مقالة منهجية

طريقة موحدة للتعقيم الفائق من بذور نبات

DOI:

10.3791/56587

⸱

أكتوبر 17, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Arabidopsis Biological Resource Center, Center for Applied Plant Sciences, The Ohio State University, 2Department of Molecular Genetics, Center for Applied Plant Sciences, The Ohio State University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان الهدف من هذه الدراسة لتحديد آثار التبييض والكلور غاز التعقيم على إنبات البذور الأنماط الجينية طائفة من نبات يزرع في وسائل الإعلام العقيمة. وقد وضعت بروتوكولات التعقيم الأمثل لمنع نمو الملوثات الميكروبية مع توفير البذور مرضية البقاء على قيد الحياة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التمويل نبات غالباً ما تحتاج شتلات (نبات) زراعتها في وسائل الإعلام العقيمة. وهذا يتطلب تعقيم البذور السابقة لمنع نمو الملوثات الميكروبية موجودة على سطح البذور. حاليا، يتم تعقيم بذور نبات استخدام تقنيات التعقيم مميزة اثنين في ظروف تختلف اختلافاً طفيفا بين مختبرات ولا تم توحيد، وغالباً ما يؤدي إلى في التعقيم الفعالة الوحيدة جزئيا أو في الوفيات البذور المفرط. معظم هذه الطرق أيضا ليست قابلة بسهولة لعدد كبير من خطوط البذور من الأنماط الجينية المتنوعة. كما لا تزال تقنيات التحليل الفائق لنبات تتكاثر، أصبحت تقنيات موحدة لتعقيم أعدادا كبيرة من بذور الأنواع الوراثية المختلفة الضرورية لإجراء هذه الأنواع من التجارب. وتم تقييم استجابة عدد من خطوط أعطيت لتقنيات التعقيم مختلفة اثنين على أساس معدل إنبات البذور ومستوى تلوث البذور مع الجراثيم ومسببات الأمراض الأخرى. وتشمل العلاجات تركيزات مختلفة لتعقيم وكلاء وأوقات التعرض، جنبا إلى جنب لتحديد الظروف المثلى لتعقيم بذور نبات. تم وضع البروتوكولات الأمثل لأسلوبين من أساليب التعقيم المختلفة: التبييض (المرحلة السائلة) وغاز الكلور (Cl2) (بخار-المرحلة)، سواء نتج عنه معدلات إنبات البذور عالية، والحد الأدنى من التلوث الميكروبي. الأداة المساعدة هذه البروتوكولات تجلى من خلال اختبار نوع البرية وبذور متحولة مع طائفة من الإمكانات الإنبات. وتظهر النتائج التي توصلنا إليها أن بذور يمكن فعالية التعقيم استخدام أي من الطريقتين دون وفيات البذور المفرطة، وعلى الرغم من أن لوحظت آثار ضارة للتعقيم للبذور مع أقل من إمكانات إنبات الأمثل. وباﻹضافة إلى ذلك، وضعت معادلة لتمكين الباحثين من تطبيق شروط التعقيم غاز الكلور موحدة إلى محكم حاويات ذات أحجام مختلفة. تسمح البروتوكولات المذكورة هنا تعقيم البذور سهلة وفعالة وغير مكلفة لعدد كبير من خطوط نبات.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التمويل نبات (نبات) كائن نموذج الرئيسي للبحوث الأساسية والتطبيقية في مصنع بيولوجيا1،،من23. بينما كانت الشروط القياسية لنمو نبات راسخة4، تأثير تعقيم البذور على صلاحية البذور لم يتم اختبار صارم. وسائط صلبة في لوحات أو مربعات تستخدم بشكل روتيني لتسهيل نمو شتلات نبات للعديد من التطبيقات التجريبية، مثل تحديد طفرات مميتة متماثل في فصل سكان، المراقبة تعمل تبادل لإطلاق النار والجذرية في وقت مبكر مراحل، وعزله أنسجة خالية من مسببات الأمراض، وجمع كميات كبيرة من أنسجة الشتلات، واختيار ترانسفورمانتس أو النباتات المقاومة للعقاقير، وتقييم لإنبات1،2،3،4 . تحصد البذور من النباتات التي نمت في دفيئة أو دائرة النمو أحياناً ملوثة بالغبار والكائنات الدقيقة. يتطلب نمو شتلات نبات في أنواع مختلفة من الوسائط معقمة تعقيم البذور السابقة إزالة الملوثات الميكروبية مثل الفطريات والبكتيريا الموجودة على سطح البذور. استخدام نظام تعقيم البذور الفعالة أمر بالغ الأهمية لتحقيق توازن لإنبات عالية، والحد الأدنى من التلوث، ونمو النبات قوية.

تستند الطريقتين الأكثر شيوعاً المستخدمة لتعقيم بذور نبات التبييض التجارية (المرحلة السائلة) وغاز الكلور (بخار-المرحلة). وقد استخدمت مختلف الإجراءات لكلا التعقيم السائل-المرحلة1،4،5،6،7،،من89 , 10 وبخار-مرحلة التعقيم من نبات بذور8،10،11،،من1213،،من1415 ،16. ومع ذلك، بينما كانت هذه الإجراءات فعالة في إنجاز تعقيم البذور من الأنماط الجينية المستخدمة، تحليلاً مفصلاً لتأثير العلاجات المختلفة التعقيم على البذور من الأنماط الجينية المختلفة لا أبلغ. ولذلك، مطلوب الاستفادة المثلى من هذه الإجراءات التعقيم لتحديد الشروط التي يتم الجمع بين كفاءة التعقيم مع معدل إنبات عالية.

أعطيت البيولوجي الموارد مركز (أبرك) في موقع فريد يمكنها أ) اختبار صلاحية البذور لمجموعة متنوعة من الأنماط الجينية المختلفة في جمع وب) الاستفادة من إجراءات مراقبة الجودة المطبقة داخليا واستجابة لتعليقات المستخدمين عن إنبات البذور. وتمثلت أهداف التجارب المقدمة هنا لتحديد آثار مختلف أساليب التعقيم على إنبات البذور الأنماط الجينية طائفة من نبات. وترد إجراءات التعقيم الأمثل الذي يؤدي إلى معدلات إنبات البذور عالية مع المحافظة على التلوث الممرض الحد الأدنى للتبييض والكلور غاز التعقيم.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-إعداد 1 × المتوسطة Murashige وسكوغ (مللي ثانية)

حمض
  1. ز 4.31 إضافة خليط الملح القاعدي مرض التصلب العصبي المتعدد والسكروز 10 جرام 0.5 غ من اثانيسولفونيك 2-(N-Morpholino) (MES) لكوب يحتوي على 0.8 لتر من الماء المقطر ويقلب حل. فحص وضبط الأس الهيدروجيني إلى 5.7 استخدام 1 M هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH). إضافة الماء المقطر لجعل 1 ل.
  2. تقسيم وسائل الإعلام إلى زجاجتين 1 لتر، 500 مل. إضافة 5 غ أجار لكل زجاجة. الحفاظ على الغطاء فضفاضة.
  3. اﻷوتوكﻻف لمدة 20 دقيقة في 121 درجة مئوية، 15 psi مع شريط إثارة مغناطيسية في الزجاجة.
  4. بعد التعقيم، ضع الزجاجات على طبق من إثارة على سرعة منخفضة، وتسمح المتوسطة MS لتبريد إلى 45-50 درجة مئوية (حتى يمكن عقد الزجاجة بأيديهم العارية).
  5. ابتداء من هذه الخطوة، تنفيذ كافة الخطوات في ظروف معقمة في غطاء الاندفاق الصفحي. إضافة 500 ميليلتر جامبورج ' s "حل فيتامين" لكل زجاجة ويقلب المتوسط مرض التصلب العصبي المتعدد بالتساوي بتوزيع الحل فيتامين.
  6. صب ما يكفي من وسائل الإعلام في لوحات لتغطية ما يقارب نصف عمق اللوحة.
  7. السماح بلوحات لتبرد في درجة حرارة الغرفة لحوالي 1 ح للسماح لاجار ترسيخ.
    ملاحظة: إذا كانت اللوحات ليس لاستخدامها فورا، التفاف عليها في البلاستيك وتخزينها عند 4 درجة مئوية (درجة حرارة الثلاجة). ويمكن تخزين ألواح مغطاة أو مربعات، أو أنابيب مع أجار طدت لعدة أسابيع في 4 درجات مئوية في وعاء محكم.

2. التعقيم من "بذور نبات" مع التبييض

  1. لوحات إعداد MS وفقا للمادة 1 من البروتوكول. اﻷوتوكﻻف 100 مل ماء المقطر وفي الوقت نفسه كمرض التصلب العصبي المتعدد الوسائط. استخدم هذا في وقت لاحق كماء الشطف والمساعدة في وقف البذور للمعونة في الطلاء.
    ملاحظة: إذا رغبت في ذلك، مزيج أجار 0.8% (w/v) (مثل فيتاجار) يمكن أيضا أن يعقم في هذه الخطوة. مزيج أجار يمكن أن تكون بديلاً للماء المقطر أثناء الطلاء (الخطوة 2.5.3.). لزوجة مزيج أجار إضافي يجعل من الأسهل لبذور الفضاء على لوحة أو مصنع في الصفوف إذا لزم الأمر.
  2. تحضير 50% (v/v) التبييض الحل لاستخدامها لتعقيم البذور. لتمييع التبييض، إضافة 100 مل التبييض إلى 100 مل ماء المقطر. إضافة 50 ميليلتر من المنظفات 20 توين إلى الحل التبييض.
    ملاحظة: يمكن تخزين حل التبييض مستعدا لتصل إلى شهر طالما أنه مفتوح فقط في ظروف معقمة.
  3. بذور الكوة 100 في أنبوب 1.5 مل ميكروسينتريفوجي.
  4. تعقيم البذور استخدام حل التبييض 50%-
    1. في غطاء الاندفاق الصفحي، إضافة 500 ميليلتر من الحل التبييض 50% إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي التي تحتوي على البذور. اضغط على الجزء السفلي من الأنبوب تعليق البذور في محلول التبييض.
      ملاحظة: بدلاً من ذلك، المدورة أو منصة شاكر قد تستعمل للحفاظ على بذور تعليق.
  5. شطف الحل التبييض من الأنبوب.
    1. بعد 10 دقيقة، إزالة الحل التبييض من أنبوب ميكروسينتريفوجي باستخدام ماصة أو المضخة مزودة بطرف ماصة في النهاية.
    2. إضافة 500 ميليلتر من الماء المقطر المعقم للأنبوب. إغلاق الأنبوب وعكس إلى المزيج. تسمح بذور لتسوية إلى الجزء السفلي من الأنبوب. حالما استقر البذور إلى الجزء السفلي من الأنبوب بعناية إزالة الحل التبييض بيبيتينج. كرر هذا الإجراء الشطف العملية 6 مرات.
    3. إضافة 1 مل ماء المقطر يعقم إلى أنبوب لتعليق البذور.
  6. لوحة بذور معقمة في لوحات MS.
    1. في غطاء الاندفاق الصفحي، تسمية الجزء السفلي من لوحة MS مع اسم الأسهم والتاريخ الحالي.
    2. من أجل البذور من أنبوب ميكروسينتريفوجي على لوح مرض التصلب العصبي المتعدد. نشر البذور حول لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد باستخدام حلقة إينوكولاتينج العقيمة، وتستخدم مرة واحدة أو تلميح ماصة معقمة.
      ملاحظة: إذا كانت البذور تزرع في الصفوف، يمكن استخدام ماصة مع تلميح 200 ميليلتر لوضع البذور على حدة في المواقف المطلوبة. لتحسين تدفق البذور، يمكن أن يتم اقتطاعها نهاية طرف الماصة من 3-5 ملم باستخدام مقص. يمكن ثم يتم إعادة تحديد موضعها أو فصلها باستخدام حلقة إينوكولاتينج معقمة تستخدم مرة واحدة أي البذور في غير محله أو مجموعات من بذور.
    3. وضع لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد في الجزء الخلفي من هود الاندفاق الصفحي مع غطاء نصف مغلقة. السماح للمياه الزائدة تتبخر من لوحة MS.
    4. ضع الغطاء على لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد. ختم الشريط لوحة MS بالتفاف اللوحة مع ورقة microporous الجراحية (انظر الجدول للمواد)-

3. التعقيم من بذور نبات مع "غاز الكلور"

  1. لوحات إعداد MS وفقا للمادة 1 من البروتوكول. اﻷوتوكﻻف 100 مل ماء المقطر وفي الوقت نفسه كمرض التصلب العصبي المتعدد الوسائط؛ سيتم استخدام هذا في وقت لاحق للمساعدة في وقف بذور للمعونة في الطلاء.
    ملاحظة: إذا رغبت في ذلك، مزيج أجار 0.8% (w/v) (مثل فيتاجار) يمكن أيضا أن يعقم في هذه الخطوة. مزيج أجار يمكن أن تكون بديلاً للماء المقطر أثناء الطلاء (الخطوة 3.6.2.). لزوجة مزيج أجار إضافي يجعل من الأسهل لبذور الفضاء على لوحة أو مصنع في الصفوف إذا لزم الأمر.
  2. قبل البدء في التعقيم، حساب المبالغ للتبييض وحامض الهيدروكلوريك (HCl) اللازمة لإنتاج غاز الكلور-
    1. حساب كمية HCl اللازمة لإنتاج 6.1% Cl 2 المطلوبة للتعقيم.
    2. استخدام الصيغة التالية:
      figure-protocol-1
      مع مل 7,000 كحجم الحاوية التعقيم و 6.1% Cl 2؛ ويحسب حجم HCl لتكون مل 3.
      ملاحظة: يتم توفير جدول بيانات مبرمجة للقيام بحساب لكميات مختلفة من Cl حاوية و % 2 تكميلية الجدول 1-
  3. 100 الكوة البذور في أنبوب ميكروسينتريفوجي 0.5 مل. إغلاق القبعات لكل قنينة، ووضع في قارورة في رف بلاستيك وجانبا.
    ملاحظة: يمكن تخزين البذور لفترة ممتدة من الوقت في هذه المرحلة طالما يتم تخزينها في ظروف ملائمة. ويمكن الاطلاع على ظروف التخزين في الفرع 3.3.2 البروتوكول ريفيرو والزملاء 4. يمكن أيضا استخدام تنسيق لوحة 96-جيدا-
  4. إعداد المواد اللازمة لإجراء التعقيم غاز الكلور-
    1. الحصول على التبييض و HCl من مواقعها التخزين.
    2. قص الفيلم قطاع من البارافين كبيرة (انظر الجدول للمواد) للاستخدام في الخطوة 3.5.3. لختم الحاويات التعقيم.
    3. مكان حاوية بلاستيكية مع غطاء عملية التعقيم التي سوف تجري داخل غطاء دخان. فتح القبعات على كل قنينة البذور ووضع على الرف البذور كاملة داخل الحاوية البلاستيكية.
  5. إجراء التعقيم غاز الكلور في درجة حرارة الغرفة.
    تنبيه: العمل مع التبييض والأحماض بشكل منفصل. لا تترك الزجاجة أما أزم للحد من مخاطر الانسكابات. استخدام معدات الوقاية الشخصية المناسبة (معدات الوقاية الشخصية) بما في ذلك القفازات ومعطف معمل. إذا كانت البقع التبييض أو حمض قفازات، تغيير القفازات قبل التعامل مع المواد الأخرى. إزالة القفازات دائماً في غطاء الدخان في حالة التلوث بالتبييض أو حمض.
    1. وضع كوب 250 مل داخل الحاوية وإضافة 100 مل التبييض.
      ملاحظة: يتطلب رد فعل بين HCl والتبييض فائض وحدات التخزين على الأقل 22 من التبييض. أن رد الفعل سوف تستهلك HCl والتبييض عن طريق الإفراج عن الغاز 2 Cl مع كلوريد الصوديوم (NaCl) والمياه تركات. يسمح باستخدام فائض كبير من التبييض استهلاك إضافية HCl ديورنغ فترة التنفيس، مما يقلل من مقدار بيكربونات الصوديوم (ناكو 3) اللازمة لتحييد الحل للتخلص منها.
      تنبيه: ينبغي أن يكون الكأس مرتين على الأقل إجمالي حجم السائل للتبييض + HCl. وهذا ما يمنع البقع الهروب الكأس أثناء الخطوة التالية، التي يمكن إتلاف البذور والتبييض الملابس أو حرق الجلد.
    2. أضف 3 مل HCl للكأس التي تحتوي على المبيض.
      تنبيه: رد الفعل الأولى سوف تنتج فقاعات، ولا سيما في تركيزات الغاز أعلى من 6.1 في المائة. معطف مختبر اكمام طويلة ضروري لهذه الخطوة.
    3. إغلاق الحاوية التعقيم، وختم ذلك مع الفيلم البارافين فورا.
    4. رصد الحاوية التعقيم زمن التعقيم لضمان تراكم الغاز؛ وتراكم غاز الكلور يجب أن تكون مرئية كضباب أصفر خافت داخل الحاوية.
      تنبيه: فحص دوري للحاوية التعقيم لضمان أن الضغط داخل قد أقصت لا الغطاء أو البارافين الفيلم. إذا أصبح الغطاء مقعده أو الفيلم البارافين قد تأتي فضفاضة، أغلق الغطاء والتفاف بعناية الحاوية مع طبقة إضافية من الفيلم البارافين.
    5. ح بعد 1-التعقيم الفترة، فتح الحاوية بإزالة الفيلم البارافين وفتح غطاء على زاوية واحدة. يسمح الحاوية للتنفيس عن ح 3 لإتمام التفاعل والقضاء على غاز الكلور-
      6. إغلاق
    6. قبعات جميع ميكروسينتريفوجي الأنابيب في الرف البذور.
      ملاحظة: يمكن تخزين بذور معقمة حتى وقت تصفيح طالما يتم تخزينها في حالة جفاف.
    7. إزالة رف البذور ووضعها في غطاء الاندفاق الصفحي.
    8. تحييد تفاعل غاز الكلور
      1. ز 1.5 إضافة مسحوق 3 ناكو ببطء للكأس التي تحتوي على الحل التبييض/HCl ويقلب بقضيب زجاج يذوب ناكو 3 في الحل. استمر في إضافة NaHCO 3 حتى توقف فقاعات غاز ثاني أكسيد الكربون (CO 2) تشكيل.
        تنبيه: أضف ببطء لمنع البقع. استخدام معدات الوقاية الشخصية الملائمة بما في ذلك القفازات ومعطف معمل.
      2. اختبار الرقم الهيدروجيني للحل باستخدام شرائح الأس الهيدروجيني أو مقياس الأس الهيدروجيني. إضافة إضافية ناكو 3 إذا كان ضروريا حتى الرقم الهيدروجيني للحل محايد (الرقم الهيدروجيني 7.0). عند هذه النقطة يمكن إزالتها من غطاء الدخان الحل والتخلص منها وفقا لجميع المبادئ التوجيهية المطبقة التخلص.
        تنبيه: إذا لاحظت أي رائحة أثناء التخلص منها، ثم الحل ينبغي أن يكون أعيد على الفور إلى غطاء الدخان.
  6. لوحة بذور معقمة في لوحات MS.
    1. في غطاء الاندفاق الصفحي، تسمية الجزء السفلي من لوحة MS مع اسم الأسهم والتاريخ الحالي.
    2. إضافة 500 ميليلتر من الماء المقطر المعقم لكل أنبوبة ميكروسينتريفوجي تعليق البذور. من أجل البذور إلى لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد وتنتشر البذور بالتساوي حول لوحة باستخدام حلقة إينوكولاتينج العقيمة، وتستخدم مرة واحدة أو تلميح ماصة معقمة.
    3. وضع لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد في الجزء الخلفي من هود الاندفاق الصفحي مع غطاء نصف مغلقة. السماح للمياه الزائدة تتبخر من لوحة MS.
    4. ضع الغطاء على لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد. ختم اللوحة مرض التصلب العصبي المتعدد بالتفاف اللوحة مع الشريط الجراحي ورقة microporous.

4. نمو نبات على لوحات MS

  1. بوضع اللوحات مع الغطاء على أعلى لمدة ثلاثة أيام في 4 ˚C والرطوبة المحيطة.
    ملاحظة: هذه العملية تسمى التقسيم الطبقي، ويعمل على مزامنة إنبات البذور الفردية-
  2. نقل اللوحات لبيئة النمو. كبيرة
    1. المحافظة على درجة حرارة 23 درجة مئوية وكثافة الضوء في 120-150 µmol/م 2 s مع الضوء ح 16/8 ح الظلام. وضع لوحات شقة في البيئة ينمو مع غطاء على الأعلى حيث تنمو الجذور في المتوسط-
  3. تمكنك من زراعة الشتلات في لوحات لمدة 8 أيام-
    ملاحظة: يسمح فترة نمو يوم 8 متأخر الإنبات البذور على الإنبات. يمكن سجل لوحات عاجلاً من 8 أيام إذا قد نامي كل البذور.
  4. نقاط معدلات الإنبات.
    1. سجل عدد البذور التي لها نامي والتي قد لا نامي. حساب معدل الإنبات بقسمة عدد البذور التي نامي بالعدد الكلي للبذور على اللوحة-
      ملاحظة: يحسب الإنبات عندما يتوقع جذير خارج المعطف البذور و cotyledons اثنين مرئية.
    2. أيضا حساب عدد البذور المتأثرة بالقالب لتحديد مدى فعالية شروط التعقيم.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بذور نبات جمعت من دائرة مفتوحة لحقل أو الاحتباس الحراري أو النمو في بعض الأحيان ملوثة بمختلف الكائنات الحية الدقيقة مثل الفطريات والبكتيريا1،4. وهكذا، الإنبات البذور على وسائط العقيمة يمكن أن يشكل تحديا كبيرا بسبب التلوث لوحات، وخصوصا عندما يقتصر الإمداد بالبذور. البروتوكول الأمثل للتبييض والكلور غاز التعقيم، النتائج التي ترد أدناه، يقلل من هذه المشكلة ويحافظ على بقاء البذور اللازمة للتطبيقات عالية الإنتاجية.

تأثيرات التبييض التعقيم على إنبات بذور نبات Col-0

التبييض هو عامل الأكثر استخداماً لتعقيم البذور في العديد من الأنواع النباتية. يختلف تركيز عامل تعقيم ووقت التعرض الأمثل بين الأنواع. وقد استخدمت عددا من البروتوكولات باستخدام التبييض للتعقيم من بذور نبات1،4،5،،من67،،من89 , 10-وتعرض أربعة تركيزات مختلفة للتبييض مع وقت التعرض مختلفة خمس فترات تم اختبارها والنتائج في الرقم 1. تم تطبيق العلاجات كولومبيا البرية من نوع البذور (Col-0). تأثير تركيز التبييض في إنبات البذور Col-0 تختلف باختلاف وقت التعقيم كما يتضح من وجود تفاعل كبير بين الوقت للتعقيم وتركيز التبييض (الشكل 1، ف < 0.001، ANOVA-تحليل التباين).

في التجارب مع تعقيم مرات بين 5 و 10 دقيقة، أسفرت العلاجات مع جميع التبييض تركيزات التساوي إنبات عالية معدل البذور Col-0 (الشكل 1). ولوحظت أيضا معدلات الإنبات عالية للتبييض المنزلية تركيزات 40% و 50% لجميع الأوقات التعقيم. العلاج بالتبييض 80% و 100% لفترات أطول من 10 دقائق أدى كبير الانخفاض في معدل إنبات مقارنة بالأوقات مغطس أقصر (ف < 0.01، ANOVA). وعلاوة على ذلك، عن 80% و 100% التبييض علاجات لمدة 20 دقيقة، الإنبات قد تناقص بصورة كبيرة المقابلة 40% وعلاجات التبييض 50% بالمقارنة مع (ف < 0.001، ANOVA).

بذور عرض مستويات مختلفة من التبييض وشريفلينغ عند استخدام تركيزات عالية من التبييض لمدة 15 دقيقة أو أكثر. بالإضافة إلى عالية نسبيا (تصل إلى 32 في المائة) ووفيات البذور، ونبتت بذور معقمة في هذه الظروف غالباً ما أظهرت عيوب النمو، ينعكس في عدم كوتيليدونس وهيبوكوتيلس العيان وتمديد، أسفرت عن اعتقال التنموية. كانت معظم العلاجات (14 من أصل 20) تماما خالية العفن، أسفر عن العفن المستوى المتوسط الإجمالي ± 0.21 في المائة 0.003 (الجدول 1).

علاج بالتبييض 50% ووقت حوضاً من 10 دقيقة اختير كأفضل نظام التعقيم نظراً لأنها تجمع بين نسبة إنبات عالية مع تثبيط النمو الممرض السطحية جيدة. واختير هذا العلاج اختبار تأثير التعقيم التبييض على خطوط متحولة مختلفة كما هو موضح أدناه.

تأثيرات التعقيم غاز الكلور في إنبات البذور Col-0

لتحسين ظروف التعقيم غاز الكلور، استخدمت ثلاثة تركيزات مختلفة من غاز الكلور في تعقيم البذور Col-0 لفترتين من الزمن (الجدول 2). وكان حساب تركيز الغاز استناداً إلى حجم HCl مركزة وحجم الحاوية التعقيم باستخدام المعادلة التالية:

figure-results-1

استمدت هذه المعادلة باستخدام قانون الغازات المثالية افتراض 12.3 M HCl، درجة حرارة 23 درجة مئوية وضغط جوي قياسي 101.3 كيلو باسكال.

كان سيظهر تأثير تركيز غاز الكلور في إنبات البذور Col-0 يعتمد على وقت التعقيم كما هو مبين بوجود تفاعل كبير بين الوقت وعوامل التركز (الشكل 2A، ف < 0.01، ANOVA) . وكان تركيز غاز الكلور أي تأثير كبير على إنبات البذور Col-0 تخضع للتعقيم ح 1. مع هذا الوقت التعقيم، شجعت جميع تركيزات غاز الكلور وبالمثل مستويات عالية من الإنبات، أكثر من 85 في المائة (ف > 0.05، ANOVA). من ناحية أخرى، أدى تعقيم ح طوله 3 انخفاضا كبيرا في معدل إنبات لأعلى تركيز لغاز الكلور، بالمقارنة مع تركيزات الغاز أقل اثنين (ف < 0.05، ANOVA). تشير هذه النتائج إلى أن علاجات بذور نبات مع أي من تركيزات غاز الكلور اختبار ح 1، أو مع تركيزات غازات أقل نسبة 16.5 في المائة ح 3، نفس القدر من الفعالية في الحفاظ على بقاء البذور حيث أن معدلات الإنبات كانت دائماً أكبر من 82 في المائة. ومع ذلك، تعقيم بذور ح 3 مع الغاز 16.5 في المائة كان ضار لإنبات البذور.

وكان أيضا الإصابة بالعفن اعتماداً على تركيز الغاز ومدة التعرض. كانت فعالية أعاقت نمو العفن بتركيزات عالية نسبيا من 6.1 في المائة و 16.5 في المائة من غاز الكلور لعلاج دام ح 1 ومع جميع تركيزات غاز ح 3 (الشكل 2).

استناداً إلى هذه النتائج، اختير علاج بتركيز غاز من 6.1 في المائة ح 1 (الجدول 2) كأفضل حالة التعقيم مرحلة البخار اختبار تأثير غازات التعقيم على خطوط متحولة مختلفة، نظراً لأنها تجمع بين (معدل إنبات عالية 85 في المائة) مع المستوى المنخفض جداً للتلوث العفن (0.02 في المائة).

تأثيرات التبييض والكلور غاز التعقيم على البذور الإنبات المختلفة المحتملة

التحليل الإحصائي أظهرت أن الاستجابة الإنبات بأساليب التعقيم يعتمد على إمكانية إنبات خطوط (الشكل 3 ألف، ف < 0.01، ANOVA). التعقيم غاز الكلور ولا التبييض خفض معدل إنبات البذور الإنبات المرتفعة المحتملة (المجموعات 4 و 5). لا علاج لها أثر على معدل إنبات المنخفضة بالفعل للفريق مع إنبات أدنىإمكانيات (المجموعة 1). وفي المقابل، أسفر التعقيم غاز الكلور تخفيضاً كبيرا بحوالي 12-18% (ف < 0.01، ANOVA) في إنبات البذور مع إمكانية إنبات الوسيطة (المجموعات 2 و 3). التعقيم التبييض انخفض أيضا معدل الإنبات بنسبة 13% من المجموعة 2، بل أنها لم تقل معدل إنبات المجموعة 3. على الرغم من أن كان هناك أي اختلاف كبير في معدل إنبات بين التبييض والكلور علاجات الغاز في أي مجموعة الإنبات (الشكل 3 ألف، ف > 0.442، ANOVA)، بذور تعقيمها باستخدام التبييض لديها أعلى قليلاً معدل إنبات البذور غازات التعقيم في جميع مجموعات إنبات.

التعقيم العلاج تغيير كبير (ف < 0.001، ANOVA) النسبة المئوية للبذور التي تتأثر العفن (الشكل 3B). كلا التعقيم الكلور التبييض والغاز أدى إلى نمو العفن أقل (ف < 0.05، ANOVA) مقارنة لا التعقيم. لم يكن هناك فرق في مستوى العفن اكتشفت بين الغاز والتبييض التعقيم في أي مجموعة (الشكل 3B، ف > 0.4، ANOVA).

figure-results-2
رقم 1: آثار التبييض وقت تركيز والتعقيم على إنبات بذور نبات Col-0- القيم هي وسائل ± التنمية المستدامة التي تم الحصول عليها من تكرار التجربة المستقلة 5. * تشير إلى اختلافات كبيرة بالنسبة إلى 5 دقائق مغطس المدة لمجموعة من تركيزات التبييض (ف < 0.01، ANOVA). #يشير إلى اختلافات كبيرة من 80 في المائة، وتركيزات التبييض 100% مقارنة بنسبة 40 في المائة و 50 في المائة بالنسبة 20 دقيقة فترة زمنية (ف < 0.01، ANOVA). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-results-3
رقم 2: آثار الكلورين الغاز وقت تركيز والتعقيم على بذور نبات Col-0- (أ) معدل الإنبات ومستوى العفن (ب). أشرطة الخطأ تمثل وسائل ± التنمية المستدامة التي تم الحصول عليها من 5 البيولوجية وتكرار التجربة التقنية 5. يعني أن عدم مشاركة رسالة تختلف اختلافاً كبيرا (ف < 0.05، ANOVA). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-results-4
الشكل 3: آثار التبييض والكلور غاز التعقيم على البذور الإنبات المختلفة المحتملة. (أ) معدل الإنبات ومستوى العفن (ب). خطوط سالك تي-دنا 100 صنفت إلى خمس مجموعات حسب ما إنبات المحتملة يعرف معدل الإنبات في غياب أي عامل التعقيم. مجموعات على أساس معدل الإنبات على النحو التالي: المجموعة 1 (0-20%)، المجموعة 2 (21-50%)، والمجموعة 3 (51-70 في المائة)، والمجموعة 4 (71-90 ٪) والمجموعة 5 (91-100%). الخطوط التي تم اختيارها عشوائياً وعلى إنبات المحتملة لا تتوقف على النمط الوراثي. القيم هي وسائل ± التنمية المستدامة التي تم الحصول عليها من تكرار التجربة المستقلة الثلاثة. تشير الأحرف ("a"، "ab"، "ج"، إلخ) فوق كل قيمة إلى المجموعات الإحصائية لوسائل الفئة. يعني أن عدم مشاركة رسالة تختلف اختلافاً كبيرا (ف < 0.05، ANOVA). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

التعقيم الوقت (دقيقة)بليتش تركيز (%)
405080100
50.00%0.00%0.00%2.13 في المائة
80.00%0.00%0.00%0.00%
100.00%0.50%0.00%0.36 في المائة
150.00%0.00%0.00%0.68%
200.19 في المائة0.28 في المائة0.00%0.00%

الجدول 1: مستوى العفن للتبييض تعقيم البذور Col-0.

بليتشقائمة توافق الأجهزةالوقت% غاز الكلور (مول Cl2/mol إجمالي الغاز)
(mL)(mL)(ح)
25112.1
25132.1
100316.1
100336.1
2009116.5
2009316.5

الجدول 2: الكلور (Cl2) غازات التعقيم العلاج في كولومبيا البرية من نوع البذور باستخدام حاوية ل 7-

تكميلية الجدول 1: جدول بيانات مبرمجة للقيام بحساب لكميات مختلفة من Cl حاوية و %2. اضغط هنا لتحميل هذا الملف.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عندما تنمو بذور نبات في وسائل الإعلام العقيمة، يجب تطبيق بعض أشكال التعقيم. التبييض والكلور غاز التعقيم العلاج يؤدي إلى إنبات مماثلة معدل والعفن تثبيط النمو. طريقة التعقيم لا يسبب انخفاض كبير في معدل إنبات البذور الإنبات المرتفعة المحتملة؛ مع ذلك، ينصح تعقيم التبييض لخطوط مع انخفاض احتمال إنبات (20-70 في المائة)، سبب الصغيرة، أن كان ذلك غير ذي، تحسن في معدل إنبات بالمقارنة مع غازات التعقيم (الشكل 3A).

تعقيم بذور نبات مع تركيزات التبييض من 40-100% لتصل إلى 10 دقيقة توفر نسب الإنبات مرضية وقمع العفن فعالة. على الرغم من أن التبييض تركيزات أقل من 40% توفر التعقيم كافية لمعظم البذور الكثير، تستخدم بتركيز 40% أو أعلى الضمانات التعقيم الفعالة حتى القرعة البذور الملوثة بشكل كبير. فمن المهم لا تتجاوز 10 دقائق للتعقيم عند استخدام التبييض تركيزات تساوي أو تزيد عن 80% لتجنب الوفيات البذور عالية والعيوب في التنمية الشتلات.

معاملة بذور نبات مع تركيزات غاز الكلور من 6.1 في المائة أو نسبة 16.5 في المائة لنتائج ح 1 في معدلات الإنبات عالية، والقضاء على العفن كافية. تركيز غاز الكلور منخفض (2.1%) يمكن أن تستخدم بنجاح عن طريق زيادة مدة التعقيم إلى ح 3.

عندما أسطر قليلة تحتاج إلى التعقيم، ينصح بالتعقيم السائل في إيجاد حل للتبييض 50% لمدة 10 دقائق. للحصول على عدد أكبر من خطوط، غازات التعقيم بتركيز غاز من 6.1 في المائة ح 1 خيار أفضل نظراً للعديد من خطوط يمكن تعقيمها بسرعة وسهولة مع أقل التلاعب.

النتائج التي توصلنا إليها توفير الشروط الموحدة لتعقيم عدد كبير من البذور من مختلف الأنماط الجينية والبذور مع احتمال انخفاض الإنبات. القيد الوحيد لهذه التقنيات التعقيم أنه لا يمكن تطبيقها للبذور مع معدلات الإنبات أقل من 20% بسبب وفيات البذور واسعة النطاق. أساليب بديلة، مثل سونيكيشن17، إلى زيادة معدل الإنبات في غياب التعقيم قد تكون مفيدة في هذه الحالات.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر غاوري داتا لمساعدتها في إعداد المواد التجريبية. ونحن ممتنون أيضا لبيتينا ويتلير وجيمس مان لاستعراض دقيق للمخطوط. كان يدعمها هذا العمل NSF المنح DBI 1049341 والمجلس-1143813.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.65 مل أنابيب الطرد المركزيGeneMateC-3260-5أنبوب توضع فيه بذور نبات الأرابيدوبسيس ثاليانا لإجراء التعقيم
طرد مركزي دقيق 1.7 ملGeneMateC-3262-1أنبوب توضع فيه بذور نبات الأرابيدوبسيس ثاليانا لإجراء التعقيم
بلاستيكية سعة 7 لترمن Sistema1016265438الحاوية التي يتم
فيها التعقيم بالغازمادة كيميائية مركزة من HClSigma-Aldrich320331 تستخدم في عملية إنتاج غاز الكلور
حلقة تلقيح معقمة يمكن التخلص منهاتستخدم حلقة Fisher Scientific22-363-603لنشر أو وضع بذور نبات الأرابيدوبسيس على ألواح MS
Gamborg ' محلول فيتامينSigma-AldrichG1019محلول فيتامين يستخدم في عملية صنع وسائط التصلب العصبي المتعدد
المبيض المنزليكلوركسللتبييضالعادي تستخدم في عملية إنتاج غاز الكلور والتعقيم السائل
MES هيدراتسيجما ألدريتشM2933مادة كيميائية تستخدم في عملية صنع الشريط الجراحي Micropore لوسائط التصلب العصبي المتعدد
3M1530-1شريط ورقي جراحي صغير يسهل اختراقه يستخدم لإغلاق ألواح التصلب العصبي المتعدد
Murashige و Skoog خليط الملح القاعدي (MS)Sigma-AldrichM5524مادة كيميائية تستخدم في عملية صنع وسائل الإعلام
MS Parafilm Mشركة Bemis#PM996فيلم Parraffin المستخدم لإغلاق حاوية التعقيم
طبق بتري 100 × 15 مم & nbsp ؛فيشر FB0875713بتري من فيشر العلمي التي تسكب فيها وسائط التصلب العصبي المتعدد لغرض زراعة شرائط مؤشر نبات الأرابيدوبسيس ثاليانا
2613991يستخدم للتحقق من درجة الحموضة لمحلول الكلور المحايد وبيكربونات الصوديوم
PhytoagarFisher Scientific50-255-212يستخدم للمساعدة في تعليق بذور نبات الأرابيدوبسيس في عملية طلاء البذور
بيكربوناتالصوديومSigma-AldrichS5761مادة كيميائية تستخدم في عملية تحييد تفاعل غاز الكلور
السكروزسيجما-ألدريتشS0389مادة كيميائية تستخدم في عملية صنع وسائط التصلب العصبي المتعدد
Tween 20Fisher BioReagentsBP337-100مادة كيميائية تستخدم في عملية التعقيم السائل
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgCS70000 (Col-0)بذور نبات الأرابيدوبسيس من النوع البري 
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_037606Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIRwww.arabidopsis.org SALK_041402Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_059101Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_063470Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نبات الأرابيدوبسيس SALK_072048C المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_072240Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_081989Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_084124Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 1
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_085049Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتSALK_089717CTAIR المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_107354Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_110111Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_111322C المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_113109Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_114702Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_114872Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 1
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_115657Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_116803Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناللمجموعة 1 ABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_039445Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_039782Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_043037Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_045828Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_048556Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_049514Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 2
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_049725Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتSALK_080816C www.arabidopsis.orgTAIR المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناللمجموعة 2 ABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_081176Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_081770Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_082262Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_082289Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_082702Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_083630Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 2
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_084635Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_085337Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناللمجموعة 2 ABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_085656Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_093049Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_103332C المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_105336Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_105704Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_106388Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 2
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_109575Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتSALK_110580Cتستخدم في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_110617Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_111424Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_111584Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_112097Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_113339Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نبات الأرابيدوبسيس www.arabidopsis.org SALK_115837C TAIRتستخدم في الاختبار كجزء من المجموعة 2
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_019535Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتSALK_026478Cتستخدم في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناللمجموعة 3 ABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_046565Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ طلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_049258Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_049339C المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_056307Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_081292Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_081597Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 3
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_083488Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات الأرابيدوبسيس من المجموعة 3
ABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتالأرابيدوبسيسSALK_110573Cالمستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_112793Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ طلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_113658Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_113904C المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_114673Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_114709Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نبات الأرابيدوبسيس www.arabidopsis.org SALK_115455C TAIRالمستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 3
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_013186Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_018261Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_062509Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_080639Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_088586C المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات الأرابيدوبسيس الثاليانا من المجموعة 4
ABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_096651Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_106900Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_110131C المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 4
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_111051Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتSALK_111245CTAIR www.arabidopsis.org المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_113223Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_121391Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_125097C المستخدمة في الاختبار كجزء من
بذور نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_201905Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_210001Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_000662Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 5
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_029335Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتSALK_047760CTAIR المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_071275Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات الأرابيدوبسيس الثاليانا للمجموعة 5
ABRC ؛ طلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_080530Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات الأرابيدوبسيس الثاليانا للمجموعة 5
ABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_103881Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_110864Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_120294Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_124390Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 5
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_132808Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال بذور نباتSALK_137036CTAIR المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_139519Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_140643Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_142288Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC. اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_143304Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور
نبات الأرابيدوبسيس الثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgبذور نباتالأرابيدوبسيس SALK_147597C المستخدمة في الاختبار كجزء من بذور نبات
الأرابيدوبسيسABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_209076Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعة 5
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_081081Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعتين 5 و 1
بذور نبات الأرابيدوبسيس ثالياناABRC ؛ اطلب من خلال TAIR www.arabidopsis.orgSALK_107487Cبذور نبات الأرابيدوبسيس المستخدمة في الاختبار كجزء من المجموعتين 5 و 2
الدقيقة أنبوب حاوية مادة كيميائية أطباق من المجموعة 1 للمجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 الأرابيدوبسيس www.arabidopsis.org للمجموعة 1 للمجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 1 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 الأرابيدوبسيس من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 الأرابيدوبسيس www.arabidopsis.org من المجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 2 بذور من المجموعة 2 للمجموعة 2 من المجموعة 2 من المجموعة 3 الأرابيدوبسيس www.arabidopsis.org للمجموعة 3 من المجموعة 3 من المجموعة 3 للمجموعة 3 من المجموعة 3 T www.arabidopsis.org AIR للمجموعة 3 من المجموعة 3 من المجموعة 3 من المجموعة 3 للمجموعة 3 للمجموعة 3 من المجموعة 4 للمجموعة 4 للمجموعة 4 من المجموعة 4 للمجموعة 4 من المجموعة 4 من المجموعة 4 الأرابيدوبسيس للمجموعة 4 للمجموعة 4 من المجموعة 4 من المجموعة 4 من المجموعة 4 من المجموعة 4 من المجموعة 5 الأرابيدوبسيس www.arabidopsis.org للمجموعة 5 بذور من المجموعة 5 للمجموعة 5 من المجموعة 5 من المجموعة 5 الأرابيدوبسيس www.arabidopsis.org للمجموعة 5 للمجموعة 5 من المجموعة 5 من المجموعة 5 للمجموعة 5 من المجموعة 5

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weigel, D., Glazebrook, J. Arabidopsis: a laboratory manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, N.Y. (2002).
  2. Koornneef, M., Meinke, D. The development of Arabidopsis as a model plant. Plant J. 61 (6), 909-921 (2010).
  3. The Arabidopsis Genome Initiative. Analysis of the genome sequence of the flowering plant Arabidopsis thaliana. Nature. 408 (6814), 796-815 (2000).
  4. Rivero, L., et al. Handling Arabidopsis plants: growth, preservation of seeds, transformation, and genetic crosses. Methods Mol Biol. 1062, 3-25 (2014).
  5. Yamada, K., et al. Empirical analysis of transcriptional activity in the Arabidopsis genome. Science. 302 (5646), 842-846 (2003).
  6. Alonso, J. M., Stepanova, A. N. Arabidopsis transformation with large bacterial artificial chromosomes. Methods Mol Biol. 1062, 271-283 (2014).
  7. Savage, L. J., Imre, K. M., Hall, D. A., Last, R. L. Analysis of essential Arabidopsis nuclear genes encoding plastid-targeted proteins. PLoS One. 8 (9), e73291(2013).
  8. Podar, D. Plant growth and cultivation. Methods Mol Biol. 953, 23-45 (2013).
  9. Xu, W., et al. An improved agar-plate method for studying root growth and response of Arabidopsis thaliana. Sci Rep. 3, 1273(2013).
  10. Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16, (1998).
  11. Cederholm, H. M., Benfey, P. N. Distinct sensitivities to phosphate deprivation suggest that RGF peptides play disparate roles in Arabidopsis thaliana root development. New Phytol. 207 (3), 683-691 (2015).
  12. Ye, G. N., et al. Arabidopsis ovule is the target for Agrobacterium in planta vacuum infiltration transformation. Plant J. 19 (3), 249-257 (1999).
  13. Kuromori, T., et al. A collection of 11 800 single-copy Ds transposon insertion lines in Arabidopsis. Plant J. 37 (6), 897-905 (2004).
  14. Fiers, M., et al. The 14-amino acid CLV3, CLE19, and CLE40 peptides trigger consumption of the root meristem in Arabidopsis through a CLAVATA2-dependent pathway. Plant Cell. 17 (9), 2542-2553 (2005).
  15. Stepanova, A. N., Alonso, J. M. PCR-based screening for insertional mutants. Methods Mol Biol. 323, 163-172 (2006).
  16. O'Malley, R. C., Alonso, J. M., Kim, C. J., Leisse, T. J., Ecker, J. R. An adapter ligation-mediated PCR method for high-throughput mapping of T-DNA inserts in the Arabidopsis genome. Nat Protoc. 2 (11), 2910-2917 (2007).
  17. López-Ribera, I., Vicient, C. M. Use of ultrasonication to increase germination rates of Arabidopsis seeds. Plant Methods. 13 (31), (2017).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Arabidopsis Seed SterilizationBleach SolutionChlorine GasSeed Germination RateMicrobial ContaminationLaminar Flow HoodFume HoodSterile Distilled WaterMS PlateSeed Stratification

مقالات ذات صلة