مقالة منهجية

سوبريتينال زرع الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية المستمدة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية إلى نموذج كبير العينين من ضمور الجغرافية

DOI:

10.3791/56702

⸱

يناير 22, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Clinical Neuroscience, Section for Ophtalmology and Vision, Karolinska Institutet, 2Clinical Sciences, Intervention and Technology, Division of Obstetrics and Gynecology, Karolinska Institutet

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن أن تكون الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية كعلاج استبدال خلية لشكل متقدمة من الجفاف المرتبطة بالسن البقعي. ويصف هذا البروتوكول توليد نموذج كبير العينين من ضمور الجغرافية وزرع الخلايا الظهارية الإنسان صبغة الشبكية المستمدة من الخلايا الجذعية الجنينية سوبريتينال إلى هذا النموذج من المرض.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ضمور الجغرافية (GA)، مرحلة متأخرة من الجافة المرتبطة بالسن البقعي تتسم بفقدان طبقة (RPE) الظهارية الصبغية الشبكية، الأمر الذي يؤدي إلى انحطاط اللاحقة للهياكل الشبكية الحيوية (مثلاً، فوتوريسيبتورس) مما تسبب في ضعف الرؤية حادة. وبالمثل، RPE-الخسارة وانخفاض في حدة البصر هو ينظر في المتابعة طويلة الأجل عن مرضى المتقدمة الرطب المرتبطة بالسن البقعي (AMD) يتلقون العلاج حقن الأوعية الدموية المضادة عامل نمو غشائي (VEGF). ولذلك، من ناحية، أنه أمر أساسي لكفاءة استخلاص الخلايا RPE من مصدر غير محدود يمكن أن تستخدم كعلاج بديل. من ناحية أخرى، من المهم تقييم السلوك ودمج الخلايا المشتقة في نموذج تستتبع الأمراض الجراحية وأساليب التصوير كقريبة قدر الإمكان من تلك المطبقة في البشر. هنا، نحن نقدم بروتوكول مفصل استناداً إلى المنشورات السابقة التي تصف توليد نموذج الإكلينيكية للجمعية العامة استخدام العين أرنب ألبينو، لتقييم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية المستمدة من الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية (هيس-RPE) في الإعداد ذات الصلة سريرياً. RPE هيس متباينة يتم زرعها في عيون ساذجة أو العيون مع نيو3-الناجم عن تنكس الشبكية GA-مثل استخدام تقنية بلانا بارس ترانسفيتريل ز 25. تقييم للمناطق المزروعة وتحولت يؤديها المتعدد الوسائط عالي الدقة من التصوير في الوقت الحقيقي غير الغازية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويصف هذا البروتوكول توليد نموذج السريرية كبيرة العينين من ضمور الجغرافية (GA) التي تتيح تقييم إدماج RPE هيس المزروعة في الفضاء سوبريتينال. وقد استخدمت الأساليب الموصوفة هنا بالتفصيل 3 المنشورات الأخيرة التي تثبت إنتاج السكان المخصب ونقية والوظيفية للخلايا RPE من هيس1، فضلا عن خلق تلف الشبكية الخارجي والنمط الظاهري مثل GA الناجم عن حقن سوبريتينال لحلول الملح الفسيولوجي (أي، BSS وبرنامج تلفزيوني) أو نيو3 في أرنب العين2،3. كذلك أثبتنا أن تشكل عمليات زرع الشبكية دون تعليق من RPE هيس مونولاييرس وظيفية واسعة النطاق مع مستقبله الإنقاذ قدرة2.

مرافقة عدة مزايا استخدام العين أرنب لتوليد نموذج ألجأ للمرض. أولاً، الحجم العين الأرانب، والذي هو 70% حجم العين البشرية الكبار، يسمح زرع سريرياً ذات مغزى استخدام كثافة خلية التي أقل بكثير مما يستخدم عادة في عيون القوارض الصغيرة (1,000 الخلايا/ميليلتر مقابل 50,000 الخلايا/ميليلتر)4 , 5-وثانيا، عملية جراحية في القوارض هو عادة ترانسكليرال عبر المشيمية، مما يهدد الجدار الشبكية، ويحتمل أن يؤدي استجابة تحريضية و رفض ممكن6. هذان العاملان معا قد يؤدي إلى مولتيلاييرينج والتثاقل زرع الخلايا، ودمج الخلايا المزروعة في نسيج شبكية أصلية تعطل فقراء عموما. ومع ذلك، يسمح نموذج أرنب كبير العينين أداء تقنية جراحية مع الأجهزة مطابقة لإعداد سريرية. وثالثاً، نموذج كبير العينين أيضا تصاريح ذات الدقة العالية في فيفو التصوير ورصد الخلايا المزروعة والشبكية السطحية من خلال الساعة1،،من23. وهكذا يصف لنا نموذج السريرية ذات الصلة سريرياً وفعالة من حيث التكلفة التي ينبغي أن تكون بديلاً جذاباً للقوارض لأي شخص لديه مصلحة في البحوث الشبكية المريضة وطبيعية والمساحة الشبكية الفرعية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكول التالي المبادئ التوجيهية الرعاية الحيوانية من إينستيتويت كارولينسكا. جميع التجارب على الحيوانات باستخدام نيوزيلندا ألبينو الأرانب (جدول المواد) أقرتها لجنة الأخلاقيات الحيوانية الإقليمية (Stockholms التاريخي Djurförsöksetiska Nämnd) (تصريح: dnr 56/15). استخدام هيس (dnr 2011/745-31/3)، ونقل والتلاعب في هيس-RPE (dnr 2013/813-31/2) هو أيضا وفقا للتشريع السويدي ومعهد كارولينسكا الأنظمة، وقد أقرها (لجنة الأخلاقيات البشرية الإقليمية Etikprövningsnämnden ريجيونالا أنا ستوكهولم).

1-سوبريتينال حقن يودات الصوديوم (نيو3) إلى نموذج حيوان كبير العينين

  1. تخدير الحيوانات قبل الاعطاء العضلي في الفخذ مع خليط الكيتامين 35 مغ/كغ وإكسيلازيني 5 مغ/كغ في المالحة باستخدام المحاقن 30 غرام، وتمدد التلاميذ مع قطره الموضعية باستخدام مزيج فينيليفريني سيكلوبينتولاتي و 2.5% 0.75 في المائة. تأكد أنيسثيتيزيشن المناسبة إذا كان الحيوان لا تستجيب لقرصة الثابت في الساق مرة أخرى.
  2. ضع الأرنب تحت المجهر الجراحي مع الرأس التي تواجه الجراح (الشكل 1A). استخدام ضام غطاء لإزالة الغشاء الجفون ونيكتيتانس بقطعة قماش معقمة التقليل من مخاطر التلوث. استخدام موازنة الحل الملح (BSS) لمنع جفاف بينما تحت التخدير في كلتا العينين.
  3. للجراحة أو استخدام منفذ 2 (أو 3-منفذ اختياري) ترانسفيتريل ز 25 فارس بلانا تقنية مع تروكارس غير-المزودة بصمامات لإدراج الصكوك microsurgical (الشكل 1B). آلة متعددة الوظائف الاستئصال الكلي الزجاجية قد منافذ الاتصال قنية التسريب، اندويلومينيشن، فيتريكتور، واندولاسير. لحقن سوبريتينال، إلا اندويلومينيشن إلزامي، مما يجعل هيكل 2-الميناء كافية. إدراج في اندويلوميشن عن طريق تروكار الأيسر العلوي واستخدام تروكار الأيمن العلوي قنية الحقن سوبريتينال.
    1. لمجموعة 3-الميناء، استخدم تروكار الزمنية الدنيا قنية ضخ BSS. إذا كانت الصكوك الاختيارية (مثل فيتريكتور) المستخدمة، بإدراجها عن طريق تروكار الأيمن العلوي.
    2. إدراج تروكارس 2 العلوي 1-2 مم من ليمبوس استخدام الملقط المخالب لانتزاع وتشريد الملتحمة تغمر الموقع الإدراج.
    3. تأكد من تروكارس هي ترانسكليرالي المدرجة في زاوية موازية ليمبوس 30-45 درجة مئوية، والشروع في منتصف غيض من تروكار. ثم تتحول تروكار 90°، والمضي قدما في العين، ويهدف القطب الخلفي للعين. هذا الإجراء سوف تجنب تسرب بعد الجراحة من سكليروتوميس، وأيضا تقليل خطر اندوفثالميتيس (أي، العدوى البكتيرية في العين). راجع أيضا الشكل 2B لمواقف تروكار.
    4. وضع عدسات اللاصقة شقة استخدام واحد على القرنية لتصور الشبكية، بالدموع الاصطناعية كجل الاتصال بين العين والعدسات اللاصقة (الشكل 1A).
    5. رسم 500 ميليلتر من نيو3 إلى 1 مل حقنه متصلة بأنبوب تمديد (يشغلها المساعد) وقنية بوليتيب ز 38 (يشغلها الجراح).
    6. إدراج التحقيق اندويلومينيشن عن طريق تروكار الأيسر العلوي وقنية الحقن عن طريق تروكار الأيمن العلوي، ودفع قنية عبر الفضاء الزجاجي نحو الشبكية، تهدف إلى تحقيق منطقة أسفل رأس العصب البصري.
    7. تسمح غيض قنية للمس الشبكية ببطء حتى تبييض تنسيق مرئياً. حقن نفسه سوف تخترق الشبكية، السماح بتسليم سوبريتينال. لا تدع قنية اختراق الشبكية، حيث قد يؤدي ذلك إلى نزيف.
    8. حقن 50 ميليلتر من نيو3 سوبريتينالي على مدى فترة s 5. تدريجيا نظراً لوجود طائرة انقسام طبيعي بين الشبكية والمشيميه الكامنة، ينبغي أن تشكل بليب شبه شفاف مرئية بوضوح خلال الحقن.
    9. أثناء الحقن، ببطء سحب الإبرة، ولكن تأكد من التلميح يتم الاحتفاظ داخل بليب للتقليل من الجزر.
    10. بعد إزالة قنية اندويلوميشن وحقن، إزالة تروكارس استخدام الملقط المخالب، وتطبيق الضغط الخفيف لمدة 30 ثانية إلى سكليروتوميس أقل خياطة الختم الذاتي باستخدام التلميح أو النهاية غير حادة الملقط.
  4. بوستسورجيكالي إعطاء 10 مل من المحلول الملحي تحت الجلد منع الجفاف. لا تعطي المنشطات بعد الجراحة الموضعية أو المضادات الحيوية. لإعطاء المسكنات 0.5 مل من البوبرينورفين 0.3 ملغ/مل تحت الجلد بعد الجراحة، فضلا عن اليوم بعد عملية جراحية.
  5. بعد الاستخدام، غسل جميع الصكوك التي غمر بها لبضع ثوان أولاً في الإيثانول 70%، ثانيا في الإيثانول بنسبة 45%، وأخيراً في ماء مقطر. تجفيفها بشكل صحيح مع منشفة ورقية.
  6. حضور الحيوانات حتى يستعيد وعيه كافية ووضع كل واحد منهم انكاجيد. إذا لزم الأمر (مثلاً، لأغراض إيمونوهيستوتشيميستري)، euthanize الحيوانات عن طريق الحقن الوريدي من بينتوباربيتال 100 مغ/كغ (انظر الجدول للمواد).
  7. الانتظار 7 أيام للمضي قدما في زرع خلايا RPE هيس.

2-سوبريتينال زرع الخلايا RPE هيس في "معاملة الحيوانات"

  1. إدارة 2 مغ (100 ميليلتر) لحقن سينولون في الحيوانات تخديره باستخدام إبرة حقن ز 30 تدخل 1-2 مم من ليمبوس في الربع الزمني السفلي 1 أسبوع قبل زرع RPE هيس، وإعادة إدارته كل 3 أشهر. تأكد من نقطة التلميح نحو القطب الخلفي للعين لتجنب لمس عدسة.
  2. الثقافة من أحادي الطبقة هيس-RPE كما هو موضح سابقا1.
  3. قم بإزالة الوسائط تمايز الخلية (انظر الجدول للمواد) من أحادي الطبقة RPE هيس المتلاقية 24-البئر ويغسل كل جيدا مع 500 ميليلتر من برنامج تلفزيوني دون Ca2 + و Mg2 +. كرر هذا الإجراء مرة أخرى، ليصبح مجموع يغسل 2.
  4. تجاهل المادة طافية، وإضافة 500 ميليلتر من التربسين كل بئر، واحتضان لمدة 12 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
  5. إمالة اللوحة وإزالة بعناية التربسين (الخلايا ينبغي أن تظل متمسكة باللوحة). جمع الخلايا في 800 ميليلتر الطازج 37 درجة مئوية التمايز بريوارميد وسائل الإعلام بيبيتينج لطيف، أو حتى إلغاء إذا لزم الأمر، للحصول على تعليق خلية مفردة.
    ملاحظة: استخدام مصفاة خلية 40 ميكرومتر إذا لوحظت كتل الخلية.
  6. حساب عدد الخلايا في دائرة هيموسيتوميتير باستخدام 0.2% تريبان الأزرق، وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.
  7. إضافة 5 مل من تمايز الخلايا وسائل الإعلام وأجهزة الطرد المركزي عند درجة حرارة الغرفة، 300 غرام x لمدة 5 دقائق.
  8. تجاهل المادة طافية وريسوسبيند بيليه في طازجة تصفية تعقيم PBS (تم تمريرها من خلال مرشح حقنه 25 مم) إلى تركيز نهائي من الخلايا 1,000/ميليلتر.
  9. قاسمة تعليق الخلية السابقة إلى 600 ميليلتر مختبرين والحفاظ على الجليد حتى وأثناء الجراحة.
  10. تخدير الحيوانات قبل الاعطاء العضلي في الفخذ مع خليط من 35 ملغ/كغ xylazine الكيتامين و 5 ملغ/كغ في المالحة باستخدام المحاقن 30 جرام. تمدد التلاميذ مع قطره الموضعية باستخدام أم فينيليفريني سيكلوبينتولاتي و 2.5% 0.75 في المائة. تأكد أنيسثيتيزيشن المناسبة إذا كان الحيوان لا تستجيب لقرصة الثابت في الساق الخلفية لها.
  11. مكان الأرنب مع الرأس التي تواجه الجراح. استخدام ضام غطاء لإزالة الغشاء الجفون ونيكتيتانس بقطعة قماش معقمة التقليل من مخاطر التلوث. استخدام BSS لمنع جفاف بينما تحت التخدير في كلتا العينين.
  12. للجراحة أو استخدام منفذ 2 (أو 3-منفذ اختياري) ترانسفيتريل ز 25 فارس بلانا تقنية مع تروكارس التي توضع في نفس المواضع كما هو موضح في الخطوة 1، 3 و الشكل 2. إذا كانت سكليروتوميس السابقة مرئية، أداء تروكار الإدراج المجاورة فقط، ولكن ليس عن طريق هذه، التقليل من مخاطر تسرب بعد العملية الجراحية.
    1. وضع عدسات اللاصقة شقة استخدام واحد على القرنية لتصور الشبكية، بالدموع الاصطناعية كهلام الاتصال بين العين والعدسات اللاصقة (الشكل 1A).
    2. بعد تلميح الصحيح (انظر الخطوات 1.3.5 و 1.3.6) لتحديد المواقع، حقن 50 ميليلتر من تعليق مختلطة بلطف هيسك-RPE (50,000 الخلايا) سوبريتينالي. وتهدف لمركز منطقة3 pretreated نايو تتميز منعكس مميزة "معدني" إندو-إضاءة. يجب فصل الشبكية الحسية بسهولة إنشاء بليب مرئية بوضوح. كتل دافق الإبرة مع العقيم ح2س في بين الأرانب بعد استخدامها لتجنب إبرة انسداد نتيجة للخلية. ولوحظ تغير الإبرة عند انسداد.
    3. أثناء الحقن، ببطء سحب الإبرة ولكن تأكد من التلميح يتم الاحتفاظ داخل بليب لتقليل ارتداد.
    4. بعد إزالة قنية اندويلوميشن وحقن، إزالة تروكارس استخدام الملقط المخالب، وتطبيق الضغط الخفيف لمدة 30 ثانية إلى سكليروتوميس أقل خياطة الختم الذاتي باستخدام التلميح أو النهاية غير حادة الملقط.
  13. بوستسورجيكالي إعطاء 10 مل من المحلول الملحي تحت الجلد منع الجفاف. لا تعطي المنشطات بعد الجراحة الموضعية أو المضادات الحيوية. لإعطاء المسكنات 0.5 مل من البوبرينورفين 0.3 ملغ/مل تحت الجلد بعد الجراحة، فضلا عن اليوم بعد عملية جراحية.
  14. بعد الاستخدام، غسل جميع الصكوك التي غمر بها لبضع ثوان، أولاً في الإيثانول 70%، ثانيا في الإيثانول بنسبة 45%، وأخيراً في ماء مقطر. تجفيفها بشكل صحيح مع منشفة ورقية.
  15. حضور الحيوانات حتى يستعيد وعيه كافية ووضع كل واحد منهم انكاجيد. إذا لزم الأمر (مثلاً لأغراض إيمونوهيستوتشيميستري)، euthanize الحيوانات عن طريق الحقن الوريدي من بينتوباربيتال 100 مغ/كغ.

3. في فيفو الشبكية وتصوير سوبريتينال

  1. استخدام جهاز التصوير المقطعي (SD--أكتوبر) تماسك ضوئية مجال طيفي مع البرامج المرفقة (انظر الجدول للمواد) للحصول على فحص ب مستعرضة من الحيوانات المعالجة، وفقا لإرشادات الشركة المصنعة. لتجنب عدم وضوح الصورة، تأكد من إبقاء القرنية رطبة بالتنظيف مع المالحة الموضعية كل 30-60 ثانية.
    1. ضع الحيوانات تخديره والمتوسعة تلميذ (انظر الخطوات 1-1 و 2، 10) في جبل قابل لتعديل للحصول على مسار دون عائق من صك مصدر الضوء إلى الشبكية أرنب.
    2. الحصول على مالا يقل عن 3 أكتوبر الأشعة مع تزامن المسح الضوئي الأشعة تحت الحمراء [كنفوكل] تنظير العين الليزر الصور مرجع الانعكاس (الأشعة تحت الحمراء-كسلو) تمثل الجزء العلوي والوسطى والسفلي من منطقة الحقن.
    3. الحصول على صور النظارة أون-الوجه مع كسلو الأزرق، والأشعة تحت الحمراء والخضراء ومتعدد الألوان بالليزر الانعكاس (أي، ألوان الليزر متزامنة متعددة)، على التوالي.
    4. التقاط الصور أوتوفلوريسسينسي الضوء الأزرق (BAF) باستخدام الليزر الضوء الأزرق قدرة الجهاز SD، تشرين الأول/أكتوبر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الممثل في فيفو الصور BAF، والأشعة تحت الحمراء-كسلو، و SD--أكتوبر من الشبكية أرنب ألبينو عادي مبينة في الشكل 2. ملاحظة مختلف طبقات الشبكية مع مستويات مميزة من انعكاس الضوء التي استولت عليها الصك SD، تشرين الأول/أكتوبر.

ويتضح في الأرقام 1A و 1B الشكل، الإعداد لإنشاء بليبس الشبكية دون: يتم وضع ضام غطاء، إخضاع الجفون للسماح بإدراج تروك...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد في هذا البروتوكول، وتوليد نموذج كبير العينين GA واستخدامها الإكلينيكية لتقييم RPE هيس التكامل في فيفو .

لترجمة العلاجات التجديدي للجمعية العامة والأمراض ذات الصلة إلى عيادة7، من المهم تطوير وتحسين الأساليب التي صدق التقاط الطرق السريرية لزرع الأعضاء والتصوير. الأرنب في هذا الجانب من جوانب جذابة: فقد عين كبيرة نسبيا تسمح بجراحه العين واستخدام التصوير القياسية، ورخيصة ومساكن بسهولة مقارنة بغيرها من الحيوانات الكبيرة العينين.

يصف ل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لدى أي من أصحاب المصالح المتنافسة أو المصالح المتضاربة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه الدراسة كانت تدعمها المنح المقدمة من معهد كارولينسكا، مؤسسة مارغريتا الأميرة للمكفوفين، مؤسسة الأردن إدوين لبحوث طب العيون، ومؤسسة العين السويدية، مؤسسة الملك جوستاف الخامس، في أرميك مؤسسة ليندبيرج، ومؤسسة كرونقفيست.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
وسط التمايز NutriStem hESC XF &ndash ؛ bFGF و – TGFbBiological Industries06-5100-01-1A
TrypLE Select 1xGibco و ThermoFisher Scientific Corp12563-011
PBS بدون Ca2 + < / sup> و Mg2 + < / sup>Gibco ، ThermoFisher Scientific Corp14190-094
مصفاة الخلية 40 & mu ؛ م نايلونVWR732-2757
إبرة 30 جم 0.5 ' ’; 0.3 مم × 13 ممBD Microlance304827
Acrodisc 25 مم فلتر حقنةAcrodiscPN4612
0.4٪ تريبان أزرقThermoFisher ScientificCorp 15250061الاستخدام عند 0.2٪
NaIO3< / sub>Sigma-Aldrich CorpS4007
BSSAlcon Nordic A / S65079550
70٪ إيثانولسولفكو AB1047
كيتامينول ، 100 مجم / ملإنترفيت ، بوكسمير511519استخدم 35 مجم / كجم كيتامين
رومبون بيطري ، 20 مجم / ملباير لصحة22545استخدم 5 مجم / كجم زيلازين
تريسينسنس ، 40 مجم / ملألكون نورديك أ / إس412915داخل الجسم الزجاجي
، 0.75٪ + 2.5٪APL321968استخدم قطرة واحدة في كل عين
مختبرات ViscotearsTh é أ597562
محلول ملحي موضعيApotea AB7053249369080
Allfatal vet. 100 مجم / ملOmnidea77168استخدم 100 مجم / مل أنبوب تمديد البنتوباربيتال
(مطرقة)MedOne Surgical Inc3223
25 جم / 38 جم قنية تحت الشبكية متعددةMedOne Surgical Inc321925 جم / 38 جم
مسطحة للاستخدام مرة واحدةفولك#VWFD10
ضام غطاء Barraquer ColibriAgnTho'sAB 42-020-030
المبازل غير الصماميةAlcon Nordic A / S8065751448
ملقط مخالبBausch & amp Lomb Nordic ABET1811
Alcon Accurus 400VS آلة استئصال الزجاجيةAlcon Nordic A / S8065740238
Accurus 25+ مقياس استئصال الزجاجية TotalL Plus PakAlcon Nordic A / S8065751493
جهاز SD-OCTهايدلبرغ الهندسيةSpectralis HRA + OCTاستخدم Heidelberg Eye Explorer الإصدار 1.9.10.0
24 لوحة بئرSarstedt83.3922
مقياس الدم NeubauerVWR631-0925
نيوزيلندا ألبينو الأرانبLidk & ouml; pings Rabbit Farm ، السويد
hESC-RPEانظر الرقم المرجعي 1< / sup>
Buprenodale Vet ، 0.3 مجم / ملDechra660500استخدم 0.5 مل من البوبرينورفين تحت الجلد
2 مجم سيكلوبنتولات فينيليفرين الأطراف عدسة خلايا

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Plaza Reyes, A., et al. Xeno-Free and Defined Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Pigment Epithelial Cells Functionally Integrate in a Large-Eyed Preclinical Model. Stem Cell Rep. 6 (1), 9-17 (2016).
  2. Bartuma, H., et al. In Vivo Imaging of Subretinal Bleb-Induced Outer Retinal Degeneration in the Rabbit. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (4), 2423-2430 (2015).
  3. Petrus-Reurer, S., et al. Integration of Subretinal Suspension Transplants of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Pigment Epithelial Cells in a Large-Eyed Model of Geographic Atrophy. Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 1314-1322 (2017).
  4. Carido, M., et al. Characterization of a mouse model with complete RPE loss and its use for RPE cell transplantation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (8), 5431-5444 (2014).
  5. Lund, R. D., et al. Human embryonic stem cell-derived cells rescue visual function in dystrophic RCS rats. Cloning Stem Cells. 8 (3), 189-199 (2006).
  6. Vugler, A., et al. Elucidating the phenomenon of HESC-derived RPE: anatomy of cell genesis, expansion and retinal transplantation. Exp Neurol. 214 (2), 347-361 (2008).
  7. Schwartz, S. D., et al. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379 (9817), 713-720 (2012).
  8. Hughes, A. A schematic eye for the rabbit. Vision Res. 12 (1), 123-138 (1972).
  9. Blanch, R. J., Ahmed, Z., Berry, M., Scott, R. A., Logan, A. Animal models of retinal injury. Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (6), 2913-2920 (2012).
  10. Nork, T. M., et al. Functional and anatomic consequences of subretinal dosing in the cynomolgus macaque. Arch Ophthalmol. 130 (1), 65-75 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

25

مقالات ذات صلة