هنا نظهر بروتوكولا لتوحيد إجراءات أخذ العينات نموذج الخنزير الراسخة لاحتشاء عضلة القلب الحاد من أجل زيادة قيمتها متعدية الجنسيات في فهم الفسيولوجيا المرضية لإصابة احتشاء عضلة القلب الاسكيمية/الاكسجينيه واختبار المرشحين المخدرات الرواية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحسين نموذج احتشاء عضلة القلب الخنزير الصدر مغلقة بتوحيد إجراءات أخذ عينات الدم والأنسجة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
احتشاء عضلة القلب الاسكيمية ضخه (أنا/R) يساهم الإصابة إلى النصف تقريبا من منطقة نخرية بعد احتشاء عضلة القلب. حتى الآن هناك لا المخدرات المعتمدة لمنع أو الحد من احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R. الدراسة وفهم الآليات الفيزيولوجية المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R أمر ضروري لتطوير علاجات ناجحة. التجارب على الحيوانات الكبيرة خطوة هامة في أساليب متعدية الجنسيات. أنشئ نموذج الخنزير من احتشاء عضلة القلب الحاد والموصوفة بأنفسنا والآخرين. نحن تهدف إلى زيادة تحسين قيمة النموذج بالتركيز بالتفصيل على تقنيات أخذ العينات لاستخدامها في التجارب المستقبلية. وعلاوة على ذلك، نؤكد على خطوات صغيرة ولكن الهامة التي يمكن أن تؤثر في نوعية النتائج النهائية. لمحاكاة الحالة السريرية من احتشاء عضلة القلب أنا/R الإصابة، قسطرة تدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI) تم إدراجه في اليسار الأمامي تنازلي الشريان التاجي (الفتى) من خنزير أنيسثيتيزيد. ° ° ° هذا نموذج يقلد احتشاء عضلة القلب الحاد والعلاج PCI في البشر مع إمكانية تحديد المنطقة في دقة المخاطر فضلا عن نخرية-والأنسجة الدماغية قابلة للحياة. هنا استخدمت النموذج للتحقيق في تأثير مثبط تربين الببتيد من فكسييا. يمكن أيضا تعديل النموذج للسماح بوقت أطول لضخه لدراسة آثار لاحقة من احتشاء عضلة القلب.
المقدمة
مرض القلب الاقفاري، خاصة الحادة احتشاء عضلة القلب (ميتشيغن)، هو السبب الرئيسي للوفاة في البلدان المتقدمة النمو 1. اليوم، هي المعالجة المعيارية لمي التدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI)، معاملة قثطرة البالون. واحدة من العوامل الحاسمة التي تؤثر على نوعية الحياة والتشخيص للمرضى بعد المعالجة PCI مي الحاد هو حجم احتشاء. الحد الحجم يمكن أن يكون لها تأثير كبير على المريض البقاء على قيد الحياة والتشخيص 2. احتشاء عضلة القلب الاسكيمية/ضخه (أنا/R) إصابة تأثيراً كبيرا على حجم احتشاء ذلك هو أحد الأهداف الرئيسية في أبحاث القلب والأوعية الدموية لمنع أو الحد من احتشاء عضلة القلب أنا/R الإصابة 3. آليات الضبط أنا/R الإصابة لا تزال قيد التحقيق 4. تفعيل الشلالات البلازما وخلايا بطانية هي السمات المميزة لانا/R إصابة 5. تفعيل نظام التخثر هو وضوح تشارك 6،7. في الآونة الأخيرة، وقد تبين دور فكسيي، باعتباره ببتيد المنبع أوائل المشاركين في مرحلة الاتصال تنشيط تتالي تخثر الدم، في فكسيي ضرب نموذج الفئران من دماغي أنا/R إصابة 8. التحقق من هذه النتائج في نموذج الخنزير خطوة هامة في الترجمة السريرية. ولذلك، نحن تختبره مثبط فكسييا (80 كاتشين مبطلات) تربين رواية في سياق احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R في دراسة تجريبية.
النماذج الحيوانية، والتي تحاكي الحالة السريرية للعلاجات MI و PCI الحادة، ضرورية لتحسين فهمنا الفسيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R واختبار خيارات العلاج الجديدة. الخنازير وتمثل نموذجا حيوانية جيدة السريرية احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R. وهذا ليس فقط لأن قلوبهم متشابهة جداً إلى قلوب البشر فيما يتعلق بالتشريح وتداول التاجية، ولكنها أيضا تظهر الاستجابات الفيزيولوجية المرضية مشابهة لاحتشاء عضلة القلب الاسكيمية وضخه 9،من10. نماذج أخرى مثل الفئران والجرذان لا تفي بهذه المعايير وتظهر اختلافات كبيرة إذا ما قورنت بقلوب البشر 11،12، بينما الكلاب على سبيل المثال، لديك العديد من الأوعية التاجية الجانبية أكثر مقارنة بالبشر 13.
نموذج الخنزير احتشاء عضلة القلب الحاد قد استخدمت على نطاق واسع في أبحاث القلب والأوعية الدموية للتحقيق بما فيها مرض القلب الاقفاري احتشاء عضلة القلب أنا/R إصابة 14،15،،من1617. هذا الأخير هو شرط تحريضية، بسبب التقليل من التي تتصل التفاعل ستيرنوتومي أو ثوراكوتومي المستخدمة في جراحة الصدر المفتوحة أمر ضروري. الطراز الصدر مغلقة باستخدام إعداد الأوعية ج-ذراع سريرية ويتغلب على هذه المشكلة. وعلاوة على ذلك، واحد من أهم النقاط أن لدينا بروتوكول ينص تمييز دقيق بين الدماغية (منطقة الخطر، AAR) والمناطق غير الدماغية البطين الأيسر (منطقة ليست في خطر، ANR) حيث يمكن لحجم احتشاء (الأنسجة الدماغية نخرية، أحمق) ستحدد بدقة. هدفنا لهذه الورقة أن تحدد بوضوح منهجية استنساخه من الخنزير احتشاء عضلة القلب أنا/نموذج الإصابة R، لا سيما فيما يتعلق بأخذ عينات أنسجة عضلة القلب، التي تسمح بإجراء تحليل أكثر دقة للآليات الجزيئية لانا/الإصابة R، الحصول على صورة أوضح عن آثار العلاج بالعقاقير الجديدة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-الحيوانات:
جميع الحيوانات يعاملون وفقا للمبادئ التوجيهية للقوانين الوطنية السويسرية. تمت الموافقة على الدراسة باللجنة التجارب الحيوانية المحلية بكانتون برن (إذن لا. أن يكون 25/16).
استخدام الخنازير بيضاء كبيرة لكلا الجنسين (~ 30 ± 5 كغم). تقسيم الحيوانات عمياء إلى مجموعتين، مجموعة واحدة تلقي مثبط (80 كاتشين مبطلات) تربين من فكسييا أو العلاج للاختيار والآخر عنصر تحكم غير نشط.
2-الجراحة (الشكل 1)
- التخدير والتحضير للحيوان:
- بسرعة الحيوانات من أجل ح 12 قبل البدء التجربة.
- قبل التداوي الحيوان مع 20 مغ/كغ الكيتامين و 2 مغ/كغ إكسيلازيني عن طريق حقن العضلي في الرقبة، باستخدام حقنه 10 مل. تسجيل وزن الحيوان والجنس.
- حمل التخدير عن طريق حقن 0.5 ملغ/كغ الميدازولام والاتروبين 0.05 مغ/كغ في الوريد إذني. التنبيب الحيوان مع أنبوب داخل رغامى.
- المحافظة على التخدير بالتهوية الميكانيكية باستخدام جهاز تنفس اصطناعي (/air2س 1:3، سيفوراني 1.5%)، أنبوب مجرى الهواء 7-8 مم، وعامل تصفية. ضبط جزء الأوكسجين من وحي (2من قوة المراقبة الدولية) بنسبة 35 في المائة وحجم المد إلى 6-10 مل/كغ.
- ويتم تقييم عمق التخدير كافية في غياب الاستجابات الحركية أو اللاإرادي للأنف معسر. وتم رصد ردود الفعل بالبيبرال ولهجة الفك بشكل مستمر، وكذلك استهداف نغمة استرخاء الفك وعدم وجود ردود الفعل بالبيبرال. تم رصد درجة الحرارة الأساسية بصورة مستمرة وكفلت صيانة نورموثيرميا (38-38.5 درجة مئوية) مع الاحترار السلبي (عزل البطانيات وزجاجات الحارة).
- تشريح مجاناً، كما سبق وصفها كودستال وخطواته الزملاء 3-1 إلى 3-318الشرايين السباتي في كلا الجانبين وكانولاتي لهم مع غمد 7F. كانولاتي حبل الوريد الأيسر مع غمد 7F لأخذ عينات من الدم الوريدي.
- إدارة جرعة بلعه من 250 مسكن شيفتشنكو ميكروغرام عن طريق الخط الوريدي المركزي تليها 250 ميكروغرام/ح تسريب الوريدي مستمر استخدام مضخة لضخ. مراقبة درجة حرارة الجسم ومعدل ضربات القلب وإيقاع مع 3-يؤدي رسم قلب (ECG)، الضغط الوريدي الشرياني والوسطى خلال التجربة بأكملها.
- استخدام أنابيب جمع الدم القياسية، سحب عينات الدم الأساس التالية من خط وريدي: 5 مل سيتراتيد البلازما ومل 2.9 يدتا البلازما في الأنابيب الخاصة بكل منها. الطرد المركزي فورا في 2,000 ز س لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية. تأخذ مل 2.9 الدم في أنبوب مصل والسماح يتجمد لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة قبل سينتريفوجينج كما هو موضح أعلاه.
- أنابيب ميليلتر 200 الكوة البلازما أو المصل إلى 500 ميليلتر وتخزين جميع العينات في-80 درجة مئوية لمزيد من التحليل.
- سحب 0.5 مل دم من الخط الشرياني باستخدام المحاقن تحليل غاز الدم الخاصة (بغا) لقياس بغا باستخدام آلة بغا وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.
- سحب 0.5 مل دم من خط وريدي استخدام المحاقن قياسية 2 مل ونقل على الفور إلى خرطوشة قانون استخدام إبرة 30 جرام. إدراج خرطوشة معبئة في آلة القانون لقياس الوقت التخثر وفقا لإرشادات الشركة المصنعة. انظر الشكل 2 للنقاط الزمنية.
- إدارة 5000 مشاركة الهيبارين غير المجزأ مع الاسبيرين وحدة دولية في خط وريدي استخدام المحاقن 2 مل والسماح للحيوان لتحقيق الاستقرار لمدة 20 دقيقة قبل البدء بالتجربة مي.
- قانون مراقبة كل 30-45 دقيقة كما هو مذكور في 2.1.11. حقن الهيبارين غير المجزأ مع الاسبيرين 2500 وحدة عن طريق الوريد إذا كان قانون s < 180.
- تجربة احتشاء عضلة القلب
- استخدام معدات التنظير ذراع C قياسية (برنامج تصوير الأوعية التاجية، زاوية 0° 12 لقطة في الثانية، ~ 70 كيلو فولت)-أو بدلاً من ذلك نظام الأوعية مخصصة-القيام بالتدخل التاجي.
- استخدام التوجيه الفلوري لإدراج قسطرة ضغط (5F، 120 سم) عبر غمد الموضوعة سابقا في الشريان السباتي الأيسر. دفع إلى البطين الأيسر. قم بتوصيل القسطرة الضغط إلى اقتناء نظام لتسجيل ضغط البطين الأيسر. يحتاج نظام حيازة لحساب بشكل مستمر وتسجيل معدل ضربات القلب، وضعت الضغط، dP/dt الحد الأقصى (contractility البطين الأيسر) و dP/dt الحد الأدنى (استرخاء البطين الأيسر) خلال التجربة بأكملها. تسجيل قيم الأساس لمدة 10 دقائق.
- إدراج 6F (100 سم، EB3.75) القسطرة التوجيهية عبر غمد الموضوعة سابقا في الشريان السباتي الحق. مسبقاً للشريان التاجي الأيسر إلى الشريان التاجي تنازلي الأيسر الأمامي (الفتى) تحت إرشاد الأشعة السينية. حقن المتوسطة التباين باستخدام المحاقن 20 مل عبر القسطرة التوجيهية لإجراء تصوير الأوعية التاجية أساس.
ملاحظة: تم حقن متوسطة التباين بالضغط اليدوي ولكن نظام حاقن طاقة مخصصة يمكن استخدامها كذلك. - تقييم حجم اللاعب على رصد الأشعة السينية لتحديد الحجم المناسب للقسطرة التدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI). استخدام البالونات PCI بطول 15-25 مم وأقطار بين 2 و 3.5 مم تبعاً لحجم الفتى. تجميع القسطرة PCI وجويديويري التاجية (و 014/ي 175 سم). قم بتوصيل القسطرة PCI مع الجهاز التضخم قبل مليئة بمتوسط التباين.
ملاحظة: يمكن قياس القطر الفتى مباشرة على جهاز معايرة باستخدام مسطرة وثم يتم تحديد حجم البالون المشروع تبعاً لذلك. - إدراج نظام المجمعة من 2.2.4 في التجويف القسطرة التوجيهية. المضي قدما في جويديويري إلى الفتى حتى تصل إلى خارج الفرع الثاني قطري للاعب.
- استخدام التوجيه الفلوري لدفع القسطرة PCI حتى يصل إلى حوالي منتصف اللاعب. اختر الموقع حظر اللاعب اعتماداً على تشريح التاجية، عادة بعد الثاني، وفي بعض الأحيان بعد أول فرع قطري (الشكل 3) كي يكون نسب مماثلة من AAR البطين الأيسر (LV).
ملاحظة: يعتمد اختيار الموقع حظر على طول فروع قطري، ومن ثم المنطقة من الأنسجة والتي تزود بالدم عن طريق فرع كل منهما. في حالة فترة طويلة، ستكون أول فرع قطري سيوصف الموقع حظر فقط بعد هذا. في حالة فرع قطري أول أقصر، يتم حجب بعد قطري الثانية. - إزالة جويديويري ثم قم بزيادة الضغط في الجهاز التضخم إلى 7-10 بار تضخيم البالون للقسطرة PCI وحمل احتشاء عضلة القلب الاسكيمية 1 h. تدريجيا زيادة قوة المراقبة الدولية2 إلى 50-60% بين 15 و 40 دقيقة من الاسكيمية. إبقاء حجم المد 6-10 مل/كجم.
ملاحظة: هذا الإجراء سيتم تقليل حدوث extrasystoles وتقليل تواتر فيبريليشنز بطيني. - سجل تسلسل فيديو s 5-10 بينما الحقن المتوسطة التباين عن طريق القسطرة التوجيهية وعائية البالون للقسطرة PCI في مكان فقط بعد بدء تشغيل الاسكيمية؛ كرر بعد 10 دقائق من الاسكيمية للتحقق من انسداد كامل للاعب القاصي على البالون للقسطرة PCI.
- مراقبة الحيوانات عن كثب الفور الكشف عنها وعلاجها (2.2.10) عدم انتظام ضربات القلب. اكستراسيستوليس عادة ما يحدث، وزيادة في تواتر (> 3 في الدقيقة) بين 20 و 40 دقيقة بعد الاستقراء من احتشاء عضلة القلب الاسكيمية. في حالة حدوث ذلك، بلطف تدليك الرقبة على جانبي أسفل الخد. في معظم الحالات سيكون هذا كافياً لإعادة ضربات قلب منتظمة، ربما بحفز baroreceptors تحفيزه العصب الموجود في الشريان السباتي المشترك.
- في حالة عدم انتظام ضربات القلب التقدم إلى رجفان بطيني، استخدام الرجفان ثنائية الطور خارجي، إلى إعادة تأسيس إيقاع الجيوب الأنفية. قم بتطبيق الضغط على الصدر 5-10 استخدام منصات الرجفان فورا قبل تطبيق الصدمة من أجل ملء التاجية مع الدم المؤكسج وصدمة ثم مع 150 ي (بالنسبة للحيوانات 30 كغم).
- كرر إذا لزم الأمر وزيادة الطاقة إلى 175 ي بعد الصدمة 3rd . استخدام إعدادات الطاقة أعلى لأثقل الحيوانات.
- كرر خمس دقائق قبل نهاية الوقت الاسكيمية أخذ عينات من الدم المذكورة في 2.1.8-2.1.13. حقن مادة اختبار (مثبط فكسييا تربين أو التحكم 4 مغ/كغ، ونفعل ذلك هذا أعمى) عن طريق الوريد من خلال الخط الوريدي المركزي وتدفق الخط مع 20 مل المالحة.
- سحب عينة واحدة من سيترات البلازما (كما ورد في 2.1.8 و 2.1.9) 4 دقيقة بعد الحقن المادة في 2.2.12.
- القيام صورة وعائية (2.2.3) للتأكد من انسداد الفتى، ثم تنكمش البالون للقسطرة PCI وإزالة هذه القسطرة من القسطرة التوجيهية. تأكيد نضح الفتى القاصي إلى موقع الانسداد بواسطة وعائية فورا بعد الانكماش وإزالة البالون للقسطرة PCI، 10 دقيقة بعد ذلك، كلما كانت علامات احتشاء عضلة القلب الاسكيمية مرئية بتخطيط القلب لمدة أكثر من 5 دقائق، وقبل مباشرة إعادة انسداد للاعب.
- تسمح ضخه من عضلة القلب الاقفاري ح 2. أخذ عينات البلازما والمصل في دقيقة 10، 30 و 60 و 115 من ضخه (2.1.8 و 2.1.9). شاشة بغا في 115 و 60 دقيقة (2-1-10).
- أعد إدخال القسطرة PCI جنبا إلى جنب مع جويديويري لنفس الموقف كما تستخدم الاسكيمية. تضخيم البالون للقسطرة PCI قبل وتأكيد انسداد الفتى بصورة وعائية (2.2.3). إزالة القسطرة الضغط من البطين الأيسر وإيقاف التسجيل.
- حقن 100 مل 2% "أزرق إيفانز" في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS، درجة الحموضة 7.4) إلى الخط الوريدي المركزي. حوالي 30 ثانية لاحقاً، عندما يتحول الحيوان كله أزرق، حقن 40 مل 20% بوكل euthanize الحيوان. وأكد وفاة غياب إشارات تخطيط القلب وموجات النبض.
3. تقنيات أخذ العينات
-
استخراج وتشريح وأخذ عينات من القلب (الشكل 4)
- نفذ ستيرنوتومي لفضح القلب. يتبع البروتوكول الموصوفة سابقا قبل كودستال والزملاء، والخطوات من 8-2 و 8-318. قطع مفتوحة في تامور خلال تفقده للتشوهات التي قد تنشأ من التهاب التامور سابق، واستبعاد الحيوان من إجراء المزيد من التقييم.
- انكماش وإزالة المشروع فضلا عن القسطرة التوجيهية. المكوس القلب لمزيد من التحليل. قطع في الوريد الأجوف وإزالة الدم باستخدام مضخة شفط، ثم قطع جميع السفن الكبيرة التي تربط القلب بالجسم.
- شطف قلب الداخل والخارج مع المحلول الملحي في درجة حرارة الغرفة. وزن القلب كله.
- ضمن 30-40 دقيقة، مقطعة شرائح حوالي 3-5 مم من القمة إلى تينديناي حدث للصمام التاجي، عمودي على محور طويل باستخدام سكين حادة في القلب.
- كن حذراً دائماً وضع القلب في نفس اتجاه مع الجانب البطني مواجهة بغية الحفاظ على التوجه لعينات قطع (الشكل 5).
- تصوير شرائح القلب باستخدام كاميرا رقمية وحيدة عدسة العاكسة.
- قص بعيداً البطين الأيمن (تجاهل كغير مطلوبة). تصوير شرائح البطين الأيسر، وتزن كل شرائح للوزن الكلي البطين الأيسر.
- التفريق بين "الأزرق إيفانز" الإيجابية و "الأزرق إيفانز" الأنسجة سلبية في جميع الأقسام. تشريح شرائح فصل الأنسجة غير الدماغية (الأزرق إيفانز إيجابية) باستخدام مشرط السكتة (إيفانز الأزرق السلبية).
- أولاً تحليل المقاطع السلبية "الأزرق إيفانز" (المنطقة الدماغية في خطر، AAR). تزن كل منها ووضعها جميعا في وعاء من بلاستيك.
- تغطي الشرائح تماما مع 100-150 مل (وفقا لحجم القلب) تيترازوليوم ثلاثي فينيل كلوريد الحل (2 ز عقاري، ز 16 ديكستران، الوزن الجزيئي 48000-90000، في برنامج تلفزيوني، طازج 200 مل) حيث أن القطع القلب يمكن أن تتحرك بحرية داخل الحل. تغطية الحاوية واحتضان لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية بينما تهز برفق.
- أثناء هذا 20 دقيقة حضانة وقت تزن "الأزرق إيفانز" القطع إيجابية (منطقة ليست في خطر، ANR)، أخذ عينات لتضمين الأنسجة-تك (اختر الجزء القاصي أكثر من الضرر) وتخزينها في-80 درجة مئوية لمزيد من التحليل. نقل الباقي إلى 4% فورمالدهايد حل وتخزين في درجة حرارة الغرفة لأقسام علم الأنسجة.
- إزالة قطعة من الجمعية من الحل عقاري. النسيج الملون الأحمر هو الأنسجة الدماغية قابلة للتطبيق (فيت) والأنسجة غير الملون الأنسجة الدماغية نخرية (أحمق). قطع قطعة صغيرة 2 (كتل من 2-3 مم) من كل أحمق وفيت، بتضمينها في الأنسجة-تك وتخزينها في-80 درجة مئوية لمزيد من التحليل. ينبغي أن تكون هذه العينات نفس الوزن.
- إصلاح باقي القطع (جميع شرائح المستمدة من AAR) التي تعلق عليها إلى أسفل في حاوية الستايروفوم وتغطي تماما مع 4% فورمالدهايد حل أجل 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة في غطاء دخان. يجب أن تبقى القطع المسطحة للوثائق الفوتوغرافية في الخطوة التالية.
- وفي اليوم التالي تصوير جانبي القطع مع كاميرا عالية الدقة مع نفس إعداد التكبير/التصغير والمسافة من الأنسجة (التكبير نفسه). إضافة أشرطة مقياس تلقائي لكافة الصور. كافة أشرطة بحاجة إلى أن يكون بنفس الطول.
ملاحظة: ينبغي توصيل الكاميرا ذات الدقة العالية للبرامج التي تلقائياً بإضافة شريط مقياس لكل صورة.
-
حساب AAR وحجم احتشاء
- % AAR البطين الأيسر = (وزن AAR في ز/الوزن من البطين الأيسر في ز) * 100.
- استخدام برنامج إيماجيج لحساب المساحة الكلية لكل من الجمعية واحمق (كلا الجانبين لكل قطعة) استناداً إلى الصور الفوتوغرافية.
- ضبط شريط المقياس بتحديد طول شريط المقياس باستخدام خط مستقيم من زاوية الأداة. اختر من قائمة تحليل > "ضبط مقياس" وإدراج المسافة المعروفة ووحدة من شريط مقياس. اختر "العالمية" حيث سيتم تطبيق نفس المقياس على كافة الصور.
- وضع علامة على مساحة السطح كله من الأنسجة باستخدام أداة التحديد اليد الحرة لحساب الجمعية. كن حذراً لا يقوموا بتضمين الجانب (الارتفاع) من الأنسجة و/أو الأنسجة الدهنية (الشكل 6-ج).
- تعيين القياس عن طريق اختيار "المجال" و "عرض التسمية" من تحليل > "تعيين قياسات" القائمة. قياس المساحة السطحية من تحليل > التدبير.
- كرر الخطوة 3.2.5 لتدبير أحمق (مارك الأنسجة غير الملون فقط). ملاحظة: لا تشمل الأنسجة الدهنية (الشكل 6-د) في حساب أحمق. كرر الخطوة في الجانب الآخر من الأنسجة.
- حساب متوسط AAR واحمق لكل قطعة من الأنسجة.
- استخدام القيم التي تم الحصول عليها من 3.2.7 لحساب أحمق كنسبة مئوية من الصابة AAR AAR:% = (Σ متوسط المساحة السطحية لأحمق في سم2/Σ متوسط المساحة السطحية للجمعية في سم2) * 100.
- اثنين من المحققين مختلفة ينبغي تكرار الأسلوب أعلاه. هامش مقبول من الفرق هو < 10%.
-
علامات الاسكيمية
- استخدام عينات البلازما يدتا، التي تم تخزينها مسبقاً في-80 درجة مئوية (2.1.9) لقياس مستوى تروبونين القلب-الأول باستخدام مقايسة لوميناكس من نوع plex واحد كما سبق وصف 19.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الحيوان واحد توفي قبل الأوان قبل إقامة فكسييا الببتيد المانع أو السيطرة بسبب خطأ فني (الانخفاض المفاجئ لضغط الدم أثناء وقت الاسكيمية، قبل إضافة مادة الاختبار). تم استبعاد الحيوان واحدة من مجموعة مثبطات فكسييا بسبب أي ضرر الاسكيمية/ضخه لوحظ نتيجة التشريح الشاذ الشريان تنازلي الأمامي الأيسر (الفتى). وكان جزء كبير من البطين الأيسر، بما في ذلك القمة، perfused بعلامة سيركوفليكس الشريان في هذا الحيوان. كانت الحيوانات المدرجة في التحليل النهائي n = 2 في مجموعة مثبطات ببتيد فكسييا تربين (يعني وزن...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R له تأثير كبير على حجم احتشاء النهائي الذي يترجم مباشرة إلى تشخيص المريض بعد احتشاء عضلة القلب الحاد3. فهم الفسيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا الإصابة R هو الخطوة الأولى للحد من أو منع ذلك. احتشاء عضلة القلب أنا الإصابة R هو شرط حاد الذي يحدث مباشرة بعد ضخه السفن المغطى. أنا/R الإصابة يؤدي إلى تنشيط الاستجابة المناعية الفطرية والأضرار الخلوية يحدث في موقع ضخه و الأنسجة المحيطة بها20. دراسة أجريت مؤخرا أظهرت تحسنا في نتائج العصبية في نمو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
المؤلفون أن نشيد البروفيسور كريستيان هينس لتوفير مثبطات فكسييا والتحكم في كل منها. ونعترف أيضا امتنان بيسلاك أولجيغا والدكتور دانييل متلر نيتيلبيك كاي وحدة الجراحة التجريبية، وإدارة "البحوث الطبية الحيوية"، جامعة برن للدعم التقني. سيلين جيلود ماتياس راوش من الإدارة للتشخيص، وإينتيرفينشونال، وطب الأشعة، مستشفى جامعة بيرن، إينسيلسبيتال قدمت الدعم مع معدات الأشعة السينية والتقنيات. تم تمويل هذا المشروع من "مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية"، المشروع رقم 320030_156193. ونود أيضا أن نشكر السيد حسان هاني من الاتصالات والتسويق، مستشفى جامعة بيرن، إينسيلسبيتال لتسجيل لدينا تجربة الفيديو.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ABL 90 Flex ، محلل غازات الدم | مقياس الإشعاع | - | تحليل غازات الدم (BGA) ACT |
| Plus | التخثر المنشط | بالميدترونيك | |
| ، Atropin | Sintetica-Atropinum | Sulfas ، 0.5 مجم / مل | |
| توازن (20-500 كجم) مقياس | NAGATA ، Tiwan | HTB / HTR | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| التوازن (21-4200 جم) | Mettler توليدو ، سويسرا | MS4002SDR | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| أنابيب جمع الدم: EDTA ، السترات والمصل | S-Monovette ، Nuembrecht ، ألمانيا | 05.1167.001 ، 05.1071.001 و 05.1557.001 على التوالي | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| BV Pulsera mobile C-arm | Philips | - | استخدام المنتجات البديلة |
| Labcare ، المملكة المتحدة | يمكن استخدام ALC PK120R | المنتجات البديلة | |
| مزيل الرجفان Lifepak 12 | Medtronic-Alternative | يمكن استخدام المنتجات البديلة | |
| Dextran من Leuconostoc mesenteroides | Sigma-Aldrich ، ألمانيا | D3759 | متوسط MWT 48000-90000 |
| كاميرا انعكاسية رقمية أحادية العدسة | سوني ، تايلاند | DSLR-A500 / A550 | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| تشريح الملقط | يمكن استخدام المنتجات البديلة | ||
| قسطرة التوسع EMPIRA RX PCI | CORDIS ، Johnson & amp جونسون ، الولايات المتحدة الأمريكية | 85R15300S | قطر 3 مم ، طول 15 مم ، يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| قسطرة التوسع EMPIRA RX PCI | CORDIS ، Johnson & amp جونسون ، الولايات المتحدة الأمريكية | 85R15350S | قطر 3.5 مم ، طول 15 مم ، يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| إيفانز بلو | سيجما ألدريتش ، ألمانيا | E2129 | جهاز |
| التنفس الصناعي الممتاز فابيوس GS | السام الدكتور أومل ؛ ger, Lü بيك ، ألمانيا | - | محطة عمل التخدير ، يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| الفنتانيل | Inselspital ISPI-Fentanyl | 2500mcg / 50ml | |
| الفورمالديهايد | ، جامعة برن | SI148701 | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| مثبط FXIIa | مقدم من مختبر البروفيسور كريستيان هاينيس في EPFL | Novel الببتيد ثنائي الحلقة | |
| Galeo، سلك توجيه الشريان التاجي | Biotronik ، ألمانيا | 125497 | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| قسطرة التوجيه | بوسطن العلمية ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 34356-06 | 6F (100 سم ، EB3.75). يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| هيبارين الصوديوم | Drossapharm ، بازل ، سويسرا | - | Liquemin ، 25000 U.I. / 5 مل |
| الجراحة الكهربائية المتطورة | BOWA ، ألمانيا | ARC 400 | مصدر كهربائي لشفط الدم. يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| مرشح التنفس Hydro-Guardmini | Intersurgical ، ليتوانيا | 1745000 | مرشحات |
| الصورة J | المعهد الوطني للصحة ، الولايات المتحدة الأمريكية | 1.47 فولت | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| جهاز التضخم ، Atrion QL2530 | Atrion المنتج الطبي ، ألاباما ، الولايات المتحدة الأمريكية | 96402 | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| IntelliVue MP 70 | Philips ، Boeblingen، ألمانيا | مونيتور (تخطيط القلب ، معدل ضربات القلب ، ضغط الدم ودرجة حرارة الجسم). يمكن استخدام المنتجات البديلة | |
| KCl | Sintetica | SA-كلوريد | البوتاسيوم 15٪ |
| كيتامين | فيتوكينول-ناركيتان | ، 1 مل / 100 مجم | |
| LR-ACT | Medtronic | 402-01 | ACT محاقن خاصة |
| Midazolam | Roche-Dormicum | ، 5 مجم / مل | |
| مشرط | يمكن استخدام المنتجات البديلة | ||
| إبرة | يمكن استخدام المنتجات البديلة | ||
| كاميرا عالية الدقة ، حامل تصوير ماكرو PathStand لتصوير المشاهد الإجمالي | ، دقة 1080 بكسل عالية الدقة بالولايات المتحدة الأمريكية | . يمكن استخدام المنتجات البديلة | |
| PBS | التحضير الداخلي | - | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| القنية الوريدية الطرفية ، يمكن استخدام المنتجات البديلة 18 G | |||
| PowerLab 4/35 نظام الحصول على البيانات | Adinstruments ، Spechbach ، | ||
| Heidolph ، ألمانيا | 544-41200-00 | شاكر. يمكن استخدام البديل | |
| Rü schelit-Super Safety Clear Tube | Teleflex ، دبلن ، أيرلندا | 112480 | أنابيب ممر الهواء ، يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| Safe Pico Aspirator الحقن | مقياس الإشعاع | 956-622 | BGA محاقن خاصة |
| Saline | Sintetica Bioren-NaCl | 0,9٪. يمكن استخدام المنتجات البديلة | |
| سيفوران 1.5٪ | AbbVie | AG-Sevorane | 250 مل 100٪ |
| غمد | كورديس ، جونسون & جونسون ، الولايات المتحدة الأمريكية | 504-607 A | AVANTI + / 7 F ، يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| مضخة التسريب الفضائية | B.Braun Medical AG ، ألمانيا | - لضخ الفنتانيل. يمكن استخدام المنتجات البديلة | |
| SPR-350 (قسطرة ميلار) | الأدوات الإعلانية ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية | 840-8166 | MIKRO-TIP ، 5F ، 120 سم |
| منشار | القص يمكن استخدام المنتجات البديلة | ||
| خيوط | ETHICON و Johnson & جونسون ، الولايات المتحدة الأمريكية | Y3110H | Monocryl 3-0 SH-1 Plus. يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| المحاقن (20 و 10 و 5 مل) | CODAN ، بار ، سويسرا | 62.7602 ، 62.6616 ، 62.5607 على التوالي | تستخدم لحقن مواد مخدرة في العضل أو مباشرة في الخط الوريدي المركزي. أيضا لحقن الهيبارين أو FXIIa أو عنصر التحكم المعني. يمكن استخدام المنتجات البديلة |
| موزعة | يمكن استخدام المنتجات البديلة | ||
| Tissue-tek | SAKURA ، هولندا | 4583 | O.C.T. ملقط |
| الأوعية الدموية | يمكن استخدام المنتجات البديلة | ||
| Xenetix 300 وسائط التباين | Guerbet ، Z & uuml. ريتش ، سويسرا | - | لوبيتريدول ، 300 مجم يوديد / مل |
| زيلازين | فيتوكينول-زيلابان | ، 20 مجم / 1 مل | |
| 2،3،5-تريفينيل تيرازوليوم كوريد | سيجما ألدريتش ، النمسا | T8877 | |
| 500 مو ؛ أنابيب L (eppendorf) | Trefflab ، سويسرا | 96.08185.9.03 | يمكن استخدام المنتجات البديلة |
المراجع
- Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update. Circulation. 133, e338-e360 (2016).
- Miller, T. D., et al. Infarct size after acute myocardial infarction measured by quantitative tomographic 99mTc sestamibi imaging predicts subsequent mortality. Circulation. 92, 334-341 (1995).
- Ovize, M., et al. Postconditioning and protection from reperfusion injury: where do we stand? Position Paper from the Working Group of Cellular Biology of the Heart of the European Society of Cardiology. Cardiovasc Res. 87, 406-423 (2010).
- Neri, M., Riezzo, I., Pascale, N., Pomara, C., Turillazzi, E. Ischemia/Reperfusion Injury following Acute Myocardial Infarction: A Critical Issue for Clinicians and Forensic Pathologists. Mediators Inflamm. 2017, 1-14 (2017).
- Yang, Q., He, G. -W., Underwood, M. J., Yu, C. -M. Cellular and molecular mechanisms of endothelial ischemia/reperfusion injury: perspectives and implications for postischemic myocardial protection. Am J Transl Res. 8, 765-777 (2016).
- Massberg, S., et al. Platelet-Endothelial Cell Interactions During Ischemia/Reperfusion: The Role of P-Selectin. Blood. 92, 507-515 (1998).
- Wang, J., et al. Antithrombin is protective against myocardial ischemia and reperfusion injury. J Thromb and Haemost. 11, 1020-1028 (2013).
- Hopp, S., et al. Targeting coagulation factor XII as a novel therapeutic option in brain trauma. Ann Neurol. 79, 970-982 (2016).
- Crick, S. J., Sheppard, M. N., Ho, S. Y., Gebstein, L., Anderson, R. H. Anatomy of the pig heart: comparisons with normal human cardiac structure. J Anat. 193 (Pt 1), 105-119 (1998).
- Heusch, G., Skyschally, A., Schulz, R. The in-situ pig heart with regional ischemia/reperfusion - ready for translation. J Mol Cell Cardiol. 50, 951-963 (2011).
- Poirier, P. Exercise, heart rate variability, and longevity: the cocoon mystery? Circulation. , 2085-2087 (2014).
- Milani-Nejad, N., Janssen, P. M. L. Small and large animal models in cardiac contraction research: advantages and disadvantages. Pharmacol Ther. 141, 235-249 (2014).
- Bloor, C. M., White, F. C. Functional development of the coronary collateral circulation during coronary artery occlusion in the conscious dog. Am J Pathol. 67, 483-500 (1972).
- Banz, Y. Locally targeted cytoprotection with dextran sulfate attenuates experimental porcine myocardial ischaemia/reperfusion injury. Eur Heart J. 26, 2334-2343 (2005).
- Krombach, G. A., Kinzel, S., Mahnken, A. H., Günther, R. W., Buecker, A. Minimally Invasive Close-Chest Method for Creating Reperfused or Occlusive Myocardial Infarction in Swine. Invest Radiol. 40, 14(2005).
- Suzuki, Y., Lyons, J. K., Yeung, A. C., Ikeno, F. In vivo porcine model of reperfused myocardial infarction: in situ double staining to measure precise infarct area/area at risk. Catheter Cardiovasc Interv. 71, 100-107 (2008).
- McCall, F. C., et al. Myocardial infarction and intramyocardial injection models in swine. Nat Protoc. 7, 1479-1496 (2012).
- Koudstaal, S., et al. Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs. J Vis Exp. , e51269(2014).
- Kamat, P., et al. Dexrazoxane Shows No Protective Effect in the Acute Phase of Reperfusion during Myocardial Infarction in Pigs. PLoS One. 11, e0168541(2016).
- Carden, D. L., Granger, D. N. Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury. J Pathol. 190, 255-266 (2000).
- Pérez de Prado, A., et al. Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion. J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).
- Lown, B., Levine, S. A. The carotid sinus. Clinical value of its stimulation. Circulation. 23, 766-789 (1961).
- Regueiro-Purriños, M., et al. Ventricular Arrhythmias and Mortality Associated with Isoflurane and Sevoflurane in a Porcine Model of Myocardial Infarction. J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2011).
- Roberts, L. N. Evans blue toxicity. Can Med Assoc J. 71, 489-491 (1954).
- Ellenbroek, G. H. J. M., et al. Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction. J Vis Exp. , e54021(2016).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
