يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الكينماتيكا العين التي تقاس في المختبر حفز الأعصاب في السلحفاة

7.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/56864

⸱

يونيو 2, 2018

 ,  ,  , 
1Department of Biology and Neuroscience Program, Lafayette College, 2Department of Information Technology, Computer Science, and Digital Media, Juniata College

في هذه المقالة

ملخص

هذا البروتوكول يصف كيفية استخدام في المختبر معزولة سلحفاة رأس إعداد لقياس الكينماتيكا تحركاتهم العين. بعد إزالة الدماغ من الجمجمة، ويمكن حفز أعصاب مع التيارات التحديد الكمي لتناوب العين والتغيرات في أحجام التلميذ.

الملخص

بعد هي euthanized الحيوانات، يبدأ أنسجتها للموت. سلاحف توفر ميزة بسبب فترة بقاء أطول لانسجتها، خاصة عند مقارنتها بالفقاريات ذوات الدم الحار. وبسبب هذا، يمكن إجراء التجارب في المختبر في السلاحف لفترات طويلة من الوقت للتحقيق في الإشارات العصبية والسيطرة على أفعالهم المستهدفة. تستخدم إعداد رأس معزولة، قمنا بقياس علم الحركة حركات العين في السلاحف، والتحوير واسطة إشارات كهربائية يحملها أعصاب. بعد أن تمت إزالة الدماغ من الجمجمة، ترك الأعصاب سليمة، وضعت رأسه تشريح في انحراف لمعايرة حركات العين. زجاج كهربائي تم إرفاقه أعصاب (أوكولوموتور، تروتشلير، ومبعد) وحفز مع التيارات تثير حركات العين. نحن رصد حركات العين مع شريط فيديو الأشعة تحت حمراء على تتبع النظام وتناوب كمياً للعيون. البقول الحالية مع طائفة من الاتساع، الترددات، واستخدمت القطار المدد الزمنية لمراقبة آثار على الردود. لأنه يتم فصل الإعداد من الدماغ، يمكن النظر في مسار الإضافة الذهاب إلى أهداف العضلات بمعزل عن التحقيق في الإشارات العصبية في غياب المعلومات الحسية المجهزة مركزياً.

المقدمة

الأساس المنطقي لاستخدام المنزلق الأحمر ذو اذنين السلاحف في التجارب الكهربية:

تعتبر واحدة من العالم أسوأ الأنواع الغازية1 المنزلق الأحمر ذو اذنين السلاحف (ايليجانس سكريبتا تراتشيميس)، ويمكن أن يشير إلى أن النظام إيكولوجي في مأزق. هو غير مفهومة السبب المنزلق الأحمر ذو اذنين السلاحف ناجحة جداً ولكن قد يكون جزئيا سبب فسيولوجيا متسامح وحيازتها لانسجة الجهاز العصبي التي يمكن البقاء على قيد الحياة تحت ظروف التاكسج2،3،4 . استخدام لهم للتجريب لا تهدد أعدادهم ومع الحد الأدنى من الجهود، الاستعدادات الكهربية يمكن أن تظل قابلة للتطبيق على مدى فترات ممتدة، ما دام 18 ساعة5،6. الفائدة مماثلة للاستفادة من استخدام الحيوانات اللافقارية مثل جراد البحر7، التي لديها أيضا القدرة على تحمل مستويات منخفضة من الأكسجين8.

تقنيات لقياس حركات العين:

وقد نهج لقياس حركات العين في الحيوانات العينين أمامي استخدام الرئيسيات غير البشرية نمواً جيدا9. العين تدور في المدار حول ثلاثة محاور: الأفقي والرأسي، والالتوائيه. الطريقة لفائف البحث المغناطيسي يعتبر عموما الأكثر موثوقية لتناوب قياس، ولكن الغازية، التي تتطلب لفائف صغيرة يمكن إدراجه في سكليراس من الحيوانات10،11. الأنظمة المستندة إلى الفيديو كما يمكن قياس عمليات التناوب ولها ميزة كونها غير الغازية. وعززت تنمية أفضل الكاميرات جنبا إلى جنب مع معالجة الصور المبتكرة وظائفها مما يجعل الأنظمة المستندة إلى الفيديو بديلاً جذاباً للنظر في12،،من1314.

التقنيات المتقدمة لقياس حركات العين في نونمامالس كانت كبيرة أقل بكثير. التدابير هي أما ذات الدقة المنخفضة أو وصف بعض تناوب15،16،،من1718فقط. الافتقار إلى التنمية يمكن يمكن توجيه اللوم جزئيا على الصعوبة في نونمامالس التدريب لمتابعة الأهداف المرئية. على الرغم من أن حركات العين وقد درست جيدا في منزلق الأحمر ذو اذنين السلاحف19،20،21،،من2223،24،25 ،26،،من2728،،من2930، بسبب التحدي في تدريب الحيوانات لتعقب الأهداف، الكينماتيكا دقيقة تحركاتهم العين ضعيف ومن المفهوم.

المنزلق الأحمر ذو اذنين السلاحف تعتبر عموما الفقاريات العينين الجانبية, ولكن نظراً لأنهم تماما سحب رؤوسهم في شل على31، انسداد هام الحقول البصرية الأفقي بحسب يحدث32. والنتيجة أن يجبر على خط الرؤية البصرية تجاه الجبهة، مما يجعلهم يتصرفوا أكثر الثدييات العينين أمامي. ولذلك، يوفر استخدامها كنموذج لوضع نهج لقياس حركات العين أيضا من منظور تطوري فريدة من نوعها.

يستخدم البروتوكول هو موضح في هذا العمل في المختبر عزل رئيس إعداد لتحديد الكينماتيكا حركات العين في منزلق الأحمر ذو اذنين السلاحف. يتم تشريح أدمغة من الجماجم ترك الأعصاب سليمة. يتم وضع رؤساء إلى انحراف معايرة حركات العين وتثير ردود بالتحفيز الكهربائي لاعصاب إينيرفاتينج في عضلات العين. تدابير للتناوب بالعيون تتم بنظام الفيديو القائم، باستخدام خوارزميات البرمجيات، التي تتبع التلميذ الظلام وعلامات القزحية. الإعداد يتيح الفرصة لقياس الكينماتيكا على حد سواء اكستراوكولار (أي، تناوب الأفقي والرأسي، والالتوائيه)32 والعين (أي، التغييرات التلميذ) حركات33 .

نظام نموذجي لتحليل المسارات العصبية ناقل:

وبصورة أعم، يوفر النهج المحققين فرصة لدراسة كيفية ناقل الإشارات العصبية توليد حركات العين عند بدء العضلات من دولهم استرخاء، وفي غياب المعلومات الحسية المتكاملة معالجتها بواسطة الدماغ32، 33. ولذلك، يمكن فحص الكينماتيكا العين في نظام نموذجي الذي يتم معالجتها فقط بالمسار العصبية ناقل ترك الدماغ وسينابسينج على العضلات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تم شراء السلاحف المنزلق الأحمر ذو اذنين، ذكوراً وإناثاً، من بائع. تم إيواء السلاحف في جناح حيوانات حارة التي تحتوي على اثنين 60 غالون أحواض مجهزة بجزر الطوب للتشمس تحت أضواء الأشعة تحت الحمراء 250-ث. وأبقى على البيئة في دائرة الضوء/الظلام 14/10-ح مع درجة حرارة الماء 22 درجة مئوية. تم تشغيل الساعة 06:00 ص الأضواء وإيقاف الساعة 08:00 م. تم تنظيف الدبابات مجهزة بتصفية النظم أسبوعيا، وتم تغذية السلاحف إعلانية libitum كل يوم. الجميع هنا وصف32،الإجراءات التجريبية التالية33 أقرت "المؤسسية رعاية الحيوانات" واستخدام اللجنة (إياكوك) في كلية لافاييت والسلاحف للعناية بالأحمر ذو اذنين المنزلق.

1-معدات الإعداد

  1. إعداد حل السلحفاة في المسابقة. يضاف ما يلي إلى الماء المقطر بهذا الترتيب: كلوريد الصوديوم 96.5 ملم (58.44 g/mol)، كلوريد البوتاسيوم 2.6 مم (74.56 g/mol)، كلوريد المغنيسيوم 2.0 مم (203.31 g/mol)، بيكربونات الصوديوم 31.5 ملم (84.01 g/mol)، سكر العنب 20.0 ملم (180.16 g/mol)، تتركز حمض الهيدروكلوريك لضبط درجة الحموضة إلى 7.51، وكلوريد الكالسيوم 4.0 مم (110.98 g/mol) (انظر الجدول للمواد). مزيج الحل أثناء إضافة كل الملح.
    تنبيه: من HCl تركيز الخطرة (الجلد والعينين واستنشاق وابتلاع الإخطار).
  2. تقديم نصائح لأقطاب شفط من شعري طوله 5 سم زجاج (انظر الجدول للمواد)، بالنار وتلميع لأحجام مختلفة من أقطار الداخلية بغية استيعاب أعصاب سمك متفاوتة.
    1. استخدام ملف صغير لحفر خط عبر قطعة من الزجاج الشعرية. مكان في المناديل الورقية، وكسر في النصف.
    2. لفة واحدة من نهايات الزجاج الشعرية ببطء في شعلة الموقد بنسن. يفحص دورياً معلومات عن حجم ونعومة والتماثل تشريح باستخدام نطاق وألياف بصرية ضوء المصدر (انظر الجدول للمواد).
      ملاحظة: للسلاحف، مع عرض الرأس بين 20 و 30 ملم وتركيب المثلى القطر الداخلي أحجام عادة تتراوح بين 0.4 إلى 0.8 ملم للعصب الغرز (نيي)، 0.3 إلى 0.6 لعصب بكري (يقول:)، و 0.2 إلى 0.4 ملم لعصب مبعد (نفي).
  3. تنظيف وتنظيم رونجيورس وتحقيق تشريح كليلة، ميكروسسيسورس، الملقط غرامة، الملقط المنحنية ومقبض المبضع بريش (انظر الجدول للمواد) للتشريح.
    ملاحظة: تعقيم الأدوات اختيارية.

2-التخدير والقتل الرحيم

  1. دلو مكان السلحفاة في الثلج لمدة 60 دقيقة إلى كريوانيسثيتيزي عليه.
  2. Euthanize السلحفاة بقطع الرأس باستخدام مقصلة حيوانات صغيرة (انظر الجدول للمواد).
    1. بلطف نقب بين فكي تكون مفتوحة الحيوان مع ملعقة صغيرة وزنها حتى أنه يمكن إدراج هوك وتحولت لتناسب مقتضى غيض الفك العلوي.
    2. قم بالسحب بالضغط المستمر لتوسيع رأس الحيوان عن طريق المقصلة. سرعة قطع رأس الحيوان.
  3. وضع رأس السلحفاة في طبق تشريح. وقد حل ما يكفي في المسابقة السلاحف في ناحية لري الأنسجة. أوكسيجينيزي الحل مع 95/5/CO2س2 (انظر الجدول للمواد).
  4. المحافظة على الأنسجة عند 4 درجة مئوية عن طريق وضع الثلج حول خارج الطبق.

3-تشريح

  1. استخدام نطاق التشريح مع مصدر ضوء ألياف بصرية للقيام بالتشريح.
  2. إزالة الفك السفلي. مكان تحقيق تشريح كليلة عن طريق الفم لتوفير معالجة أسهل من الرأس. قطع مشتركة تربط عظم دينتاري للجمجمة مع مشرط. استخدام رونجيورس لسحب الفك السفلي بعيداً الجمجمة. استخدم رونجيورس لسحب قبالة الجلد والعضلات من المرفقات بها في مناطق الظهرية والجانبية الجمجمة.
  3. إزالة العمود الفقري.
    1. تحديد العمود الفقري في نهاية والذيلية الجمجمة. ثني العمود الفقري بطنيا لفضح الحبل الشوكي. استخدم ميكروسسيسورس لقص الحبل الشوكي. استخدام رونجيورس لإزالة العمود الفقري والأنسجة الأخرى من الجمجمة عن طريق سحب كودالي.
  4. إزالة الدماغ من الجمجمة بعد قطع في الأعصاب.
    1. بدءاً من ماغنوم ثقبة، استخدم رونجيورس لقطع شقوق اثنين في الجمجمة الظهرية. جعل التخفيضات سطحية لتجنب إتلاف الدماغ تحت.
    2. استخدم رونجيورس لسحب بعناية قبالة الجمجمة الظهرية. استخدام ميكروسسيسورس لإزالة وماربرغ للكشف عن بقية المخ. إزالة ما يكفي وماربرغ حتى يمكن التعرف على المصابيح شمي، في تجويف الجمجمة الأمامية، (انظر الشكل 1A). الاستمرار في ري الدماغ مع حل السلحفاة المسابقة، حسب الاقتضاء.
    3. استخدام الملقط منحنية بلطف سحب المخ كودالي وتنتج التوتر طفيف على الأعصاب. بعناية قطع بعيداً وإزالة المصابيح شمي والمخ مع الملقط منحنية.
    4. استخدام ميكروسسيسورس للدفع بلطف midbrain نحو خط الوسط لفضح الأعصاب؛ نيي، يمكن رؤية حوالي 0.6 مم، أمام يقول:، والقطر من يقول: سيكون أقل قليلاً من نيي. قص نيي ويقول: حيث يعلقونها midbrain (انظر الشكل 1B). كرر هذه العملية على الجانب الآخر.
    5. قطع اليمين واليسار العصب البصري (نيي) مع ميكروسسيسورس. ثم إمالة في الدماغ إلى جانب واحد. مراقبة نفي الخارجة من السطح البطني قرب مفرق بونس ولب (انظر الشكل 1). قطر نفي صغير وحوالي 0.3 مم. قص نفي اليمين واليسار على حد سواء.
    6. إزالة الأجزاء المتبقية من جذع الدماغ من السلحفاة بالملقط الجميلة وميكروسسيسورس. بمجرد الجمجمة فارغاً، دراسة الكلمة تجويف الجمجمة. تحديد نيي، ويقول: ونفى.
  5. إزالة العين-الجفن العلوي والسفلي مع الملقط الجميلة وميكروسسيسورس.

4-معايرة حركات العين

  1. استخدام جدول جامد (انظر الجدول للمواد) لدعم موضع انحراف وغيرها من الصكوك. وضع رأس السلحفاة في تشاك انحراف حيث يكون السطح الظهرية رئيس مواز للأفق باستخدام يستريح مستوى فقاعة صغيرة عبر الجمجمة. تقريبا موقف واحد من العيون في مركز عمليات التناوب الأفقي والرأسي انحراف.
  2. ضع الكاميرا الأشعة تحت الحمراء، ومزودة الأشعة تحت الحمراء التي تنبعث منها صمام ثنائي (LED)، التي جزء من نظام تتبع العين المستندة إلى الفيديو (انظر الجدول للمواد)، على مسافة حوالي 12 سم من العين للسلحفاة عرض.
    1. زاوية الكاميرا 45 درجة فوق خط الأفق للعين. ينبغي أن يكون الصمام الموضع 11:00 ص عند النظر في عدسة الكاميرا. مركز الصمام على طول المحور البصري للعين. سوف تكون الكاميرا قليلاً قبالة محور (كما تم عرضه من فوق العين).
    2. ضبط المسافة للكاميرا من العين حيث أن أقصى عرض الكاميرا يشغل مقلة العين. التأكد من وجود زوايا العينين (كانتي) على حواف العرض الأفقي.
  3. توصيل الكاميرا بالعين المستندة إلى الفيديو تتبع نظام لمعالجة البيانات. تقسيم إشارة على دي في دي مسجل لالتقاط الفيديو الخام. وتركز الكاميرا للحصول على صورة واضحة للعين. العناية بغرامة-موقف العين في وسط عرض الكاميرا باستخدام الثلاث درجات التكيف الخطي (x, y, z) زودت انحراف.
  4. كشف التلميذ الظلام عن طريق تحديد العتبة والتباين على النحو المناسب باستخدام البرنامج الموفر مع العين على أساس الفيديو نظام تتبع.
    1. باستخدام الماوس، انقر فوق القائمة "الفيديو" وتحت "الوضع" حدد "عالية الدقة" لالتقاط الصور بمعدل أخذ عينات من 30 هرتز (القرار خطوط بكسل 640 x 480). أيضا تحت "الفيديو"، حدد "التلميذ الظلام" لنوع "التلميذ" و "قطع ناقص (بيضاوي مستدير)" ل "أسلوب تجزئة التلميذ".
    2. في الإطار "ايكاميرا"، انقر على أيقونة "التلميذ البحث عن مجال التكيف" (مستطيل عمودي صغير مع نقطة في المركز). استخدام الماوس لسحب خارج مستطيل الذي يحد منطقة حول التلميذ. تجنب المناطق المظلمة التي يمكن الخلط مع التلميذ.
    3. في إطار "التحكم"، تؤكد أن يتم التحقق من مربعات ل "الصورة التلقائي" و "إيجابية-لوك العتبة-تتبع". انقر فوق تلقائي-"العتبة" تحسين كثافة المسح الضوئي، والتي سوف تظهر كنقط خضراء على التلميذ الظلام.
  5. معايرة عرض الفيديو العين المستندة إلى الفيديو تتبع البرنامج بتناوب انحراف 12.5 ° (+/-) حول محورها الأفقي و 10 ° (+/-) حول محورها الرأسي.
    1. في الإطار "عناصر التحكم"، انقر فوق "عرض". التحقق من المربعات تحت "نظرات" و "Stim" "وجهة نظرة"، "منطقة كليب"، و "هندسة الشبكة". بعد التحقق من المربعات تحت "هندسة الشبكة"، سوف يطفو على السطح نافذة ويقول، "هندسة عرض الحوافز يجب أن يقاس قبل أن يمكن عرض شبكة الهندسة. هل ترغب في القيام بذلك الآن؟ " حدد "نعم" لَنِعْمَ.
    2. باستخدام الماوس، انقر فوق القائمة "ويندوز" وحدد "التحفيز". سيتم فتح نافذة "التحفيز" عرض من عبور خط العمودي والأفقي في وسط الشاشة. قياس أطوال الخطوط لأقرب ملم. اضغط على المفتاح "Esc" على لوحة المفاتيح للخروج من الإطار "التحفيز".
    3. باستخدام الماوس، انقر فوق القائمة "التحفيز" وحدد "هندسة الإعداد". إدخال أطوال الخطوط التي قيست فقط. ضبط مسافة العرض حيث أن الدرجات/الخط تساوي 25 درجة مئوية للخط الأفقي و 20 درجة للخط العمودي. انقر فوق الزر "مخزن" وإغلاق النافذة.
    4. في النافذة "اييسبيس"، وحدد عدد المعايرة "نقطة البيانات" إلى "9". مع العين السلحفاة المتمركزة في المركز، انقر على مركز البيانات أشر وانقر فوق الزر "إعادة تقديم".
      ملاحظة: سيتم فتح نافذة "التحفيز"، والحصول على "استعداد" سوف يظهر في وسط الشاشة. سوف تظهر في موقع مركز مربع وثم تختفي. في اختفائها، سيتم إغلاق الإطار "التحفيز". وينبغي الآن معايرة موضع المنتصف.
    5. كرر هذا الإجراء عن طريق تناوب انحراف اليمين/اليسار، +12.5/-12.50 °، وأعلى/لأسفل + 10/-10 ° لمعايرة نقاط البيانات المتبقية.
  6. لمعايرة التناوب اﻻلتوائية، استخدم القالب المناسب خوارزمية المقدمة مع العين على أساس الفيديو تتبع البرنامج. تعيين موضع صفر استناداً إلى علامات القزحية الخوارزمية ويحسب زاوية الاستدارة عندما تصبح إزاحة العلامات من centroid للتلميذ.
    1. باستخدام مؤشر الماوس، انقر فوق القائمة "ويندوز" وحدد "التواء". انقر فوق الزر "ابدأ" في إطار "التواء". في الإطار "ايكاميرا"، سوف تظهر قوس فوق الصورة للعين.
    2. ضبط نصف القطر والزاوية وطول القوس باستخدام المنزلقات في مكان حيث توجد علامات غير النظامية في قزحية العين. التحقق من المربعات ل "الرسومات في الوقت الحقيقي" و "تعيين تلقائي بعد ضبط". إذا لزم الأمر، ضبط السطوع والتباين في إطار الضوابط وعتبة إعادة التلميذ الظلام (راجع الخطوة 4). انقر فوق الزر "تحديد القالب".
  7. ضع مسطرة في نفس المستوى البؤري كالتلميذ وتسجيل عرض عرض الكاميرا الكاملة. سيتم استخدام القيمة لاحقاً لتحديد العرض الفعلي للتلميذ.

5-تحديد المواقع من الشفط الكهربائي في الأعصاب القحفية لاستحضار حركات العين

  1. بعناية وضع قطب مرجع رقم pin في الأنسجة الضامة أو العضلات المتبقية على رأسه.
  2. ضع مسرى الشفط (انظر الجدول للمواد) على الأعصاب القحفية استخدام نطاق ميكرومانيبولاتور وتشريح المحملة على ازدهار. استخدام مصدر ضوء ألياف بصرية لعرض ودليل التنسيب.
    1. يتطابق مع حجم العصبية لتلميح زجاج شعرية. التجربة والخطأ أمر ضروري للحصول على أفضل تناسب جميع أنحاء القطر من العصب (راجع الخطوة 1.2 للتوصيات الحجم). ضع طرف الزجاج على مسرى شفط. ملء مسرى شفط مع الحل للمسابقة، وضبط مستوى الصوت داخل المحقن إلى حوالي نصف قدرته.
    2. نقل طرف الزجاج الكهربائي باستخدام في ميكرومانيبولاتور إلى موضع أعلاه القص-النهاية العصب المحدد بعناية. التأكد من أن الحل في المسابقة ليملأ الجمجمة والتلميح تحت سطحه. إذا لزم الأمر، استخدم الطين النمذجة للسد تصل المواقع حيث يتسرب الحل المسابقة من أصل الجمجمة.
    3. اسحب المكبس للمحاقن.
      ملاحظة: سيتم رسم الفراغ العصب إلى نهاية الحافة الشعرية. يتم الإشارة إلى حسن صالح العصب المتبقية داخل الحافة مع فراغ إضافية قليلة أو لا تطبق.

6-تحفيز الأعصاب القحفية وتحليل حركات العين

  1. استخدام مشجعا عصب/العضلات لأغراض عامة مع جهاز عزلة الحالية (انظر الجدول للمواد) لتحفيز الأعصاب القحفية عن طريق الشفط الكهربائي.
    1. قم بتوصيل مسرى شفط الجهاز العزلة الحالية باستخدام كبل. الاتصال الرصاص من مسرى مرجع رقم التعريف الشخصي للاتصال الأرضي للجهاز العزلة.
    2. حدد معلمات التيارات باستخدام الأوجه وتبديل الجهاز مشجعا والعزلة. استخدام مجموعة من التيارات من 1 إلى 100 Μa، مع تردد 10 إلى 400 هرتز-استخدام 1 أو 2 مللي البقول في القطارات دائم 100 أو 500 مللي 1,000.
  2. سجل توقيت التحفيز.
    ملاحظة: النبضات الترانزستور الترانزستور-منطق (TTL) متزامنة مع عمليات تسليم التيارات من مشجعا والتواصل في الوقت الحقيقي عن طريق كابل لقنوات الإدخال العين المستندة إلى الفيديو نظام تتبع. نمطية برامج المقدمة مع العين على أساس الفيديو تتبع عناصر البرنامج الاتصال.
    1. تصور توقيت التطبيقات الحالية وتأثيرها على حركات العين، انقر فوق القائمة "بينبلوتس". حدد "الموقف نظرات X" "الموقف نظرات Y"، "التواء" والتلميذ عرض "لإظهار قطع البيانات الخام في الوقت الحقيقي للعين X و Y المواقف والتواء وعرض التلميذ. أيضا تحديد "معالم & ثانية" من قائمة "بينبلوتس" لإظهار مؤامرة توقيت مع علامات التجزئة، التي تظهر في فترات ق 1.
      ملاحظة: سوف يظهر حرف "T" وسم بداية نبض TTL، التي تحدث في وقت واحد مع التطبيق الحالي.
    2. لتخزين البيانات الخاصة بحركات العين التي أثارت من قبل التيارات، انقر فوق القائمة "ملف" واختر "ملف بيانات جديد" ضمن "بيانات". إدخال اسم ملف ثم اضغط "إدخال". حفظ البيانات يمكن أن يكون مؤقتاً وثم إعادة تشغيل باستخدام مزيج الأوامر الرئيسية، "Ctrl" + "ف". عند الانتهاء من جلسة عمل تجريبي، حدد "إغلاق ملف البيانات" من القائمة "ملف" ضمن "بيانات".
    3. للمساعدة في الحفاظ على المسار من نوع التيارات تطبيقها، انقر فوق القائمة "ويندوز" وحدد "لوحة البيانات". سوف تظهر نافذة "لوحة المفاتيح/داتاماركير". انقر فوق حرف أو رقم لتعريف معلمات التحفيز الحالية التي يجري تسليمها للعصب.
      ملاحظة: على سبيل المثال، "X" يمكن أن تقف على 10 µA. النقر على "X" بتخزين دخولها في ملف البيانات في الوقت الحقيقي لتحليل الوظائف المخصصة . ويبدو أيضا على "بينبلوت" عن "علامات & ثانية" للمراقبة المستمرة.
  3. تحليل البيانات من نظام تعقب العين.
    1. فتح ملف البيانات المحفوظة، بتنسيق نص محدد، إلى برنامج ورقة انتشار الاختيار تنظيم البيانات وإجراء التحليلات الإحصائية.
      1. تحويل التلميذ عرض القيم المخزنة في الملف إلى الأحجام الحقيقية في مم.
      2. تحويل قيم X والعين مواقف وتورسيونس إلى وحدات درجة Y واستخدام اتفاقيات لوصف حركات العين؛ ولذلك، الاتجاهات الإيجابية لتناوب: إينتورسيون، الارتفاع، وإيراد؛ وسلبية اتجاهات عمليات التناوب: اكستورسيون، والاكتئاب، والاختطاف.
    2. نسخ معلومات الرأس على ورقة عمل جديدة. وسيشمل هذا قيم لحجم الشاشة (الطول والعرض) ومسافة العرض. وسيتابع ثمانية أعمدة من البيانات التي تم جمعها بمعدل 30 هرتز أدناه معلومات الرأس.
    3. العودة إلى ورقة العمل التي تحتوي على البيانات الخام. "بحث" ل "X" في العمود الأخير تحت عنوان "العلامة" لتحديد موقع حيث تم تطبيق التحفيز مع 10 µA. البحث عن حدوث "T"، بداية من التحفيز الحالية. نسخ الصفوف 15 (0.5 s) من البيانات التي تحدث قبل "T" وإطارات 90 بعد "T" (3.0 s)؛ أي3.5 s المجموع. قم بلصق البيانات في ورقة العمل الجديدة أدناه معلومات الرأس.
    4. قم بإدراج عمود فارغ بعد "بوبيلويدث". في العمود الفارغ، تحويل إلى البعد معايرة مم:
      التلميذ أفقية قطرها = "بوبيلويدث" × البعد لعرض الكاميرا بالعرض
    5. إدراج أعمدة فارغة 2 بعد "X_Gaze" و "Y_Gaze". تطبيع المواقف إلى أبعاد شاشة عرض: الإحداثيات (0، 0) في الجزء العلوي الأيسر من توسيع الشاشة إلى (1, 1) في أسفل اليمين. في العمود الفارغ الأول، ترجمة المواقف إلى وجود نظام الإحداثيات (0، 0) في وسط الشاشة. وتشمل عملية التحويل إلى أبعاد الشاشة مم:
      X = (العرض 0.5 ×) – (العرض × "X_Gaze")؛ Y = (الطول 0.5 ×) – ("Y_Gaze" × الارتفاع)
      ملاحظة: يتم تسلسل العملية للعين اليسرى. سوف تحتاج التسلسل العكسي للعين اليمنى لمتابعة الاتفاقية من السلبية للاختطاف والإيجابية لإيراد.
    6. في الأعمدة الثانية، استخدام دالات مثلثية لتحويل إلى زوايا (°) التناوب:
      التناوب الأفقي = البرنامج (/viewingXالمسافة)؛ التناوب الرأسي = البرنامج (المسافةY/viewing)
    7. التواء ويرد الفعل في وحدات درجة، ولكن لتتفق مع اتفاقية الإيجابية إينتورسيون، إذا كان قياس يتم في العين اليسرى، ضرب-1. للعين اليمنى، لا الضرب ضروري. رموز البرنامج دوران مع عقارب الساعة بأنه إيجابي.
    8. مؤامرة قطر التلميذ وتناوب كدالة للزمن.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ويبين الشكل 1 اللقطات صور مأخوذة من شريط فيديو يصف التشريح. وتوفر صور مواقع نموذجية للأعصاب قبل قطع من الدماغ.

figure-results-1
رقم 1: اللقطات صور الملتقطة من شريط فيديو للتشريح لإظهار مواقع العصب البصري (المؤسسة)، والعصب الغرز (نيي)، عصب بكري (يقول:) وعصب مبعد (نفي). (أ) صورة مع المناطق المسماة في ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

خطوات حاسمة:

الخطوات الحاسمة ضمن هذا البروتوكول ما يلي: 1) التشريح والعناية للحفاظ على استمرارية الأعصاب بحف؛ 2) مطابقة الأحجام بأقطاب كهربائية شفط إلى أعصاب تقديم استجابات متسقة؛ و 3) موضع الرأس في انحراف لتوفير المعايرة كافية للتناوب للعين.

استكشاف الأخطاء وإصلاحها:

التشريح يمكن أن تكون صعبة، ولكن بعد استكمال العملية بضع مرات، الخطوات التي ينبغي أن تصبح نسبيا على التوالي إلى الأمام. إذا الأعصاب تظهر غير المستجيبة، السبب الأكثر احتمالاً فشل لل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

يشكر المؤلفون السيدة بوليت ماكينا وليزا بيزينو في هذه الدراسة لدعم أعمال السكرتارية، والسيد فيل اورباخ للدعم التقني. كما يشكر المؤلفون الدكتور مايكل أرييل ومايكل س. جونز (جامعة سانت لويس مدرسة للطب) على تقديمه لنا بإعداد رأسه في المختبر معزولة. وقدمت التمويل لدعم هذا التعاون بقسم علم الأحياء (روبرت س. تشيس الصندوق) ولجنة الأبحاث الأكاديمية وبرنامج علم الأعصاب في كلية لافاييت. وأخيراً، هذا العمل مكرس للسيد فيل اورباخ، الذي وافته المنية في 28 سبتمبر 2016؛ الاستغناء المسح الإلكتروني المجهري، وأقر بفائدة المرحلة 5-محور للاستخدام في هذا البروتوكول. وسيفتقد كثيرا عن الصداقة والحيلة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
السلاحف المنزلقة ذات أذنين حمراءKons ScientificTrachemys scripta elegans< / em>حجم كبير (طول الدرع 15-20 سم)
كلوريد الصوديومSigma-Aldrich Co. LLC.S5886
كلوريد البوتاسيومشركة سيجما ألدريتش ذ.م.م.P5405
كوريد المغنيسيومSigma-Aldrich Co. LLC.M7304
بيكربونات الصوديومشركة سيجما ألدريتش ذ.م.م.S5761
سكر العنبسيجما ألدريتش ذ م م.C5767
حمض الهيدروكلوريك المركزشركة سيجما ألدريتش ذ.م.م.H7020
كلوريد الكالسيومشركة سيجما ألدريتش ذ.م.م.C7902
مقياس الأس الهيدروجينيأوكتوندرجة الحموضة 6 +
قطب تحفيز الشفطأنظمة AM573000قطب شفط ثنائي القطب. لاحظ أنه تم استبدال 573000 ب 573050.
أنظمة AB الزجاجية الشعرية626000زجاج شعري أحادي الأسطوانة من البورسليكات بدون خيوط دقيقة ، الطول 10 سم ، القطر الخارجي 1.0 مم ، القطر الداخلي 0.50 مم
قطب تحفيز الشفط البديلأنظمة AM573050قطب شفط ثنائي القطب. يتطلب زجاجا شعريا بقطر أكبر: 627000 ، القطر الخارجي 1.2 مم ، القطر الداخلي 0.68 مم
نطاق التكبيرالمجسمة LiecaGZ7، 10x & ndash ؛ 70x
مصدر ضوء الألياف البصريةAmscopeHL250-A150W صندوق إضاءة مجهر ألياف
RongeursCarolina Biological Supply Company625654الفولاذ المقاوم للصدأ ، زنبرك مستقيم ، 5.25 "
مسبار تشريح حادCarolina Biological SupplyCompany 627405مسبار هوبر مول ، مسبار وباحث مزدوج النهايات ، 6 "
MicroscissorsCarolina Biological Supply Company623555مقص تشريح دقيق Iris ، فولاذ مقاوم للصدأ ، شفرات 0.5 بوصة ، ملقط ناعم بطول 4.75 بوصة
Sigma-Aldrich Co. LLC.F6521، دومون رقم 5 ، سبيكة إينوكس ، ملقط منحني 4.25 بوصة
شركة سيجما ألدريتش ذ م م.Z168696طرف متوسط ، ملقط منحني ، ستانلس ستيل ،
مقبض مشرطSigma-Aldrich Co. LLC.مقابض مشرط S2896، رقم 3 ، شفرة مشرط من الفولاذ المقاوم للصدأ
Sigma-Aldrich Co. LLC.S2771شفرات مشرط ، رقم 11 ، مقصلة فولاذية
هارفارد جهاز73-1918كلاين مقصلة نوع 7575
ملعقةسيجماZ648299ملعقة صغيرة ومجموعة وزن. استخدم ملعقة صغيرة: 5.9 بوصة طويل × 0.07 بوصة مقبض القطر بنهاية مربعة: 0.17 بوصة × 1.3 بوصة طويل ، آخر نهاية الجولة: 0.17 " × 1.27 بوصة خطاف
طويل Autozone98069SureBilt هوك ومجموعة اختيار. استخدم المطحنة لتخفيف النقاط الحادة من الخطاف لمنع إصابة فم.
95/5٪ O2< / sub> / CO2< / sub>Airgas، Inc.X02OX95C20031025٪ خليط غاز قياسي معتمد من الأكسجين من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ ، مقاس 200 أسطوانة ، CGA-296
RegulatorAirgas، Inc.Y11244D296-AGأسطوانة تحليلي أحادي المرحلة من النحاس 0-100 رطل لكل بوصة مربعة CGA-296 مع مخرج إبرة. استخدم صمام أنبوب الخطوط الجوية القابل للتعديل من النحاس الأصفر للانتقال من 3/8 بوصة ، القطر الداخلي ، أنابيب طيران من الفينيل متصلة بالمنظم إلى 3/16 بوصة ، القطر الداخلي ، اتصال شركة الطيران يذهب إلى حجر الهواء أو ماصة باستور الزجاجية.
صمام أنبوب طيران قابل للتعديلأطباء فوستر وسميثCD-12061صمام نحاسي
طاولة صلبةغير معروفباب clave تلقائي غير معروف موضوعة فوق طاولة قوية. تسع كرات تنس بقطر 5 بوصات تعزل الاهتزازات عن السطح العلوي للطاولة.
كرة تنس 5 بوصاتPetco Animal Supplies، Inc.712868التنس Petco Jumbo Pet: يتم فك الكرات وتثبيتها داخل إطار مدمج في الجزء السفلي من باب الأوتوكلاف.
طاولة عزل الاهتزاز البديلةNewport CorporationINT1-36-6-Nنظام التحكم في الاهتزاز الصلب ، السلامة 1: أبعاد السطح ، 3 × 6 '
GimbalISI ، International Scientific Instruments، Inc.مرحلة من SUPER III-A المسح الضوئي EM5 محاور EUCENTRAL: حركات خطية X و Y و Z ، & plusmn ؛ 20 مم ، دقة 0.1 مم ؛ الدوران ، الرأسي ، & 10 درجة ؛ وأفقي ، & 12.5 درجة ؛ مع 1.25 درجة ؛ دقة. ملاحظة: من أداة إيقاف التشغيل.
تشاك للgimbalUnknownUnknown Chuck من ميكروتوم قديم من تصنيع غير معروف ليناسب عمود حامل العينة لمرحلة المسح EM
البديلةThorLabs، Inc.GN2 / M مع مقياس الزوايا ثنائي المحور MBT602 / M(GN2 / M) مركب على مرحلة الكتلة الدقيقة ذات 3 محاور مع أدوات ضبط المسمار (MBT602 / M): صمم ظرف لتثبيت رأس السلحفاة بالعين عند 12.7 مم فوق السطح العلوي لمقياس الزوايا (المسافة إلى نقطة الدوران)
نظام تتبع العين المستند إلى الفيديوArrington Research، Inc.ViewPoint EyeTracker ، طريقة تتبع PC-60: فيديو الأشعة تحت الحمراء بواسطة التلميذ الداكن. الكاميرا بالأبيض والأسود (البند BC02): 30 هرتز ، 640 × 480 ؛ متطلبات النظام: Windows 2000 و XP و 7 و 8 و 8.1 و 10 ؛ النطاق البصري: أفقي +/- 44 درجة ؛ عمودي +/- 20°; الدقة ~ 0.5 درجة ؛ الدقة المكانية ~ 0.15 درجة ؛ دقة حجم التلميذ ~ 0.03 مم ؛ بيانات العين: X ، Y موضع النظرة ، ارتفاع وعرض التلميذ ، الالتواء ، وقت الدلتا ، الوقت الإجمالي ، ومناطق الاهتمام (ROI) ؛ الاتصال في الوقت الحقيقي (البند 0022): 4 قنوات AnalogOut مع ثماني قنوات إدخال TTL لتمييز الرموز في ملف البيانات
مغناطيسية متعددة المواضعHarbor Freight ToolsPittsburg ، البند # 5645يصل الحامل المغناطيسي إلى 12 بوصة وينتج 45 رطلا من السحب المغناطيسي. استخدم لوضع الكاميرا. ثقوب خيط الماكينة في نهاية القضيب لتركيب الكاميرات.
MicromanipulatorKopf9005 محاور التلاعب لتركيب قطب الشفط: X ، Y ، Z السفر الخطي ، 2 محور الدوران
نطاق التشريح على نطاق تكبيرLiecaGZ6، 6.7x & ndash ؛ 40x
محفز الأعصاب / العضلاتAstro-Med Grass TelefactorGrass S88محفز جهد النبض المزدوج: قناتا إخراج يمكن تشغيلهما بشكل مستقل أو متزامنتين لتوليد نبضات جهد ثابت غير معزولة (10 مللي فولت إلى 150 فولت). يمكن أن تكون البقول مفردة (10 مو ؛ ثانية إلى 10 ثوان) ، ومتكررة (0.01 هرتز إلى 1 كيلو هرتز) ، وقطارات (1 مللي ثانية إلى 10 ثوان) ومتزامنة مع مدخلات ومخرجات TTL. أرسل مخرجات TTL عبر قنوات الإخراج لموصل DB25 إلى قنوات إدخال TTL الخاصة ب ViewPoint EyeTracker. ملاحظة: لم يعد Astro-Med Grass Telefactor يعمل في مجال الأعمال.
جهاز العزل الحاليAstro-Med Grass TelefactorPSIU6وحدة عزل التحفيز الحالي: يتيح التوصيل الآمن للتيارات الثابتة بواسطة S88 إلى المستحضر. يتصل PSIU6 عن طريق كابل BNC بإحدى قنوات الإخراج الخاصة ب S88. تسمح مفاتيح المضاعف على PSIU6 ل S88 بتوليد مجموعة واسعة من السعات الحالية التي تتراوح من 0.1 ومايكرو. من أ إلى 15 مللي أمبير.
محفز الأعصاب / العضلات البديل مع محفز النبض المعزولA-M Systems2100: تحتوي الوحدة على عازل مدمج لإنتاج تيارات ثابتة.
شركة ملقط المجوهرات 4 بوصات منظم كرة تم تشكيل قاعدة

المراجع

  1. Kikillus, K. H., Hare, K. M., Hartley, S. Minimizing false-negatives when predicting the potential distribution of an invasive species: A bioclimatic envelope for the red-eared slider at global and regional scales. Anim Conserv. 13, 5-15 (2010).
  2. Lutz, P. L., Rosenthal, M., Sick, T. J. Living without oxygen: turtle brain as a model of anaerobic metabolism. Mol Physiol. 8, 411-425 (1985).
  3. Lutz, P. L., Milton, S. L. Negotiating brain anoxia survival in the turtle. J Exp Biol. 207, 3141-3147 (2004).
  4. Storey, K. B. Anoxia tolerance in turtles: Metabolic regulation and gene expression. Comp Biochem Physiol A-Mol Integr Physiol. 147 (2), 263-276 (2007).
  5. Granda, A. M., Dearworth, J. R., Subramaniam, B. Balanced interactions in ganglion-cell receptive fields. Vis Neurosci. 16, 319-332 (1999).
  6. Dearworth, J. R., Granda, A. M. Multiplied functions unify shapes of ganglion-cell receptive fields in retina of turtle. J Vis. 2 (3), 204-217 (2002).
  7. Nesbit, S. C., Van Hoof, A. G., Le, C. C., Dearworth Jr, J. R. Jr Extracellular recording of light responses from optic nerve fibers and the caudal photoreceptor in the crayfish. J Undergrad Neurosci Educ. 14 (1), A29-A38 (2015).
  8. McMahon, B. R. Respiratory and circulatory compensation to hypoxia in crustaceans. Resp Phsiol. 128 (3), 349-364 (2001).
  9. Leigh, R. J., Zee, D. S. The neurology of eye movements. , 3rd edition, Oxford University Press. New York. (1999).
  10. Robinson, D. A. A method of measuring eye movement using a scleral search coil in a magnetic field. IEEE Trans Biomed Eng. 10, 137-145 (1963).
  11. Judge, S. J., Richmond, B. J., Chu, F. C. Implantation of magnetic search coils for measurement of eye position: an improved method. Vis Res. 20, 535-538 (1980).
  12. Ong, J. K. Y., Halswanter, T. Measuring torsional eye movements by tracking stable iris features. J Neurosci Meth. 192, 261-267 (2010).
  13. Kimmel, D. L., Mammo, D., Newsome, W. T. Tracking the eye non-invasively: simultaneous comparison of the scleral search coil and optical tracking techniques in the macaque monkey. Front Behav Neurosci. 6 (49), 1-17 (2012).
  14. Otero-Millan, J., Roberts, D. C., Lasker, A., Zee, D. S., Kheradmand, A. Knowing what the brain is seeing in three dimensions: A novel, noninvasive, sensitive, accurate, and low-noise technique for measuring ocular torsion. J Vis. 15 (14), 1-15 (2015).
  15. Demski, L. S., Bauer, D. H. Eye movements evoked by electrical stimulation of the brain in anesthetized fishes. Brain Behav Evol. 11, 109-129 (1975).
  16. Gioanni, H., Bennis, M., Sansonetti, A. Visual and vestibular reflexes that stabilize gaze in the chameleon. Vis Neurosci. 10, 947-956 (1993).
  17. Straka, H., Dieringer, N. Basic organization principles of the VOR: lessons from frogs. Prog Neurobio. 73 (4), 259-309 (2004).
  18. Voss, J., Bischof, H. -J. Eye movements of laterally eyed birds are not independent. J Exp Biol. 212 (10), 1568-1575 (2009).
  19. Ariel, M. Independent eye movements in the turtle. Vis Neurosci. 5, 29-41 (1990).
  20. Ariel, M., Rosenberg, A. F. Effects of synaptic drugs on turtle optokinetic nystagmus and the spike responses of the basal optic nucleus. Vis Neurosci. 7, 431-440 (1991).
  21. Balaban, C. D., Ariel, M. A "beat-to-beat" interval generator for optokinetic nystagmus. Biol Cybern. 66, 203-216 (1992).
  22. Keifer, J. In vitro eye-blink reflex model: Role of excitatory amino acid receptors and labeling of network activity with sulforhodamine. Exp Brain Res. 97, 239-253 (1993).
  23. Keifer, J., Armstrong, K. E., Houk, J. C. In vitro classical conditioning of abducens nerve discharge in turtles. J Neurosci. 15, 5036-5048 (1995).
  24. Rosenberg, A. F., Ariel, M. A model for optokinetic eye movements in turtles that incorporates properties of retinal slip neurons. Vis Neurosci. 13, 375-383 (1996).
  25. Ariel, M. Open-loop optokinetic responses of the turtle. Vis Res. 37, 925-933 (1997).
  26. Anderson, C. W., Keifer, J. Properties of conditioned abducens nerve responses in a highly reduced in vitro brainstem preparation from the turtle. J Neurophysiol. 81, 1242-1250 (1999).
  27. Keifer, J. In vitro classical conditioning of the turtle eyeblink reflex: Approaching cellular mechanisms of acquisition. Cerebell. 2, 55-61 (2003).
  28. Zhu, D., Keifer, J. Pathways controlling trigeminal and auditory nerve-evoked abducens eyeblink reflexes in pond turtles. Brain Behav Evol. 64, 207-222 (2004).
  29. Jones, M. S., Ariel, M. The effects of unilateral eighth nerve block on fictive VOR in the turtle. Br Res. 1094, 149-162 (2006).
  30. Jones, M. S., Ariel, M. Morphology, intrinsic membrane properties, and rotation-evoked responses of trochlear motoneurons in the turtle. J Neurophysiol. 99 (3), 1187-1200 (2008).
  31. Krenz, J. G., Naylor, G. J. P., Shaffer, H. B., Janzen, F. J. Molecular phylogenetics and evolution of turtles. Mol Phylogenet Evol. 37 (1), 178-191 (2005).
  32. Dearworth, J. R. Jr, et al. Role of the trochlear nerve in eye abduction and frontal vision of the red-eared slider turtle (Trachemys scripta elegans). J Comp Neur. 52, 3464-3477 (2013).
  33. Dearworth, J. R. Jr, et al. Pupil constriction evoked in vitro by stimulation of the oculomotor nerve in the turtle (Trachemys scripta elegans). Vis Neurosci. 26, 309-318 (2009).
  34. Mead, K., et al. IFEL TOUR: a description of the introduction to FUN electrophysiology labs workshop at Bowdoin College, July 27-30, and the resultant faculty learning community. J Undergrad Neurosci Educ. 5, A42-A48 (2007).
  35. Jackson, D. C., Ultsch, G. R. Physiology of hibernation under the ice by turtles and frogs. J Exp Zool A Ecol Genet Physiol. 313 (6), 311-327 (2010).
  36. Romano, J. M., Dearworth, J. R. Jr Pupil constriction evoked by stimulation of the ciliary nerve in the red-eared slider turtle (Trachemys scripta elegans). J Penns Acad Sci. 85, 4-8 (2011).
  37. Miller, J. M., Robins, D. Extraocular-muscle forces in alert monkey. Vis Res. 32, 1099-1113 (1992).
  38. Gamlin, P. D., Miller, J. M. Extraocular muscle motor units characterized by spike-triggered averaging in alert monkey. J Neurosci Meth. 204, 159-167 (2011).
  39. Quaia, C., Ying, H. S., Optican, L. M. The Viscoelastic properties of passive eye muscle in primates. III: Force elicited by natural elongations. PLOS ONE. 5, A236-A254 (2010).
  40. Anderson, S. R., et al. Dynamics of primate oculomotor plant revealed by effects of abducens microstimulation. J Neurophys. 101, 2907-2923 (2009).
  41. Maxwell, J. H. Anesthesia and surgery. Turtles: Perspective and Research. Harless, M., Morlock, H. , Wiley. New York. 127-152 (1979).
  42. AVMA Panel on Euthanasia. American Veterinary Medical Association. J Am Vet Med Assoc. 218 (5), 669-696 (2001).
  43. Clarke, R. J. Shaping the pupil's response to light in the hooded rat. Exp Br Res. 176, 641-651 (2007).
  44. Bennett, R. A. A review of anesthesia and chemical restraint in reptiles. J Zoo Wild Med. 22 (3), 282-303 (1991).
  45. Bickler, P. E., Buck, L. T. Hypoxia Tolerance in Reptiles, Amphibians, and Fishes: Life with Variable Oxygen Availability. Ann Rev Physiol. 69, 145-170 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الكينماتيكا العين التي تقاس في المختبر حفز الأعصاب في السلحفاة
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.