هنا، يمكننا وصف أسلوب ثقافة ثلاثي الأبعاد لتحليل مورفولوجية الابتدائي خلايا سرطان الثدي، كذلك فيما يتعلق بدراسة تفاعلها المباشر/غير المباشر مع وحيدات ونتائج مثل تدهور الكولاجين وتجنيد الخلايا المناعية والخلايا الغزو، والترويج للالتهابات المتصلة بالسرطان.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحليل الاتصالات بين وحيدات وخلايا سرطان الثدي الأولية في مصفوفة خارج الخلية استخراج (أكمي)-على أساس نظام ثلاثي الأبعاد
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مضمن في المصفوفة خارج الخلية (ECM)، الخلايا الظهارية العادي والورم وثيقا التواصل مع الخلايا المكونة للدم وغير-المكونة للدم، وبالتالي التأثير على أنسجة طبيعية نتيجة التوازن والمرض إلى حد كبير. الإصابة بسرطان الثدي، المرتبطة بورم الضامة (تامس) تلعب دوراً حاسما في تطور المرض وورم خبيث، والتكرار؛ ولذلك، فهم آليات تشيمواتراكشن الوحيدات إلى ورم المكروية وتفاعلها مع الخلايا السرطانية مهم للسيطرة على المرض. هنا، نحن نقدم وصفاً مفصلاً لنظام ثلاثي الأبعاد (3D) ثقافة المشارك للثدي الخلايا السرطانية (BrC) ووحيدات البشرية. إنتاج خلايا BrC ارتفاع مستويات التنظيم في تفعيل القاعدية، وعادي تي خلية أعرب ويفرز (رنتيس)، الوحيدات chemoattractant البروتين-1 (العملية التشاورية المتعددة الأطراف-1)، وعامل تحفيز مستعمرة بلعم المحببات (ز-CSF)، بينما في الثقافة المشتركة مع وحيدات، تم إثراء بيتا انترلوكين (إيل)-1 برو-التهابات السيتوكينات (إيل-1β)، وايل-8 جنبا إلى جنب مع مصفوفة ميتالوبروتيناسيس (MMP)-1 ونظام التمثيل التناسبي المختلط-2 ونظام التمثيل التناسبي المختلط-10. هذا وورم المكروية ستروما تعزيز مقاومة anoikis في هياكل مثل acini 3D MCF-10A، تشيمواتراكشن وحيدات، والغزو العدواني BrC الخلايا. توفير بديل بأسعار معقولة لدراسة الاتصالات داخل ورم البروتوكولات المقدمة هنا وهي مثال على الإمكانات الكبيرة التي توفر في المختبر نظم خلية ثلاثية الأبعاد استجواب ميزات محددة بيولوجيا الأورام المتصلة بالورم العدوان.
المقدمة
بيولوجيا الأورام الآن أكثر تعقيداً مما كان يعتقد سابقا. أدلة متزايدة تظهر أن الخلايا السرطانية أكثر من مجرد الجزء الأكبر من الخلايا المتكاثرة غير المنضبط؛ بدلاً من ذلك، تبدو الخلايا الورمية المختلفة لأداء وظائف مختلفة عرض عالية التنظيم والتسلسل الهرمي داخل الورم1. الخلايا السرطانية أيضا في التواصل الحميم مع عدم تحول الخلايا: الضامة، والخلايا الليفية، الخلايا الليمفاوية، adipocytes، خلايا بطانية، بين الخلايا الأخرى كلها مغمورة في سقالة البروتينات والسكريات التي تشكل إدارة المحتوى في المؤسسة. يتم إنشاء العديد من التفاعلات المباشرة وغير المباشرة بين الخلايا المحولة وعدم تحويلها، ومع إدارة المحتوى في المؤسسة، التي تمارس تأثيراً قويا على مدى ال
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وتم الحصول على عينات من المرضى BrC من مصرف الأنسجة أون بحوث Unidad de Virología y المصابة، غوميز فيديريكو مستشفى الأطفال في المكسيك. أقر هذه الدراسة العلمية، والأخلاقية، والسلامة البيولوجية استعراض المجالس غوميز فيديريكو مستشفى الأطفال في المكسيك: لجنة بحوث، أون هي دي لجنة الدراسات ولجنة دي بيوسيجوريداد. جميع المرضى مقيدين في تاريخ لاحق، وأبلغ عن طبيعة الدراسة: الراغبين في المشاركة التوقيع موافقة خطية قبل جمع العينات ويعاملون وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية وأفضل الممارسة السريرية من المؤسسة. وقد تصبح مجهولة المصدر هوية المشاركين طوال فترة الدراسة. تم تشخيص مرضى وشملت مع سرطان الأقنية الغازية ونسيجية الصف 2 والسريرية في المرحلة الثانية، مع لا علاج نيوادجوفانت السابقة....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تحليل BrC الخلايا في الثقافات 3D المورفولوجية:
تم دراسة مورفولوجية الابتدائي BrC خلايا تنمو في الثقافات 3D كثافات منخفضة وعالية على مدى 5 أيام. خلال 48 ساعة الأولى، التمسك أكمي الخلايا والحفاظ على كثافة منخفضة. في هذه النقطة الزمنية، يمكن وضوح تقدير أن الخلايا الحالية على شكل يشبه شوكي ممدود، بعضها مع إسقاطات طويلة هيولى اثنين أو أكثر، ودون أن تظهر جهات الاتصال الظاهر خلية خلية. بعد 5 أيام ثقافة، تكاثرت الخلايا .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تنمو الخلايا الظهارية في تكيف ثلاثية الأبعاد مكانية وتفاعلها مع بروتينات ECM المحوري للتوازن الأنسجة. دراسات السرطان كثيرة تستند إلى خلايا تزرع في مونولاييرس (2D) وعلى الرغم من أنها كانت حاسمة بالنسبة لفهم جوانب عديدة من تشكيل الورم والتقدم، مونولاييرس لا الخص الخصائص التي يفرض إدارة المحتوى في المؤسسة في الخلايا، مثيل: الحد من انتشار وبقاء الخلية تعتمد على الالتصاق، قطبية قمي باسولاتيرال، إعادة عرض المحتوى، وتمايز الخلية، إلخ الأهم من ذلك، ليس فقط بالتفاعل بين الخلايا السرطانية وإدارة المحتوى في المؤسسة ضرورية .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب يعلن أنه ليس لديهم أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من مبرزين فونسيك أفريقيا جنوبي الصحراء/الضمان الاجتماعي/عمال المشروع رقم 233061 إلى ازكويل م فوينتس-Pananá وفوندو دي الدعم على غرار الدراسات، مستشفى الأطفال في المكسيك فريدريكو غوميز (المشروع رقم HIM-2014-053). نا اسبينوزا-سانشيز طالب دكتوراه من Programa de دوكتورادو en Biomédicas العلوم، الجامعة الوطنية المستقلة بالمكسيك (يونام) وتلقت زمالة 231663 من المجلس الوطني. ه-ق "نا"، نعترف أيضا بالدعم المالي المقدم من المعهد المكسيكي "الضمان الاجتماعي" (الضمان الاجتماعي).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| U937 | مجموعة ثقافة النوع الأمريكي ATCC ؛ | CRL-1593.2 | خط الخلايا أحادية الخلية / سرطان الغدد الليمفاوية النسيجي ; |
| THP-1 | مجموعة ثقافة النوع الأمريكي ATCC ؛ | TIB-202 | خط الخلايا أحادي الخلية / ابيضاض الدم وحيد الخلية الحاد ؛ |
| MCF-10A | مجموعة الثقافة الأمريكية ATCC ؛ | CRL-10317 | خط خلايا الثدي غير المحول |
| MCF-7 | مجموعة ثقافة النوع الأمريكي ATCC ؛ | HTB-22 | خط خلايا سرطان الثدي |
| T47D | مجموعة ثقافة النوع الأمريكي ATCC & nbsp ؛ | HTB-133 | خط خلايا سرطان الثدي |
| HS578T | مجموعة الثقافة من النوع الأمريكي ATCC & nbsp ؛ | HTB-126 | خط خلايا سرطان الثدي |
| MDA-MB-231 | ثقافة النوع الأمريكي ATCC & nbsp ؛ | HTB-26 | خط خلايا سرطان الثدي |
| RPMI 1640 متوسط | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM High Glucose | جيبكو BRL Life Technologies | 11964-092 | 4.5 جم / لتر جلوكوز |
| DMEM / F12 | جيبكو BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| المضادات الحيوية / المضادة للفطريات | جيبكو BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U / mL البنسلين ، 100 وميكرو. جم / مل ستربتومايسين ، و 0.25 وميكرو ؛ جم / مل مصل الأبقار الجنيني Fungizone |
| GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | ||
| مصل الحصان | جيبكو BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05٪ Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL LIFE | TECHNOLOGIES 25300-062 | |
| PBS 1X (محلول ملحي مخزن بالفوسفات | جيبكو BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| عامل نمو البشرة (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00 مجم) الأنسولين | |
| SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | ||
| هيدروكورتيزون | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| توكسين الكوليرا الضمة الكوليرا | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | ساركوما الفأر Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) ، مستخلص المصفوفة خارج الخلية ، يخزن في -20 درجة ؛ C حتى الاستخدام عند 4 درجة ؛ سي |
| جي إم-سي إس إف | بيبرو تيك | 300-03 | |
| ام سي بي-1 | بيبروتك | 300-04 | |
| رانتس | بيبرو تيك | 300-06 | |
| IL-8 | بيبروتك | 200-08 | |
| IL-1 وبيتا؛ | PeproTech | 200-01B | |
| كريستال بنفسجي | Hycel M & eacute ؛ xico | 541 | |
| Paraformaldehyde | SIGMA-ALDRICH | P6148 | |
| دعامات نفاذية Transwell (إدراجات) | Corning Inc | 3422 | قطر 6.5 مم ، 8 وميكرو ؛ م حجم المسام / 24 بئر لوحات ; |
| دعامات نفاذية للعمود (إدراجات) | Thermofisher Scientific | 140620 | قطر 6.5 مم ، 0.4 وميكرو ؛ م حجم المسام / 24 بئر لوحات ; |
| طقم عزل الخلايا الأحادية II الإنسان ؛ | Miltenyi Biotec | 130-091-153 | |
| LS Columns | Miltenyi Biotec | 130-042-401 | |
| مجموعة لوحة الخرزة المغناطيسية للسيتوكين البشري / الكيموكين 96 اختبار لوحة البئر | EMD Millipore | HCYTOMAG-60K | |
| Magpix مع برنامج xPonent (أجهزة اختبار تحليلية فلورية قائمة على الليزر) شريحة | Luminex | Corporation 40-072 | |
| Lab-Tek مع غطاء (8 حسنا) | Nalge Nunc International | 177402 | |
| زجاج قاع ميكروويل 35 مم petri أطباق | MatTek Corp. | P35G-1.5-14-C |
المراجع
- Rich, J. N. Cancer stem cells: understanding tumor hierarchy and heterogeneity. Medicine (Baltimore). 95 (1), Suppl 1 2-7 (2016).
- Wang, M., et al. Role of tumor microenvironment in tumorigenesis. J Cancer. 8 (5), 761-773 (2017).
- Quail, D. F., Joy....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
