Method Article

روتين فحص الطريقة المجهرية الدقيقة في عمليات نقل الدم الصفيحات

DOI:

10.3791/56893

⸱

January 31st, 2018

 ,  ,  , 
1Research & Development, LightIntegra Technology Inc., 2Quality Engineering & Regulatory, LightIntegra Technology Inc., 3Department of Pathology and Laboratory Medicine; Center for Blood Research, University of British Columbia, 4Canadian Blood Services

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إدارة المخزون الصفيحات استناداً إلى فحص محتوى يمثل في مركزات الصفائح الدموية مبادرة جديدة لتحسين جودة في بنوك الدم في المستشفيات. والهدف من ذلك التفريق بين المنشط من غير تنشيط الصفائح الدموية الاستخدام الأمثل للصفائح الدموية. توفير غير تنشيط الصفائح الدموية لمرضى أمراض الدم-السرطان قد تقلل من خطر عالية لتصبح مقاومة للحرارة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إدارة المخزون الصفيحات استناداً إلى فحص محتوى يمثل في مركزات الصفائح الدموية مبادرة جديدة لتحسين نوعية لبنوك الدم في المستشفيات. يفتت الخلايا قبالة المجهرية الدقيقة (MP) عندما شددوا. قد تحتوي على مكونات الدم والأجزاء الخلوية من مجموعة متنوعة من الخلايا، ومن أبرزها تنشيط الصفائح الدموية. عند القيام بأدوارهم كخلايا المناعة الفطرية واللاعبين الرئيسيين في التخثر والارقاء، تغيير الشكل الصفائح الدموية وتوليد المجهرية الدقيقة. مع تشتت الضوء الحيوي (DLS)-على أساس الكشف يمثل، من الممكن للتفريق بين المنشط (يمثل عالية) من الصفائح الدموية غير المنشط (يمثل منخفضة) في عمليات نقل الدم، والاستخدام الأمثل لهذا المنتج الدم النادرة. وتقترح الأبحاث السابقة أن توفير غير تنشيط الصفائح الدموية للاستخدام الوقائي في المرضى الذين يعانون من أمراض الدم-السرطان يمكن الحد من مخاطر أن تصبح مقاومة للحرارة وتحسين رعاية المرضى. والهدف من هذا الأسلوب الفرز هو المنشط للتفريق بشكل روتيني من غير تنشيط الصفائح الدموية. الأسلوب الموصوفة هنا تحدد الخطوات التي يتعين القيام بها لإدارة المخزون الصفائح الدموية الروتينية في مستشفى بنك دم: الحصول على عينة من عملية نقل الصفائح الدموية، تحميل العينة في شعري لقياس دائرة الأراضي والمساحة، ويؤدون DLS اختبار إلى تحديد المجهرية الدقيقة، واستخدام المحتوى يمثل المبلغ عنها للتعرف على تنشيط الصفائح الدموية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تمحورت اهتمام المجهرية الدقيقة معظمهم حول مشاركتها في عمليات الاتصال والبيولوجية للخلية الخلية. 1 , 2 , 3 في الآونة الأخيرة، المجهرية الدقيقة كما اجتذبت اهتمام المحتملة علامات التشخيص المبكر لأمراض المناعة الذاتية والقلب والأوعية الدموية. 4 , 5 المجهرية الدقيقة، حويصلات المعروف أيضا خارج الخلية أو اكسوسوميس، على نطاق واسع حققت التدفق الخلوي. ولسوء الحظ، على الرغم من الجهود الرامية إلى توحيد البروتوكولات التقليدية التدفق الخلوي هناك أي توافق في الآراء بشأن البروتوكول الأمثل لاستخدام. 6 , 7 , 8 , 9 , 10

على الرغم من أن قياس التدفق التقليدي يمكن تميز الفئات السكانية الفرعية MP محددة، أفادت11 فقد عدة قيود. 11 , 12 , 13 , 14 بعض هذه القيود قد عولجت باستخدام أعلى طاقة الليزر، وكاشفات في ما يسمى "الخيار جزيئات صغيرة"،15،16 ، فضلا عن الكشف على درجة 15-25 درجة مئوية إلى الأمام مبعثر زاوية وتعديل الضغط غمد . 17 , 18 على الرغم من ذلك، أسلوب فحص سريعة وسهلة الاستخدام التي يمكن دمجها مع هذه الأساليب المتطورة تزال مطلوبة للاستفادة من المجهرية الدقيقة كعلامات التشخيص المبكر. مستويات مرتفعة من المجهرية الدقيقة قابلة للاكتشاف في حوالي ثلث الدم العادي المانحين19 وقد تشير إلى الشروط السريرية. ونتيجة لذلك، يمثل ارتفاع مستويات في منتجات الدم المتبرع به قد يكون غير متوافق مع المستلمين الضعيفة. 20

عند توفير عمليات نقل الدم الصفيحات، هناك خطر غير المتمتعين بالمناعة ريفراكتورينيس-شرط حيث ترفض نقل الدم على التوالي جسم المريض ولا تسمح بجزء كبير من الصفائح الدموية تعميم. 21 , 22 ريفراكتورينيس عدم المناعة يمكن أن يؤدي نقل الدم الضائع، يبقى المضاعفات الصحية للمرضى، والمستشفى الموسعة. 23 نقل الصفائح الدموية التي تحتوي على إعداد كبيرة من المجهرية الدقيقة يمكن أن يكون عاملاً لتطوير ريفراكتورينيس غير المتمتعين بالمناعة في مرضى الأورام أمراض الدم الضعيفة. 20 فمن الممكن إدارة المخزون الصفائح الدموية وفقا لتكوين نقل الدم الصفيحات بفحص المجهرية الدقيقة مما يحد من الخطر للمرضى الضعفاء. ومع ذلك، معظم يمثل الاختبارات تتطلب عزل المجهرية الدقيقة من الصفائح الدموية5،12 أو خلاف ذلك، هي حزب العمل جداً مكثفة24،25 و ولذلك لا يمكن تنفيذه بشكل روتيني في مستشفى بنوك الدم.

ويستخدم الأسلوب الموصوفة هنا نثر الضوء الحيوي (DLS)-المعروف أيضا فوتون الترابط الطيفي أو تشتت الضوء شبه مرنة. على مدى عقود، تشتت الضوء الحيوي على نطاق واسع استخدمت في صناعة المستحضرات الصيدلانية لتوصيف تركيبات العقاقير الاسمافرون أو مستحلبات فيها أحجام الجسيمات في النطاق الفرعية ميكرون. 26 , 27 إلا أن الأدوات التي وضعت لهذه التطبيقات ليست الأمثل لمنتجات الدم الشاشة. تم وضع نظام جديد لدائرة الأراضي والمساحة للتغلب على القيود التقنية وجعل الضوء الحيوي أدى إلى تناثر مفيدة لفحص الصفائح الدموية نقل الدم. 28

تشتت الضوء الديناميكي القياسات تقوم بإلقاء الضوء الجسيمات المعلقة مع ضوء الليزر وتحليل التباين الوقت من شدة الضوء المتناثرة التي نتيجة للجسيمات تتحرك في تعليق. علاوة على ذلك، يستخدم هذا الأسلوب علاقة عكسية بين سرعة الجسيمات وحجم-جزيئات صغيرة التحرك بسرعة وجزيئات كبيرة تتحرك ببطء-تقديم معلومات عن توزيع حجم وتركيزات النسبية لمكونات العينة. استخدام دائرة الأراضي والمساحة، يمثل متوسط يمكن قياسها كمياً radius المحتوى ويعني يمثل العنصر. يتم إعطاء مضمون المجهرية الدقيقة في المنتج الدم ك % النائب على أساس المنطقة في الرسم البياني المقاسة لإنصاف أقطار الجسيمات من 50-550 نانومتر. بينما الجسيمات مع إنصاف أقطار أقل من 50 نانومتر يتم الكشف عنها بواسطة دائرة الأراضي والمساحة وعنها نظام دائرة الأراضي والمساحة، لا يتم تضمينها في % النائب. بدلاً من عزل المجهرية الدقيقة من الصفائح الدموية، يتحدد إلى التباين في عمليات نقل الدم الصفيحات استناداً إلى المحتوى النسبي المجهرية الدقيقة والصفائح الدموية في عينة. في الواقع، يمكن استخدام نسبة الصفائح الدموية ويمثل القمم لحساب تركيز MP مطلقة عندما يعرف عدد الصفائح الدموية. 19

ويوفر نظام DLS مهنيي الرعاية الصحية مع معلومات كمية ونوعية عن المجهرية الدقيقة الموجودة في العينات المستمدة من الدم البشري أو منتجات الدم. والميزة الرئيسية لوصف تقنية DLS أكثر تقنيات بديلة مثل التدفق الخلوي، والمجهر الإلكتروني، نانوحبيبات29 تتبع تحليل30 أو نبض مقاوم الانضباطي الاستشعار31 هو إعداد نموذج: ويمكن قياس مختبرين لمركزات الصفيحات مباشرة دون الحاجة إلى عزل النائب من الصفائح الدموية، وتمييع عينة أو تعديلات أخرى. 9 , 17 وبالإضافة إلى ذلك، DLS هو أسلوب تحجيم مطلقة ولا تعاني من الافتقار إلى معايرة الخرز مع الانكسار المناسبة. 14 , 32

ارتباط بين تنشيط الصفائح الدموية ومحتوى النائب السابق قد تبين بالفحص المجهري33،20 ويمكن أن يستدل من الزيادة في محتوى النائب في الحالات المرضية15،34، 35 , 36 وتحت في المختبر الظروف المعروفة لتنشيط الصفائح الدموية. 19 , 37 , 38 ولكن كذلك الدراسات مطلوبة لنفهم تماما العلاقة بين التنشيط يمثل DLS قياس المحتوى والصفائح الدموية. استناداً إلى معرفتنا الحالية أن تنشيط الصفائح الدموية تحتوي على أرقام عالية من المجهرية الدقيقة، فأفضل استخدام المعاملة العلاجية لنشاط النزيف39من المرضى، في حين يستفيد المرضى أمراض الدم-السرطان من عدم تفعيلها الصفائح الدموية مع عدم وجود أو مستويات منخفضة من المجهرية الدقيقة20. ذكرت مؤخرا أن في المختبر استجابة المانحين الصفائح الدموية لا تؤثر إلى حد كبير بالانتعاش والبقاء على قيد الحياة من هذه الصفائح الدموية في واحدة من عمليات نقل الدم للمرضى مستقرة، ومعظمها غير نزيف الدم-الأورام40 . من هذا الاستنتاج، فإنه يمكن الاستنتاج أن تنشيط الصفائح الدموية التي حددها المحتوى العالي من النائب أيضا ليس لها دور كبير في العلاج الوقائي للمرضى. ومع ذلك، سبب التحديد الضيق للمرضى، هذه الدراسة لم تتناول تأثير العوامل المانحة لمجمع المرضى الذين هم الحموية (استبعادها من الدراسة) وغير مستقرة وتتلقى العديد من أكثر من مجرد نقل الصفائح الدموية. السؤال كيف يمكن الحد من تعقيد هذه الحالات المريض-التي تبشر بالحد من ريفراكتورينيس--لا تزال دون إجابة.

علامات مبكرة لالتهاب41،42،،من4344 والصفائح الدموية التنشيط45 المجهرية الدقيقة ويتم الكشف عن ذلك في كثير من الجهات المانحة العادي. 19 وبالتالي تنشيط الصفائح الدموية والمجهرية الدقيقة موجودة في التبرعات الصفائح الدموية. ومن المعقول افترض أن المرضى الذين يعانون من الحمى، أي نظام المناعة فطرية تشغيلها بالكامل، لا يمكن أن تتسامح التحدي الإضافي المتمثل في نقل الصفائح المنشط. بيد أن الدراسات مطلوبة لإثبات هذه الفرضية. يمثل الفحص يمكن التخفيف من عدم اليقين الحالية حول مضمون الصفائح الدموية نقل الدم والحد من تعقيد معالجة المرضى.

نسبة الصفائح الدموية المنشط لعدم تفعيلها في بنك دم مستشفى يعتمد أساسا على السكان الجهات المانحة، وإلى درجة أقل بكثير على النقل والتشعيع والممرض المنظمة وغيرها من العمليات التي تؤدي إلى زيادة تنشيط الصفائح الدموية في ويركز. 19 أظهرت البيانات الواردة من بنوك الدم في المستشفيات الرئيسية في الولايات المتحدة أن معدل تكوين المخزون الصفائح الدموية هو 49% المنشط و 51% عدم تفعيلها (مجموعة لتنشيط الصفائح الدموية: 38-62 في المائة، والاتصالات الشخصية). إذا كان الدم المنتج مقدمي خدمات أو بنوك الدم في مستشفى تريد أن تعرف كم عدد الصفائح الدموية غير تنشيط وتفعيل المركزات أنها تنتج أو تلقي، وترغب في إدارة قوائم الجرد استناداً إلى تنشيط الصفائح الدموية كما أشار إلى ذلك يمثل المحتوى، وهذا البروتوكول قد يكون مناسباً لهم.

استناداً إلى تكوين الصفائح الدموية بنك دم في مستشفى سوف تكون قادرة على توجيه استخدام الصفائح الدموية عدم تفعيلها، ومتجانسة لأغراض الوقاية وتفعيلها، الصفائح الدموية غير المتجانسة للاستخدام العلاجي. فحص الصفائح الدموية يسمح المستشفيات إلى أقصى حد ممكن استخدام المخزون المتاح الذي يعمل على تحسين رعاية المرضى ويقلل التكلفة. ويهدف هذا البروتوكول للعاملين في المختبرات الذين على دراية بالتعامل مع الأساسية والتلاعب بالدم ومشتقاته.

قدم هنا هو أسلوب فرز المجهرية الدقيقة في عمليات نقل الصفائح الدموية التي يمكن تطبيقها بشكل روتيني لإدارة مخزون بنك الدم في مستشفى حيث يستحسن تحديد المنتج استناداً إلى محتوى يمثل. والهدف من هذا البروتوكول هو الخطوط العريضة للتنفيذ والتقييم لدائرة الأراضي والمساحة لفحص الصفائح المتبرع بها. ويتناول البروتوكول وصف الأسئلة الشائعة من الوصول غير الغازية للعينات، وإدماج التجارب في بنك الدم تدفق العمل، وخصائص الأداء.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أجريت في البروتوكول التالي امتثالا لجميع المبادئ التوجيهية لخدمات الدم الكندية (سي بي إس). المتطوعين أعطت موافقة تلك التبرعات يمكن أن تستخدم للقيام بهذه الدراسات. وتم إعداد مركزات الصفائح الدموية وفقا لإجراءات التشغيل الموحدة شبكة سي بي إس. كل اختبار الأداء الموصوف هنا أجريت في المركز لأبحاث الدم في جامعة كولومبيا البريطانية، فانكوفر، كندا مع موافقة "مجلس أخلاقيات البحوث" المؤسسية.

1-مراقبة نوعية الاختيار

  1. إجراء فحص مراقبة الجودة مرة واحدة على الأقل كل اختبار اليوم للتحقق من التشغيل السليم لنظام دائرة الأراضي والمساحة. قياس الخرز التحكم المتوفرة (دائرة نصف قطرها 50 نانومتر) اتباع إرشادات الشركة المصنعة للاستخدام.
  2. استرداد القنينة التحكم من التخزين البارد، والسماح لمدة 15 دقيقة الحارة إلى درجة حرارة الغرفة. يجب أن حجته الخرز إلى درجة حرارة الغرفة قبل استخدامها.
  3. تشغيل النظام DLS قبل إعداد العينة حتى يتم إكمال الليزر الاحماء فترة 15 دقيقة في الوقت عينة الأولى جاهزة للاختبار.
  4. مرة واحدة قد بدأت وحدة التحكم، اتبع الإرشادات على الشاشة باللمس لتسجيل الدخول وحدد الخيار "اختبار نظام" لقياس العينة التحكم.
  5. دوامة مزيج القنينة ل 10 ق لضمان عينة تمثيلية.
  6. ملء شعري مع الخرز عنصر التحكم باستخدام 100 ميليلتر ماصة حجم ثابت، ونصيحة ماصة والشعرية من مجموعة الاختبار.
  7. عند اكتمال الاختبار اتبع الإرشادات على الشاشة لنظام دائرة الأراضي والمساحة.
    ملاحظة: نتائج اختبار حبة التحكم تلقائياً مقارنة بالمعلومات المخزنة في عنصر تحكم التسمية الباركود حبة وتمريره أو إخطار الفشل فضلا عن نموذج معلومات تظهر على شاشة النظام DLS في نهاية الاختبار.

2-الحصول على عينة من تركيز الصفائح الدموية

ملاحظة: تصف الخطوات العملية لأخذ العينات غير الغازية من نقل الصفائح الدموية إلى DLS التجارب الشعرية لإدارة المخزون الصفائح الدموية الروتينية. ويرد في الشكل 1نظرة عامة. مطلوب اكسسوارات: أنبوب السدادة ومتجرد أنبوب يدوي ومقص ودرع دفقة.

  1. إزالة التركيز الصفائح الدموية من المخزون التي لم يتم اختبارها.
  2. الحصول على عينة المنتج الصفائح الدموية أما من حقيبة أخذ عينات غير مستخدمة (للانتقال إلى الخطوة 2، 3) أو قطعة أنابيب (تابع إلى الخطوة 2، 4 إذا كان فارغاً أو خطوة 2.5 إذا لم فارغة).
    لقطع الحقيبة استخدام أنابيب أو أنابيب الجزء السدادة أنبوب. تعمل السدادة الأنبوب، اتبع إرشادات الشركة المصنعة. بإيجاز، المشبك الأنابيب تكون مختومة في وضع دقيق بين هذين الفكين ساخنة. في جهاز محمول باليد، اضغط الأنابيب المنصهر معا وباردة تحت الضغط العالي أثناء الضغط على الرافعة (المدة المشار إليها بالضوء الأخضر) أسفر عن ختم دائمة، مانعة للتسرب.
  3. أخذ العينات من الحقيبة
    1. مزيج محتوى كيس الصفيحات جيدا من قبل الحركة الأفقية لطيف 5 s (البقشيش من البداية إلى النهاية خمس مرات).
    2. فتح المشبك للحقيبة. الحقيبة يتم إخلاؤها، وسوف تملأ بنفسها. ليس من الضروري ملء الحقيبة تماما كما ستكون مطلوبة لاختبار DLS فقط 100 ميليلتر عينة.
    3. قطع الحقيبة الحقيبة بأنابيب الحرارة الختم الاتصال مع السدادة أنبوب. تابع إلى الخطوة 3.
  4. أخذ عينات من أنابيب فارغة
    1. تحقق من أن الصفائح الدموية كيس تم تخزين أنابيب فارغة وكتلة الأنابيب لا يزال قائما. فحص الأنابيب للتأكد من أنه لا يوجد قدر كبير من التركيز الصفائح الدموية في الأنبوب بصريا. إذا لم تكن فارغة الأنابيب تابع مع الخطوة 2.5.
    2. إغلاق متجرد الأنبوب في الأنبوب كقريبة من كتلة الأنابيب ممكن عن طريق ضغط المقابض للضغط على الأنبوب بين كرات.
    3. تعليق الحقيبة عمودياً والحفاظ على ضغط المقابض متجرد.
    4. بينما الحفاظ متجرد مغلقة، الإفراج عن كتلة الأنابيب.
    5. سحب متجرد أسفل أنابيب فارغة مما يسمح للأنبوب لملء ببطء خلف متجرد ببطء. تستمر حتى المقطع أدناه متجرد أدى إلى تضخم تماما أو حتى متجرد من داخل 1 بوصة من نهاية الأنبوب.
    6. حالما يتم التوصل إلى نقطة التوقف مع متجرد، استخدام السدادة الأنبوب للحرارة ختم الأنبوب 1 بوصة أعلاه متجرد.
    7. الإفراج عن مقابض متجرد أنبوب يدوي.
    8. الحرارة الختم مرة أخرى 1 إلى 2 بوصة فوق الختم السابقة لإنشاء الجزء الاختبار.
    9. قطع الجزء المتعلق باختبار من وحدة الصفيحات. سيتم استخدام هذا الجزء لاختبار دائرة الأراضي والمساحة.
  5. أخذ عينات من أنابيب غير فارغ
    1. شنق الكيس عمودياً والإفراج عن كتلة الأنابيب إذا كان في المكان.
    2. فحص الأنابيب لتحديد ما إذا كانت هناك أية كتل صلبة كبيرة بصريا. في حالة وجود كتل صلبة، ختم أعلاه لهم بأنهم لا يمكن تجريده في الكيس.
    3. إغلاق متجرد الأنبوب في الأنبوب كقرب نهاية الأنبوب ممكن مختومة.
    4. الشريط محتويات الأنبوب داخل الحقيبة بواسطة ضغط المقابض للضغط على الأنبوب بين بكرات، ومع الحفاظ على القوة لقط، نقل متجرد الأنبوب على طول الأنبوب نحو الحقيبة.
    5. إزالة كيس الصفيحات من مأزق معلقة وتخلط بلطف كيس 5 s بترجيح أنه من البداية إلى النهاية خمس مرات مع الحفاظ متجرد مغلقة.
    6. تعليق الحقيبة عمودياً مع إبقاء متجرد مغلقة.
    7. سحب متجرد أسفل أنابيب فارغة، مما يسمح للأنبوب لملء ببطء خلف متجرد ببطء. تستمر حتى المقطع أدناه متجرد أدى إلى تضخم تماما أو حتى متجرد من داخل 1 بوصة من نهاية الأنبوب.
    8. حالما يتم التوصل إلى نقطة التوقف مع متجرد، استخدام السدادة الأنبوب للحرارة ختم الأنبوب 1 بوصة أعلاه متجرد.
    9. الإصدار متجرد.
    10. الحرارة الختم مرة أخرى 1 إلى 2 بوصة فوق الختم السابقة لإنشاء الجزء الاختبار.
    11. قطع وتجاهل الجزء الأخير من الأنابيب.
    12. قطع الجزء المتعلق باختبار من وحدة الصفيحات. سيتم استخدام هذا الجزء لاختبار دائرة الأراضي والمساحة.

3-ملء النموذج إلى DLS التجارب الشعرية

  1. استخدام درع دفقة ومقصات نظيفة وجافة، قطع أحد طرفي الحقيبة الأنابيب أو اختبار الجزء.
    ملاحظة: ينبغي ملء الشعرية المستخدمة لاختبار DLS فورا.
  2. ملء شعري باستخدام أداة أخذ العينات (ماصة حجم ثابت المجمعة 100 ميليلتر ونصيحة ماصة والشعرية) رسم العينة مباشرة من فتح الحقيبة أو الجزء المتعلق بالأنابيب إلى شعري.
  3. ختم الجزء السفلي من شعري شغلها عن طريق دفع الشعرية مليئة بلطف إلى تسرب الأنبوبة الشعرية أثناء تطبيق لمسة رقيقة وبعض الضغط على الدرج.
  4. قطع ميليلتر 100 ثابتة ماصة حجم ونصيحة من الشعرية، ضمان الشعرية تظل راسخة في تسرب الأنبوبة الشعرية.
  5. إزالة شعري من درج تسرب الأنبوبة الشعرية ومسح بواسطة جهاز pad كحول الأيزوبروبيل والتأكد من أنه لا توجد فقاعات الهواء محاصرون بالتحريك بلطف الجزء السفلي من شعري.
  6. مكان شعري في نظام دائرة الأراضي والمساحة.

4-إجراء الاختبار DLS

  1. حدد الخيار اختبار النائب للبدء باختبار DLS جديدة لقياس محتوى يمثل عينة الصفائح الدموية.
  2. أدخل معلومات العينة (التبرع بهوية رقم (إيسبت) وتاريخ انتهاء الصلاحية جمع/إنتاج ورمز المنتج) باستخدام الماسح الضوئي الباركود أو يدوياً.
  3. إذا يتوفر لا رمز المنتج الذي يمكن استخراج المعلومات المتوسطة السوائل نظام دائرة الأراضي والمساحة، وحدد المتوسطة السوائل المناسبة يدوياً (لمعظم الصفائح الدموية مركزات تحديد البلازما ولكن للعينات التي تحتوي على الحل مضافة الصفائح الدموية (PAS)، أدخل النسبة المئوية للبلازما المتبقية).
    ملاحظة: انحراف صغير نظام تقييم الأداء كنسبة مئوية من القيمة الاسمية 65% سوف يؤدي إلى خطأ صغير في اللزوجة (محسوبة تلقائياً بالنظام DLS) الذي يؤثر على الحد الأدنى المحسوب النائب radius لكن لا % النائب.
  4. ضع شعري في النظام DLS عندما أوعز إلى وبدء الاختبار.
  5. عند اكتمال الاختبار، قم بإزالة العينة من حامل الشعرية والتخلص من المواد الاستهلاكية على نحو مناسب وفقا للمبادئ التوجيهية لمرفق. إزالة النموذج من حامل الشعرية والتخلص من المواد الاستهلاكية على نحو مناسب وفقا للمبادئ التوجيهية لمرفق.
  6. علامة كيس الصفيحات مع اللون المقابل إلى النتيجة، على سبيل المثال البرتقال لعدم تفعيلها (متجانسة) مع % MP يساوي أو أقل من 15% والوردي لتنشيط (غير متجانسة) مع % النائب أكثر من 15 في المائة.

figure-protocol-1
الشكل 1 : نظرة عامة على الأسلوب. نظرة عامة حول الخطوات التي يتعين القيام بها لإدارة المخزون الصفائح الدموية الروتينية في مستشفى بنك دم: الحصول على عينة من الصفائح الدموية تركيز, تحميل العينة في شعري لقياس دائرة الأراضي والمساحة، ويؤدون دائرة الأراضي والمساحة بإجراء اختبار لتحديد المجهرية الدقيقة ويمثل المبلغ عنها المحتوى باستخدام تحديد تنشيط الصفائح الدموية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إعداد متوسط الوقت
ويرد في الشكل 1الصفائح الدموية باستخدام نظام DLS عملية الفرز. يتم اختبار الصفائح الدموية مع نظام دائرة الأراضي والمساحة في وقت الاستلام من الموردين الدم. كما هو مفصل في الجدول 1 ، هو وقت إعداد متوسط المستخدمين المدربين s 2 دقيقة 23 أثناء التنظيف وأوقات عمل الاختبار بعد 14 s و 46 ثانية، على التوالي. وفي المجموع، يأخذ المستخدم متوسط 3 دقيقة و 23 ثانية وقت العملي لكل اختبار.

النشاطالوقت نشطسيرا على الأقدام بعيداً من وقت الاختبارالمجموع
إعداد نظام دائرة الأراضي والمساحة14 s
تجميع أداة أخذ العينات28 s
الحصول على الجزء52 s
ملء الشعرية وبدء الاختبار49 s
5 دقيقة
تنظيف14 s
كيس الصفيحات العلامة والمخزون46 s
إجمالي الوقت اللازم كل عينة3 دقيقة 23 ثانية5 دقيقة8 دقيقة 23 ثانية

الجدول 1: توزيع وقت الاختبار النشطة. اختبار نفسه اختبار بعيداً مع متوسط مدة 5 دقائق سيرا على الأقدام. للمستخدم العادي يستغرق 3 دقيقة 23 ثانية لإعداد نظام دائرة الأراضي والمساحة لاختبار والحصول على واختبار عينة عقب هذا البروتوكول والوسم كيس الصفيحات.

الدقة
تم تقييم دقة النظام DLS المستويات يمثل 3، 0-7% و % 12-25 و 28-75%. هو النطاق ذات الصلة سريرياً % MP 3-75%. مشغلي هما اختبار عينات مراقبة منخفضة ومتوسطة وعالية لمدة 16 يوما التشغيل على نظامين DLS بالتوازي. اختبار عينات في التكرار، ولكن في ترتيب عشوائي في كل يوم الاختبار.

ويلخص الجدول 2 دقة القياسات DLS "المجهرية الدقيقة في المائة" (% MP) بالنسبة للصفائح الدموية داخل الجهاز.

يمثل المحتوى
منخفضمتوسطةعالية
يعني النائب % (%)4.419.553.8
الانحراف المعياري (%)1.82.65.8
السيرة الذاتية (%)40.413.210.6

الجدول 2: الدقة داخل الجهاز من "المجهرية الدقيقة في المائة" (% MP). في محتوى منخفض جداً يمثل الصفائح الصغيرة يمكن أن تسهم % زيادة MP مما أدى إلى تقلب ليمثل انخفاض محتوى عينات.

ويبين الجدول 3 دقة القياسات DLS لدائرة نصف قطرها يمثل متوسط بين 50-550 نيوتن متر داخل الجهاز.

يمثل المحتوى
منخفضمتوسطةعالية
يعني نصف قطرها (nm)331161188
الانحراف المعياري (مم)1334125
السيرة الذاتية (%)40.125.213.5

الجدول 3: الدقة داخل الجهاز يمثل نصف قطرها. في يمثل منخفضة جداً قد تسهم الصفائح الصغيرة المحتوى "المجهرية الدقيقة في المائة" (% MP) مما أدى إلى زيادة تقلب ليمثل انخفاض محتوى عينات.

ويبين الجدول 4 إمكانية تكرار نتائج القياسات DLS "المجهرية الدقيقة في المائة" (% MP).

يمثل المحتوى
منخفضمتوسطةعالية
يعني النائب % (%)4.429.253.6
إمكانية تكرار نتائج (%)1.52.35
السيرة الذاتية (%)3511.89.4

الجدول 4: إمكانية تكرار نتائج القياسات تشتت الضوء الحيوي (DLS) "المجهرية الدقيقة في المائة" (% MP).

الخطي
يظهر الشكل 2 أن النتائج DLS الخطية، أيتناسب خط مستقيم فيما يتعلق بالقيم المعينة للعينات. تم إعداد العينات السبعة مع اختلاف يمثل المحتوى. وأعدت عينات مع عالية (7من بروتوكول مونتريال) والمحتوى المنخفض من يمثل (1من بروتوكول مونتريال) ومطابقة تركيز الصفائح الدموية ومختلطة في نسب مختلفة لإنشاء عينات متوسطة (النائبالعاشر). اختبار عينات مع التدفق الخلوي كما هو موضح سابقا19 ودائرة الأراضي والمساحة، وتم رسم نتائج % النائب في كل تركيز الإدخال والإخراج. تم العثور على معامل التحديد أن يكون 0.985. وترد أمثلة لرسوم بيانية DLS للمحتوى يمثل منخفضة وعالية في الشكل 3ألف. وأكدت نتائج DLS التدفق الخلوي (الشكل 3ب).

figure-results-1
الشكل 2 : مقارنة بين التدفق الخلوي ونتائج DLS. العلاقة الخطية بين % MP يحدده التدفق الخلوي (مدخلات) ودائرة الأراضي والمساحة (إخراج)، تظهر البيانات DLS الأصلي من عينتين تميزت ○ الرمز مفتوحة في الشكل 3. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-results-2
الشكل 3 : يمثل المحتوى للتفريق بين الصفائح الدموية غير تنشيط وتفعيل. (أ) النتائج DLS المحتوى النائب في تنشيط الصفائح الدموية (خط متقطع) كان 57 في المائة مقارنة بنسبة 4 في المائة في عدم تنشيط الصفائح الدموية (خط متصل). وأجريت اختبارات في قياس درجة حرارة 37 درجة مئوية، إعداد لزوجة البلازما من 1.06 x10-3 Pa·s، وإعدادات كثافة الإجمالي بين 200-600 كيلو هرتز. (ب) التدفق الخلوي النتائج (كما هو موضح سابقا19) عينات نفس كما هو موضح في (أ)؛ في الرسوم البيانية المبعثرة إلى الأمام P1 و P2 تمثل بوابات النائب والصفائح الدموية، على التوالي؛ لتنشيط الصفائح الدموية سقط (يسار) 76% من أحداث بوابة النائب مقارنة بنسبة 6 في المائة لعدم تنشيط الصفائح الدموية (يمين). وتقترح خط الانحدار الخطي مساهمة نسبي مستمر من الضوضاء الخلفية إلى % النائب بالتدفق الخلوي مما يؤدي إلى نتائج دائماً أعلى. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

خصوصية/التدخل
المنظمة الدولية "التوحيد القياسي" (ISO) يعرف خصوصية التحليلي قدرة إجراء قياس لكشف أو قياس عينتان فقط بينما هناك كميات أخرى موجودة في العينة. يمكن أن تتأثر خصوصية يمثل الفحص التحليلي بخلايا الدم الحمراء (RBC). تدابير DLS المحتوى النائب بالنسبة إلى محتوى الصفائح الدموية. قد تتداخل ربك لأنه يتم تضمين مساهمة نثر ربك في مساهمة نثر الصفائح الدموية، تخفيض المساهمة النسبية للنائب. توجد حدود تنظيمية للمحتوى المسموح به ربك في الدم ومشتقاته؛ تحويل محافظ على عتبة الذي أوصت به AABB لتركيز ربك المسموح بها في الصفيحات مركزات-2 مل من وجبات ربك في وحدة واحدة من الصفائح الدموية أدت إلى 8.0 x1010 خلايا/لتر (الافتراضات: حجم ربك هو 8.5 x10-14لتر، الهيماتوكريت ربك معبأة هو 68%، حجم وحدة الصفيحات 200 مل). عن تركيزات ربك بقايا في المنتجات المختلفة بدون هذه العتبة46.

ثلاث جهات مانحة مختلفة التبرع بالصفائح الدموية وخلايا الدم الحمراء (RBC) في اليومين مختلفة، كمؤهلة، لثلاث تجارب مستقلة. كان مضمون ربك الأولية في مركزات الصفائح الدموية (المرجع عينة) 0.05-0.15 x109 خلايا/لتر كما يحدد مع هيموسيتوميتير. خمس عينات إضافية تم إنشاؤها بواسطة النتوءات في معروف كميات من ربك إلى مختبرين لتركيز الصفائح الدموية؛ المستويات المستهدفة ربك في هذه العينات كانت 1.0 و 5.0، 10، 40 و 80 x109 خلايا/ل.

عتبة تدخل خلايا الدم الحمراء وكان ما يقرب من 1.0 x1010 خلايا/لتر (الشكل 4)، الذي يرتبط أيضا بالمستوى الذي كان وجود خلايا الدم الحمراء وضوحاً بصريا (الشكل 5). فوق هذا المستوى، % النائب كان التقليل مما يعني أن في بصريا الأحمر العينات، التي تتضمن ربك بدلاً من محتوى الهيموغلوبين، يمثل المبلغ عنها سوف تكون منخفضة جداً.

figure-results-3
الشكل 4 : العلاقة الخطية بين % MP (DLS) و "تركيز ربك" (خلايا/لتر)- زيادة تركيزات ربك من 0.1 x109، 1.0 x109، 5.0 x109، 1.0 x1010، 4.0 x1010، و 8.0 x10 خلايا10 /لتر (من اليسار إلى اليمين) من 3 التجارب المستقلة (تجربة ○ 1، تجربة ● 2، تجربة □ 3، خطوط الانحدار الخطي وترد لكل تجربة). أعلاه 1.0 x1010 ربك/لتر يؤدي إلى التقليل % MP. ويبين الشكل 5المظهر المرئي للعينات المحتوية على ربك. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-results-4
الشكل 5 : المظهر المرئي لربك تتضمن عينات. احمرار الصفيحات العينات التي تحتوي على تركزات ربك من 0.1 x109، 1.0 x109، 5.0 x109، 1.0 x1010، 4.0 x1010، و 8.0 x10 خلايا10 /لتر من اليسار إلى اليمين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

دقة
يتم تعريف دقة كالفرق بين نتيجة قياس واحد وقيمة كمية حقيقية المخصصة للعينة. ويشمل هذا الخطأ قياس مكون منتظمة المقدرة بتحيز القياس ومكون عشوائي المقدر بانحراف معياري. وهكذا، دقة نتيجة القياس مزيج من صدق ودقة.

واستخدمت لتحديد دقة الاختبار DLS حبة قياسية. وجرى تقييم دقة في تركيزات اثنين داخل نطاق ذات الصلة سريرياً المقايسة MP 3-75%. واستخدمت الخلائط حبة مرجع تحضير عينات تركيزات معروفة لدى مرجع الخرز الحجم المعروفة وتركيز. ونتيجة لذلك، يمكن أن تكون مختلطة الخرز مرجع للحصول على عينات مع أحجام الجسيمات المرجوة وتركيزات.

واستخدمت الخرز البوليسترين القياسية مع قطرها 125 نانومتر لتمثيل المجهرية الدقيقة واستخدمت الخرز مع 1.5 ميكرومتر radius لتمثيل الصفائح الدموية. وجرى تقييم دقة التحليل يمثل مع الخلائط حبة من محتوى النائب حوالي 20% و 50%. تمت مقارنة دقة إنصاف أقطار الجسيمات المقيسة لإنصاف أقطار الجسيمات الموثقة المتعلقة "شهادات تحليل" الخرز المرجعية كما هو موضح في الجدول 5.

125 نانومتر الخرز1.5 ميكرومتر الخرز
شهادة التحليلشهادة التحليل
النائب 20%النائب 50%النائب 20%النائب 50%
يعني نصف قطرها122.0113.8124.41.51.61.60
الانحراف المعياري4.52.833.60.0350.060.07
السيرة الذاتية3.60%2.48 في المائة2.89%2.20%3.74%4.05%
دقة6.70%2.00%6.50%6.30%

الجدول 5: دقة القياسات تشتت الضوء الحيوي (DLS). مقارنة حجم ل DLS النتائج ضد شهادة تحليل لحبات 125 radius نيوتن متر ونصف قطرها 1.5 ميكرومتر في الخلائط.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويصف هذا البروتوكول طريقة تشتت ضوء ديناميكي ليمثل الفحص الأمثل لتركيزات الجسيمات العالية الموجودة في العينات البيولوجية مثل الصفائح الدموية ويركز. يتم توحيد أسلوب DLS أصلاً لقياس الحجم بدقة. التركيز النسبي المجهرية الدقيقة يمكن تحويلها إلى بتركيز مطلق إذا كان من المعروف أن تركيز الصفائح الدموية ومنطقة الذروة الصفائح الدموية كذروة الإشارة19. كالصفائح الدموية تركيزات يتم عادة الحصول عليها مع تحليل الدم أو تدفق سيتوميتيرس يمكن اعتبار هذه الأساليب التكنولوجيات مصاحب لدائرة الأراضي والمساحة.

وظائف النظام DLS المؤمن عليه عن طريق تشغيل مراقبة الخرز بانتظام. ويمكن قياس الماء المقطر للتحقق من أن الضوضاء الخلفية الحد الأدنى. يمكن تحليل المعايير المتاحة تجارياً الصفائح الدموية كعناصر سلبية النائب، وبعد إضافة 125 نانومتر radius الخرز، كعناصر إيجابية النائب. حدود تركيزات النطاق البيولوجي للنائب من الاهتمام، الإجراءات عملية وسريعة لتنفيذ كجزء من روتين بنك الدم.

بدلاً من التدفق الخلوي، هذا الأسلوب لا يستند مقارنة كثافات تشتت الجسيمات ولكن بدلاً من ذلك سرعة بهم البراونية. وهكذا، اكسوسوميس يمكن أيضا الكشف عن على الرغم من صغر حجمها، وترد بشكل منفصل من النائب.

صممت كأداة لفحص، والقيود المفروضة على هذه الطريقة تتعلق بقدرته على التفريق بين أنواع مختلفة من المجهرية الدقيقة. وهناك مجال محتمل للتحسين إذا استخدمت الخطوات عزل إضافية؛ ويمكن اختبار العينات قبل وبعد إزالة المجهرية الدقيقة من خلال جسم معين إلى جانب التقاط حبة المغناطيسية. وبالإضافة إلى ذلك، أنه لا يمكن افتراض أن كل كشف المجهرية الدقيقة هي الخلية المشتقة لأنه سيبلغ chylomicrons شكلت في الدهون47،48 والصغيرة البكتريا أو الفيروسات6 أيضا في نطاق يمثل. ومع ذلك، توجد ضمانات أخرى داخل إمدادات الدم لتجنب شدة ليبيميك أو الصفائح الدموية الملوثة لإدخال مخزون بنك الدم في مستشفى.

اختيار تخثر الدم في العينة يؤثر في مدى تنشيط الصفائح الدموية ومن ثم النائب المحتوى49. لإجراء مقارنات لمنتجات مختلفة يلزم هذا العامل النظر فيها. وعلاوة على ذلك، تبادل البلازما مع وسائل الإعلام الحرة تعليق النائب مثل نظام تقييم الأداء سوف تؤثر على محتوى النائب والحد الأدنى لتحديد التباين-إلا إذا ترك حوالي ثلث محتوى النائب الأصلي داخل البلازما المتبقية في التركيز تبعاً لذلك سوف تشير إلى الحد الأدنى من المحتوى النائب على نفس المستوى من تنشيط الصفائح الدموية كما هو الحال في بلازما 100%. النائب النسبة المئوية هو مضمون بروتوكول مونتريال بالنسبة للصفائح الدموية. وذكر سابقا أن الصفيحات متوسط لمنتج نظام تقييم الأداء كان أقل حيث أن % متوسط النائب كان لا يزال 9.5%19. تم حاليا تعيين العتبة % MP للصفائح الدموية PAS مرخصة في الولايات المتحدة إلى 10%.

بينما هو المصدر الأساسي للنائب في مركزات الصفيحات الجهة المانحة، العمليات التي تسبب الإجهاد للصفائح الدموية سوف زيادة مستوى النائب تبعاً لقابلية الصفائح الدموية التأكيد-إذا كان الفعل عالية يتم تنشيط الصفائح الدموية، قاصر عوامل الإجهاد مثل تمديد مدة الصلاحية، المنظمة الممرض، الغسيل، التشعيع أو النقل مسافات طويلة يمكن أن يؤدي إلى زيادة كبيرة في محتوى MP. أيا من هذه الضغوطات قد ثبت أن تؤثر تأثيراً كبيرا على الصفائح الدموية متجانسة، وعدم تفعيلها19. وبالإضافة إلى ذلك، الاهتمام ينبغي أن تدفع إلى الإمكانات لإجراء تغييرات في تكوين نموذج داخل شعري إذا لم يكن اختبار مباشرة بعد التحضير (الانتهاء من الخطوة 3 من هذا البروتوكول).

هذا البروتوكول ينصب التركيز على تحديد التكوين للجسيمات الموجودة في الصفائح الدموية نقل الدم واستخدام المجهرية الدقيقة كالمؤشرات الحيوية لتنشيط الصفائح الدموية. نقل الصفيحات تنشيط أو يوصف بأنه أما عدم تفعيلها (برتقالي) (الوردي) استناداً إلى عتبة يمثل نسبة 15 في المائة. عتبة 15% MP للصفائح الدموية في بلازما 100% تجريبية مصممة حسبالمتوسط 66 المئوية من مواقع متعددة .

هدف إدارة المخزون الصفيحات استناداً إلى روتين يمثل الفحص مع دائرة الأراضي والمساحة تحسين المريض كفاءة تكلفة الرعاية ومحرك الأقراص عن طريق منع الصفيحات المناعية غير ريفراكتورينيس. تنفيذ نظام دائرة الأراضي والمساحة لفحص أكياس الصفيحات سوف تمكن المستخدم من توجيه غير تنشيط الصفائح الدموية للمريض من السكان الأكثر عرضه لتطوير ريفراكتورينيس الصفائح الدموية.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نظم الإدارة البيئية هو مؤسس شركة تكنولوجيا لايتينتيجرا، شركة الأجهزة طبية لتطوير نظام ثرومبولوكس يمثل واختبار نوعية الصفائح الدموية. جميع مؤلفين آخرين هم موظفون في تكنولوجيا لايتينتيجرا. وتشرف شركة تكنولوجيا لايتينتيجرا الإنتاج وحرية الوصول إلى هذه المادة

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونشكر المتبرعين بالدم والموظفين في "المركز الكندي لشبكة خدمات الدم" "تطبيق التنمية" لجمع وإنتاج الصفيحات الوحدات المستخدمة في هذه الدراسة. ونعترف "المؤسسة الكندية" للابتكار ومايكل سميث مؤسسة "البحوث الصحية" لتمويل البنية التحتية في "مركز جامعة كولومبيا البريطانية" "أبحاث الدم". تم توفير التمويل للمنشور بشركة تكنولوجيا لايتينتيجرا، الشركة المصنعة ثرومبولوكس.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ThromboLUX-MLightIntegra Technology Inc. LPN120DLS نظام
ThromboSight SoftwareLightIntegra Technology Inc. LPN124DLS تحليل
البرمجيات الشعيرات الدمويةLightIntegra Technology Inc. (المدرجة في مجموعة الاختبار, البائع Optinova MLE)LPN065مخصص مقذوف غير تنشيط, أنبوب بلاستيكي غير منكسد ثنائي, تفتيش وإشعاع
MiniPet LightIntegra Technology Inc. (مضمنة في مجموعة الاختبار ، البائع TriContinent Scientific)LPN082100 & micro ؛ L ماصة ذات حجم ثابت لأخذ العينات   
MicroFlex 1-200 & L نصائح الماصةLightIntegra Technology Inc. (مضمنة في مجموعة الاختبار ، البائع ESBE Scientific)LPN080نصائح الماصة لأخذ العينات
Critoseal   ؛LightIntegra Technology Inc. (مضمنة في مجموعة الاختبار ، البائع Fisher Scientific)LPN075Capiley Tube Sealant
Dukal Alcohol Pad أو ما يعادلهاLightIntegra Technology Inc. (مضمنة في مجموعة الاختبار ، البائع Dukal Corp.)وسادة الأيزوبروبيل LPN085(مشبعة بكحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪)
حبات التحكم ، دائرة نصف قطرها 50 نانومترLightIntegra Technology Inc. (مضمنة في مجموعة الاختبار ، البائع PolySciences Inc.)LPN128التحكم الخرز
Microbead NIST معيار حجم الجسيمات التي يمكن تتبعها ، 3 & مشركة PolySciences Inc.64060الميكروبيدات القياسية: 1.5 & م نصف قطرها حبات البوليسترين. النطاق 1.43-1.58 & m; 1٪ معلقات المواد الصلبة في الماء منزوع الأيونات
معيار حجم الجسيمات النانوية NIST ، 250 نانومترPolySciences Inc.64014-15حبات نانوية قياسية: نصف قطر 125 نانومتر حبات البوليسترين ؛ النطاق 120 - 130 نانومتر ؛ 1٪ معلقات المواد الصلبة في المياه المنزوعة الأيونة
Genesis BPS RapidSeal II أو ما يعادلهامن Genesis BPS428-SE640أنبوب السدادة
Fresenius Kabi Tube Stripper أو ما يعادلهاFresenius Kabi6R4452متجرد الأنبوب اليدوي
Biohazard Shield - عداد الخلية أو ما يعادلهCardinalHealthS1389-75Splash Shield
Corning LSE Vortex Mixer أو ما يعادلهمن خلاط Corning Incorporated6775Vortex
FACSCanto II Flow cytometer  مع إصدار برنامج FACSDiva الإصدار 6.1.3 أو ما يعادلهBD Biosciences338960مقياس التدفق الخلوي

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dinkla, S., et al. Platelet microparticles inhibit IL-17 production by regulatory T cells through P-selectin. Blood. 127 (16), 1976-1986 (2016).
  2. Yin, W., Ghebrehiwet, B., Peerschke, E. I. Expression of complement components and inhibitors on platelet microparticles. Platelets. 19 (3), 225-233 (2008).
  3. Aatonen, M., Gronholm, M., Siljander, P. R. Platelet-derived microvesicles: multitalented participants in intercellular communication. Semin Thromb Hemost. 38 (1), 102-113 (2012).
  4. Suades, R., Padro, T., Alonso, R., Mata, P., Badimon, L. High levels of TSP1+/CD142+ platelet-derived microparticles characterise young patients with high cardiovascular risk and subclinical atherosclerosis. Thromb Haemost. 114 (6), 1310-1321 (2015).
  5. Obeid, S., et al. Development of a NanoBioAnalytical platform for "on-chip" qualification and quantification of platelet-derived microparticles. Biosens Bioelectron. 93, 250-259 (2017).
  6. Witwer, K. W., et al. Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research. J Extracell Vesicles. 2, (2013).
  7. Lacroix, R., Robert, S., Poncelet, P., Dignat-George, F. Overcoming Limitations of Microparticle Measurement by Flow Cytometry. Semin Thromb Hemost. 36 (8), 807-818 (2010).
  8. Lacroix, R., et al. Standardization of platelet-derived microparticle enumeration by flow cytometry with calibrated beads: results of the International Society on Thrombosis and Haemostasis SSC Collaborative workshop. J Thromb Haemost. 8 (11), 2571-2574 (2010).
  9. Shah, M. D., Bergeron, A. L., Dong, J. F., Lopez, J. A. Flow cytometric measurement of microparticles: pitfalls and protocol modifications. Platelets. 19 (5), 365-372 (2008).
  10. Nolan, J. P., Jones, J. C. Detection of platelet vesicles by flow cytometry. Platelets. 28 (3), 256-262 (2017).
  11. Connor, D. E., Exner, T., Ma, D. D., Joseph, J. E. The majority of circulating platelet-derived microparticles fail to bind annexin V, lack phospholipid-dependent procoagulant activity and demonstrate greater expression of glycoprotein Ib. Thromb Haemost. 103 (5), 1044-1052 (2010).
  12. Inglis, H., Norris, P., Danesh, A. Techniques for the analysis of extracellular vesicles using flow cytometry. J Vis Exp. (97), (2015).
  13. Inglis, H. C., et al. Techniques to improve detection and analysis of extracellular vesicles using flow cytometry. Cytometry A. 87 (11), 1052-1063 (2015).
  14. van der Pol, E., Coumans, F., Varga, Z., Krumrey, M., Nieuwland, R. Innovation in detection of microparticles and exosomes. J Thromb Haemost. 11, Suppl 1 36-45 (2013).
  15. Boudreau, L. H., et al. Platelets release mitochondria serving as substrate for bactericidal group IIA-secreted phospholipase A2 to promote inflammation. Blood. 124 (14), 2173-2183 (2014).
  16. Rousseau, M., et al. Detection and quantification of microparticles from different cellular lineages using flow cytometry. Evaluation of the impact of secreted phospholipase A2 on microparticle assessment. PLoS One. 10 (1), 0116812(2015).
  17. Groot Kormelink, T., et al. Prerequisites for the analysis and sorting of extracellular vesicle subpopulations by high-resolution flow cytometry. Cytometry A. 89 (2), 135-147 (2016).
  18. van der Vlist, E. J., Nolte-'t Hoen, E. N., Stoorvogel, W., Arkesteijn, G. J., Wauben, M. H. Fluorescent labeling of nano-sized vesicles released by cells and subsequent quantitative and qualitative analysis by high-resolution flow cytometry. Nat Protoc. 7 (7), 1311-1326 (2012).
  19. Maurer-Spurej, E., Larsen, R., Labrie, A., Heaton, A., Chipperfield, K. Microparticle content of platelet concentrates is predicted by donor microparticles and is altered by production methods and stress. Transfus Apher Sci. 55 (1), 35-43 (2016).
  20. Maurer-Spurej, E., et al. Platelet quality measured with dynamic light scattering correlates with transfusion outcome in hematologic malignancies. Transfusion. 49 (11), 2276-2284 (2009).
  21. Hess, J. R., et al. Clinical and laboratory correlates of platelet alloimmunization and refractoriness in the PLADO trial. Vox Sang. 111 (3), 281-291 (2016).
  22. Doughty, H. A., et al. Relative importance of immune and non-immune causes of platelet refractoriness. Vox Sang. 66 (3), 200-205 (1994).
  23. Vassallo, R. R., Norris, P. J. Can we "terminate" alloimmune platelet transfusion refractoriness. Transfusion. 56 (1), 19-22 (2016).
  24. Anderson, W., Kozak, D., Coleman, V. A., Jaemting, A. K., Trau, M. A comparative study of submicron particle sizing platforms: Accuracy, precision and resolution analysis of polydisperse particle size distributions. J colloid inter sci. 405, 322-330 (2013).
  25. Gyoergy, B., et al. Improved Flow Cytometric Assessment Reveals Distinct Microvesicle (Cell-Derived Microparticle) Signatures in Joint Diseases. Plos One. 7 (11), 49726-49726 (2012).
  26. Urey, C., et al. Combining gas-phase electrophoretic mobility molecular analysis (GEMMA), light scattering, field flow fractionation and cryo electron microscopy in a multidimensional approach to characterize liposomal carrier vesicles. Int J Pharm. 513 (1-2), 309-318 (2016).
  27. Mohr, K., et al. Evaluation of multifunctional liposomes in human blood serum by light scattering. Langmuir. 30 (49), 14954-14962 (2014).
  28. Maurer-Spurej, E., Brown, K., Labrie, A., Marziali, A., Glatter, O. Portable dynamic light scattering instrument and method for the measurement of blood platelet suspensions. Physics in Medicine and Biology. 51 (15), 3747-3758 (2006).
  29. Arraud, N., et al. Extracellular vesicles from blood plasma: determination of their morphology, size, phenotype and concentration. J Thromb Haemost. 12 (5), 614-627 (2014).
  30. Ambrose, A. R., Alsahli, M. A., Kurmani, S. A., Goodall, A. H. Comparison of the release of microRNAs and extracellular vesicles from platelets in response to different agonists. Platelets. , 1-9 (2017).
  31. Buzas, E. I., Gardiner, C., Lee, C., Smith, Z. J. Single particle analysis: Methods for detection of platelet extracellular vesicles in suspension (excluding flow cytometry). Platelets. 28 (3), 249-255 (2017).
  32. Stoner, S. A., et al. High sensitivity flow cytometry of membrane vesicles. Cytometry A. 89 (2), 196-206 (2016).
  33. Labrie, A., Marshall, A., Bedi, H., Maurer-Spurej, E. Characterization of platelet concentrates using dynamic light scattering. Transfus Med Hemother. 40 (2), 93-100 (2013).
  34. Ueba, T., et al. Plasma level of platelet-derived microparticles is associated with coronary heart disease risk score in healthy men. J Atheroscler Thromb. 17 (4), 342-349 (2010).
  35. Badimon, L., Suades, R., Fuentes, E., Palomo, I., Padro, T. Role of Platelet-Derived Microvesicles As Crosstalk Mediators in Atherothrombosis and Future Pharmacology Targets: A Link between Inflammation, Atherosclerosis, and Thrombosis. Front Pharmacol. 7, 293(2016).
  36. Berezin, A. E., Kremzer, A. A., Berezina, T. A., Martovitskaya, Y. V. The pattern of circulating microparticles in patients with diabetes mellitus with asymptomatic atherosclerosis. Acta Clin Belg. 71 (1), 38-45 (2016).
  37. Marcoux, G., et al. Microparticle and mitochondrial release during extended storage of different types of platelet concentrates. Platelets. 28 (3), 272-280 (2017).
  38. Yanez-Mo, M., et al. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles. 4, 27066(2015).
  39. Reddoch, K. M., et al. Hemostatic function of apheresis platelets stored at 4 degrees C and 22 degrees C. Shock. 41, Suppl 1 54-61 (2014).
  40. Kelly, A. M., et al. The effect of variation in donor platelet function on transfusion outcome: a semirandomized controlled trial. Blood. 130 (2), 214-220 (2017).
  41. Peerschke, E. I., Yin, W., Ghebrehiwet, B. Platelet mediated complement activation. Adv Exp Med Biol. 632, 81-91 (2008).
  42. Redman, C. W., Sargent, I. L. Microparticles and immunomodulation in pregnancy and pre-eclampsia. J Reprod Immunol. 76 (1-2), 61-67 (2007).
  43. Ripoche, J. Blood platelets and inflammation: their relationship with liver and digestive diseases. Clin Res Hepatol Gastroenterol. 35 (5), 353-357 (2011).
  44. Ling, Z. L., Combes, V., Grau, G. E., King, N. J. Microparticles as immune regulators in infectious disease - an opinion. Front Immunol. 2, 67(2011).
  45. Melki, I., Tessandier, N., Zufferey, A., Boilard, E. Platelet microvesicles in health and disease. Platelets. 28 (3), 214-221 (2017).
  46. Culibrk, B., et al. Application of the ADVIA cerebrospinal fluid assay to count residual red blood cells in blood components. Vox Sang. 103 (3), 186-193 (2012).
  47. Connolly, K. D., et al. Lipoprotein-apheresis reduces circulating microparticles in individuals with familial hypercholesterolemia. J Lipid Res. 55 (10), 2064-2072 (2014).
  48. Mork, M., et al. Prospects and limitations of antibody-mediated clearing of lipoproteins from blood plasma prior to nanoparticle tracking analysis of extracellular vesicles. J Extracell Vesicles. 6 (1), 1308779(2017).
  49. Raczat, T., et al. The influence of four different anticoagulants on dynamic light scattering of platelets. Vox Sang. 107 (2), 196-199 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microparticle DetectionPlatelet TransfusionsDynamic Light ScatteringPlatelet ActivationBlood Bank ScreeningCapillary SamplingMicroparticle ContentPlatelet InventoryTransfusion MedicineDLS Testing

Related Articles