يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إنشاء درجة الحموضة خارج الخلية الحمضية منظومة الثقافة

15.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/56660

⸱

نوفمبر 19, 2017

 , 
1Innovative Technology Laboratories, Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd, 2Laboratory for Systems Biology and Medicine, RCAST, The University of Tokyo

في هذه المقالة

ملخص

الحمضية وورم المكروية تلعب أدواراً حاسمة في تطور الورم. لتقييم آثار حمضية pH خارج الخلية في سرطان الخلايا في المختبر، قمنا بإنشاء نظم الثقافة حمضية بسيطة.

الملخص

شروط وورم المكروية، مثل نقص أو المجاعة المغذيات، تلعب أدواراً حاسمة في تطور السرطان والأورام الخبيثة. ومع ذلك، دور الأس الهيدروجيني خارج الخلية الحمضية في عدوانية الورم وآليتها الأساسية لا على نطاق واسع درست مقارنة بظروف المجاعة التاكسج أو المغذيات. وبالإضافة إلى ذلك، لم تبلغ تماما أسلوب ثقافة محددة تحديداً جيدا لتقليد خارج الخلية الحمضية وورم المكروية.

نقدم هنا طريقة بسيطة في المختبر ثقافة للحفاظ على درجة الحموضة خارج الخلية الحمضية باستخدام تخفيض بيكربونات وزيادة لاكتات أو تركيزات HCl على المديين المتوسط والثقافة. الهيدروجيني المتوسط تستمر لمدة 24 ساعة على الأقل وتدريجيا بنسبة 72 ح أثر الثقافة PANC-1 و AsPC-1 خلايا سرطان البنكرياس. ثلاثة شروط متميزة الوسائط الحمضية في هذه الدراسة العالية upregulated الجينات المراعية للحموضة مثل MSMO1، INSIG1، و IDI1 مقارنة بنقص أو المجاعة المغذيات. يمكن استخدام أوبريجوليشن لهذه الجينات كعلامة على درجة الحموضة الحمضية. هذه التقنيات البسيطة مفيدة توضيح الآليات الكامنة للورم الخبيث تحت الحمضية وورم المكروية. ولذلك، يمكن اكتشاف الاستجابات الخلوية الأس الهيدروجيني الحمضية ليس فقط في الخلايا السرطانية ولكن أيضا في الخلايا الأولية مثل الخلايا الأنبوبي الكلوي، بالنسبة حمضية الاضطرابات الأخرى بما في ذلك، ketoacidosis السكري، من نظامنا الثقافة الأس الهيدروجيني الحمضية خارج الخلية الحماض اللبن والحماض الأنبوبي الكلوي الحماض التنفسي.

المقدمة

وورم المكروية تلعب أدواراً حاسمة في تطور الورم وسرطان الخلية الأيض1،،من23. الخلايا السرطانية غالباً ما يتعرضون لظروف مثل نقص والحرمان المغذيات، ودرجة الحموضة خارج الخلية الحمضية (pHe). ومع ذلك، دور الفنيل ألانين في تطور الورم لم يتضح على نطاق واسع كما هو الحال في المجاعة نقص أو المغذيات. يمكن أن تصبح pHe في أنسجة الورم الحمضية، تصل إلى حوالي الأس الهيدروجيني 6.84،5. ينبع الهيدروجيني الحمضية من إفراز جليكوليتيك الهوائية واللاهوائية للبروتونات (H+) ولاكتات بالسرطان تكاثر الخلايا5،6.

وكشفت الدراسات التي أجريت مؤخرا أن هستون الحمضية الناجمة عن الفنيل ألانين ديسيتيليشن، وأكسدة الأحماض الدهنية، والرقابة من lysosomes الحمضية للتكيف للبيئة الحمضية الشديدة7،،من89،10. ومع ذلك، يؤثر الآليات عن طريق التي تحمض خارج الخلية سلوك السرطان وهوية مفتاح المنظمين في الأس الهيدروجيني الحمضية وورم المكروية لم تحدد تماما. وعلاوة على ذلك، وصفت عدة تقارير مختلف وسائل الإعلام الأس الهيدروجيني الحمضية باستخدام تركيزات غير واضحة بيكربونات والمخزن المؤقت تريس، والأنابيب، وحبيس أو لاكتات و HCl، ولكن هناك تقارير قليلة تثبت استقرار المعدل المتوسط ولا شاملة مقارنة بين عدة وسائط الثقافة الحمضية متميزة7،،8،9،10

لتوضيح أن المنظمين الرئيسيين والتغيرات الأيضية في الخلايا السرطانية في سياق تحمض خارج الخلية، إنشاء نموذج ثقافة بسيطة في المختبر للحفاظ على الفنيل ألانين حمضية، وبحث دور الفنيل ألانين في خلايا السرطان11. باستخدام هذا الأسلوب، حافظنا على وسيط الثقافة حمضية مع pHe 6.8 في 37 درجة مئوية تحت 5% CO2، استخدام بيكربونات خفض تركيزات في الأجلين المتوسط والثقافة. الأس الهيدروجيني 7.4 استخدمت كالمعتاد والتحكم في المتوسط. تستمر لمدة 24 ساعة على الأقل درجة الحموضة المتوسطة وانخفضت تدريجيا من ح 72 خلال ثقافة خلايا سرطان البنكرياس PANC-1 و AsPC-1. نظراً لتسارع تحلل تعزيز إفراز البروتونات ليس فقط ولكن أيضا لاكتات7،،من89، أنشأنا أيضا ثقافة أسلوب محاكاة الحماض لاكتات المستحثة بإضافة لاكتات بدلاً من خفض تركيز بيكربونات. بالإضافة إلى ذلك، pHe الحمضية الناجمة عن HCl على المديين المتوسط ويسمح لنا باستبعاد إمكانية أن الاستجابات الخلوية للأس الهيدروجيني الحمضية الثقافة المتوسطة ليست نتيجة لانخفاض تركيز بيكربونات. وعلاوة على ذلك، باستخدام وسائل الإعلام المختلفة مع الرقم الهيدروجيني من 6.4 إلى 7.4 مع تركيز بيكربونات مختلفة، يمكننا تقييم مدى الآثار الفنيل ألانين في الاستجابات الخلوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-إعداد الحمضية الثقافة المتوسطة

  1. إعداد التحكم (درجة الحموضة 7.4) والمتوسطة الثقافة المنخفضة-الرقم الهيدروجيني (pH 6.8)
    1. حل ز 4.75 مسحوق دميم دون لام الجلوتامين في 500 مل الماء.
    2. إعداد الحل3 ناكو م 0.33 في زجاجة ضغط ضيق.
      تنبيه: من المهم استخدام زجاجة ضيق ضغط منذ ناكو3 تنبعث CO2 الغاز عند تسخينها وتتحلل حرارياً.
    3. اﻷوتوكﻻف المتوسطة والحل. تسمح هذه المخازن المؤقتة لتبريد إلى 25 درجة مئوية.
    4. إضافة 5 مل من 200 ملم ل الجلوتامين، 5 مل من البنسلين-ستربتوميسين، و 50 مل مصل البقري الجنين إلى 500 مل دميم دون بيكربونات.
    5. للتحكم (درجة الحموضة 7.4) المتوسطة، إضافة 2.4 مل م 0.33 ناكو3 حل كل 100 مل دميم دون بيكربونات. للمتوسطة والمنخفضة-الرقم الهيدروجيني (pH 6.8)، إضافة 0.6 مل م 0.33 NaHCO3 حل كل 100 مل دميم دون بيكربونات.
    6. فحص درجة الحموضة المتوسطة بعد 24 ساعة حضانة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2.
      ملاحظة: مقدار NaHCO3 الحل يحتاج إلى تعديلها اعتماداً على درجة الحموضة متوسطة الحجم، التي يمكن أن تختلف تبعاً لمحتوى2 CO حاضنة والضغط الجوي. ومن الناحية المثالية، للمرة الأولى، فمن الأفضل لقياس درجة الحموضة متوسطة مع تركيزات بيكربونات المختلفة لتحديد المبلغ المناسب لحل3 ناكو إضافة إلى دميم.
      1. جمع الثقافة المتوسطة فورا بعد إزالة الطبق الثقافة من حاضنة2 CO وقياس درجة الحموضة باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني. الحفاظ على درجة حرارة متوسطة في 37 درجة مئوية باستخدام حمام مائي إذا لزم الأمر. قياس درجة الحموضة متوسطة ثلاث مرات بشكل مستقل.
        ملاحظة: يجب أن يتم تخزين ناكو3 الحل عند 4 درجة مئوية وكل وسائل الإعلام ينبغي أن يكون طازج. يتم سرد المنتجات المتاحة تجارياً التي يمكن استخدامها في هذه الدراسة في الجدول للمواد.
  2. إعداد متوسطة الثقافة الحمضية الناجمة عن لاكتات أو بفعل HCl
    1. إضافة ميليلتر 74 من حل لاكتات أو 125 ميليلتر من 1 M HCl إلى 100 مل من التحكم المتوسطة (أعد الخطوة 1.1.5).
    2. فحص درجة الحموضة المتوسطة بعد 24 ساعة حضانة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2.
      ملاحظة: مقدار لاكتات أو حل HCl يحتاج أيضا إلى تعديلها وفقا لدرجة الحموضة متوسطة الحجم، التي يمكن أن تختلف تبعاً لمحتوى2 CO في حاضنة والضغط الجوي. ومن الناحية المثالية، فمن الأفضل لقياس pH متوسطة مع لاكتات المسلسل أو تركيزات HCl لتحديد المبلغ المناسب للتكيف مع درجة الحموضة المطلوبة من المتوسط.

2-حصاد وعلاج الخلايا

  1. البدء في زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2 1 أسبوع على الأقل قبل إجراء التجارب.
    ملاحظة: يتم سرد خطوط الخلايا المستخدمة في هذه الدراسة في الجدول للمواد.
  2. مرور الخلايا عندما تصل إلى كونفلوينسي 70-90%. لا تسمح للخلايا لتصبح متكدسة. تغيير في المتوسط كل 2-3 أيام أثناء زراعة اليومية.
  3. غسل الخلايا بإضافة 5 مل برنامج تلفزيوني. نضح في برنامج تلفزيوني، وإضافة فصل الإنزيم مثل 1 مل التربسين.
  4. احتضان عند 37 درجة مئوية حتى يتم تقريب الخلايا وبدء فصل.
  5. إضافة 5 مل من الثقافة المتوسطة إلى خلايا منفصلة وإلغاء تنشيط الإنزيم. نقل تعليق خلية الأنبوبة 15 مل والطرد المركزي لمدة 3 دقيقة في 300 x زاي Aspirate المادة طافية وتعليق إعادة الخلايا مع الثقافة المتوسطة.
  6. عد الخلايا قابلة للتطبيق باستخدام هيموسيتوميتير وتريبان الأزرق.
  7. بذور 5.0 × 105 خلايا/بئر طبق 10 سم في 10 مل متوسطة. احتضان الخلايا عن 24 ساعة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2.
  8. نضح المتوسطة الثقافة وغسل الخلايا مع 5 مل برنامج تلفزيوني، وإضافة 10 مل المتوسطة الثقافة الحمضية أعدت في الباب 1. احتضان الخلايا عن 24 ساعة عند 37 درجة مئوية تحت 5% CO2.

3. عزل الحمض النووي الريبي

  1. نضح المتوسطة الثقافة وغسل الخلايا مع 5 مل برنامج تلفزيوني. تعطيل الخلايا بإضافة كاشف استخراج الحمض النووي الريبي (انظر الجداول من المواد).
  2. كشط الطبق بإيجاز، ثم إزالة الكاشف استخراج الحمض النووي الريبي مع ماصة وإيداع رنا الاستخراج الكاشف/الخلية في أنبوب 1.5 مل. تترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
  3. إضافة 250 ميليلتر كلوروفورم ويهز الأنبوب بقوة لترك حوالي 15 س. في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق وأجهزة الطرد المركزي في إيه إيت، 000 x ز لمدة 5 دقائق.
  4. بعناية إزالة المرحلة المائية باستخدام ماصة. تترك وراءها بعض المرحلة مائي. ضع في أنبوب 1.5 مل آخر.
  5. إضافة 550 ميليلتر الايزوبروبانول إلى مرحلة مائي وتخلط برفق. تترك في درجة حرارة الغرفة للحد الأدنى 5 أجهزة الطرد المركزي بالسرعة القصوى (إيه تو زيرو، 000 x ز) لمدة 20 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  6. صب قبالة الكحول وإضافة 1 مل 75 ٪ إيثانول في ديبك المياه المعالجة. المزيج بلطف. الطرد المركزي في 8,000 س ز لمدة 5 دقائق.
  7. "الماصة؛" قبالة الإيثانول واسمحوا أيردري الكريات.
  8. إضافة حوالي 15-25 ميليلتر (اعتماداً على حصيلة) من ديبك المياه المعالجة لبيليه الجيش الملكي النيبالي. مزيج دقيق.
  9. قياس تركيز الحمض النووي الريبي معزولة عن طريق قياس التوجيه التشغيلي في 260 نيوتن متر باستخدام جهاز المطياف الضوئي.

4-كدنا التوليف

  1. الجمع بين المكونات التالية في أنبوب تفاعل PCR: يصل إلى 5 ميكروغرام مجموع الجيش الملكي النيبالي، 1 ميليلتر اليغو ديناراً (50 ميكرومتر) أو "عشوائي التمهيدي مزيج" (60 ميكرومتر)، 1 دنتب ملم 10 ميليلتر، والمياه خالية من نوكلاس إلى إجمالي حجم 14 ميليلتر.
  2. خلط وإيجاز الطرد المركزي المكونات باستخدام الطرد مركزي benchtop صغيرة (~ 5 s). تؤذي العينة من الحمض النووي الريبي/التمهيدي لمدة 5 دقائق عند 65 درجة مئوية. تدور بإيجاز (~ 5 s) من benchtop صغيرة باستخدام الطرد المركزي ووضع العينة على الفور على الجليد لمدة 1 دقيقة على الأقل.
  3. أضف المكونات التالية: ميليلتر 4 5 x "عكس النسخ" الاحتياطي، 1 ميليلتر المنتسخة العكسية (200 يو/ميليلتر)، 1 ميليلتر "رناسي المانع" (40 ش/ميليلتر).
    ملاحظة: يتم عرض أمثلة لمجموعات المتاحة تجارياً في الجدول للمواد
  4. كاب الأنبوب، مزيج، وثم الطرد المركزي بإيجاز محتويات الطرد مركزي benchtop صغيرة استخدام (~ 5 s). احتضان الخليط رد فعل مجتمعة في 50-55 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
  5. إلغاء تنشيط رد الفعل التي تفرخ في 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.

5-قياس التعبير الجيني المراعية لحمض باستخدام PCR الوقت الحقيقي

  1. الجمع بين المكونات التالية في لوحة رد فعل جيدا 384: 1 ميليلتر قالب كدنا، 0.75 ميليلتر 10 X N',N'-dimethyl-N-[4-[(E)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)methyl]-1-phenylquinolin-1-ium-2-yl]-N-propylpropane-1,3-diamine، 0.3 ميليلتر 50 ميكرون إلى الأمام التمهيدي، عكس ميليلتر 0.3 50 ميكرومتر التمهيدي، 1 ميليلتر [تق] [بولمرس]، 2.5 ميليلتر 10 x [تق] [بولمرس] المخزن المؤقت، 2.5 دنتب مم 20 ميليلتر، المياه 16.65 ميليلتر.
    ملاحظة: يبين الجدول للموادمثال لمجموعات المتاحة تجارياً. ويرد في الجدول 1قائمة بأجهزة الإشعال. يمكن استخدام لوحة رد 96-جيدا أيضا في هذه الخطوة. يمكن أيضا استخدام المجسات الأخرى (مثلاً، مسبار Taqman).
  2. قم بإعداد التجربة والبرنامج بكر التالية على "نظام PCR الوقت الحقيقي": 50 درجة مئوية لمدة 2 دقيقة، دورة 1؛ 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، دورة 1؛ 95 درجة مئوية عن 15 ثانية و 60 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة، دورات 40؛ 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، دورة 1؛ 60 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، دورة 1؛ 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، 1 دورة.
  3. ضع اللوحة في الصك qPCR. بدء تشغيل البرنامج.
    ملاحظة: أن Upregulation الجينات استجابة الأس الهيدروجيني MSMO1و INSIG1و IDI1 يمكن أن يقاس بمستويات البروتين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لتحديد تركيز بيكربونات المناسبة، أعد دميم في النطاق من 0-8 مم NaHCO3 (تركيز النهائي في الأجلين المتوسط والثقافة)، ونجح في إعداد وسائط الثقافة مع الأس الهيدروجيني يتراوح من 6.4-7.4 (الشكل 1). ونحن على استعداد دميم مع 8 مم ناكو3 (الرقم الهيدروجيني 7.4) كعنصر التحكم المتوسطة، ومم 2 ناكو3 (الرقم الهيدروجيني 6.8) كوسيط مع الأس الهيدروجيني الحمضية ووفقا لتقرير سابق تفيد بأن درجة الحموضة خارج الخلية يصل الرقم الهيدروجيني 6.8 للأورام ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هنا، يمكننا وصف نظام ثقافة الأس الهيدروجيني حمضية بسيطة وعملية التقييم. أن الجمع بين الطرق الثلاث تحمض المتوسط، أي، بيكربونات انخفاض التركيز وإضافة لاكتات، وإضافة HCl، أتاح لنا للتحقيق الدقيق في إليه الاستجابة للأس الهيدروجيني ومقارنة الاستجابة الخلوية للورم الأخرى ميكرونفيرونمينتال شروط مثل المجاعة نقص أو المغذيات.

مفتاح لهذا الأسلوب لتحديد التركيزات المناسبة بيكربونات ولاكتات HCl على المديين المتوسط والثقافة. قياس درجة الحموضة متوسطة مع مختلف بيكربونات تركيزات عند تنفيذ هذا الأسلوب ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

صاحب البلاغ Ayano كوندو موظف كيووا هاكو كيرين المحدودة

شكر وتقدير

ونشكر أعضاء شعبة العلوم الجينوم ومختبر لنظم علم الأحياء والطب، ركاست، جامعة طوكيو. لا سيما ونحن نشكر الدكتور H. أبوراتاني، كوداما ت. د.، (لسبم، ركاست، وجامعة طوكيو)، الدكتور ك. توميزوكا ويوشيدا ت. د. د. أ
كونيساتو (هاكو كيووا كيرين Co., Ltd.) لإجراء مناقشات مفيدة والدعم. هذا العمل جزئيا وأيده معونات للشباب عالم (A) (26710005، ل)، معونات "البحث العلمي" في "مجالات مبتكرة" (ح 01567، ل 26116711 و 16)، ومعونات للتحدي
البحوث الاستكشافية (16 14605 ك، ل) من وزارة التربية والتعليم، والثقافة والرياضة، والعلوم والتكنولوجيا من اليابان ومؤسسة العلوم وتاكيدا (ل)، ومؤسسة كوباياشي لأبحاث السرطان (ل) والمشروع لبحوث السرطان و تطور العلاجية (ف--إنشاء) والبحث العملي لمكافحة السرطان مبتكرة من وكالة اليابان للبحوث الطبية والتنمية، AMED (ل).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي > كواشف < / قوي >
النسر المعدل من دولبيكو" نيسوي" 2Nissui05919
مصل الأبقار الجنينيثيرمو فيشر10438
NaHCO3واكو191-01305
محلول L-glutamineThermo Fisher25030-081
محلول مختلط بنسلين - ستربتومايسين (مستقر)Nacalai09367-34
0.5 جم / لتر Tripsin / 0.53 مليمول / لتر محلول EDTA ، مع الفينول الأحمرNacalai32778-05
0.5٪ - Trypan Blue Stain SolutionNacalai29853-34
محلول حمض اللاكتيكSigma-Aldrich252476
حمض الهيدروكلوريكSigma-AldrichH9892
RNeasy Plus Mini KitQIAGEN74134
SuperScript IV نظام توليف الخيطالأول Thermo Fisher18091
باور SYBR جرين PCR ماستر ميكس الأنظمة الحيوية التطبيقية4368702 
<قوي>الاسم<قوي>الشركة رقم الكتالوجتعليقات
Cell lines
PANC-1ATCCCRL-1469
AsPC-1ATCCCRL-1682
KMS-6JCRB بنك الخليةJCRB0432
TIGJCRB Cell Bank
MRC9ATCCCCL-212
HUVECATCCCRL-1730
NameCompanyCatalog NumberComments
Equipment
NanoDrop One Microvolume UV-Vis مع Wi-FiThermo FisherND-ONE-W
QuantStudio 5 نظام PCR في الوقتالحقيقي Thermo FisherCRL-1682
وسط محلول

المراجع

  1. Cairns, R. A., Harris, I. S., Mak, T. W. Regulation of cancer cell metabolism. Nature reviews. Cancer. 11 (2), 85-95 (2011).
  2. Chang, C. H., et al. Metabolic Competition in the Tumor Microenvironment Is a Driver of Cancer Progression. Cell. 162 (6), 1229-1241 (2015).
  3. Hsu, P. P., Sabatini, D. M. Cancer cell metabolism: Warburg and beyond. Cell. 134 (5), 703-707 (2008).
  4. Gerweck, L. E., Seetharaman, K. Cellular pH gradient in tumor versus normal tissue: potential exploitation for the treatment of cancer. Cancer research. 56 (6), 1194-1198 (1996).
  5. Webb, B. A., Chimenti, M., Jacobson, M. P., Barber, D. L. Dysregulated pH: a perfect storm for cancer progression. Nature Rev. Cancer. 11 (9), 671-677 (2011).
  6. Gatenby, R. A., Gillies, R. J. Why do cancers have high aerobic glycolysis? Nature reviews. Cancer. 4 (11), 891-899 (2004).
  7. McBrian, M. A., et al. Histone acetylation regulates intracellular pH. Mol Cell. 49 (2), 310-321 (2013).
  8. Damaghi, M., et al. Chronic acidosis in the tumour microenvironment selects for overexpression of LAMP2 in the plasma membrane. Nat Commun. 6, 8752(2015).
  9. Corbet, C., et al. Acidosis Drives the Reprogramming of Fatty Acid Metabolism in Cancer Cells through Changes in Mitochondrial and Histone Acetylation. Cell Metab. 24 (2), 311-323 (2016).
  10. Chen, J. L., et al. The genomic analysis of lactic acidosis and acidosis response in human cancers. PLoS genetics. 4 (12), e1000293(2008).
  11. Kondo, A., et al. Extracellular Acidic pH Activates the Sterol Regulatory Element-Binding Protein 2 to Promote Tumor Progression. Cell Rep. 18 (9), 2228-2242 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الحفاظ على الأس الهيدروجيني خارج الخلويحموضة البيئة الدقيقة للأورامالتعبير الجيني المستجيب للأس الهيدروجينيالحموضة الناجمة عن اللاكتاتالحموضة بوساطة حمض الهيدروكلوريكطريقة خفض البيكربوناتزراعة خلايا سرطان البنكرياسبروتوكول استخلاص الحمض النووي الريبوزيتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي
إنشاء درجة الحموضة خارج الخلية الحمضية منظومة الثقافة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.