مقالة منهجية

تطوير Biosensor الكهروكيميائية الحمض النووي للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية

DOI:

10.3791/56585

⸱

يونيو 3, 2018

 ,  ,  , 
1Laboratory of Food Safety and Food Integrity, Institute of Tropical Agriculture and Food Security, Universiti Putra Malaysia, 2Laboratory of Functional Device, Institute of Advanced Technology, Universiti Putra Malaysia, 3Department of Chemistry, Faculty of Science, Universiti Putra Malaysia, 4La Trobe Institute for Molecular Science, La Trobe University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد على بروتوكول لتطوير بيوسينسور الحمض النووي الكهروكيميائية تضم polylactic الذهب، واستقرت حمض الكربون تعديل الجسيمات النانوية، والتحكم كهربائي للكشف عن Vibrio parahaemolyticus .

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) من مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية مشتركة التي تساهم بنسبة كبيرة من مشاكل الصحة العامة على الصعيد العالمي، التي تؤثر إلى حد كبير في معدل الاعتلال والوفيات البشرية. الأساليب التقليدية للكشف عن V. parahaemolyticus مثل الأساليب القائمة على الثقافة وفحوصات المناعية، والأساليب الجزيئية يتطلب معالجة العينة معقدة وتستغرق وقتاً طويلاً وشاقة ومكلفة. في الآونة الأخيرة، أجهزة استشعار العوامل البيولوجية قد ثبت أن طريقة الكشف عن واعدة وشاملة مع مزايا الكشف السريع والفعالية من حيث التكلفة، والتطبيق العملي. هذا البحث يركز على تطوير أسلوب سريع لكشف V. parahaemolyticus بانتقائية عالية وحساسية باستخدام مبادئ التهجين الحمض النووي. في العمل، تحقق وصف المركبة polylactic حمض استقر الذهب جسيمات نانوية (جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس) باستخدام "حيود الأشعة السينية" (XRD)، مطيافية الأشعة فوق البنفسجية-المرئية (تجاه الأشعة فوق البنفسجية)، وانتقال الميكروسكوب الإلكتروني (TEM)، ميدان الانبعاثات المسح الضوئي المجهر الإلكتروني (فسيم)، ودوري فولتاميتري (CV). كما قمنا بتنفيذ اختبار المزيد من الاستقرار، وحساسية، وإمكانية تكرار نتائج لجيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس. ووجدنا أن جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس تشكيل بنية سليمة لجسيمات نانوية استقرت في المحلول. لاحظنا أيضا أن تحسن الحساسية نتيجة أصغر قيمة المقاومة (Rct) نقل التهمة، وزيادة المساحة السطحية النشطة (0.41 سم2). تطوير أعمالنا بيوسينسور الحمض النووي يستند إلى التعديل الكربون موضع القطب (SPCE) مع جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس واستخدام الميثيلين الأزرق (ميغا بايت) كمؤشر الأكسدة والاختزال. قمنا بتقييم أحداث التثبيت والتهجين بالنبض تفاضلي فولتاميتري (دبف). وجدنا أن تكميلية وغير متكاملة، وعلى وجه التحديد كانت تتميز النوكليوتيد غير متطابقة biosensor ملفقة. كما أظهر الكشف الحساسة موثوق في دراسات ه ضد مختلف مسببات الأمراض التي تنقلها الأغذية، وفي تحديد V. parahaemolyticus في الأصداف البحرية الطازجة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

موضوعا رئيسيا للمناقشة العامة والعلمية في السنوات الأخيرة، التسمم الغذائي يرتبط أساسا بعوامل 3: الكائنات الحية الدقيقة1،2من المواد الكيميائية، والطفيليات3. الأغذية الملوثة يمكن أن يسبب عواقب صحية خطيرة في البشر، ولا سيما في مجموعة المخاطر أعلى من أولئك مع ضعف نظم المناعة والنساء المسنات، والنساء الحوامل، والأطفال الرضع والأطفال الصغار4. مع أكثر من 1 مليون من حالات الإسهال الحادة التي تحدث سنوياً في الأطفال دون سن 5 سنوات من العمر في أفريقيا، وآسيا، وأمريكا اللاتينية، التسمم الغذائي هو5،عالمي لأمراض رئيسية6 وقد أنشأت "منظمة الصحة العالمية" الكائنات الحية الدقيقة ك مساهم أهم7. Vibrio parahaemolyticus تبرز من بين سلالات ضراوة المعترف بها على نطاق واسع. عادة ما تكون موجودة في البيئات الساحلية ومصبات الأنهار، والبحرية8، هو بكتيريا سلبية الغرام، الذي ينشط في البيئات المالحة عالية، وتسبب الأمراض المعوية البشرية الخطيرة عندما تؤكل في البحرية المطبوخة، أساءوا أو الخام 9من المنتجات. بالإضافة إلى ذلك، الظروف الطبية الموجودة في بعض الناس جعلها عرضه للجرح بعدوى الإذن، وتسمم الدم أو الإصابة الناجمة عن V. parahaemolyticus10. عوامل الفوعة V. parahaemolyticus هيموليسينس تنقسم إلى نوعين التي تسهم في إمراضية المرض: الحرارة هيموليسين المباشر (TDH) ترميز الجينات tdh، والمتصلة بمقر قوات الدفاع الإقليمي هيموليسين ترميز الجينات trh11. وتوجد علامات الفوعة (الجينات tdh و trh) من باراهايموليتيكوس ف الغالب في العينات السريرية وليس في العينات البيئية.

V. parahaemolyticus تمتلك القدرة على البقاء في ظل طائفة واسعة من الظروف، الاستجابة السريعة للتغييرات البيئية12. إليه انتشار يتصاعد إمكاناتها المخاطر كما سميته يزيد بالتوازي مع الخلية الجماعية13. بل الأسوأ من ذلك، تغير المناخ هو توفير هذه البكتيريا مع شروط وافرة للتعجيل النمو السكاني خلية14. بسبب ما تردد عال، V. parahaemolyticus يجب أن يتم رصدها على طول سلسلة الإمدادات الغذائية، لا سيما في التجارة وإنتاج المأكولات البحرية نظراً لتلك المنتجات حيث أنها توجد في كميات هائلة15،16 في جميع أنحاء العالم. حاليا هي التعرف على البكتيريا ومعزولة باستخدام مجموعة من الأساليب، بما في ذلك الاختبارات الكيميائية الحيوية والإثراء وانتقائية الإعلام17، المرتبط بالانزيم إيمونوماجنيتيك ماصة الاعتداء (أليسا)18، جل نبض الميدان التفريد (بفجي) 19واختبارات تراص اللاتكس بوليميريز سلسلة من ردود الفعل (الاسترداد) الاختبارات20. عادة ما تتطلب هذه الأساليب الموظفين المؤهلين وأدوات متطورة وتقنيات الشاقة التي لا توفر معلومات حول التلوث فورا. وهذا يحد بشدة من احتمال الكشف فورا عن التلوث الضارة والتطبيقات في الموقع. أدوات الكشف السريع يبقى تحديا غير المسددة.

بيوسينسينج أخذ في الظهور كخيار وأعد للكشف عن مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية لأنه يوفر تحليل توفير الوقت وفعالة من حيث التكلفة، وعملياً، وفي الوقت الحقيقي أسلوب21،،من2223،24 . ومع ذلك، على الرغم من أن هناك العديد من النتائج الإيجابية للكشف أكثر في عينات ارتفعت والحل القياسية باستخدام أجهزة استشعار العوامل البيولوجية، لا يزال هناك نقص في البحوث المطبقة على عينات حقيقية أما في خليط مائي أو مقتطفات العضوية25. في الآونة الأخيرة، الكهروكيميائية أجهزة استشعار العوامل البيولوجية باستخدام الكشف المباشر و/أو غير المباشرة الحمض الخلوي الصبغي (DNA) قد حظيت باهتمام متزايد بين العلماء، بسبب كشفها محددة الهدف التكميلية عن طريق حدث تهجين26 , 27 , 28 , 29-هذه النهج الفريد أكثر استقرارا بالمقارنة مع هذه الأجهزة المستندة إلى الإنزيم، وبالتالي تقدم تكنولوجيا واعدة للتصغير وتسويقها. الهدف من هذه الدراسة ذكرت هنا هو بناء أداة سريعة ويمكن كشف V. parahaemolyticus بانتقائية عالية، وحساسية، والتطبيق العملي، استناداً إلى خصوصية تسلسل الحمض النووي أثناء التهجين. وتشمل الاستراتيجيات تحديد تركيبة polylactic حمض استقر الجسيمات النانوية الذهبية (جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس)30 والأقطاب الكربونية التحكم (سبسيس) حضور المؤشر التهجين، أزرق الميثيلين (ميغابايت). هو استكشاف إمكانات بناء المتقدمة الكشف عن زيادة استخدام البكتيريا عينات الحمض النووي القواقع ليساتي والطازجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: جميع الكواشف الكيميائية والبيوكيميائية لاستخدامها ينبغي أن تكون تحليلية الصف واستخدامها دون مزيد من تنقية. إعداد جميع الحلول باستخدام المياه المعقمة. اﻷوتوكﻻف جميع الأواني الزجاجية قبل التعقيم.

تنبيه: الرجاء استخدام جميع ممارسات السلامة المناسبة عند القيام بأنشطة المختبرات بما في ذلك استخدام هندسة عناصر التحكم (الأبخرة هود، الدرج الأمامي) ومعدات الحماية الشخصية (سلامة النظارات، قفازات، معطف مختبر، كامل طول السراويل، وتو مغلقة أحذية).

1-تصنيع وتوصيف قطب تعديل استخدام جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس

  1. إعداد وتوصيف لجيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس
    1. بسرعة بإضافة 10 مل من محلول سترات الصوديوم (38.8 مم) إلى 100 مل من الغليان حل حمض تشلورواوريك مائي (1 مم) وبارد عليه وصولاً إلى درجة الحرارة المحيطة. مراقبة التغييرات في الألوان في حل أونبس الاستعداد الذي يبدأ كالأصفر، التغييرات إلى داكن وأخيراً ينتهي كالأحمر الداكن روبي.
    2. مكان الكريات جيش التحرير الشعبي الصيني في قالب الفولاذ المقاوم للصدأ لعملية ذوبان وتسخَّن لهم عند درجة حرارة 190 درجة مئوية لأدنى 10 المتابعة مع إجراءات ملحة: وضعها تحت ضغط الآلام والكروب الذهنية 2.2 لمدة 1 دقيقة كجزء من إعداد صحيفة جيش التحرير الشعبي الصيني. صحيفة جيش التحرير الشعبي الصيني سوف تكون جاهزة للاستخدام بعد التبريد لحوالي 3 ساعات.
    3. التحريك بقوة، حل مغ 0.68 أوراق جيش التحرير الشعبي الصيني في 5 مل كلوروفورم في درجة حرارة الغرفة. مزيج جيش التحرير الشعبي المذاب مع 10 مل الحل أونبس معدّة مسبقاً والبلوتينيوم إثارة ذلك في درجة حرارة الغرفة. ثم يمكن أن يكون دينوتيد كجيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس مخاليط متجانسة وتتميز باستخدام الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة زرد، TEM وفسيم مع EDX.
  2. إعداد وتوصيف قطب الكربون موضع تعديل
    ملاحظة: SPCE المستخدمة في هذه الدراسة ويتألف نظام القطب ثلاثة: عداد كهربائي وكهربائي عامل الكربون قطب مرجعي Ag/AgCl.
    1. بسرعة ميليلتر ماصة 25 الحل متجانسة لجيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس على SPCE ومن ثم الهواء الجاف ل 24 ساعة قبل الاستخدام.
    2. اليكتروتشيميكالي تميز أقطاب المعدلة، SPCE/جيش التحرير الشعبي الصيني--أونبس، في سيانيد البوتاسيوم فيرو (ك3[Fe(CN)]6[3-/4-) لقياس المساحة السطحية النشطة، ومقاومة الكهروكيميائية التحليل الطيفي، والتكرار، إمكانية تكرار نتائج، و30من الاستقرار.

2-تطوير Biosensor الكهروكيميائية الحمض النووي

  1. إعداد التحقيق
    ملاحظة: تسلسل مسبار سدنا والحمض النووي التكميلية اختيرت استناداً إلى المعلومات الواردة من المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية (نكبي) قاعدة البيانات.
    1. شراء النوكليوتيد الاصطناعية (20-مير ssDNA المسبار والحمض النووي التكميلية 20-مير، 20-مير غير متطابقة الحمض النووي والحمض النووي غير مكملة 21-مير) كمسحوق المجففة بالتبريد من المختبرات التجارية، استناداً إلى التسلسل التالي:
      مسبار سدنى ثيولاتيد: 5 '--/5ThioMC6-د/كجاتاتجكاجاجكاكتج-3
      الحمض النووي التكميلية:-كاجتجكتكتجكاتاتككج-5 '3'
      قاعدة واحدة غير مطابقة الحمض النووي:-كاجتجكتكتجك ṪTAATCCG-5 '3'
      3-قاعدة غير مطابقة الحمض النووي:-كاجتجكتكت Ċ ṪṪTAATCCG-5 '3'
      الحمض النووي غير متكاملة: 3 '5'--كجكاكاجكتكجاكجكتجا-
    2. إعداد حلول الأسهم من جميع النوكليوتيد (100 ميكرومتر) باستخدام حل الشركة المصرية للاتصالات عقيمة (10 مم تريس-HCl، 1 مم يدتا، درجة الحموضة 7.5)، مقسمة إلى أجزاء التحليلية. الحفاظ على هذا في-4 درجة مئوية ثم قم بإجراء تخفيف مناسبة فقط قبل استخدامها.
  2. الأمثل للتثبيت والتهجين
    ملاحظة: SPCE تعديل مع جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس، تتم الإشارة إليها ك SPCE/جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس، واستخدمت لهذه الدراسة، وقد استخدمت طريقة صب قطره لتجميد الحمض النووي والتهجين.
    1. أولاً، شل 25 ميليلتر من مسبار سدنى ثيولاتيد على SPCE/جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس وثم الجوية الجافة عن 24 ساعة عند درجة حرارة الغرفة، بعد ذلك أنها سوف أخيرا الإشارة إلى ك SPCE/جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس/سدنى. تحديد الاستغلال الأمثل لحالة التثبيت باستخدام ثلاثة عوامل: تركيز سدنا (تتراوح من 0.2 إلى 1.4 ميكرومتر) والوقت (تتراوح من 30 إلى 210 دقيقة)، ودرجة الحرارة (تتراوح بين 25 إلى 75 درجة مئوية).
    2. "الماصة؛" 25 ميليلتر من الحمض النووي التكميلية إلى سطح SPCE/جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس/سدنى إجراء الحدث التهجين بعدها أنه يمكن أخيرا الإشارة إلى ك SPCE/جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس/دسدنا. تحديد الاستغلال الأمثل للشرط التهجين عن طريق العاملين من الزمن (تتراوح من 5 إلى 30 دقيقة) ودرجة الحرارة (تتراوح بين 25 إلى 75 درجة مئوية).
    3. تزج المعطل تداولها وإزالة أقطاب المهجن في ميكرومتر 20 ميغابايت للدقيقة 30 في الممتزة غير تحديداً الحمض النووي وميغابايت الزائدة بالغسيل مع 0.5 م إس/20 مم كلوريد الصوديوم (pH 4.5) وثم الشطف بواسطة المياه. قياس الحالية ذروة للتخفيض في بروميد الميثيل باستخدام تقنية دبف. تنفيذ قياس دبف استخدام 0.1 M برنامج تلفزيوني (pH 7) التي تحتوي على أي مؤشر.
  3. وصف بيوسينسور الحمض النووي ملفقة
    1. تزج SPCE/جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس في ميكرومتر 20 ميغابايت لمدة 30 دقيقة، يغسل مع 0.5 م إس/20 ملم كلوريد الصوديوم (pH 4.5)، ومن ثم شطف بالمياه قبل قياس. اتبع إجراء مماثل لكل التفاعلات بينها مسبار الحمض النووي والحمض النووي التكميلية، والحمض النووي غير متطابقة، وعينات الحمض النووي غير متكاملة.
    2. قياس الحد الكهروكيميائية.
      ملاحظة: قمنا بقياس استخدام أوتولاب المصنوعة تجارياً مع البرمجيات واجهة دبف.
      قياسات دبف ميغابايت الحد الكهروكيميائية في إمكانات تتراوح بين 0.5-V 0.25 V، مع خطوة محتملة من 0.005 الخامس السعة التحوير 0.05 الخامس، والمسح الضوئي بمعدل 7.73 mVs-1 في برنامج تلفزيوني م 0.1 (pH 7)، الذي يحتوي على أي مؤشر. ودرست كذلك الانتقائية وحساسية، وإمكانية تكرار نتائج، واستقرار الحرارة بيوسينسور الحمض النووي ملفقة. عرضت النتائج المبلغ عنها متوسط قيمة القياسات في replicates الثلاثة.

3-التحقق بيوسينسور الحمض النووي ملفقة باستخدام عينات حقيقية

  1. إعداد السلالات البكتيرية
    1. تحديد العينات البكتيرية استناداً على التلوث الكبيرة من المأكولات البحرية31،32 .
      ملاحظة: V. parahaemolyticus السلالات المرجعية و 8 أخرى السلالات البكتيرية (والعطيفه الصائمية، الليستريه المستوحدة، typhimurium السالمونيلا، السالمونيلا الأمعاء، والالتهاب الرئوي الكلبسيله، الإشريكيّة القولونية O157:H7، العصوية الشمعية، و الضمة الجينوليتيكوس) من المنقولة المشتركة استخدمت الممرض للمصادقة على الحمض النووي biosensor الكهروكيميائية في هذه الدراسة.
    2. إجراء ثقافة فرعية روتينية من السلالات البكتيرية في أجار كل منهما على كل أسبوعين للحفاظ على قدرتها على الاستمرار، ويشير الجدول 1 لشروط الثقافة.
    3. الحفاظ على الحفاظ على المدى الطويل من السلالات البكتيرية في بهم المرق المتزايد كل منها يحتوي على الجلسرين 20% (v/v) في-80 درجة مئوية كما يحمي والغليسيرول البكتيريا عن طريق منع تكوين بلورات الجليد التي يمكن أن تلحق الضرر بها أثناء عملية التجميد. بعد ذلك، تطعيم حلقة ثقافة الحفاظ على الخلايا البكتيرية في مخزونات والغليسيرول في المرق كل منهما. احتضان المرق وفقا لنمو كل الوقت ودرجة الحرارة عند الحاجة إلى أحياء هذه البكتيريا.
    4. تحديد الكمية V. parahaemolyticus الخلايا باستخدام تقنية لوحة انتشار33ومعيار وأسلوب معروف لتعداد الكائنات الحية الدقيقة المستمدة من سلسلة من تخفيف.
      1. الثقافة V. parahaemolyticus في "مرق فول الصويا تريبتيكاسي" (TSB + 3% كلوريد الصوديوم) عند 37 درجة مئوية في حالة اهتزاز 140 لفة في الدقيقة. ثم قم بنقل 1 مل ثقافة الخلية البكتيريا إلى 9 مل TSB + 3% كلوريد الصوديوم للحصول على عامل تخفيف 10-1 .
    5. كرر هذه الخطوة من تسع مرات للحصول على سلسلة كاملة من يصل إلى 10-10 إضعاف عامل. بعد ذلك، انتشار 0.1 مل لكل عامل من عوامل التخفيف (بدءاً من 10-1 إلى 10-10) على لوحة أجار انتقائية ضمه لمستعمرة العد، على التوالي. احتضان لوحات المحتضنة في 37 درجة مئوية ح 24.
    6. استخدام عداد مستعمرة لعد المستعمرات الفردية ومن ثم العودة-حساب (حساب مقدار زيمبابوي/بيبيتيد × معامل التخفيف) للحصول على وحدة لتشكيل مستعمرة في المليلتر الكثافة (زيمبابوي مل-1). وتستمد تركيز مستعمرة تشكيل وحدات (كفوس) في تعليق خلية البكتيريا من مؤامرة المعايرة من زيمبابوي مل-1 ضد امتصاص.
  2. إعداد التحليل PCR
    1. استخراج الحمض النووي بعد تعديل المغلي تحلل الداخلي34. أولاً، متواصلة البكتريا فردية ضغوطا على وسائل الإعلام أجار وتطعيم ذلك في وسائل الإعلام مرق، تليها تفرخ في حالته النمو النسبي، دورة في الدقيقة 140 تهز الشرط.
    2. "الماصة؛" ثقافة 1 مل من مرق في أنبوب مايكرو أجهزة الطرد مركزي. الطرد المركزي هذه في 4830 x ز و 4 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة للحصول على الكريات. استخدم حوالي 500 ميليلتر من المخزن المؤقت للشركة المصرية للاتصالات العقيمة لإعادة تعليق مع بيليه. إجراء تعليق الناتجة عن 10 دقيقة في 98 ± 2 درجة مئوية في كتلة تدفئة والبرد فورا عند-18 درجة مئوية لمدة 10 دقائق الخلايا والإفراج عن الحمض النووي.
    3. الطرد المركزي الحمض النووي في 4830 x ز و 4 درجات مئوية لمدة 3 دقيقة الحصول على تعليق واضح وإبقاء المادة طافية في-20 درجة مئوية لاستخدامها مرة أخرى. استخدام مقياس بيوفوتوميتير بامتصاص الأشعة فوق البنفسجية في طول موجه 260 nm (الأحماض النووية استيعاب الطول الموجي للضوء) وأيضا في طول جه 280 نانومتر (كالبروتينات استيعاب الطول الموجي للضوء) لتحديد تركيز ونقاء استخراج الحمض النووي وثم تحديد جميع سلالات استخدام الاختبارات البيوكيميائية القياسية35 والتحقق من لهم 16S الرنا الريباسي مورثة تسلسل36. وأخيراً، تؤذي الحمض النووي الجينومي في 92 درجة مئوية لمدة 2 دقيقة وبارد عليه سريعاً في الماء المثلج قبل التطبيق إلى بيوسينسور.
    4. كذلك تأكيد الوجود V. parahaemolyticus استخدام PCR لاستهداف الجين توزر. تنفيذ هذا الإجراء في ثيرموسيكلير استخدام زوج التمهيدي (5 '-جتكتكتجاكجكاتكجتج-3' و 5 '-أتاكجاجتجتجكتجتكاتج-3'). تحسين [بكر] تضخيم في حجم رد فعل إجمالي 25 ميليلتر تتألف من الماء المعقم (15.5 ميليلتر) والمخزن المؤقت (5 ميليلتر)، التمهيدي (1 ميليلتر، 10 ميكرومتر)، دنتب ميكس (1 ميليلتر)، وقالب الحمض النووي (2 ميليلتر)، وبوليميراز "الدنا بوليميراز" (0.2 ميليلتر، 10 x).
    5. تخلط المكونات جيدا وترتيب [بكر] تضخيم تسلسل المستهدفة في ثيرموسيكلير المبرمجة لدورات 30 من التضخيم. في دراستنا، تتألف كل دورة من ثلاث خطوات ردود فعل أي.، تمسخ الأولية (94 درجة مئوية، 3 دقيقة) تليها دورات 30 تمسخ (94 درجة مئوية، 1 دقيقة)، والصلب (63 درجة مئوية، 1.5 دقيقة) وملحق (72 درجة مئوية، 1.5 دقيقة)، متبوعاً بالتمديد النهائي (72 درجة مئوية، 7 دقيقة).
    6. تحديد المنتجات تضخيم وأحجامها عن طريق التفريد على 1.5% [اغروس] هلام. التقاط الصور هلام مع نظام توثيق جل منتجة تجارياً.
  3. إعداد عينات القواقع
    1. الحصول على عينات جديدة.
      ملاحظة: لدينا الأصداف البحرية الطازجة (أجريت جرانوسا) التي تم الحصول عليها من السوق الرطب في Serdang، سيلانغور، وجلب بسرعة إلى المختبر في مربع برودة الثلج للتحليل. تقسيم العينات إلى 2 مجموعات، هي المجموعة المعالجة وغير المعالجة، على افتراض أن الأصداف البحرية تحصد موحد من بداية موسم الحصاد حتى وضعها في مستودع التخزين البارد.
    2. علاج قبل جمع الأصداف في المجموعة المعالجة عن طريق تخزينها في-20 درجة مئوية ح 24، يليه التعرض للأشعة فوق البنفسجية في 20 درجة مئوية ح 4 قبل استخراج الحمض النووي.
      ملاحظة: درجة حرارة التجميد والتعرض للأشعة فوق البنفسجية المستخدمة الخاضعة للضوابط الفريق يقتل أو يحد على الأقل تراكم بطبيعة الحال V. parahaemolyticus في جمع الأصداف. لا يتم تطبيق نظام بسترة أعلى من 70 درجة مئوية كما هدف الشرط التي تسيطر عليها في هذه الدراسة لمحاكاة الوضع الفعلي للأصداف البحرية الطازجة. وفي الوقت نفسه، تحليل العينات مباشرة من المجموعة غير المعالجة دون أي معالجة مسبقة بمجرد وصولها إلى المختبر.
    3. سلالة من V. parahaemolyticus ATCC 17802 في لجان فرعية (3% كلوريد الصوديوم). تحديد مستوى خلايا قابلة للحياة في العدوى عن طريق الطلاء لتخفيف مناسبة من TSB (3% كلوريد الصوديوم) في كاليفورنيا من أجل الحصول العدوى من 104 زيمبابوي مل-1 من V. parahaemolyticus. تغسل كل القواقع في الماء المقطر وفرك خالية من الاوساخ قبل استخدام الملقط العقيمة في تدفق الصفحي مجلس الوزراء لإزالة الأنسجة من shell.
    4. مجانسة حوالي 10 غم عينات الأنسجة القواقع مع الخالطون في 90 مل TSB العقيمة (3% كلوريد الصوديوم) 60 س. أضف كمية معروفة من V. parahaemolyticus إلى 9 مل مرق عينة المتجانس للعينات التي ارتفعت. استخدام العينات أونسبيكيد كعنصر سلبي. تقدير عدد خلايا من V. parahaemolyticus ارتفعت إلى عينات القواقع بطلاء 0.1 مل العينات في كاليفورنيا، وفي وقت لاحق، بيبيتينج 1 مل عينات في أنبوب ميكروسينتريفوجي للحمض النووي عينة الاستخراج، لاستخدامها في بيوسينسور وفحص PCR.
    5. استخراج الحمض النووي الجينومي V. parahaemolyticus من العينات التي ارتفعت وأونسبيكيد بعد تعديل المغلي تحلل الداخلي36. وأخيراً، تحديد تركيز الحمض النووي ونقاء باستخدام قياس الحيوي شحني بامتصاص الأشعة فوق البنفسجية في طول موجه 260 شمال البحر الأبيض المتوسط (الأحماض النووية استيعاب الطول الموجي للضوء) وأيضا في طول جه 280 نانومتر (كالبروتينات استيعاب الطول الموجي للضوء).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم الكشف عن تشكيل أونبس من خلال التغير في لون المحلول مع سترات الصوديوم الحالية. هذا بسبب اللون لتغيير من الضوء الأصفر إلى أحمر روبي عميقة. وأكد الجيل من جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس من الأشعة فوق البنفسجية-vis الأطياف (الشكل 1) حيث تم العثور على نمو ذروة الرنين (موارد البرنامج الخاصة) السطحية مأكل مثل الطحين في حوالي 540 نانومتر. وذكر بتشكيل ووجود جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس في نطاقات الطول الموجي نانومتر 500-600، تبعاً لحجم الجسيمات...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخطوات الحاسمة في إطار للتنمية الناجحة لهذا النوع من بيوسينسور الكهروكيميائية اختيار العناصر الاعتراف البيولوجية المناسبة لمحول (الحمض النووي أو الحمض النووي هنا)؛ نهج الكيميائية لبناء طبقة الاستشعار من محول؛ توصيل المواد؛ الأمثل لتجميد الحمض النووي والتهجين؛ والتحقق بيوسينسور المتقدمة باستخدام عينات حقيقية.

الأساسية للتنمية الناجحة ل biosensor الحمض النووي الكهروكيميائية الحساسة وانتقائية، هي الأمثل لشرط التثبيت والتهجين. في هذا العمل، استخدمنا ميغابايت الأكسدة المعقدة. هناك المبادئ المختلفة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يود المؤلفون أن نعترف بالدعم من جامعة بوترا ماليزيا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حمض الخليكميرك100056
الكلوروفورمميرك102445
حمض رباعي الأسيتيك ديامينوإيثانPromegaE5134
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة   ؛سيجما ألدريتشS9763
فوسفات الهيدروجين ثنائي الصوديومسيجما ألدريتش255793
الإيثانول   ؛سيجما ألدريتش16368
كلوريد الذهب (III) ثلاثي الهيدراتسيجما ألدريتش520918
حمض الهيدروكلوريكميرك100317
الميثيلين الأزرقسيجما ألدريتشM44907
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة ، أحادي الهيدراتسيجما-ألدريتشS3522
محلول ملحي مخزن بالفوسفاتسيجما ألدريتشP5119
راتنج بولي (حمض اللاكتيك) ، درجة تجارية 4042DNatureWorks4042D
كلوريد البوتاسيومR & M Chemicals59435
فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيومSigma-AldrichP9791
سداسي سيانوفيرات البوتاسيوم IIIR & M للكيماويات208019
أسيتات الصوديوم الملح اللامائيسيجما ألدريتشS2889
كلوريد الصوديومسيجما ألدريتشS9888
سترات ثلاثي الصوديومسيجما ألدريتشS1804
تريس (هيدروكسي ميثيل) أمينوميثانفيشر ScientificT395-100
تريس بيسفيشر ScientificBP152-500
2X PCR Master Mix مع صبغةمزدوجة Norgen Biotek28240
Agarosegel Merck101236
بولتون أجارميرك100079
بولتون مرقميرك100079
CHROMagar VibrioCHROMagarVB910
dNTPsPromegaU1511
ماء خال من NucleaseThermo ScientificR0581
Eosin الميثيلين الأجار الأزرق   ؛ميرك101347
جل الأحمرالبيوتيوم41001
الجلسرينميرك104092
جو تاك العازلةPromegaM7911
تحميل صبغة 100 نقطة أساس سلم الحمض النوويPromegaG2101
تحميل صبغة 1 كيلو بايت سلم الحمض النوويPromegaG5711
كلوريد المغنيسيومPromega91176
مانيتول صفار البيض بوليميكسين أجارميرك105267
ماكونكي أجارميرك105465
مرق المغذياتميرك105443
تاك بوليميرازميرك71003
مرق الصويا تريبتيكازميرك105459
تريبتيكاز فول الصويا أجارميرك105458

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gould, L. H., Rosenblum, I., Nicholas, D., Phan, Q., Jones, T. F. Contributing factors in restaurant-associated foodborne disease outbreaks, FoodNet sites, 2006 and 2007. Journal of Food Protection. 76, 1824-1828 (2013).
  2. Arvanitoyannis, I. S., Kotsanopoulos, K. V., Papadopoulou, A. Rapid detection of chemical hazards (toxins, dioxins, and PCBs) in seafood. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 54, 1473-1528 (2014).
  3. Robertson, L. J., Sprong, H., Ortega, Y. R., van der Giessen, J. W. B., Fayer, R. Impacts of globalisation on foodborne parasites. Trends in Parasitology. 30, 37-52 (2014).
  4. Sandilands, E. A., Bateman, D. N. The epidemiology of poisoning. Medicine. 44, 76-79 (2016).
  5. Boschi-Pinto, C., Velebit, L., Shibuya, K. Estimating child mortality due to diarrhoea in developing countries. Bulletin of the World Health Organization. 86, 710-717 (2008).
  6. Farthing, M. J. G. Diarrhoea: A Significant Worldwide Problem. International Journal of Antimicrobial Agents. 14, 65-69 (2000).
  7. World Health Organization. WHO estimates of the global burden of foodborne diseases: foodborne disease burden epidemiology reference group 2007-2015. , 1-255 (2015).
  8. Yeung, M., Boor, K. Epidemiology, pathogenesis, and prevention of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections. Foodborne Pathogens and Disease. 1, 74-88 (2004).
  9. Sakazaki, R. Foodborne Diseases. Cliver, D. O., Riemann, H. P. , Academic Press. 127-136 (2002).
  10. Grochowsky, J., Odom, S. R., Akuthota, P., Stead, W. Primary Septicemia and Abdominal Compartment Syndrome From Vibrio parahaemolyticus Infection in a 40-Year-Old Patient With No Known Immunocompromise. Infectious Disease in Clinical Practice. 22, (2013).
  11. Raghunath, P. Roles of thermostable direct hemolysin (TDH) and TDH-related hemolysin (TRH) in Vibrio parahaemolyticus. Frontiers in Microbiology. 5, 805(2014).
  12. Kalburge, S. S., Whitaker, W. B., Boyd, E. F. High-Salt Preadaptation of Vibrio parahaemolyticus Enhances Survival in Response to Lethal Environmental Stresses. Journal of Food Protection. 77, 246-253 (2014).
  13. Esteves, K., Hervio-Heath, D., Mosser, T., Rodier, C., Tournoud, M. G., Jumas-Bilak, E., Colwell, R. R., Monfort, P. Rapid proliferation of Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, and Vibrio cholerae during freshwater flash floods in French Mediterranean Coastal lagoons. Applied and Environmental Microbiology. 81, 7600-7609 (2015).
  14. Khandeparker, L., Anil, A. C., Naik, S. D., Gaonkar, C. C. Daily variations in pathogenic bacterial populations in a monsoon influenced tropical environment. Marine Pollution Bulletin. 96, 337-343 (2015).
  15. Caburlotto, G., Suffredini, E., Toson, M., Fasolato, L., Antonetti, P., Zambon, M., Manfrin, A. Occurrence and molecular characterization of Vibrio parahaemolyticus in crustaceans commercialised in Venice area, Italy. International Journal of Food Microbiology. 220, 39-49 (2016).
  16. Wong, H. C., Chen, M. C., Liu, S. H., Liu, D. P. Incidence of highly genetically diversified Vibrio parahaemolyticus in seafood imported from Asian countries. International Journal of Food Microbiology. 52, 181-188 (1999).
  17. Rosec, J. P., Causse, V., Cruz, B., Rauzier, J., Carnat, L. The international standard ISO/TS 21872-1 to study the occurence of total and pathogenic Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae in seafood: ITS improvement by use of a chromogenic medium and PCR. International Journal of Food Microbiology. 157, 189-194 (2012).
  18. Maniyankode, R. A., Kingston, J. J., Murali, H. S., Batra, H. V. Specific identification of vibrio parahaemolyticus employing monoclonal antibody based immunoassay. International Journal of Pharmacy and Biological Sciences. 4 (2), B156-B164 (2013).
  19. Suffredini, E., Lopez-Joven, C., Maddalena, L., Croci, L., Roque, A. Pulsed-field gel electrophoresis and PCR characterization of environmental Vibrio parahaemolyticus strains of different origins. Applied and Environmental Microbiology. 77, 6301-6304 (2011).
  20. Bhattacharyya, N., Hou, A. A pentaplex PCR assay for detection and characterization of Vibrio vulnificus and Vibrio parahaemolyticus isolates. Letters in Applied Microbiology. 57, 233-240 (2013).
  21. da Silva, E. T. S. G., et al. Electrochemical Biosensors in Point-of-Care Devices: Recent Advances and Future Trends. ChemElectroChem. 4 (4), 778-794 (2017).
  22. Nordin, N., Yusof, N. A., Abdullah, J., Radu, S., Hushiarian, R. Sensitive detection of multiple pathogens using a single DNA probe. Biosensors and Bioelectronics. 86, 398-405 (2016).
  23. Nordin, N., Yusof, N. A., Abdullah, J., Radu, S., Hushiarian, R. A simple, portable, electrochemical biosensor to screen shellfish for Vibrio parahaemolyticus. AMB Express. 7 (1), 41(2017).
  24. Zhang, J., Li, Z., Zhang, H., Wang, J., Liu, Y., Chen, G. Rapid detection of several foodborne pathogens by F0F1-ATPase molecular motor biosensor. Journal of Microbiological Methods. 93, 37-41 (2013).
  25. Barsan, M. M., Ghica, E. M., Brett, C. M. A. Portable biosensing of food toxicants and environmental pollutants. Nikolelis, D. P., Varzakas , T., Erdem, A., Nikoleli, G. P. , CRC Press, Taylor & Francis Group. Boca Raton. 33-69 (2014).
  26. Kwun, J., Yun, S., Park, L., Lee, J. H. Development of 1,1'-oxalyldiimidazole chemiluminescent biosensor using the combination of graphene oxide and hairpin aptamer and its application. Talanta. 119, 262-267 (2014).
  27. Thavanathan, J., Huang, N. M., Thong, K. L. Colorimetric biosensing of targeted gene sequence using dual nanoparticle platforms. International Journal of Nanomedicine. 10, 2711-2722 (2015).
  28. Hushiarian, R., Yusof, N. A., Abdullah, A. H., Ahmad, S. A. A., Dutse, S. W. Facilitating the indirect detection of genomic DNA in an electrochemical DNA biosensor using magnetic nanoparticles and DNA ligase. Analytical Chemistry Research. 6, 17-25 (2015).
  29. Dutse, S. W., Yusof, N. A., Ahmad, H., Hussein, M. Z., Zainal, Z., Hushiarian, R., Hajian, R. An Electrochemical Biosensor for the Determination of Ganoderma boninense Pathogen Based on a Novel Modified Gold Nanocomposite Film Electrode. Analytical Letters. 47 (5), 819-832 (2014).
  30. Nordin, N., Yusof, N. A., Abdullah, J., Radu, S., Hajian, R. Characterization of Polylactide-Stabilized Gold Nanoparticles and Its Application in the Fabrication of Electrochemical DNA Biosensors. Journal of the Brazilian Chemical Society. 27 (9), 1679-1686 (2016).
  31. Vongkamjan, K., Wang, S., Moreno Switt, A. I. Rapid detection of foodborne bacterial pathogens in seafood. Handbook of Seafood: Quality and Safety Maintenance and Applications. , 247-257 (2016).
  32. Wang, F., Jiang, L., Yang, Q., Han, F., Chen, S., Pu, S., Vance, A., Ge, B. Prevalence and antimicrobial susceptibility of major foodborne pathogens in imported seafood. Journal of Food Protection. 74 (9), 1451-1461 (2011).
  33. Szermer-Olearnik, B., Sochocka, M., Zwolinska, K., Ciekot, J., Czarny, A., Szydzik, J., Kowalski, K., Boratynski, J. Comparison of microbiological and physicochemical methods for enumeration of microorganisms. Postepy Higieny i Medycyny Doswiadczalnej. 68, 1392-1396 (2014).
  34. Ivanov, I. G., Bachvarov, D. R. Determination of plasmid copy number by the "boiling" method. Analytical Biochemistry. 165 (1), 137-141 (1987).
  35. Gopireddy, V. R. Biochemical tests for the identification of bacteria. International Journal of Pharmacy and Technology. 3 (4), 1536-1555 (2011).
  36. Böhme, K., Fernández-No, I. C., Pazos, M., Gallardo, J. M., Barros-Velázquez, J., Cañas, B., Calo-Mata, P. Identification and classification of seafood-borne pathogenic and spoilage bacteria: 16S rRNA sequencing versus MALDI-TOF MS fingerprinting. Electrophoresis. 34 (6), 877-887 (2013).
  37. Seoudi, R., Fouda, A. A., Elmenshawy, D. A. Synthesis, characterization and vibrational spectroscopic studies of different particle size of gold nanoparticle capped with polyvinylpyrrolidone. Physica B: Condensed Matter. 405, 906-911 (2010).
  38. Mishra, A., Harper, S., Yun, S. I. Interaction of biosynthesized gold nanoparticles with genomic DNA isolated from E. coli and S. aureus. Nanotechnology (IEEE-NANO). , 1745-1750 (2011).
  39. Sugimoto, T. Formation of modoispersed nano- and micro-particles controlled in size, shape, and internal structure. Chemical Engineering and Technology. 26, 313-321 (2003).
  40. Rath, C., Sahu, K. K., Kulkarni, S. D., Anand, S., Date, S. K., Das, R. P., Mishra, N. C. Microstructure-dependent coercivity in monodispersed hematite particles. Applied Physics Letters. 75, 4171-4173 (1999).
  41. Abbas, M., Wu, Z. Y., Zhong, J., Ibrahim, K., Fiori, A., Orlanducci, S., Sessa, V., Terranova, M. L., Davoli, I. X-ray absorption and photoelectron spectroscopy studies on graphite and single-walled carbon nanotubes: Oxygen effect. Applied Physics Letters. 87 (5), 051923(2005).
  42. Lim, S. C., Choi, Y. C., Jeong, H. J., Shin, Y. M., An, K. H., Bae, D. J., Lee, Y. H., Lee, N. S., Kim, J. M. Effect of gas exposure on field emission properties of carbon nanotubes arrays. Advanced Materials. 13, 1563-1567 (2001).
  43. Kim, B. H., Kim, B. R., Seo, Y. G. A study on adsorption equilibrium for oxygen and nitrogen into carbon nanotubes. Adsorption. 11, 207-212 (2005).
  44. Bard, A. J., Faulkner, L. R. Electrochemical methods: Fundamentals and applications. , John Wiley & Sons Inc. (2000).
  45. Tan, Q., Wang, L., Ma, L., Yu, H., Ding, J., Liu, Q., Xiao, A., Ren, G. Study on anion electrochemical recognition based on a novel ferrocenyl compound with multiple binding sites. Journal of Physical Chemistry B. 112, 11171-11176 (2008).
  46. Manivannan, S., Ramaraj, R. Polymer-embedded gold and gold/silver nanoparticle-modified electrodes and their applications in catalysis and sensors. Pure and Applied Chemistry. 83, 2041-2053 (2011).
  47. Benali, O., Larabi, L., Traisnel, M., Gengembre, L., Hareka, Y. Electrochemical, theoretical and XPS studies of 2-mercapto-1-methylimidazole adsorption on carbon steel in 1 M HClO4. Applied Surface Science. 253, 6130-6139 (2007).
  48. Shi, Y., Wen, L., Li, F., Cheng, H. M. Nanosized Li4Ti5O12/graphene hybrid materials with low polarization for high rate lithium ion batteries. Journal of Power Sources. 196, 8610-8617 (2011).
  49. Bentiss, F., Traisnel, M., Lagrenee, M. The substituted 1,3,4-oxadiazoles: a new class of corrosion inhibitors of mild steel in acidic media. Corrosion Science. 42, 127-146 (2000).
  50. Wang, M., Gong, W., Meng, Q., Zhang, Y. Electrochemical DNA impedance biosensor for the detection of DNA hybridization with polymeric film, single walled carbon nanotubes modified glassy carbon electrode. Russian Journal of Electrochemistry. 47, 1368-1373 (2011).
  51. Herdt, A. R., Drawz, S. M., Kang, Y., Taton, T. A. DNA dissociation and degradation at gold nanoparticle surfaces. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 51 (2), 130-139 (2006).
  52. Bhatt, N., Huang, P. J. J., Dave, N., Liu, J. Dissociation and degradation of thiol-modified DNA on gold nanoparticles in aqueous and organic solvents. Langmuir. 27, 6132-6137 (2011).
  53. Liu, X., Jang, C. H., Zheng, F., Jürgensen, A., Denlinger, J. D., Dickson, K. A., Raines, R. T., Abbott, N. L., Himpsel, F. J. Characterization of protein immobilisation at silver surfaces by near edge X-ray absorption fine structure spectroscopy. Langmuir. 22, 7719-7725 (2006).
  54. Willey, T. M., Andrew, L., Vance, T., Buuren, V., Bostedt, C., Terminello, L. J., Fadley, C. S. Rapid degradation of alkanethiol-based self-assembled monolayers on gold in ambient laboratory conditions. Surface Science. 576 (1), 188-196 (2005).
  55. Farjami, E., Clima, L., Gothelf, K., Ferapontova, E. E. DNA interactions with a Methylene Blue redox indicator depend on the DNA length and are sequence specific. Analyst. 135, 1443-1448 (2010).
  56. Lin, X., Ni, Y., Kokot, S. An electrochemical DNA-sensor developed with the use of methylene blue as a redox indicator for the detection of DNA damage induced by endocrine-disrupting compounds. Analytica Chimica Acta. 867, 29-37 (2015).
  57. Zhang, F. T., Nie, J., Zhang, D. W., Chen, J. T., Zhou, Y. L., Zhang, X. X. Methylene Blue as a G-Quadruplex Binding Probe for Label-Free Homogeneous Electrochemical Biosensing. Analytical Chemistry. 86, 9489-9495 (2014).
  58. Ning, L., Li, X., Yang, D., Miao, P., Ye, Z., Li, G. Measurement of Intracellular pH Changes Based on DNA-Templated Capsid Protein Nanotubes. Analytical Chemistry. 86, 8042-8047 (2014).
  59. Sani, N. D. M., Heng, L. Y., Surif, S., Lazim, A. M., et al. AIP Conference Proceedings. Murad, A., et al. 1571, 636-640 (2013).
  60. Xu, P., Wang, J., Xu, Y., Chu, H., Shen, H., Zhang, D., Zhao, M., Liu, J., Li, G. Binding modes and interaction mechanism between different base pairs and methylene blue trihydrate: a quantum mechanics study. Advances in Experimental Medicine and Biology. 827, 187-203 (2015).
  61. Guo, Y., Chen, J., Chen, G. A label-free electrochemical biosensor for detection of HIV related gene based on interaction between DNA and protein. Sensors & Actuators, B: Chemical. 184, 113-117 (2013).
  62. Huang, K. J., Liu, Y. J., Wang, H. B., Wang, Y. Y., Liu, Y. M. Sub-femtomolar DNA detection based on layered molybdenum disulfide/multi-walled carbon nanotube composites, au nanoparticle and enzyme multiple signal amplification. Biosensors and Bioelectronics. 55, 195-202 (2014).
  63. Kong, R. M., Song, Z. L., Meng, H. M., Zhang, X. B., Shen, G. L., Yu, R. Q. A label-free electrochemical biosensor for highly sensitive and selective detection of DNA via a dual-amplified strategy. Biosensors and Bioelectronics. 54, 442-447 (2014).
  64. Rashid, J. I. A., Yusof, N. A., Abdullah, J., Hashim, U., Hajian, R. Novel Disposable Biosensor Based on SiNWs/AuNPs Modified-Screen Printed Electrode for Dengue Virus DNA Oligomer Detection. IEEE Sensors Journal. 15, 4420-4421 (2015).
  65. Yingkajorn, M., Sermwitayawong, N., Palittapongarnpimp, P., Nishibuchi, M., Robins, W. P., Mekalanos, J. J., Vuddhakul, V. Vibrio parahaemolyticus and its specific bacteriophages as an indicator in cockles (Anadara granosa) for the risk of V. parahaemolyticus infection in Southern Thailand. Microbial Ecology. 67, 849-856 (2014).
  66. Ahmad Ganaie, H., Ali, M. N. Short term protocol for the isolation and purification of DNA for molecular analysis. International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research. 24, 266-270 (2014).
  67. Nakano, K., Kimura, T., Kitamura, Y., Ihara, T., Ishimatsu, R., Imato, T. Potentiometric DNA sensing platform using redox-active DNA probe pair for sandwich-type dual hybridization at indicator electrode surface. Journal of Electroanalytical Chemistry. 720-721, 71-75 (2014).
  68. Yang, J., Jim Yang, L., Heng-Phon, T., Gan-Moog, C. Inhibition of DNA hybridization by small metal nanoparticles. Biophysical Chemistry. 120, 87-95 (2006).
  69. Niu, L. M., Liu, F., Wang, W., Lian, K. Q., Ma, L., Shi, H. M., Kang, W. J. Electrochemical Behavior of Paraquat on a Highly Ordered Biosensor Based on an Unmodified DNA-3D Gold Nanoparticle Composite and Its Application. Electrochimica Acta. 153, 190-199 (2015).
  70. Li, Z., Miao, X., Xing, K., Zhu, A., Ling, L. Enhanced electrochemical recognition of double-stranded DNA by using hybridization chain reaction and positively charged gold nanoparticles. Biosensors and Bioelectronics. 74, 687-690 (2015).
  71. Niu, S., Sun, J., Nan, C., Lin, J. Sensitive DNA biosensor improved by 1,10-phenanthroline cobalt complex as indicator based on the electrode modified by gold nanoparticles and graphene. Sensors and Actuators B: Chemical. 176, 58-63 (2013).
  72. Yi, H., Xu, W., Yuan, Y., Bai, L., Wu, Y., Chai, Y., Yuan, R. A pseudo triple-enzyme cascade amplified aptasensor for thrombin detection based on hemin/G-quadruplex as signal label. Biosensors and Bioelectronics. 54, 415-420 (2014).
  73. Das, R., Sharma, M. K., Rao, V. K., Bhattacharya, B. K., Garg, I., Venkatesh, V., Upadhyay, S. An electrochemical genosensor for Salmonella typhi on gold nanoparticles-mercaptosilane modified screen printed electrode. Journal of Biotechnology. 188, 9-16 (2014).
  74. Han, X., Fang, X., Shi, A., Wang, J., Zhang, Y. An electrochemical DNA biosensor based on gold nanorods decorated graphene oxide sheets for sensing platform. Analytical Biochemistry. 443 (2), 117-123 (2013).
  75. Huang, K. J., Liu, Y. J., Zhang, J. Z., Cao, J. T., Liu, Y. M. Aptamer/Au nanoparticles/cobalt sulfide nanosheets biosensor for 17β-estradiol detection using a guanine-rich complementary DNA sequence for signal amplification. Biosensors and Bioelectronics. 67, 184-191 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Vibrio parahaemolyticus

مقالات ذات صلة