ويرد على بروتوكول لتطوير بيوسينسور الحمض النووي الكهروكيميائية تضم polylactic الذهب، واستقرت حمض الكربون تعديل الجسيمات النانوية، والتحكم كهربائي للكشف عن Vibrio parahaemolyticus .
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ويرد على بروتوكول لتطوير بيوسينسور الحمض النووي الكهروكيميائية تضم polylactic الذهب، واستقرت حمض الكربون تعديل الجسيمات النانوية، والتحكم كهربائي للكشف عن Vibrio parahaemolyticus .
Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) من مسببات الأمراض المنقولة عن طريق الأغذية مشتركة التي تساهم بنسبة كبيرة من مشاكل الصحة العامة على الصعيد العالمي، التي تؤثر إلى حد كبير في معدل الاعتلال والوفيات البشرية. الأساليب التقليدية للكشف عن V. parahaemolyticus مثل الأساليب القائمة على الثقافة وفحوصات المناعية، والأساليب الجزيئية يتطلب معالجة العينة معقدة وتستغرق وقتاً طويلاً وشاقة ومكلفة. في الآونة الأخيرة، أجهزة استشعار العوامل البيولوجية قد ثبت أن طريقة الكشف عن واعدة وشاملة مع مزايا الكشف السريع والفعالية من حيث التكلفة، والتطبيق العملي. هذا البحث يركز على تطوير أسلوب سريع لكشف V. parahaemolyticus بانتقائية عالية وحساسية باستخدام مبادئ التهجين الحمض النووي. في العمل، تحقق وصف المركبة polylactic حمض استقر الذهب جسيمات نانوية (جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس) باستخدام "حيود الأشعة السينية" (XRD)، مطيافية الأشعة فوق البنفسجية-المرئية (تجاه الأشعة فوق البنفسجية)، وانتقال الميكروسكوب الإلكتروني (TEM)، ميدان الانبعاثات المسح الضوئي المجهر الإلكتروني (فسيم)، ودوري فولتاميتري (CV). كما قمنا بتنفيذ اختبار المزيد من الاستقرار، وحساسية، وإمكانية تكرار نتائج لجيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس. ووجدنا أن جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس تشكيل بنية سليمة لجسيمات نانوية استقرت في المحلول. لاحظنا أيضا أن تحسن الحساسية نتيجة أصغر قيمة المقاومة (Rct) نقل التهمة، وزيادة المساحة السطحية النشطة (0.41 سم2). تطوير أعمالنا بيوسينسور الحمض النووي يستند إلى التعديل الكربون موضع القطب (SPCE) مع جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس واستخدام الميثيلين الأزرق (ميغا بايت) كمؤشر الأكسدة والاختزال. قمنا بتقييم أحداث التثبيت والتهجين بالنبض تفاضلي فولتاميتري (دبف). وجدنا أن تكميلية وغير متكاملة، وعلى وجه التحديد كانت تتميز النوكليوتيد غير متطابقة biosensor ملفقة. كما أظهر الكشف الحساسة موثوق في دراسات ه ضد مختلف مسببات الأمراض التي تنقلها الأغذية، وفي تحديد V. parahaemolyticus في الأصداف البحرية الطازجة.
موضوعا رئيسيا للمناقشة العامة والعلمية في السنوات الأخيرة، التسمم الغذائي يرتبط أساسا بعوامل 3: الكائنات الحية الدقيقة1،2من المواد الكيميائية، والطفيليات3. الأغذية الملوثة يمكن أن يسبب عواقب صحية خطيرة في البشر، ولا سيما في مجموعة المخاطر أعلى من أولئك مع ضعف نظم المناعة والنساء المسنات، والنساء الحوامل، والأطفال الرضع والأطفال الصغار4. مع أكثر من 1 مليون من حالات الإسهال الحادة التي تحدث سنوياً في الأطفال دون سن 5 سنوات من العمر في أفريقيا، وآسيا، وأمريكا اللاتينية، التسمم الغذائي هو5،عالمي لأمراض رئيسية6 وقد أنشأت....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ملاحظة: جميع الكواشف الكيميائية والبيوكيميائية لاستخدامها ينبغي أن تكون تحليلية الصف واستخدامها دون مزيد من تنقية. إعداد جميع الحلول باستخدام المياه المعقمة. اﻷوتوكﻻف جميع الأواني الزجاجية قبل التعقيم.
تنبيه: الرجاء استخدام جميع ممارسات السلامة المناسبة عند القيام بأنشطة المختبرات بما في ذلك استخدام هندسة عناصر التحكم (الأبخرة هود، الدرج الأمامي) ومعدات الحماية الشخصية (سلامة النظارات، قفازات، معطف مختبر، كامل طول السراويل، وتو مغلقة أحذية).
1-تصنيع وتوصيف قطب تعديل استخدام جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم الكشف عن تشكيل أونبس من خلال التغير في لون المحلول مع سترات الصوديوم الحالية. هذا بسبب اللون لتغيير من الضوء الأصفر إلى أحمر روبي عميقة. وأكد الجيل من جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس من الأشعة فوق البنفسجية-vis الأطياف (الشكل 1) حيث تم العثور على نمو ذروة الرنين (موارد البرنامج الخاصة) السطحية مأكل مثل الطحين في حوالي 540 نانومتر. وذكر بتشكيل ووجود جيش التحرير الشعبي الصيني-أونبس في نطاقات الطول الموجي نانومتر 500-600، تبعاً لحجم الجسيمات.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الخطوات الحاسمة في إطار للتنمية الناجحة لهذا النوع من بيوسينسور الكهروكيميائية اختيار العناصر الاعتراف البيولوجية المناسبة لمحول (الحمض النووي أو الحمض النووي هنا)؛ نهج الكيميائية لبناء طبقة الاستشعار من محول؛ توصيل المواد؛ الأمثل لتجميد الحمض النووي والتهجين؛ والتحقق بيوسينسور المتقدمة باستخدام عينات حقيقية.
الأساسية للتنمية الناجحة ل biosensor الحمض النووي الكهروكيميائية الحساسة وانتقائية، هي الأمثل لشرط التثبيت والتهجين. في هذا العمل، استخدمنا ميغابايت الأكسدة المعقدة. هناك المبادئ المختلفة.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
يود المؤلفون أن نعترف بالدعم من جامعة بوترا ماليزيا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حمض الخليك | ميرك | 100056 | |
| الكلوروفورم | ميرك | 102445 | |
| حمض رباعي الأسيتيك ديامينوإيثان | Promega | E5134 | |
| فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة ؛ | سيجما ألدريتش | S9763 | |
| فوسفات الهيدروجين ثنائي الصوديوم | سيجما ألدريتش | 255793 | |
| الإيثانول ؛ | سيجما ألدريتش | 16368 | |
| كلوريد الذهب (III) ثلاثي الهيدرات | سيجما ألدريتش | 520918 | |
| حمض الهيدروكلوريك | ميرك | 100317 | |
| الميثيلين الأزرق | سيجما ألدريتش | M44907 | |
| فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة ، أحادي الهيدرات | سيجما-ألدريتش | S3522 | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات | سيجما ألدريتش | P5119 | |
| راتنج بولي (حمض اللاكتيك) ، درجة تجارية 4042D | NatureWorks | 4042D | |
| كلوريد البوتاسيوم | R & M Chemicals | 59435 | |
| فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم | Sigma-Aldrich | P9791 | |
| سداسي سيانوفيرات البوتاسيوم III | R & M للكيماويات | 208019 | |
| أسيتات الصوديوم الملح اللامائي | سيجما ألدريتش | S2889 | |
| كلوريد الصوديوم | سيجما ألدريتش | S9888 | |
| سترات ثلاثي الصوديوم | سيجما ألدريتش | S1804 | |
| تريس (هيدروكسي ميثيل) أمينوميثان | فيشر Scientific | T395-100 | |
| تريس بيس | فيشر Scientific | BP152-500 | |
| 2X PCR Master Mix مع صبغة | مزدوجة Norgen Biotek | 28240 | |
| Agarose | gel Merck | 101236 | |
| بولتون أجار | ميرك | 100079 | |
| بولتون مرق | ميرك | 100079 | |
| CHROMagar Vibrio | CHROMagar | VB910 | |
| dNTPs | Promega | U1511 | |
| ماء خال من Nuclease | Thermo Scientific | R0581 | |
| Eosin الميثيلين الأجار الأزرق ؛ | ميرك | 101347 | |
| جل الأحمر | البيوتيوم | 41001 | |
| الجلسرين | ميرك | 104092 | |
| جو تاك العازلة | Promega | M7911 | |
| تحميل صبغة 100 نقطة أساس سلم الحمض النووي | Promega | G2101 | |
| تحميل صبغة 1 كيلو بايت سلم الحمض النووي | Promega | G5711 | |
| كلوريد المغنيسيوم | Promega | 91176 | |
| مانيتول صفار البيض بوليميكسين أجار | ميرك | 105267 | |
| ماكونكي أجار | ميرك | 105465 | |
| مرق المغذيات | ميرك | 105443 | |
| تاك بوليميراز | ميرك | 71003 | |
| مرق الصويا تريبتيكاز | ميرك | 105459 | |
| تريبتيكاز فول الصويا أجار | ميرك | 105458 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.