Method Article

قبل التكييف الهوائية للفئران مع بليوميسين يزيد من كفاءة Engraftment خلية سرطان الرئة أورثوتوبيك

DOI:

10.3791/56650

⸱

June 28th, 2018

 ,  , 
1Department of Pathology, Yale University School of Medicine, 2Department of Medical Oncology, Yale University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف لنا أسلوب يعزز انجرافتمينت أورثوتوبيك من خلايا سرطان الرئة في الرئتين مورين بتكييف قبل الخطوط الجوية مع الإصابة. وهذا النهج يمكن أيضا أن تطبق لدراسة التفاعلات اللحمية داخل الرئة المكروية، نشر المنتشر، وسرطان الرئة المراضات المشارك، وأكثر كفاءة توليد المريض المستمدة تكثيفها.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سرطان الرئة هو مرض صهر علاج القاتل بيولوجيا غير متجانسة. هناك حاجة لفهم وعلاج فعال الطيف الكامل السريرية للأورام الخبيثة والصدر، نماذج حيوانية الإضافية التي يمكن إيجاز الأنواع الفرعية سرطان الرئة البشرية المتنوعة والمراحل. نماذج allograft أو xenograft تنوعاً وتمكين التحديد الكمي للقدرات الورمية في فيفو، باستخدام الخلايا الخبيثة أما مورين أو بشرية المنشأ. ومع ذلك، تم إجراء الأساليب المذكورة سابقا من سرطان الرئة الخلية انجرافتمينت في مواقع غير الفسيولوجية، مثل الجناح الفئران، بسبب عدم كفاءة أورثوتوبيك زرع الخلايا إلى الرئتين. في هذه الدراسة، يصف لنا طريقة لتعزيز engraftment خلية سرطان الرئة أورثوتوبيك من قبل التكييف الهوائية للفئران مع بليوميسين عامل حمل التليف. كتجربة من بين مفهوم الإثبات، قمنا بتطبيق هذا النهج انجرافت الخلايا السرطانية للرئة غدية النوع الفرعي، التي تم الحصول عليها من مصادر بشرية، أو الماوس في سلالات مختلفة من الفئران. نظهر أن إصابة الخطوط الجوية مع بليوميسين قبل حقن الخلايا السرطانية يزيد engraftment الخلايا السرطانية من 0-17% إلى 71-100%. عزز هذا الأسلوب كثيرا، حدوث ورم الرئة وثمرة اللاحقة باستخدام نماذج مختلفة وسلالات الماوس. وباﻹضافة إلى ذلك، نشر خلايا سرطان الرئة انجرافتيد من الرئتين إلى الأجهزة البعيدة ذات الصلة. وهكذا، نحن نقدم بروتوكول التي يمكن استخدامها لإنشاء وصيانة نماذج أورثوتوبيك جديدة من سرطان الرئة مع الحد من كميات من الخلايا أو بيوسبيسيمين وتقييم كمي الورمية قدرة خلايا سرطان الرئة في الإعدادات ذات الصلة فسيولوجيا .

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سرطان الرئة هو أبرز سبب السرطان المتعلقة بالوفيات في جميع أنحاء العالم1. المرضى الذين يعانون من سرطان الرئة في نهاية المطاف الاستسلام من ورم خبيث على الأجهزة البعيدة، وخصوصا على الجهاز العصبي المركزي، والكبد، والغدد الكظرية، وعظام2،،من34. الأورام الخبيثة والصدر قد صنفت تقليديا كسرطان الرئة الخلية الصغيرة (مؤتمر القيادة المسيحية الجنوبية) أو (NSCLC) سرطان الرئة الخلية غير الصغيرة5. NSCLC هو الأكثر تواترا تشخيص الأورام الخبيثة ويمكن تقسيمها إلى أنواع فرعية نسيجية مختلفة، بما في ذلك الرئة غدية (لواد) والرئة الخلايا الحرشفية (لوس)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع التجارب التي أجريت وفقا للبروتوكولات المعتمدة "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) في جامعة ييل.

1-إعداد/إعداد المواد الكاشفة.

  1. بليوميسين
    تنبيه: بناء على عالمياً مواءمة النظام (GHS) لتصنيف ووسم المواد الكيميائية، بليوميسين تصنف خطرا على صحة GHS08.
    1. إعداد بليوميسين في غطاء كيميائية. ريسوسبيند 15 ش إلى 5 مل من الفوسفات العقيمة مخزنة المالحة (PBS).
    2. الكوة 100-200 ميليلتر من الحل في الزجاج زجاجة وتجميدها في-20 درجة مئوية لاستخدامها في المستقبل. تسمية الأنابيب مع تاريخ تعليق بشكل صحيح. استخدام في غضون 6 أشهر من هذا التاريخ.
      ملاحظة: كل سلالة الماوس لديه حساسية مختلفة إلى بليوميسي....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لزيادة كفاءة لواد سرطان الخلية انجرافتمينت إلى الرئتين من الفئران، قمنا بتطوير بروتوكول أولاً قبل الأحوال الجوية باستخدام بليوميسين متبوعاً بحقن خلية الورم أورثوتوبيك (الشكل 1). وأكد لنا أنه حتى عندما تدار في الفئران athymic المناعة، بليوميسين الناجمة عن التليف عابر يوم 14 كما يتضح من فقدان العمارة مجرى الهواء وترسب زيادة الكولاجين (الشكل 2). التليف الإجمالي في هذه الفئران حل 50 يوما بعد حقن بليوميسين (الشكل .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وثقت يوازي السريرية ملفتة للنظر بين سرطان الرئة وغيره من الأمراض المزمنة ل الرئة36. على وجه الخصوص، المرضى الذين يعانون من تليف رئوي مجهول السبب (الحكومي) زيادة ميل لتطوير سرطان الرئة، وهذه الرابطة مستقلة عن التدخين التاريخ37،38. مقترحات تتسم بالتدمير التدريجي للعمارة الرئة وتلف في وظيفة الجهاز التنفسي عن طريق ترسب ECM39. أيضا، قد مرضى NSCLC المرحلة المبكر مع مقترحات متزامنة عقب الاستئصال الجراحي، نتيجة سوء

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذه الدراسة من المنح المقدمة من المعهد الوطني للسرطان (R01CA166376 و R01CA191489 إلى نغوين مركزي) ووزارة الدفاع (W81XWH-16-1-0227 إلى نغوين مركزي).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
BleomycinSigmaB5507-15UNCAUTION المخاطر الصحية GHS08
قسطرة Exel 24Gفيشر1484121إزالة الإبرة. للحقن داخل القصبة الهوائية
الكيتامين (كيتاسيت inl 100 مجم / مل C3N 10 مل)بتلر شاين56344لتخدير الفئران
XylazineButler Schein33198لتخدير الفئران
كيتوبروفين ، 5,000 مجمكايمان كيميائي10006661مسكن
Puralube مرهم عيون بيطريBUTLER ANIMAL HEALTH COMPANY LLC8897لمنع جفاف العين أثناء التخدير
مسحوق D-LuciferinPerkin Elmer Health Sciences Inc122799للتصوير المضيء. أعد تكوين المسحوق مع PBS لتركيز عمل 15 مجم / مل. الحماية من
حامل التنبيب القوارضBraintree ScientificRIS-100حامل موصى به للحقن داخل القصبة الهوائية
MI-150 ILLUMINATOR 150W MI-150DOLAN-JENNER INDUSTRIESMI-150 / EEG2823Mلإضاءة وتصور ملقط Graefe القصبة الهوائية
، 2.75 (7 سم) سيلراتطويل RobozRS-5111لحقنة الحقن داخل القصبة الهوائية
Luer-Lok Sterile 5 ملBD / فيشر309646
Satiny Smooth من Conair رقائق معدنية مزدوجة قابلة للشحن قابلة للشحنConair-Toحلاقة
مقص بون ، 3.5 بوصة مستقيمة 15 مم شفرات قطع حادة / حادةRobozRS-5840SC
15 مل أنبوب مخروطيBD / Fisher352097
1.5 مل أنابيب الطرد المركزيUSA SCIENTIFIC INC1615-5500
قارورة تلألؤ 7 مل زجاج البورسليكات GPIFisher701350
أطراف ماصة مرشح (200 مو ؛ L)USA SCIENTIFIC INC1120-8710
تقنيات الحياة المالحة المخزنة بالفوسفات14190-144
0.25٪ Trypsin-EDTALife Technologies25200-056
DMEM High GlucoseLifeTechnologies 11965-092
RPMI Medium 1640Life Technologies11875-093
مصل الأبقار الجنيني USDALife Technologies10437-028
Penicillin-StreptomycinLife Technologies15140-122
Amphotericin BSigmaA2942-20ML
Trypan Blue Stain 0.4٪Life Technologies15250-061
Countess Automated Cell CounterLife TechnologiesAMQAX1000
قارورة T / C 75 سم مربع رقبة معلقة ، غطاء أزرقفيشر / كورنينج353135
IVIS Spectrum Xenogen BioluminiscencePerkin Elmer Health Sciences Inc124262ل in vivo < / em> تصوير التلألؤ
البيولوجي برنامج الصور الحيةPerkin Elmer Health Sciences Inc128113ل in vivo < / em> تحليل التلألؤ البيولوجي
XGI-8 نظام التخدير بالغازPerkin Elmer Health Sciences Inc118918لتخدير الأيزوفلوران
BD Ultra-Fine II حقنة الأنسولين ذات الإبرة القصيرة 1 سم مكعب 31 جم × 8 مم (5/16 بوصة)BD / FisherBD328418لحقن اللوسيفيرين المداري الرجعية
حقنة 1 ملBD / Fisher14-823-434للحقن داخل الصفاق
26 جم × 1/2 بوصة إبرةBD / فيشر305111للحقن داخل الصفاق
4٪ بارافورمالديهايدVWR43368-9Mتحذير المخاطر الصحية GHS07 ، GHS08. لتثبيت الأنسجة
Pipet-Lite Pipette ، Unv. SL-200XLS +METTLER-TOLEDO الدولية
ماير هيماتوكسيلينعلوم المجهر الإلكتروني517-28-2
صبغة Eosin Y 0.25٪ (وزن / حجم) في 57٪فيشر67-63-0
Masson Trichrome Stain KitIMEB IncK7228لصبغة ماسون ثلاثية الألوان لتصور الكولاجين
Superfrost plus الشرائح الزجاجيةفيشر1255015
6 ألواح آبارCorningC3516
طقم الكشف عن الميكوبلازما العالميATCC30-1012K
OCT تضمين مركبELECTRON MICROSCOPY SCIENCES62550-12لتضمين الأنسجة للأقسام المجمدة
Leica CM3050 S Research CryostatLeicaCM3050 Sلقسم الأنسجة لتحليل
التلوينKeyence الكل في واحد المجهر الفلوريKeyenceBZ-X700
ImageJالمعاهد الوطنية الأمريكية للصحةIJ1.46http://rsbweb.nih.gov/ij/ download.html
Prism 7.0 لنظام التشغيل Mac OS XGraphPad Software، Inc.-
الشعرية (Crl: NU (NCr) -Foxn1nu) الفئرانتشارلز ريفرNIH-553
NSG (إيماءة. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ) الفئرانمختبرات جاكسون5557
B6129SF1 / J الفئرانمختبرات جاكسون101043
خلايا NIH-H2030ATCCCRL-5914
368T1مقدمة بسخاء من قبل خلايا مونتي وينسلو (جامعة ستانفورد)-
PC9نجوين DX وآخرون خلية. 2009 ؛ 138:51 –
BrM3 cellsNguyen DX et al. Cell. 2009; 138:51 – 62-
، الخفيفة 17014411 62-H2030

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2015. CA-Cancer J Clin. 65, 5-29 (2015).
  2. Gaspar, L. E. Brain metastases in lung cancer. Expert Rev Anticanc. 4, 259-270 (2004).
  3. Hess, K. R., et al. Metastatic patterns in a....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Orthotopic Lung CancerBleomycin Pre ConditioningTumor Cell EngraftmentLung Adenocarcinoma ModelIntratracheal InjectionBioluminescence ImagingMouse Strain VariabilityMetastasis DetectionFibrosis InductionXenograft Tumor Models

Related Articles