولة لمجموعة واسعة نطاق من فحوصات، مثل تحليل المستقلب، البروتين والدهن. باختصار، هذا الأسلوب لعزل س. تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس محددة، وتتسم بالكفاءة، السريعة، يتطلب الحد الأدنى من المعدات، وهو أكثر تنوعاً من الأسلوب الكلاسيكي للعزل بواسطة السكروز التدرج-تنبيذ فائق.

المقدمة

يتم تعميم الضامة الخلايا متجولة المتخصصة التي كشف وتبتلع وتحط أي الجسيمات الأجنبية موجودة في الأنسجة المحيطية، بدءاً من الخلايا أبوبتوتيك إلى غزو الكائنات الدقيقة مثل البكتيريا. عند الحصول على الاعتراف بوساطة مستقبلات سطحية الممرض علامات محددة عادة موجودة على السطح من الكائنات الحية الدقيقة (المعروفة باسم أنماط الجزيئية المرتبطة بالعوامل الممرضة أو بامبس)، الضامة الشروع في إعادة تنظيم معقدة للغشاء الخلوي في النظام المحيطي و الممرض¹فاجوسيتيزي.

ثم يرد الممرض انجولفيد بلعم في حويصلة داخل الخلايا المعروفة باسم يبلوع. من خلال سلسلة من الانصهار والانشطار الأحداث مع حويصلات أخرى مثل اندوسوميس وليسوسوميس، يكتسب يبلوع التي تح....