ويصف هذا البروتوكول طريقة جديدة للتحقيق في شكل من أشكال نيوروستيموليشن الكيميائية من ووليماونت الفئران شبكية العين في المختبر مع غلوتامات العصبي. نيوروستيموليشن الكيميائية يعتبر بديلاً واعداً نيوروستيموليشن الكهربائية التقليدية من الخلايا العصبية الشبكية لعلاج لا رجعة فيه العمى الناجم عن الأمراض التنكسية مستقبله.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
منهجية للمحاكاة البيولوجية الكيميائية نيورومودوليشن من الفئران شبكية العين مع العصبي الغلوتامات في المختبر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
علم الأمراض التنكسية يسبب العمى لا يمكن إصلاحه عن طريق الفقدان التدريجي لخلايا مستقبله في الشبكية. هي الأطراف الاصطناعية الشبكية معاملة ناشئة لعلم الأمراض التنكسية التي تسعى إلى استعادة الرؤية بشكل مصطنع تحفيز الخلايا العصبية الشبكية الباقين على قيد الحياة على أمل الحصول على الإدراك البصري مفهومة في المرضى الذين. الأطراف الاصطناعية الشبكية الحالية أثبتت النجاح في استعادة الرؤية المحدودة للمرضى باستخدام صفيف أقطاب كهربائياً تحفيز الشبكية ولكن تواجه حواجز مادية كبيرة في استعادة عالية الحدة، الرؤية الطبيعي للمرضى. نيوروستيموليشن الكيميائية باستخدام أجهزة الإرسال العصبية الأصلية هو حفز المحاكاة البيولوجية بديلة للكهرباء، ويمكن تجاوز القيود الأساسية المرتبطة بالأطراف الاصطناعية الشبكية باستخدام نيوروستيموليشن الكهربائية. على وجه التحديد، نيوروستيموليشن الكيميائية لديها القدرة على استعادة الرؤية أكثر طبيعية مع أكويتيس البصرية مماثلة أو أفضل للمرضى عن طريق حقن كميات ضئيلة جداً من أجهزة الإرسال العصبية، العوامل الطبيعية نفس الاتصال المستخدمة من قبل الشبكية سينابسيس الكيميائية، في قرار أكثر دقة بكثير من الأطراف الاصطناعية الكهربائية الحالية. ومع ذلك، هناك كنموذج تحفيز غير مستكشفة نسبيا، لا بروتوكول المنشأة لتحقيق التحفيز الكيميائي لشبكية العين في المختبر. والغرض من هذا العمل هو توفير إطار تفصيلي لتحقيق التحفيز الكيميائي الشبكية للمحققين الذين يرغبون في دراسة إمكانات neuromodulation الكيميائية الشبكية أو ما شابه الأنسجة العصبية في المختبر. في هذا العمل، نحن وصف الإعداد التجريبية ومنهجية لاستخلاص العقدة الشبكية الخلية (كمبوديا) سبايك ردود مماثلة للبصرية الخفيفة الردود في البرية من نوع ومستقبله-وتحولت ووليمونت الفئران شبكية العين عن طريق حقن تسيطر وحدات التخزين من غلوتامات العصبي في الفضاء سوبريتينال استخدام الزجاج ميكروبيبيتيس وجهاز مخصص موائع جزيئية متعددة المنافذ. هذه المنهجية والبروتوكول عامة كافية تكييفها ل neuromodulation باستخدام أجهزة الإرسال العصبية الأخرى أو حتى غيرها من الأنسجة العصبية.
المقدمة
علم الأمراض التنكسية، مثل التهاب الشبكية الصباغي، والمتعلقة بالعمر البقعي، هي أهم أسباب فقدان البصر القابلة للتوريث و غير قابل للشفاء حاليا1،2. على الرغم من أن هذه الأمراض تنشأ من مجموعة متنوعة من طفرات وراثية محددة، تتميز الأمراض التنكسية مستقبله كمجموعة بالفقدان التدريجي لخلايا مستقبله في الشبكية، مما يسبب العمى في نهاية المطاف. فقدان photoreceptors المشغلات على نطاق واسع يعيد البناء في جميع أنحاء الشبكية ولكن الباقين على قيد الحياة الخلايا العصبية الشبكية، بما في ذلك الخلايا ثنائية القطب ورجكس، تظل سليمة ووظيفية نسبيا حتى في مراحل متقدمة من مستقبله تنكس3 ،،من45،،من67.
الآليات والأسباب المرضية لهذه الأمراض قد اتسمت أيضا3،،من45،،من67 ولكن علاج فعال لا يزال بعيد المنال. على مدى العقود الثلاثة الماضية، والباحثين في جميع أنحاء العالم حققت مجموعة متنوعة من العلاجات العلاجية لاستعادة الرؤية لأولئك المصابين بالأمراض التنكسية مستقبله بما في ذلك الجينات العلاج8، الخلايا الجذعية العلاج9، زرع الشبكية10، و11،التحفيز الاصطناعي12 من الخلايا العصبية الشبكية الباقين على قيد الحياة. هذه هي آخر سريرياً المتاحة الاصطناعية الشبكية، وهي أجهزة نيوروستيموليشن الاصطناعية التي استخدمت تقليديا صفيف من الأقطاب الكهربائية لتحفيز خلايا ثنائية القطب أو رجكس كهربائياً في أنماط محددة بهدف إنشاء التصورات البصرية مصطنعة في11من المرضى. تركيبات كهربائية الجيل الحالي، مثل "ارجوس الثاني"13 وأجهزة14 ألفا--نظام الرصد الدولي، حققت موافقة السريرية والدراسات الأولية قد أشارت إلى أنها يمكن أن تحسين نوعية الحياة للمرضى باستعادة مقياس للرؤية باستخدام ابيريتينال (خدمة شبكية العين) وسوبريتينال (خلف الشبكية) مزروع الأجهزة15،16. المجموعات البحثية العالم تعمل على النهوض بالأطراف الاصطناعية الشبكية بعد النجاحات التي تحققت في هذه الأجهزة من الجيل الأول17،،من1819،20 ولكن واجهت صعوبات تصميم بدلة كهربائية قادرة على استعادة الرؤية عالية الذكاء أقل من مستوى العمى القانوني بالمرضى. وقد أظهرت الدراسات الأخيرة أن تحقيق القرار المكانية أعلى من التي يتيحها الجيل الحالي الكهربائية على الأطراف الاصطناعية يمثل تحديا بسبب تهمة حقن الحد الأقصى، الذي يتطلب استخدام أقطاب كبيرة لحفز بأمان الخلايا العصبية الشبكية على حساب القرار المكانية، أي البصر11،21. وعلاوة على ذلك، زيادة التحفيز الكهربائي محدود لأنه عادة ما يحفز جميع الخلايا المجاورة ويتسبب ذلك التصورات غير طبيعي ومربكة في المرضى، إلى حد كبير لأنها طبيعتها غير طبيعية من تحفيز نموذج21. ومع ذلك، أثبتت النجاحات المبكرة للتحفيز الكهربائي نيوروستيموليشن الاصطناعية التي يمكن أن يكون علاج فعال للأمراض التنكسية مستقبله. وهذا يقودني إلى افترض أن علاج فعال أكثر فقد تكون قابلة للتحقيق بتحفيز الشبكية مع ناقل عصبي المواد الكيميائية والعوامل الطبيعية للاتصالات في الاشتباكات العصبية الكيميائية. وغرض الطريقة المعروضة في هذه الورقة هو استكشاف جدوى التحفيز الكيميائي، الذي يسعى إلى تقليد نظام متشابك الاتصالات بين الخلايا العصبية الشبكية، كما حفز بديلة للكهرباء المحاكاة البيولوجية الطبيعية العلاجية لبدلة شبكية.
ترجمة لمفهوم التحفيز الكيميائي العلاجي لبدلة شبكية كيميائية تعتمد على تنشيط الخلايا العصبية الشبكية المستهدفة مع كميات صغيرة من العصبية الأصلية، مثل غلوتامات، صدر عن طريق موائع جزيئية كيميائيا جهاز يتألف من مجموعة كبيرة من ميكروبورتس في الاستجابة للتحفيز البصري. وبهذه الطريقة، سيكون بدلة شبكية كيميائية أساسا طبقة مستقبله اصطناعية المحاكاة البيولوجية الذي يترجم الفوتونات بطبيعة الحال الوصول إلى الشبكية لإشارات كيميائية. أن هذه الإشارات الكيميائية تستخدم نفس العصبية المستخدمة في الإشارات الشبكية العادي وتحفيز الخلايا العصبية الشبكية الباقين على قيد الحياة من الشبكية تحولت من خلال مسارات متشابك نفس المستخدمة من قبل مسارات الرؤية العادية، البصرية الناتجة يمكن أن يكون تصور تحقيقها من خلال بدلة شبكية كيميائية مقارنة بواحدة أثارت من خلال الجراحات الترقيعية كهربائية أكثر طبيعية ومفهومة. وعلاوة على ذلك، حيث يمكن إجراء ميكروبورتس من خلالها يتم إصدارها العصبية الصغيرة للغاية والمنتشرة بكثافة عالية، على عكس أقطاب كهربائية، قد يكون مادة كيميائية محتملة اصطناعية قادرة على تحقيق تنشيط التنسيق أكثر وأعلى المكانية القرار من بدلة كهربائية. هكذا، وبناء على هذه المزايا المحتملة، بدلة شبكية كيميائية يقدم بديلاً واعداً جداً للأطراف الاصطناعية الكهربائية.
التحفيز الكيميائي لشبكية العين، ولكن تم نسبيا قليلاً استكشاف حتى وقت قريب. وفي حين اتسمت التحفيز الكهربائي للشبكية جيدا على مدى عقود من العمل من خلال المختبر في22،23و في فيفو2423،، والدراسات السريرية13 ،14، دراسات في التحفيز الكيميائي قد يقتصر حصرا على عدد قليل في المختبر يعمل25،26،،من2728. Iezzi وفينلايسون26 وحلمي et al. 27 أثبتت تحفيز ابيريتينال الكيميائية للشبكية في المختبر باستخدام قطب واحد، ومجموعة مولتيليكترودي (MEA)، على التوالي، لتسجيل ردود غلوتامات أثارت الخلايا العصبية الشبكية. في الآونة الأخيرة، رونتري et al. 28 أثبتت تحفيز تفاضلية المسارات الشبكية وتشغيله باستخدام غلوتامات من الجانب سوبريتينال واتفاق بيئي متعدد الأطراف لتسجيل الاستجابات العصبية من مواقع متعددة على الشبكية.على الرغم من أن هذه الأعمال أنشأت مبدئياً إمكانية التحفيز الكيميائي، كذلك الدراسات ضرورية للتحقيق في العديد من جوانب هذا النهج تتجاوز تلك الموجهة حتى الآن25،،من2627 , 28، وضبط معايير التحفيز العلاجي في نماذج حيوانية في المختبر و في فيفو قبل ترجمة هذا المفهوم إلى بدلة شبكية كيميائية كما نوقش أعلاه. ومع ذلك، حاليا هناك لا المنهجية المتبعة لتحقيق التحفيز الكيميائي الشبكية في الأدب وقد لا وصف الطرق المستخدمة في الأعمال السابقة في مثل هذه التفاصيل كما سيكون أساسيا للدراسات ريبليكاتيفي. ولذلك، الأساس المنطقي لهذه الورقة أساليب لتوفير إطار محدد جيدا لتجري في المختبر الكيميائي التحفيز الشبكية لهؤلاء المحققين المهتمين في تكرار أما أعمالنا السابقة الدراسات27، 28 أو زيادة تعزيز هذا المفهوم الناشئ من نيوروستيموليشن الكيميائية.
هنا نظهر أسلوب إجراء في المختبر الكيميائي تحفيز الخلايا العصبية الشبكية في شبكية العين ووليمونت الجرذان البرية من نوع وطراز الفئران تحولت مستقبله الذي يحاكي عن كثب تطور علم الأمراض التنكسية الأمراض في البشر. الأساس المنطقي وراء تطوير هذا الأسلوب التحفيز في نماذج في المختبر هو تقييم النطاقات العلاجية المختلفة تحفيز المعلمات ودراسة خصائص الاستجابة العصبية التي سيكون من المستحيل أو من الصعب مراقبة في في فيفو النماذج، لا سيما من خلال الدراسات الأولية التي ركزت على تقييم جدوى هذا النهج. في هذا الإجراء، نعرض المتزامنة وموقع واحد موقع متعدد التحفيز الكيميائي لشبكية العين بتسليم كميات صغيرة من غلوتامات 1 ملم قرب الخلايا العصبية الشبكية المستهدفة عن طريق ميكروبيبيتيس زجاج أحادي المنفذ المتوفرة تجارياً ومخصص جهاز متعدد المنافذ موائع جزيئية ميكروماتشينيد، على التوالي. حين إنجاز التحفيز على حد سواء من موقع واحد ومواقع متعددة والهدف الأساسي من التحقيق في جدوى علاجية نيورومودوليشن الكيميائية، كل تخدم غرضاً متميزة مع ميزة فريدة من نوعها. تنشيط موقع واحد، الذي يمكن أن يتحقق مع ميكروبيبيتيس الزجاج سحبت مسبقاً المتوفرة تجارياً، يمكن استخدامها لحقن المواد الكيميائية مباشرة في الطبقة تحت السطحية لشبكية العين في موقع واحد ويقدم للتحقيق في حالة كمبوديا يمكن ملاحظتها ارتفاع معدل يمكن أثارت ردود مشابهة لردود الضوء بصريا مقولة فوكالي تحت موقع الحقن. من ناحية أخرى، يمكن استخدامها لحقن المواد الكيميائية مكانياً في مواقع متعددة على سطح الشبكية التحفيز متعددة المواقع، الأمر الذي يتطلب جهاز موائع جزيئية متعددة المنافذ خصيصا ملفقة، ويقدم للتحقيق في كيفية الغلوتامات أثارت RCG أنماط الاستجابة تتوافق مع أنماط حقن غلوتامات في نمط الدراسات التحفيز.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع التجارب الحيوانية وفقا للمبادئ التوجيهية الواردة بدليل "مجلس البحوث الوطني" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. بروتوكولات المناولة والقتل الرحيم الحيوان تم استعراضها والموافقة عليها "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة إلينوي في شيكاغو.
1. نماذج حيوانية
- الجرذان البرية من نوع طويلة-إيفانز
- شراء فأر يوم 24-32 قديمة "طويلة إيفانز مقنعين" البرية من نوع الجنس أما التي أثيرت مع إيقاع ليلة يوم/ح 12 قياسية.
- تكييف الظلام الفئران بوضعه في غرفة مظلمة تماما ح 1 قبل بداية التجربة.
- الفئران S334ter-3
- عبور ألبينو المعدلة وراثيا متماثل S334ter-3 الجرذ الخط (أي من الجنسين)، معربا عن وجود نسختين من الجين رودوبسين المسخ، مع الفئران منذ فترة طويلة-إيفانز البرية من نوع مصطبغة لإنتاج المصطبغة الفئران متخالف S334ter-3 أن المعرض تنكس مستقبله مماثلة في التقدم للبشرية التهاب الشبكية الصباغي29،30.
- رفع ذرية متخالف مع إيقاع ليلة يوم/ح 12 القياسية واستخدام الفئران من أي من الجنسين لإجراء تجارب عليها في العصور التالية المقابلة لمستقبله تنكس المراحل التالية: أوائل المرحلة الانحطاط: 14-20 يوما؛ الأوسط مرحلة الانحطاط: 21-27 يوما من العمر؛ أواخر مرحلة الانحطاط: 28-35 يوما القديمة؛ أعمى تماما: > 50 يوما من العمر.
- تكييف الظلام الفئران بوضعه في غرفة مظلمة تماما ح 1 قبل بداية التجربة.
2-إعداد نظام التروية والحل المتوسط أميس
رقم 1: التخطيطي للإعداد التجريبية. التخطيطي للإعداد التجريبية لتحفيز الكيميائية تستخدم زجاج ميكروبيبيتي (A) وجهاز موائع جزيئية متعددة المنافذ مخصصة (ب). وضعها على بميا الشبكية و perfused باستمرار مع اﻷوكسيجين، طازجة أميس الحل متوسطة من كل من أعلى وأسفل من خلال الثقوب بميا. الاستجابة العصبية إشارات التقطت بأقطاب كهربائية بما تغذي كمبيوتر اقتناء بيانات عبر مكبر للصوت اتفاق بيئي متعدد الأطراف. التحفيز البصرية والكيميائية يتم إنجازه باستخدام الصمام خضراء وحاقن 8 قنوات ضغط، على التوالي، وكلاهما المحفزات يتم تشغيلها بواسطة كمبيوتر مخصص حافز، الذي يستخدم أيضا لموقف الماصة عبر محور 3 الدقة ميكرومانيبولاتور. يتم استخدام مجهر مقلوب لمراقبة شبكية العين خلال تجربة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: الإعداد التجريبية. (أ) صورة فوتوغرافية لإكمال الإعداد التجريبية تبين المواضع النسبية لكافة المكونات. سيتم وضع نظام مكبر للصوت طيران الشرق الأوسط أعلى مجهر مقلوب، الذي يستخدم لفحص الشبكية بصريا والصورة رقمياً في واجهة الجهاز-الشبكية عن طريق كاميرا عالية السرعة المرفقة أثناء التجربة. يتم التحكم نضح أعلى وأسفل بشكل مستقل باستخدام نظام التروية تسيطر اللولبي. الحقن، ومراقبة الموقف، وقياسات مقاومة يتم إنجازه باستخدام ضغط حاقن، ميكرومانيبولاتور، وتصحيح المشبك مكبر للصوت (البرتقال مربع؛ هو مبين بمزيد من التفصيل في ب)، على التوالي. ميكروبيبيتي أو جهاز يتم إدراجها في هيدستاجي المشبك تصحيح لقياسات مقاومة والتي شنت على الهزال (أشارت إلى جانب المربع الأخضر؛ وهو مبين بمزيد من التفصيل في ج) تيسيرا لتحديد المواقع باستخدام ميكرومانيبولاتور. (ب) عن قرب للقياس والتحكم والأدوات المستخدمة في التجربة: حاقن 8 قنوات الضغط ونظام مراقبة ميكرومانيبولاتور والتصحيح المشبك مكبر للصوت لقياس مقاومة والسفينة شفط للقضاء التروية. (ج) عن قرب من الهزال نظام حقن عرض جهاز متعدد المنافذ موصول مع حامل ماصة والتصحيح المشبك هيدستاجي، وميكرومانيبولاتور. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: الإعداد التروية. (أ) صورة فوتوغرافية للجزء العلوي من شركة طيران الشرق الأوسط مكبر للصوت يظهر الموقع نضح أعلى والشفط، فضلا عن الصمام الخضراء المستخدمة لتحفيز الضوء المرئي. (ب) عن قرب الدائرة نضح بما توضح المواقع الدقيقة لنضح أعلى والشفط، وبما ومسرى المرجعية المستخدمة لقياس مقاومة. (ج) الصورة المجهرية من نضح أسفل لوحة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
ملاحظة: انظر الشكل 1و الشكل 2و الشكل 3
- قياس 900 مل الماء المتأين الرفع في درجة حرارة الغرفة (~ 21 درجة مئوية) ووضعه في حاوية 1 لتر.
- نتخلل الماء مع أول أكسيد الكربون 100%2 باستخدام إليه محتدما.
- إضافة ز 8.8 المتوسطة أميس المجفف والمياه في حاوية 1 لتر.
- شطف الحاويات أميس المتوسطة مع مل عدد قليل من الماء المتأين إزالة لإزالة جميع آثار مسحوق أميس المتوسطة وإضافتها إلى حاوية 1 لتر.
- إضافة 25.3 مل من محلول بيكربونات الصوديوم (7.5% w/v31) للحاوية 1 لتر.
- إضافة كميات إضافية من الماء لتحقيق الحل نهائي حجم 1 ل.
- مواصلة بيرفوسينج الماء مع CO2 لمدة 5 دقائق تقريبا.
- وقف CO2 نضح وتبدأ بيرفوسينج الحل مع خليط غاز الطبي-الصف من 95% O2 و 5% CO2 لمدة 30 دقيقة على الأقل، أو استقر في 7.4 درجة الحموضة.
ملاحظة: لأغراض هذا البروتوكول، يتم الاحتفاظ المتوسط أميس في درجة حرارة الغرفة (~ 21 درجة مئوية) في جميع أنحاء هذه التجربة للحيلولة دون حصول CO2 أو س2 الغازي، الذي يمكن أن أوككلودي خطوط التروية مع فقاعات الهواء. - تنظيف الأنابيب نضح السفلي والعلوي بملء مع الإيثانول 70% ويغسل كلا خطوط 3 مرات مع الماء المتأين الشطب. تعبئة الخط السفلي بالماء المتأين الشطب والسطر العلوي مع الهواء.
3. إعداد الشبكية ووليمونت
الشكل 4: إعداد الشبكية التشريح وووليماونت- (أ) صورة فنجان العين سليمة مأخوذة من حيوان تحولت مستقبله. (ب) الصورة المجهرية الشبكية مع التخفيضات طولية تتسطح. (ج) بعد تسطيح الشبكية، فإنه يوضع على شبكة مش مع الجانب مستقبله الاتصال بالشبكة وسويت بالأرض في الهواء (خارج المتوسطة نضح) لضمان وجود توجد طيات أو حواف الكروشيه. (د) شبكة والشبكية هي تنتقل بسرعة إلى بما مع الجانب خلية العقدة الاتصال الأقطاب وأن perfused فورا مع اﻷوكسيجين أميس المتوسطة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5: مثقب الصفيف مولتيليكترودي. (أ) صورة فوتوغرافية للمصفوفة مولتيليكترودي مثقبة المستخدمة في البروتوكول. يوضع الشبكية على الصفيف قطب كهربائي (المشار إليها بواسطة المستطيل الأحمر، الذي يظهر بمزيد من التفصيل في ب) داخل قاعة بميا السماح التروية المستمرة مع اﻷوكسيجين أميس المتوسطة. (ب) الصورة المجهرية الصفيف القطب نفسها التي توضح هذا ترتيب الثقوب بين الأقطاب. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
ملاحظة: انظر الشكل 4 و الشكل 5
- استخدام مصباح LED حمراء المحمولة لتوفير الإضاءة الخافتة الحمراء، euthanize الحيوان عن طريق الخنق ثاني أكسيد الكربون تليها التفكك عنق الرحم أو الأسلوب الذي تم اختياره آخر، وفقا لبروتوكولات إياكوك.
- انوكليتي كلتا العينين باستخدام الملقط #5 لصائغ والعيون انوكليتيد في طبق بتري قطرها 60 ملم مع حوالي 3-4 مل من اﻷوكسيجين، طازجة أميس الحل المتوسط.
- بينما مراقبة العين من خلال ستيريوميكروسكوبي تشريح مع إضاءة أعلى وأسفل مغطاة بتصفية الحمراء الشاشة، جعل شق صغير في الوجه القرنية باستخدام مشرط أو مقص حاد.
- قطع من هذا شق صغير على حافة القرنية ثم تمديد الخفض في مقطع كفافى حول حافة كاملة للقرنية. إزالة القرنية بعيدة الآن جنبا إلى جنب مع العدسة، المزاجات مائي وزجاجي شفاف.
- أثناء الضغط بلطف فنجان العين مع زوج واحد من الملقط، جعل بعناية اثنان شقوق صغيرة على طرفي نقيض من فنجان العين. بعد ذلك، استخدم اثنين من أزواج من الملقط بلطف سحب فنجان العين عن بعضها البعض في كل من الشقوق وفصل الشبكية من الصلبة العينية. ببطء رفع شبكية العين كاملة من الصلبة وفنجان العين. قطع العصب البصري، إذا كانت لا تزال متصلة.
- جعل التخفيضات طولية في الشبكية للحصول على نصف أو ربع مقاطع باستخدام مقص، وانتشرت بعد ذلك بلطف واحد قسم الشبكية على شبكة نايلون (100 ميكرومتر القلاووظ مع 350 ميكرون فتح) مع خلايا العقدة التي تواجه (الجانب المقعر من الشبكية) بعيداً عن عيون.
- وضع شبكة والشبكية إلى مجموعة مولتيليكترودي مثقبة (بما) مع خلايا العقدة على اتصال بسطح بما. ثم برفق وضع شبكة شريحة مرجح على رأس شبكة لعقد الشبكية في مكانها.
4-الاتفاقات البيئية المتعددة الأطراف والإعداد اقتناء البيانات
رقم 6: الضوضاء مستويات بما. (أ) تسجيل الممثل لمجموعة فرعية أقطاب بما العارضة عالية الضوضاء المستمرة. هذا الضجيج يحدث عادة بسبب الافتقار إلى الاتصال الصحيح بين منصات الاتصال بما والدبابيس من شركة طيران الشرق الأوسط مكبر للصوت نتيجة للبلى العادي طبقة رقيقة بوليميد مثقبة على بما، لا سيما على منصات الاتصال. مصدر محتمل آخر للضوضاء عادة حل سربت على منصات الاتصال بما مكبر للصوت. الضجيج المستمر بسبب سوء دبوس الاتصال و/أو تسربت الحل على جهة الاتصال منصات يمكن تصحيح عادة عن طريق تحويل موقف بما داخل مكبر للصوت للحصول على اتصال أفضل والتنظيف والتجفيف الوسادات، على التوالي. إذا كان لا يمكن القضاء على الضوضاء بالتنظيف أو تحول موقف بما، قد تحتاج بما لتحل محلها تماما. (ب) تسجيل الممثل لمستويات الضوضاء من مجموعة فرعية أقطاب بما من بما نظيفة مع اتصال جيدة بين بما ومكبر للصوت. نموذجياً، مستوى متوسط الضوضاء داخل ±16 µV. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
ملاحظة: انظر الشكل 6
- تحت إضاءة حمراء قاتمة، ضع بميا في شركة طيران الشرق الأوسط مكبر للصوت وإغلاق صمامات مكبر للصوت.
- إذا كانت العلامات المرجعية ليست موجودة في الحلبة الدائرة بميا الفعل، أحفر اثنين 'X'-علامات على شكل متباعدة حوالي 5 ملم بعيداً في منطقة مرئية بسهولة من أعلى مع المجهر المحملة بوم-حامل.
- ضع منفذ نضح أعلى داخل قاعة بميا وتشغيل صمام نضح أعلى تحقيق معدل التروية حوالي 3 مل في الدقيقة الواحدة. ضع مدخل الشفط العلوي على المستوى المطلوب بيرفوساتي (~ 5 مم العميق) والتأكد من أنه يعمل.
- فتح برنامج اقتناء البيانات على الكمبيوتر الحصول على البيانات وانقر فوق الزر 'تشغيل' لبدء تلقي البيانات. التأكد من وجود جميع القنوات بميا خالية من الضوضاء وتسجيل الإشارات العصبية.
- التي تبحث في صورة رقمية مباشرة من مجال الرؤية المجهر المقلوب على شاشة، مراقبة السطح السفلي بما لدليل على أن الحل هو تتدفق من خلال لوحة القاع نضح.
5. إعداد التحفيز غلوتامات
رقم 7: زجاج ميكروبيبيتي وجهاز متعدد المنافذ موائع جزيئية. (أ) حامل ماصة قبل إدراج ميكروبيبيتي أو الجهاز. كلوريد فضة/فضة مسرى (50 ميكرون القطر) كهربائياً يقترن بمحول في نهاية المطاف لواجهة هيادستاجي المشبك التصحيح. (ب) صورة من ميكروبيبيتي الزجاج موصول مع صاحب ماصة تبين موقع المنفذ الضغط المستخدم لبدء حقن هوائي. (ج) جهاز موائع جزيئية متعددة المنافذ مخصصة (1 سم 1 سم سم 0.134) يعلق على لاعبا طباعة 3D مخصص وربطه مع صاحب الماصة عن طريق أنبوب الفولاذ المقاوم للصدأ. الجهاز, والتي كانت مختلقة في طبقتين، وقد ميكروبورتس ثمانية (قطرها 14 ميكرومتر) في الطبقة السفلي (340 ميكرون سميكة) وثمانية في رقاقة الخزانات (قطرها 1.6 ملم) لتخزين غلوتامات في الطبقة العليا (1 مم). كل من ميكروبورتس الثمانية في الطبقة السفلي من الجهاز متصل بشكل مستقل خزان على شريحة في الطبقة العليا عن طريق microchannel في الطائرة، وكل خزان على شريحة متصل بدوره إلى ميناء حاقن 8 قنوات الضغط عن طريق ضغط أنبوب مرن للسماح ليشتغل مستقلة من ميكروبورتس لحقن تنشيط منقوشة. (د) صورة مقربة للجهاز متعدد المنافذ الذي عقد بملاقط قبل إرفاق المباراة واجهة أنابيب ترتيب ثمانية خزانات على شريحة سعته بشكل مستقل ومداخل أنابيب. (ه) الصورة المجهرية من السطح السفلي لجهاز عرض ميكروبورتس ثمانية 14 ميكرومتر قطرها مرتبة في تكوين 3 × 3 مع 200 ميكرومتر المسافات لمحاذاة مع أقطاب كهربائية بما. وتستخدم الثمانية خارج ميكروبورتس لحقن المواقع المتعددة، بينما استخدمت الميناء المركزي الصارم لمحاذاة أثناء تصنيع الجهاز. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
ملاحظة: انظر الشكل 7.
- إعداد غلوتامات الحل عن طريق خلط غلوتامات الأسهم سولوتيونويث اﻷوكسيجين أميس حل متوسطة للحصول على عينة 0.5 مل بتركيز عامل غلوتامات 1 مم.
- عناية إدراج ميكروبيبيتي سحبت قبل 10 ميكرون-قطر أو متصل بالجهاز متعدد المنافذ موائع جزيئية إلى حامل ماصة قياسية تحتوي على قطب سلك كلوريد فضة/فضة قطرها 50 ميكرون قضيب الفولاذ المقاوم للصدأ.
ملاحظة: إذا لم يتوفر الكشف عن مقاومة، قد أغفل كلوريد فضة/فضة السلك الكهربائي. - واجهة صاحب ماصة مع هيدستاجي التصحيح-المشبك والاتصال اتصال نظام منفذ الضغط حامل ماصة القناة 1 نظام الحقن بالضغط، إذا ميكروبيبيتي زجاج استخدام، أو الاتصال اتصالات اللوير المنفذ ضغط كل من حقن 8 المنافذ مع القنوات 1-8 نظام الحقن بالضغط، إذا كان استخدام الجهاز متعدد المنافذ.
- يدوياً بتشغيل نظام حقن الضغط وتشغيل القناة 1 (أو القنوات 1-8، حسبما ينطبق). التأكد من أن النظام هو تنفيس للغلاف الجوي وتعيين ضغط الحقن إلى 0.1 من هذه المبادرة.
- قم بتشغيل ميكرومانيبولاتور ومعايرته بالضغط على زر 'معايرة' على وحدة تحكم مناور. موقف ميكرومانيبولاتور حيث يكون تلميح ميكروبيبيتي (أو الجزء السفلي من الجهاز، حسبما ينطبق) حوالي 30 ملم أعلاه مكبر للصوت اتفاق بيئي متعدد الأطراف.
- ملء طبق بيتري صغيرة مع الحل غلوتامات (غلوتامات 1 مم في معيار أميس المتوسطة) ووضعه تحت ميكرومانيبولاتور. أدنى تلميح ميكروبيبيتي (أو الجهاز) في الحل والتعبئة بالضغط على زر 'التعبئة' في نظام حقن الضغط (ضغط الشفط-13 في ح2س) حتى يكون هناك حوالي 20 مم حل مرئية في ميكروبيبيتي الزجاج أو جهاز متعدد المنافذ الأنابيب.
- إذا كان استخدام الجهاز متعدد المنافذ، تشغيل القناة 1 من حاقن الضغط قبالة وكرر البروتوكول للقنوات 2-8. رفع نصيحة ميكروبيبيتي أو جهاز من الحل وإزالة طبق بيتري، والموقف ميكرومانيبولاتور أعلاه قاعة بما.
- استخدام ستيريوميكروسكوبي مثبتة على حامل بوم، محاذاة الحافة ميكروبيبيتي أو زوايا الجهاز مع علامات مرجعية محفوراً في الحلبة الدائرة بميا. تخزين مواقف مناور في البرنامج عنصر التحكم باستخدام أزرار '"مرجع المخزن"A' و 'تخزين مرجع ب' (أو ببساطة ملاحظة إحداثيات مناور يدوياً) لتعيين نظام الإحداثيات المناور مع أقطاب بميا.
- استخدام برمجيات التحكم مناور، حدد قطب بميا مستهدفة مع قوي النشاط العفوي وانقر فوق الزر 'نقل إلى قناة' لمحاذاة ميكروبيبيتيويث الزجاج الكهربائي الهدف.
6-التفاعل مع شبكية العين
- إذا كان قياس مقاومة متوفراً، قم بتشغيل التصحيح المشبك مكبر للصوت والشروع في البرمجيات التصور مقاومة بواسطة النقر فوق الزر 'ابدأ' لتصور مقاومة القطب كلوريد فضة/فضة داخل حامل ماصة. مع مراعاة الإشارات مقاومة في الوقت الحقيقي، ببطء أقل ميكروبيبيتي أو الجهاز حتى أنها تجري اتصالات على سطح الشبكية كما يتضح من زيادة سريعة في المقاومة إشارة (انظر الشكل 8). حفظ أو جعل علما بموقف على سطح الشبكية.
- إذا لم يتوفر قياس مقاومة، الكشف عن اتصال مع سطح الشبكية من خلال الملاحظة البصرية، على الرغم من أن هذا سوف يكون أقل دقة. أقل ماصة أو الجهاز حتى أنها تجري اتصالات واضح السطح العلوي للحل المتوسط أميس في دائرة الشرق الأوسط وأفريقيا.
- ثم، مع مراعاة أعلى الشبكية مع مجهر مقلوب، انخفاض ببطء ماصة أو الجهاز حتى السطح العلوي للشبكية هو واضح مشوهة، مما يشير إلى أنه قد تم إجراء اتصال مع سطح الشبكية. حفظ أو جعل علما بموقف على سطح الشبكية.
- للتحفيز، وتحت السطح السفلي ماصة أخرى 40 ميكرومتر (لشبكية العين S334ter-3) أو 70 ميكرومتر (للبرية من نوع شبكية العين).
- إجراء بضع حقن قصيرة المدة (10-30 مللي ثانية) باستخدام نظام حقن (0.1 psi) الضغط لتحديد إذا كانت الخلايا بالقرب من الحافة ميكروبيبيتي أو ميكروبورتس الجهاز يتقبلون غلوتامات التحفيز بمراقبة الإشارات العصبية بالحصول على البيانات البرمجيات.
ملاحظة: حقن ناجحة سوف تحظى بتثبيط انفجار أو ارتفاع معدل سبايك مرئية بوضوح (انظر الشكل 9). إذا كان يتم ملاحظة أي رد، تغيير موضع ميكروبيبيتي أو جهاز في قطب مختلفة.
الشكل 8: قياس مقاومة. (أ) تخطيطي لتقنية قياس مقاومة. باستخدام مكبر للصوت المشبك التصحيح، يرصد المقاومة ميكروبيبيتي بشكل مستمر كما أنه يخفض ببطء نحو سطح الشبكية. عندما يكون ميكروبيبيتي فوق الشبكية، نتائج الموصلية الأيونية مرتفعة نسبيا من المتوسطة أميس في قراءة معاوقة منخفضة. كما ميكروبيبيتي يجعل الاتصال مع سطح الشبكية، الموصلية الأيونية عبر الأسلاك كلوريد فضة/فضة ينخفض، مما تسبب في زيادة سريعة في مقاومة المقاسة. (ب) تسجيل قطعة عرض مقاومة التغيير قبل وبعد الاتصال من طرف الماصة مع سطح الشبكية. قياس مقاومة منخفضة نسبيا عند الحافة ميكروبيبيتي في الحل قبل الاتصال (يشار إليها بمنطقة أورانج على اليسار). وبمجرد إجراء الاتصال (المشار إليه بواسطة رأس السهم الأحمر والمنطقة الخضراء على اليمين)، يزيد المقاومة سريعاً بسبب انخفاض الموصلية الأيونية عند الاتصال مع نسيج الشبكية. في الممارسة العملية، مسجلة على سطح الشبكية كارتفاع المقابلة لبداية الارتفاع الحاد لمقاومة المقاسة (موقع رأس السهم الأحمر). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 9: تسجيلات قطب كهربائي للنشاط العصبي أثناء البصرية، عفوية، وتسجيلات حقن غلوتامات. تسجيلات الممثل (A) من تسعة أقطاب بما عرض العالية تمرير تصفية البيانات القطب خلال التحفيز الضوء المرئي مع الصمام خضراء حيث يظهر كل مستطيل البيانات العصبية من قطب فريدة من نوعها. ويوضح كل تسجيل القطب البيانات التي تم جمعها في الثانية الأولى بعد تشغيل الصمام الخضراء (توقيت سيظهر مع رؤوس الأسهم البرتقالية في كل الأرض) باستخدام مقياس جهد مشترك المبين في ياكسيس اليسرى. وحددت عتبة جهد من µV-18 (خط أحمر أفقي في كل الأرض القطب) باستخدام المسامير ويمثلها آثار سوداء على البيانات القطب الأخضر. التحفيز البصري تسبب انفجار من المسامير (الإثارة) في جميع أقطاب ما عدا مركز أعلى واحد، التي تمتلك استجابة مثبطة للضوء. (ب) مؤامرة مشابهة لأقطاب نفس عرض النشاط العصبي عفوية دون التحفيز البصرية أو الحقن. على الرغم من أن رشقات نارية صغيرة كانت موجودة، كانت أنماط طفرات مختلفة جداً عن تلك التي سجلت في الاستجابة للتحفيز البصري. (ج) تسجيل التسجيلات التمثيلية من نفس مجموعة فرعية من أقطاب فورا بعد حقنه غلوتامات في مسرى المركزية (التوقيت المبين برؤوس الأسهم البرتقالية في كل الأرض). غلوتامات حقن أثارت دفعة من طفرات في مسرى المركزية التي كانت مشابهة جداً لرشقات نارية سبايك أثارت بصريا. جميع أقطاب أخرى لم تتأثر بحقن غلوتامات، الذي يوضح القرار المكانية خير أسلوب التحفيز الكيميائي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
7-الشروع في تسجيل الشبكية وبرنامج حافز
- توجيه LED أخضر اتجاه السطح العلوي للشبكية. بدء التسجيل باستخدام برنامج اقتناء البيانات على الكمبيوتر تسجيل مخصص بكتابة اسم الملف والنقر فوق الزر "تسجيل".
- متى بدأ التسجيل، افتح البرنامج التحكم التحفيز وتحميل الملف التحفيز الافتراضي بواسطة النقر فوق الزر "قراءة ملف التحفيز". بعد ذلك، انقر فوق الزر "تشغيل ملف التحفيز" الشروع في الملف الافتراضي التحفيز يتألف من البروتوكول اقتناء المنبهات والبيانات المذكورة في الملاحظة أدناه.
ملاحظة: محاكمات (ط) 30 2 s على و 2 s قبالة حقل كامل فلاش (5 م/م2 كثافة) استخدام الصمام الخضراء. (ثانيا) 120 s بيانات دون استخدام الصمام الخضراء لتسجيل نشاط عفوية الشبكية على مدى زمني مماثل. (ثالثا) مجموعات 1 أو أكثر من الحقن غلوتامات تتألف من 30 محاكمات غلوتامات حقن 0.1 هذه المبادرة مع حقن ms 10-30 مرة (حوالي 100-300 رر كل الحقن) والمدد إينتيربولسي s 3. في حالة الحقن متعددة المواقع، حدد منفذ 2 أو أكثر لحقن في وقت واحد.
رقم 10: رسوم بيانية بيريستيمولوس البصرية، عفوية، واستجابات غلوتامات. (أ) بلغ بيريستيمولوس الممثل المدرج الإحصائي (30 مللي بينويدث) من البيانات سبايك من مجموعة فرعية أقطاب في الشكل 9 ألف، عبر محاكمات 20 من التحفيز الضوء المرئي. جدول معدل ارتفاع موحد تم تطبيقها على جميع الأقطاب ويظهر في ياكسيس اليسرى. ويمثل الخط الأسود في كل الأرض القطب معدل ارتفاع متوسط لجميع المسامير التي سجلت خلال الثانية الأولى بعد تشغيل الصمام الخضراء. كما يمكن أن يرى، التحفيز البصري بسبب استجابة معدل سبايك ضادات عابر في جميع أقطاب استثناء مسرى مركز أعلى، الذي كان استجابة مثبطة عابر للضوء. (ب) سبايك عفوية متوسط معدل الردود المسجلة في أقطاب نفسه دون أي التحفيز البصرية أو المواد الكيميائية. دون التحفيز، ارتفاع معدلات كل القطب ثابتة نسبيا. (ج) ارتفاع متوسط معدل الردود المسجلة في الأقطاب نفسها استجابة لحقنه غلوتامات في مكان فوق القطب المركزي. استجابة عابرة فقط واضح هو الرد عليه في مسرى مباشرة تحت موقع الحقن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يمكن استخدام هذا البروتوكول لحفز كيميائيا شبكية العين العادية، والبرية من نوع فضلا عن مستقبله شبكية العين، على الرغم من كبير الخلوية يعيد البناء الناجمة عن فقدان photoreceptors تدهورت. قبل أن تبدأ التجارب مع أما مستقبله تدهورت أو البرية من نوع شبكية العين، وضرورة تسجيل وتنشيط المعدات (الشكل 1 و الشكل 2) فتا وبما (الشكل 5) يجب تنظيف للتقليل إلى أدنى حد الضجيج في كل قناة قطب كهربائي (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الطريقة المعروضة هنا يوضح نموذج تحفيز العصبية فريدة من نوعها، حيث يتم تحفيز الخلايا العصبية الشبكية كيميائيا عن طريق حقن المواد الكيميائية العصبي الأصلية في الطبقة تحت السطحية لشبكية العين في المختبر. يوفر هذا الأسلوب التحفيز الكيميائي العديد من الفوائد عبر تقنية التحفيز الكهربائي التقليدية، بما في ذلك الانتقائية وخصوصية تركيز عالية من الخلايا العصبية المستهدفة. البروتوكول أعلاه تفاصيل صغيرة كيف حقن حجم هوائي من غلوتامات العصبي تسليمها القرب من الخلايا العصبية الشبكية المستهدفة باستخدام أما ميكروبيبيتي زجاج أحاد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
وأيده المعروضة في الورقة العمل "المؤسسة الوطنية للعلوم"، الحدود الناشئة في مجال البحوث والابتكار (NSF-أفري) برنامج منح رقم 0938072. محتويات هذه الورقة هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية لجبهة الخلاص الوطني. الكتاب أيضا نود أن نشكر الدكتور سامسون حلمي لعمله في تصميم واختبار الإعداد التجريبية الأولى للتحفيز الكيميائي والسيد اشوين راغوناثان لعمله تصميم واختلاق، وتقييم الجهاز موائع جزيئية متعددة المنافذ المستخدمة في هذه الدراسة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة ، أنظمة متعددة القنوات ذات التخطيط المثقب | ، GmbH | 60pMEA200 / 30iR-Ti-pr | http://www.multichannelsystems.com/products/microelectrode-arrays/60pmea20030ir-ti |
| MEA مضخم | للصوت أنظمة متعددة القنوات ، GmbH | MEA1060-Inv | http://www.multichannelsystems.com/products/mea1060-inv |
| التروية السفلية لأنظمة pMEA | متعددة القنوات ، GmbH | MEA1060-Inv- (BC) -PGP | http://www.multichannelsystems.com/products/mea1060-inv-bc-pgp |
| 3 محاور Micromanipulator Micromanipulator | Sutter Instruments ، Novاتو ، CA | MP-285 | https://www.sutter.com/MICROMANIPULATION/mp285.html |
| Micromanipulator System | Control Instruments ، Novاتو ، CA | MPC-200 | https://www.sutter.com/MICROMANIPULATION/mpc200.html |
| Gantry Style حامل مناور دقيق مع شريحة خطية | Sutter Instruments ، Novاتو ، CA | MT-75 / LS | https://www.sutter.com/STAGES/mt75.html |
| حاقن الضغط متعدد القنوات القابل للبرمجة ذو 8 قنوات | OEM: أداة MicroData ، S. Plainfield ، NJ البائع: Harvard Apparatus UK | PM-8000 أو PM-8 | OEM: http://www.microdatamdi.com/pm8000.htm البائع: https://www.harvardapparatus.co.uk/webapp/wcs/stores/servlet/product_11555_10001_39808_-1 _HAUK_ProductDetail |
| Axopatch 200A دمج الأجهزة الجزيئية لمضخم التصحيح المشبك | ، Sunnyvale ، CA | تم استبدال Axopatch 200A Axopatch 200A بطراز أحدث Axopatch 200B: https://www.moleculardevices.com/systems/axon-conventional-patch-clamp/axopatch-200b-amplifier | |
| مشبك التصحيح | الأجهزة الجزيئية headstage ، Sunnyvale ، CA | CV 201A | http://mdc.custhelp.com/app/answers/detail/a_id/16554/~/axopatch-200a%3A-selection-cv-headstage |
| مجموعة نفايات الفراغ | ALA Scientific Instruments ، Farmingdale ، NY | VMK | http://alascience.com/product/vacuum-waste-kit/ |
| حامل الماصة | Warner Instruments ، Hamden ، CT | QSW-A10P | https://www.warneronline.com/product_info.cfm?id=915 |
| مسحوب مسبقا 10 مو ؛ ماصات زجاجية دقيقة بقطر طرف | m أدوات الدقة العالمية ، ساراسوتا ، فلوريدا | TIP10TW1 | https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/make-selection-pre-pulled-glass-pipettes-plain/ |
| تكبير مجهر مجهر | نيكون ، طوكيو ، اليابان | SMZ-745T | https://www.nikoninstruments.com/Products/Stereomicroscopes-and-Macroscopes/Stereomicroscopes/SMZ745 |
| حامل ذراع المجهر مع كرة خطية مزدوجة ذراع تحمل | Old School Industries، Inc. ، Dacono ، CO | OS1010H-16BB | http://www.osi-incorp.com/productdisplay/dual-linear-ball-bearing-arm |
| Zoom Stereoscope مع C-LEDS Hybrid LED Stand | Nikon ، طوكيو ، اليابان | SMZ-445 | https://www.nikoninstruments.com/Products/Stereomicroscopes-and-Macroscopes/Stereomicroscopes/SMZ445 |
| نظام المجهر المقلوب | نيكون ، طوكيو ، اليابان | Eclipse Ti-E | https://www.nikoninstruments.com/Products/Inverted-Microscopes/Eclipse-Ti-E |
| أميس متوسط | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري | A1420 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a1420 |
| حمض L-Glutamic (غلوتامات) | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، MO | G5667 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/100291 |
| بيكربونات الصوديوم | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري | S8761 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8761 |
| طبق بتري 60 مم (طول 10 مم) | طبق بتري شفاف FB0875713A Fischer Scientific ، Waltham ، MA | ؛ https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875713a | |
| Jewelers # 5 Plumps | World Precision Instruments ، ساراسوتا ، فلوريدا | 555227F | https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/555227f-jewelers-5-forceps-11cm-straight-titanium/ |
| شفرة مشرط قياسية # 24 | World Precision Instruments ، ساراسوتا ، فلوريدا | 500247 | https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/500247-standard-scalpel-blade-24/ |
| مقبض مشرط # 4 | World Precision Instruments ، ساراسوتا ، فلوريدا | 500237 | https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/500237-scalpel-handle-4-14cm/ |
| Vannas Tubingen Dissection Scissors | World Precision Instruments ، ساراسوتا ، فلوريدا | 503378 https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/503378-vannas-tubingen-scissors-8cm-straight-german-steel/ | |
| مجموعة شبكة النايلون | Warner Instruments ، Hamden ، CT | NYL / MESH | https://www.warneronline.com/product_info.cfm?id=1173 |
| شبكة شرائح القيثارة | ALA Scientific Instruments ، Farmingdale ، NY | HSG-5AD | http://alascience.com/product/standard-harp-slice-grids/ |
| Ag / AgCl أنظمة بيليه القطب المرجعي | متعددة القنوات ، GmbH | P1060 | http://www.multichannelsystems.com/products/p1060 |
| 4 قنوات صمام يتم التحكم فيه نظام تروية الجاذبية | ALA الأدوات العلمية ، فارمينغديل ، نيويورك | VC3-4xG | http://alascience.com/product/4-channel-valve-controlled-gravity-perfusion-system/ |
| Zyla 5.5 sCMOS كاميرا مجهر | Andor Technology ، بلفاست ، المملكة المتحدة | Zyla 5.5 sCMOS | http://www.andor.com/scientific-cameras/neo-and-zyla-scmos-cameras/zyla-55-scmos |
| سلك فضي (50 & mu ؛ قطر م) | Fischer Scientific ، Waltham ، MA | AA44461G5 | https://www.fishersci.com/shop/products/silver-wire-0-05mm-0-002-in-dia-annealed-99-99-metals-basis-3/aa44461g5 |
| Tygon microbore tubing (قطر 1.6 مم) | Cole Parmer ، Vernon Hills ، IL | EW-06419-01 | https://www.coleparmer.com/i/tygon-microbore-tubing-0-020-x-0-060-od-100-ft-roll/0641901 |
| حامل أداة إمالة مع قنية | فولاذيةALA Scientific Instruments ، Farmingdale ، NY | TILTPORT | تم استخدام كل منها في التروية والشفط العلوي ؛ http://alascience.com/product/tilting-tool-holder-with-steel-cannula/ |
| Roscolux # 26 ورقة تصفية حمراء فاتحة | Rosco Laboratories Inc. ، 52 Harbour View ، Stamford ، CT | R2611 | الشركة المصنعة: http://us.rosco.com/en/products/catalog/roscolux البائع: https://www.bhphotovideo.com/c/product/43957-REG/Rosco_RS2611_26_Filter_Light.html |
| سميث & أمبير ويسون غالاكسي مصباح يدوي أحمر | سميث & ويسون ، 2100 شارع روزفلت ، سبرينغفيلد ، ماساتشوستس | 4588 | الشركة المصنعة: https://www.smith-wesson.com/ البائع: http://www.mypilotstore.com/mypilotstore/sep/4588 |
| MC_Rack Software | Multi Channel Systems ، GmbH | MC_Rack http://www.multichannelsystems.com/software/mc-rack | |
| Labview Software | National Instruments ، أوستن ، تكساس | Labview | http://www.ni.com/labview/ |
| NIS-Elements: Basic Research | Nikon ، طوكيو ، اليابان | NIS-Elements BR | https://www.nikoninstruments.com/Products/Software/NIS-Elements-Basic-Research |
المراجع
- Pascolini, D., Mariotti, S. P. Global estimates of visual impairment: 2010. Br J Ophthalmol. , (2011).
- Fritsche, L. G., Fariss, R. N., Stambolian, D., Abecasis, G. R., Curcio, C. A., Swaroop, A. Age-Related Macular Degeneration: Genetics and Biology Coming Together. Annu Rev Genomics Hum Genet. 15, 151-171 (2014).
- Marc, R. E., et al. Neural reprogramming in retinal degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 3364-3371 (2007).
- Jones, B. W., Kondo, M., Terasaki, H., Lin, Y., McCall, M., Marc, R. E. Retinal remodeling. Jpn J Ophthalmol. 56, 289-306 (2012).
- Soto, F., Kerschensteiner, D. Synaptic remodeling of neuronal circuits in early retinal degeneration. Front Cell Neurosci. 9, (2015).
- Trenholm, S., Awatramani, G. B. Origins of spontaneous activity in the degenerating retina. Front Cell Neurosci. 9, (2015).
- Euler, T., Schubert, T. Multiple Independent Oscillatory Networks in the Degenerating Retina. Front Cell Neurosci. 9, (2015).
- Boye, S. E., Boye, S. L., Lewin, A. S., Hauswirth, W. W. A Comprehensive Review of Retinal Gene Therapy. Mol Ther. 21, 509-519 (2013).
- Schwartz, S. D., et al. Human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium in patients with age-related macular degeneration and Stargardt's macular dystrophy: follow-up of two open-label phase 1/2 studies. The Lancet. 385, 509-516 (2015).
- Reh, T. A. Photoreceptor Transplantation in Late Stage Retinal Degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 57, (2016).
- Zrenner, E. Fighting blindness with microelectronics. Sci Transl Med. 5, (2013).
- Humayun, M. S., de Juan, E. Jr, Dagnelie, G. The Bionic Eye: A Quarter Century of Retinal Prosthesis Research and Development. Ophthalmol. 123, S89-S97 (2016).
- Cruz, L., et al. The Argus II epiretinal prosthesis system allows letter and word reading and long-term function in patients with profound vision loss. Br J Ophthalmol. 97, 632-636 (2013).
- Zrenner, E., et al. Subretinal electronic chips allow blind patients to read letters and combine them to words. P R Soc B. 278, 1489-1497 (2011).
- Stronks, H. C., Dagnelie, G. The functional performance of the Argus II retinal prosthesis. Expert Rev Med Devices. 11, 23-30 (2014).
- Stingl, K., et al. Artificial vision with wirelessly powered subretinal electronic implant alpha-IMS. P R Soc B. 280, (2013).
- Rizzo, J. F. Update on retinal prosthetic research: the Boston Retinal Implant Project. J Neuroophthalmol. 31, 160-168 (2011).
- Ayton, L. N., et al. First-in-Human Trial of a Novel Suprachoroidal Retinal Prosthesis. PLoS ONE. 9, e115239(2014).
- Chuang, A. T., Margo, C. E., Greenberg, P. B. Retinal implants: a systematic review. Br J Ophthalmol. 98, 852-856 (2014).
- Cai, C., Twyford, P., Fried, S. The response of retinal neurons to high-frequency stimulation. J Neural Eng. 10, 036009(2013).
- Eiber, C. D., Lovell, N. H., Suaning, G. J. Attaining higher resolution visual prosthetics: a review of the factors and limitations. J Neural Eng. 10, 011002(2013).
- Humayun, M., Propst, R., de Juan, E., McCormick, K., Hickingbotham, D. Bipolar surface electrical stimulation of the vertebrate retina. Arch Ophthalmol. 112, 110-116 (1994).
- Zrenner, E., et al. Can subretinal microphotodiodes successfully replace degenerated photoreceptors? Vision Res. 39, 2555-2567 (1999).
- Majji, A. B., Humayun, M. S., Weiland, J. D., Suzuki, S., D'Anna, S. A., de Juan, E. Long-Term Histological and Electrophysiological Results of an Inactive Epiretinal Electrode Array Implantation in Dogs. Invest Ophthalmol Vis Sci. 40, 2073-2081 (1999).
- Peterman, M. C., Noolandi, J., Blumenkranz, M. S., Fishman, H. A. Localized chemical release from an artificial synapse chip. PNAS. 101, 9951-9954 (2004).
- Finlayson, P. G., Iezzi, R. Glutamate stimulation of retinal ganglion cells in normal and s334ter-4 rat retinas: a candidate for a neurotransmitter-based retinal prosthesis. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 3619-3628 (2010).
- Inayat, S., Rountree, C. M., Troy, J. B., Saggere, L. Chemical stimulation of rat retinal neurons: feasibility of an epiretinal neurotransmitter-based prosthesis. J Neural Eng. 12, 016010(2015).
- Rountree, C. M., Inayat, S., Troy, J. B., Saggere, L. Differential stimulation of the retina with subretinally injected exogenous neurotransmitter: A biomimetic alternative to electrical stimulation. Sci Rep. 6, 38505(2016).
- Ray, A., Sun, G. J., Chan, L., Grzywacz, N. M., Weiland, J., Lee, E. -J. Morphological alterations in retinal neurons in the S334ter-line3 transgenic rat. Cell Tissue Res. 339, 481-491 (2010).
- Martinez-Navarrete, G., Seiler, M. J., Aramant, R. B., Fernandez-Sanchez, L., Pinilla, I., Cuenca, N. Retinal degeneration in two lines of transgenic S334ter rats. Exp Eye Res. 92, 227-237 (2011).
- Sigma Aldrich. Sigma Aldrich Ames Medium Product Information Sheet. , Available from: https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Product_Information_Sheet/1/a1420pis.pdf (2017).
- Reinhard, K., et al. Step-By-Step instructions for retina recordings with perforated multi electrode arrays. PLoS ONE. 9, e106148(2014).
- Izumi, Y., Kirby, C. O., Benz, A. M., Olney, J. W., Zorumski, C. F. Müller cell swelling, glutamate uptake, and excitotoxic neurodegeneration in the isolated rat retina. Glia. 25, 379-389 (1999).
- Tunnicliff, G. Glutamate uptake by chick retina. Biochem J. 150, 297-299 (1975).
- Schwartz, E. A., Tachibana, M. Electrophysiology of glutamate and sodium co-transport in a glial cell of the salamander retina. J Physiol (Lond). 426, 43-80 (1990).
- Muller, A., Maurin, L., Bonne, C. Free radicals and glutamate uptake in the retina. Gen Pharmacol- Vasc S. 30, 315-318 (1998).
- Dhingra, N. K., Kao, Y. -H., Sterling, P., Smith, R. G. Contrast threshold of a brisk-transient ganglion cell in vitro. J of Neurophysiol. 89, 2360-2369 (2003).
- Ahlers, M. T., Ammermüller, J. A system for precise temperature control of isolated nervous tissue under optical access: Application to multi-electrode recordings. J of Neurosci Methods. 219, 83-91 (2013).
- Feke, G. T., Tagawa, H., Deupree, D. M., Goger, D. G., Sebag, J., Weiter, J. J. Blood flow in the normal human retina. Invest Ophthalmol Vis Sci. 30, 58-65 (1989).
- The Retina. Neuroscience. Purves, D., et al. , 2nd edition, Sinauer Associates. (2001).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
