تقييم الحيوانات المنوية الأسماك باستخدام برامج وأجهزة التبريد

Summary

ويصف هذا البروتوكول إجراء تقييم الحيوانات المنوية الأسماك باستخدام تحليل الحيوانات المنوية الحاسوب وأجهزة التبريد. ويعطي البرنامج السريع، دقيقة، والتحليل الكمي لجودة الحيوانات المنوية الأسماك استناداً إلى حركية المني، التي يمكن أن تكون أداة مفيدة في تربية الأحياء المائية في تحسين نجاح الاستنساخ.

Abstract

لتقييم نوعية مشيج، هناك تقنيات مبتكرة وسريعة، والكمية التي يمكن أن توفر بيانات مفيدة لتربية الأحياء المائية. ووضعت النظم المحوسبة لتحليل الحيوانات المنوية لقياس العديد من المعلمات وواحد لقياس الأكثر شيوعاً هو عدد الحيوانات المنوية الحركة.

في البداية، صمم هذا تكنولوجيا الحاسوب لأنواع الثدييات، على الرغم من أنه يمكن استخدامها أيضا لتحليل الحيوانات المنوية الأسماك. الأسماك لها السمات المحددة التي يمكن أن تؤثر على الحيوانات المنوية التقييم مثل فترة زمنية قصيرة حركية بعد التنشيط، وفي بعض الحالات، التكيف مع انخفاض درجات الحرارة. وبالتالي، من الضروري تعديل مكونات البرامج والأجهزة لجعل تحليل حركية أكثر كفاءة لتحليل الحيوانات المنوية الأسماك. للثدييات من الحيوانات المنوية، يتم استخدام لوحة التدفئة للحفاظ على درجات الحرارة المثلى للمني. ومع ذلك، لبعض أنواع الأسماك، أنها مفيدة لاستخدام درجة حرارة أقل لإطالة فترة حركية، نظراً للحيوانات المنوية تبقى نشطة لأقل من 2 دقيقة. ولذلك، أجهزة التبريد ضرورية للثلاجة العينات في درجة حرارة ثابتة على مر الزمن التحليل، بما في ذلك في المجهر الضوئي. ويصف هذا البروتوكول تحليل عدد الأسماك الحيوانات المنوية الحركة باستخدام البرمجيات لتحليل الحيوانات المنوية وتبريد جديدة من الأجهزة تحسين النتائج.

Introduction

فعالية الاستنساخ يعتمد على نوعية كل الأمشاج (البيض والحيوانات المنوية)^1،2. وهذا هو العامل الرئيسي الذي يسهم في نجاح الإخصاب، مما يتيح وضع ذرية صالحة^3،4. تقييم جودة مشيج مريحة هو أفضل أداة لتحديد إمكانات الخصوبة من عينة.

خلط الحيوانات المنوية من الذكور متعددة ممارسة شائعة في إنتاج العديد من الأنواع التجارية المائية⁴. بيد أن تنوع الحيوانات المنوية بين الذكور يمكن أن يؤدي إلى المنافسة الحيوانات المنوية ونتيجة لذلك، ليس جميع الذكور على قدم المساواة تساهم الجينات⁵. وبهذا المعني، الت....

Protocol

الإجراءات التي تشمل مواضيع الحيوان وقد وافق (2015/VSC/البازلاء/00064) بالاتجاه العام للإنتاج الزراعي وتربية الماشية في València دي Politècnica Universitat.

1-جمع الحيوانات المنوية من ثعبان ناضجة في الأسر

ملاحظة: استخدام ثعبان الذكور الاحتفاظ بها في خزانات مياه البحر ونظام إعادة تدوير في درجة حرارة ثابتة (20 درجة مئوية). علاج بالهرمونات عن طريق الحقن داخل أسبوعية (تروج المشيمية البشرية (hCG)؛ 1.5 وحدة دولية كل غرام من الأسماك من وزن الجسم). التأقلم الأسماك تدريجيا بدءاً من 3 أيام في المياه العذبة متبوعاً باستبدال مع مياه البحر (1/3 من إجمالي المياه في الخزان) كل يومين حتى وصلت إلى ملوحة من 37.0 غ/مل.

1. تخد....

Results

تحليل تأثير الوقت على عدد الحيوانات المنوية الحركة

في حالة ثعبان البحر الأوروبي، زادت النسبة المئوية للمني ثابتة من 15 ثانية إلى 120 s بعد التنشيط (من 24.4 في المائة إلى 40.7 في المائة)، والنسبة المئوية للجوال المني التدريجي قد انخفض (من 36.9% و 20.9%) (الشكل 1A و 1B). استناداً إلى سرعة، خلايا المني أظهر انخفاضا في السرعة على مر الزمن (الشكل 1

Discussion

برمجيات تحليل الحيوانات المنوية المستخدمة في هذا البروتوكول قد استخدمت الباحثين في جميع أنحاء العالم لمختلف الأنواع، بما في ذلك الأسماك. ومع ذلك، قد الأسماك بعض السمات المحددة التي يمكن أن يؤثر على تقييم الحيوانات المنوية. وأظهرت المني الأسماك عالية السرعة في لحظة التنشيط التي تنخفض بسرعة، ويؤدي إلى وقت قصير لحركية بعد التنشيط. وإلى جانب ذلك، درجة حرارة الاستنساخ تعتمد على الأنواع، وفي بعض الحالات، يمكن أن يكون حوالي 4 ° C^2،،^،من⁴⁸

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
الغدد التناسلية المشيمية البشرية	Argent Chemical Laboratories	هرمون hCG
هرمون البنزوكايين	Merck	E1501 Sigma	Anesthesia
بيكربونات الصوديوم	Merck	S5761 Sigma	P1 متوسط
كلوريد الصوديوم	ميرك	1.06406 EMD ميليبور	P1 كلوريد
المغنيسيوم	ميرك	1374248 USP	P1
كلوريد البوتاسيوم	ميرك	P3911-500G	P1
كلوريد الكالسيوم	Merck	C7902-500G	P1
ملح تجاري	Aqua Medic   ؛	Meersalz	Activator solution
BSA	Merck	05470 Sigma	Activator solution
أنابيب الصقر 15 مل	Merck	T1943-1000EA
أنابيب Falcon تدعم	Merck	R5651-5EA
Eppendorfs	Merck	T9661-1000EA
Micropipet 20 & micro ؛ ل	جيلسون	PIPETMAN® كلاسيك
ميكروبيبت 10 وميكرو ؛ ل	نصائح Merck	Z683787-1EA
للميكروبيبت 20 & مايكرو ؛ ل	Merck	Z740030-1000EA
نصائح للميكروبيبت 10 & مايكرو ؛ ل	Merck	Z740028-2000EA
Spermtrack	PROiSER	غرفة
TruMorph	PROiSER	TruMorph
المجهر UB 200i Serie	PROiSER	المجهر
لوحة تبريد	PROiSER		النموذج الأولي
لكتلة التبريد	PROiSER		النموذج الأولي
ISAS v1	برنامج	PROiSER	ISAS