يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التدفق الخلوي لتقدير لوكيميا الخلايا الجذعية في الابتدائي سرطان الدم النقوي الحاد والمريض-المشتقة-تكثيفها، في التشخيص والمتابعة حتى

14.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/56976

⸱

مارس 26, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratoire d’hématologie, CHU Lille, 2Univ. Lille, Inserm, CHU Lille, UMR-S 1172 - JPArc - Centre de Recherche Jean-Pierre AUBERT Neurosciences et Cancer, 3Service d’hématologie pédiatrique, hôpital Jeanne de Flandre, CHU Lille, 4Laboratoire d’hématologie CH Lyon Sud, 5Service des Maladies du Sang, hôpital Claude Huriez, CHU Lille

في هذه المقالة

ملخص

أننا مخطط بروتوكول للكشف عن التعبير المتزامن للوكيميا الخلايا الجذعية علامات على الخلايا الأولية من سرطان الدم النقوي الحاد بالتدفق الخلوي. نعرض كيفية قياس الثلاث السلف السكان وعدد سكانها احلركه المفترضة مع زيادة درجة من النضج. نحن أكدت وجود هؤلاء السكان في المقابل المريض-المشتقة-تكثيفها.

الملخص

سرطان الدم النقوي الحاد (مكافحة غسل الأموال) هو غير المتجانسة، وإذا لم تعالج، المرض المميت. هو السبب الأكثر شيوعاً للوفيات المرتبطة بسرطان الدم لدى البالغين. في البداية، مكافحة غسل الأموال هو مرض خلايا الجذعية المكونة للدم (HSC) تتميز بإلقاء القبض على التمايز، تراكم اللاحقة من اللوكيميا انفجار الخلايا، وانخفاض إنتاج عناصر المكونة للدم الوظيفية. عدم التجانس ويمتد إلى وجود الخلايا الجذعية اللوكيميا (المهارات)، مع هذه الخلية الحيوية المقصورة المتطورة للتغلب على الضغوط المختلفة اختيار المفروضة أثناء تطور سرطان الدم والعلاج. لتعريف السكان احلركه، يسمح إضافة CD90 و CD45RA بالتمييز هسكس الطبيعي وفروعه multipotent داخل المقصورة الخلايا CD34 + CD38. هنا، فإننا مخطط بروتوكولا للكشف عن التعبير المتزامن لعدة علامات احلركه المفترضة (CD34، CD38، CD45RA، CD90) في الخلايا الانفجار الأساسي للبشرية في مكافحة غسل الأموال بتدفق مولتيباراميتريك الخلوي. وعلاوة على ذلك، نعرض كيفية قياس الثلاث السلف السكان وعدد سكانها احلركه المفترضة مع زيادة درجة من النضج. نحن أكدت وجود هؤلاء السكان في المقابل المريض-المشتقة-تكثيفها. يمكن استخدام هذا الأسلوب للكشف والتحديد الكمي للمهارات المفترضة للمتابعة السريرية لاستجابة العلاج الكيميائي (أي.، الحد الأدنى من الأمراض المتبقية)، كما احلركه المتبقية قد تسبب الانتكاس مكافحة غسل الأموال.

المقدمة

سرطان الدم النقوي الحاد (مكافحة غسل الأموال) هو السبب الأكثر شيوعاً للوفيات المرتبطة بسرطان الدم. في البداية، مكافحة غسل الأموال هو مرض الاستنساخ من الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSC) تتميز بإلقاء القبض على التمايز، تراكم اللاحقة لانفجار الخلايا، وانخفاض إنتاج عناصر المكونة للدم الوظيفية. في الآونة الأخيرة، أنشئت الاستنساخ تنافر انفجار الخلية أساسا باستخدام استراتيجيات التسلسل (خ ع) الجيل المقبل، وتشير إلى وجود تطور الاستنساخ داخل ورم الخلايا1.

عدم تجانس يمتد إلى وجود الخلايا الجذعية ليوكيميك (المهارات). هو الافتراض بأن تتطور هذه المقصورة الخلية الحيوية للتغلب على الضغوط التحديد المختلفة المفروضة أثناء تطور سرطان الدم والعلاج. ولذلك يفترض أن تكون مقاومة لنظم العلاج الكيميائي الحالي والتوسط في انتكاس المرض، مع آثار عميقة السريرية2احلركه. وقد وصف علامات مختلفة لتوصيف احلركه مثل CD1233, CLL-14، CD975 أو تيم-36. يعتبر الإثراء احلركه7 CD34 + CD38-حجرة الانفجار الخلايا بل يشمل أيضا HSC العادي. CD90 و CD45RA التعبير ينطبق على CD34 + CD38-المقصورة (P6) (الشكل 1) تصاريح لفصل عدة مراحل من السلائف المكونة للدم العادي والخبيث8. على وجه التحديد، العادي CD34 + CD38-CD90 + CD45RA-هسكس, multipotent موروث (MPP) مثل CD34 + CD38-CD90dimCD45RA-الخلايا CD34 + CD38-CD90-CD45RA + يمكن تحديد الخلايا اللمفاوية أعدادا السلف multipotent (لمب) في معظم مكافحة غسل الأموال الحالات8 ،9. الأسفار متوسط الكثافة (MFI) CD38 مهم بشكل خاص النظر داخل المقصورة الخلايا CD34 +. نظراً لكثافة CD38 يحدد ثلاث مقصورات خلية جديدة منها: CD38 السلبية (P6)، CD38 خافت (P7) ومشرق CD38 (P8) (الشكل 1). وقد يحدد مؤسسة مونتانيار CD38 استخدام أما هيماتوجونيس و/أو خلايا البلازما كرقابة داخلية إيجابية كما أعرب هذه الخلايا بشدة CD38.

الطراز الماوسفارغة (مجموعة موردي المواد النووية) العوز إيماءة/نظام/IL2Rγc يستخدم على نطاق واسع ل engraftment عادي والخلايا المكونة للدم الخبيثة الإنسان10،11. وتستخدم فحوصات السلالة المسلسل تجريبيا التحقق من الدالة احلركه أو HSC. هذه الدراسات قد تم تحليلها على نطاق واسع بالنهج تسلسل واسعة النطاق. على الرغم من ذلك، يعرف حول إيمونوفينوتيبي احلركه و HSC لمكافحة غسل الأموال الانفجار السكاني انجرافتيد في الفئران مجموعة موردي المواد النووية مقارنة مكافحة غسل الأموال الأولية (الشكل 2).

إعداد احلركه أصلاً منخفضة وبالتالي، والتحديد الكمي للمهارات التحدي والطريقة الموضحة هنا يمكن استخدامها مقايسة سيتوميتريك تدفق في التشخيص والمتابعة السريرية لتقييم استجابة العلاج الكيميائي (كما قد احلركه المتبقية تسبب الانتكاس مكافحة غسل الأموال). قد يشير إلى وجود احلركه الأمراض المتبقية ضئيلة الإيجابية (MRD). وحتى الآن، رصد في مكافحة غسل الأموال في معظمها تعتمد على الأساليب الجزيئية (أي، الرايت-بكر، خ ع)10،12. بيد في هذا البروتوكول يمكننا الكشف عن التعبير البروتين المتزامن لعدة علامات HSC/احلركه (CD34، CD38، CD45RA، CD90) في الابتدائي انفجار الخلايا لمكافحة غسل الأموال البشرية بتدفق مولتيباراميتريك الخلوي2،،من89. يمكن تطبيق هذا المزيج من الأجسام المضادة في أي مختبر قياس التدفق القياسي وهذا الإنزيم MRD تدفق مثير للاهتمام خاصة عند MRD بالوقت الحقيقي البلمرة المتسلسل (RT-PCR) ليس من الممكن، أيإذا اللوكيميا محددة جزيئية علامات لا يمكن كشفها في العينة التشخيصية مكافحة غسل الأموال. وعلاوة على ذلك، هذا البروتوكول، مكمل للتقنيات الجزيئية MRD أكثر حساسية، كما أنها تهدف إلى كشف وتحديد الخلايا غير طبيعية السلف المكونة للدم الذي يمثل إحدى خصائص وظيفية خلية (الشكل 3).

نعرض كيفية قياس الثلاث المكونة للدم السلف السكان وحجرة احلركه المفترضة مع اختلاف درجة النضج بالتدفق الخلوي مع الأجسام المضادة متوفرة في معظم المختبرات السريرية. وعلاوة على ذلك، أكدت وجود هذه المقصورات الخلية في المقابل المريض-المشتقة-تكثيفها (PDX)، وفي العلاج متابعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ونحن نتابع المعايير الأوروبية لاستخدام الحيوانات للأغراض العلمية. أقر هذه الدراسة اللجنة المحلية للأخلاقيات (#3097-2015120414583482v3).

1. إعداد نموذج

  1. جمع نخاع العظم (2 مل) من حيثياته مكافحة غسل الأموال في الأنابيب التي تحتوي على حمض التخثر الإيثيلين (يدتا) بتركيز 1.8 ملليغرام كل مل نخاع العظام.
  2. أداء فيكل فصل، فصل كثافة متدرجة لعزل الخلايا وحيدات النوى من الخلايا الحمراء والمحببة، كما يتبع. تمييع نخاع العظام في 3 مجلدات من المحلول الملحي العازلة الفوسفات (برنامج تلفزيوني: خ2ص4 ، غ2هبو4 ملم 10 ملم 137 كلوريد الصوديوم، بوكل 2.7 مم 1.8 مم). تراكب 1 حجم فيكل بحجم 1 من المخفف نخاع العظام بعناية. تدور 30 دقيقة على 300 غرام x دون الفرامل. نقل الطبقة البيضاء معطف بافي خلايا مونونوكليتيد في أنبوب عقيم جديدة.
  3. تغسل الخلايا مرتين في 10 مل من برنامج تلفزيوني) والطرد المركزي في 300 غرام x لمدة 5 دقائق، بغية إزالة تلويث المصل المكونات.

2-تحلل خلايا الدم الحمراء (RBC)

  1. إضافة 2 مل من تحلل المخزن المؤقت (كلوريد الأمونيوم 0.8 في المائة) إلى الخلية بيليه، دوامة بلطف واحتضان في درجة حرارة الغرفة للحد الأدنى 5 أجهزة الطرد المركزي في 300 غرام x لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: إذا لزم الأمر، كرر هذه الخطوة.
  2. أغسل الخلايا في برنامج تلفزيوني كما تم وصفه سابقا (1.3.).

3-المريض المستمدة تكثيفها.

  1. الحصول على انفجار الخلايا من نخاع العظم بعد الانفصال فيكل وبعد استنفاد الخلايا الليمفاوية باستخدام إيمونوماجنيتيك السلبية التحديد (CD3 T-، و CD20 للخلايا الليمفاوية ب). اتبع إرشادات الشركة المصنعة.
  2. حقن 5 × 106 مكافحة غسل الأموال انفجار الخلايا في هذا السياق ذيل من الفئران مجموعة موردي المواد النووية غير المشروطة. استخدام جهاز تقييدي لتيسير حقن الوريد الذيل. تبقى الفئران تحت الشروط التقليدية، وخاصة في ظل ظروف خالية من مسببات الأمراض خاصة في جميع الأوقات، باستخدام الأقفاص التهوية الفردية والتلاعب تحت غطاء الاندفاق الصفحي. كل أسبوعين، تأخذ 60 ميليلتر من الدم بطريقة جمع اللهاة استخدام الهيماتوكريت الشعرية. مكان شعري في 5 مل جولة الأنبوبة السفلي. إيقاف التسييل بتطبيق ضغط لطيف باستخدام وسادة صغيرة شاش معقم. اكسبولسي الدم بحقنه نظيفة.
  3. أضف 1 مل من المخزن المؤقت لتحلل واحتضان لمدة 5 دقائق. ثم الطرد المركزي في 300 غرام x لأدنى 5 يغسل مع برنامج تلفزيوني وسينتريفوجري في 300 x ز لمدة 5 دقائق. إزالة المادة طافية، إضافة 100 ميليلتر برنامج تلفزيوني مع وصمة عار ألبومين المصل البقري 10% (BSA) مع 3 ميليلتر المضادة الإنسان CD45-فيتك والفاري المضادة 1 ميليلتر CD45-آسيا والمحيط الهادئ، واحتضان عند 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  4. بيليه خلية يغسل مرتين في برنامج تلفزيوني (2 مل) مع جيش صرب البوسنة 10% وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ز لمدة 5 دقائق.
  5. الكوة تصل إلى 1 × 106 خلايا للواحد 100 ميليلتر من برنامج تلفزيوني في أنابيب التدفق الخلوي.
  6. باستخدام المسح انجرافتمينت كل أسبوعين بتحليل تشيميريسم التعبير CD45 (البشرية مقابل مورين) التدفق الخلوي (الشكل 2 أ و ب).
  7. بتضحيات (انفجار الطرفية عدد أكبر من 70% أو علامات سريرية شديدة من المرض)، جمع وحيدات النوى انفجار الخلايا من سحق الطحال ونخاع العظام بالتنظيف تيبياس وقصبة مع برنامج تلفزيوني كما تم وصفه سابقا13. Euthanize الفئران بسرطان عنق الرحم التفكك اتباع المبادئ التوجيهية الدولية.
  8. إذا احتوت الخلية بيليه على ربك، أداء تحلل خلايا الدم الحمراء مع تحلل المخزن المؤقت (الخطوة 2، 1).
  9. أغسل بيليه الخلايا مرتين في برنامج تلفزيوني (2 مل) مع جيش صرب البوسنة 10% وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ز لمدة 5 دقائق.
  10. جمع الخلايا والكوة إلى 1 × 106 خلايا للواحد 100 ميليلتر من برنامج تلفزيوني في أنابيب التدفق الخلوي.

4-التلوين

  1. إضافة الأجسام المضادة مترافق (راجع الخطوة 4، 2) ودوامه. احتضان خلايا لمدة 15 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة.
  2. استخدم لوحة التالية للبشرية الأولية أو عينات PDX يتألف من 10 ميليلتر لمكافحة--CD36-فيتك، 5 ميليلتر لمكافحة--CD19-النماء، 5 ميليلتر لمكافحة--CD33-PC5.5، 5 ميليلتر لمكافحة--CD90--آسيا والمحيط الهادئ، 5 ميليلتر لمكافحة--CD34-AA700، 5 ميليلتر لمكافحة--CD45RA--آسيا والمحيط الهادئ-H7، 5 ميليلتر الأزرق ومكافحة CD38--المحيط الهادئ، 5 ميليلتر من مكافحة--CD123-PC7 و 2.5 ميليلتر لمكافحة--CD45-كو.
  3. إزالة الأجسام المضادة غير منضم بغسل الخلايا في 2 مل من برنامج تلفزيوني بالطرد المركزي على 300 غرام x لمدة 5 دقائق.
  4. إعادة تعليق الخلايا في 450 ميليلتر من برنامج تلفزيوني لتحليل تدفق النهائي سيتوميتريك.

5-النابضة استراتيجية لتحليل التدفق الخلوي

  1. إجراء الحصول على البيانات (خلايا على الأقل 500,000) على سيتوميتير تدفق مجهزة بأشعة الليزر الأحمر والأزرق والبنفسجي. تحقق من إعدادات سيتوميتير كل يوم لمحاذاة 1) البصري ونظام 2) فلويديك حساسية 3) البصرية 4) توحيد استخدام فلوروسفيريس
  2. اتبع استراتيجية النابضة متسلسلة تعريف تعبير CD38 (الشكل 1).
    1. استخدام الخلايا من عينات نخاع العظم الطبيعي لتعريف هيماتوجونيس أو خلايا البلازما التي ستكون بمثابة السيطرة الإيجابية لتعبير CD38.
      ملاحظة: هذه البوابة أهمية خاصة لتقييم اللاحقة السكان احلركه المفترضة تتوقف على التعريف الخاص به.
    2. تحديد الخلايا السلائف الفسيولوجية (انفجار الخلايا الطبيعية) بالمعايير السكانية المنخفضة (الجانب مبعثر) CD45dim/SSC (الشكل 1A). داخل هذا الانفجار السكاني، تحديد هيماتوجونيس، الذي عرض CD38 + + CD19 + النمط الظاهري (الشكل 1B) وأخيراً، استخدام تعبير CD36 و CD33 لتعريف مييلوبلاستس ومونوبلاستس واريثروبلاستس (الشكل 1). تحديد التعبير CD34 في هيماتوجونيس كما هو موضح في (الشكل 1E). تقييم العديد من الفئات السكانية الفرعية السلائف داخل خلايا الانفجار يعرف P6-P10 (الشكل 1). فصل المقصورة CD34 انفجار الخلايا في P6، P7، P8 السلف الفئات السكانية الفرعية استناداً إلى إعداد مسبق CD38 غيتس. ضمان أن حجرة P8 يحتوي على الانفجارات التي لها نفس الكثافة CD38 هيماتوجونيس، أن يشمل P6 الخلايا التي CD38-استناداً إلى الأسفار CD38 ناقص واحد (FMO) مراقبة وما بين النقيضين فيما يتعلق CD38 الخلايا P7 التعبير (الشكل 1).
  3. من CD34 + 38-(P6) فصل الخلايا، وبوابات HSC من احلركه المفترضة التي تستخدم تعبير CD90 و CD45RA (الشكل 1F).
    ملاحظة: هو النمط الظاهري HSC CD34 + CD38-CD90 + CD45RA-وفروعه multipotent (MPP) تعرف بأنها CD34 + CD38-CD90-CD45RA-. النمط الظاهري احلركه المفترضة هو CD34 + CD38-CD90dimCD45RA + والسكان المتلقين للمعلومات غير ناضجة أكثر من موروث اللمفاوية معبي (لمب) يعرف CD34 + CD38-CD90-CD45RA +.

6-رصد RT-PCR MRD

  1. رصد مستويات واسطة RT-PCR كما هو موضح سابقا من14.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

هنا نقدم طريقة لتحديد السكان السلف في عينات نخاع العظام البشرية العادية والخبيثة. ونحن جمع نخاع العظم والطحال من PDX ناجحة وإجراء قياس التدفق مولتيباراميتريك كما هو موضح أعلاه. أننا بالمقارنة مع الفئات السكانية الفرعية عدة خلايا الانفجار بين عينة المريض التشخيص و PDX المقابلة وخاصة، حجرة CD34 + CD38-السلف، لا سيما المخصب احلركه المفترضة. وقد وجدنا أن الكسر CD34 + CD38-الانفجار كان أعلى في PDX مقارنة بالعينة المريض التشخيص (3.48% مقابل 0.53 في المائة، الرقم 2، د). من المثير ل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ويتطلب إجراء تقييم دقيق واستنساخه من علامات هيولى بالتدفق الخلوي أو غشاء أن إعدادات أداة يتم التحقق من كل يوم لمحاذاة البصري، سليمة الأداء نظام فلويديك والحساسية الضوئية، وتوحيد استخدام الخرز المعايرة.

الكشف عن خلية انفجار السكان في مكافحة غسل الأموال باستخدام CD90 و CD45RA بتحليل تدفق حدودي متعدد الخلوي أسلوب بسيط نسبيا ويمكن الاعتماد عليها. خطوة حاسمة في هذا التحليل إجراء تقييم دقيق لتعبير CD38 في انفجار الخلايا، من أجل أداء النابضة الصحيح CD34 + CD38-السكان. كثافة CD38 يتم تعريفه باستخدام خ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

بتأييد هذا العمل جزئيا فيوجين لوريت الرابطة الفرنسية والسرطان le ليجويكونتري (مركز الشمال)، ومؤسسة دي فرنسا (اللوكيميا) "اللجنة"، أونكوليلي SIRIC، ومعهد السرطان الوطني الفرنسي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
PancollPAN-BiotechP04-60500
RBC Lysis Buffer (10x)OzymeBLE420301محلول تحلل كرات الدم الحمراء A: 8.29 جم من NH4< / sub>Cl + 0.037 جم من Na2< / sub>EDTA في 100 مل من محلول تحلل H2< / sub>O و RBC المعقم B: 1 غرام من KHCO3 في 100 مل من H2O
NOD / SCID / IL2R & gamma ؛ cnull  (NSG)  الفئرانJACKSON LABORATORYرقم المخزون: 005557
PBSGibco بواسطة Life Technologies14190-144
AutoMACS Running Buffer & ndash ؛ MACS فصل المخزنMACS Miltenybiotec130-091-221
Anti-CD36-FITC (استنساخ FA6-152 ، Iotest)بيكمان كولترPN IM0766U
Anti-CD33-PC5.5 (استنساخ D3HL60.251 ، Iotest)بيكمان كولترB36289
Anti-CD90-APC (استنساخ 5E10)Biolegend328114
Anti-CD19-ECD (استنساخ J3-119 ، Iotest)بيكمان كولترA07770
Anti-CD34-AA700 (استنساخ 581 ، Iotest) بيكمانكولترB92417
Anti-CD45RA-APC-H7 (استنساخ HI100)  بيكتون ديكنسون560674
مضاد ل CD38-أزرق باسيفيك (استنساخ LSI98-4-3 ، Iotest)بيكمان كولترB92396
Anti-CD45-KO (استنساخ J.33 ، Iotest)بيكمان كولترB36294
Anti-CD3-PEبيكمان كولترIM1451
Anti-CD20-PEبيكمان كولترA07747
Anti-CD123-PC7بيكمان كولترB13647
مجموعة التدفقبيكمان كولترA63492
فحصالتدفق بيكمان كولترA63493
نافيوسبيكمان كولترDS-14644A
LSR فورتيسا X20BD بيولوجيس
سي تي BDبيوساينسز655051
FacsFlow BD Biosciences336911
Anti-hCD45-FITCBiolegendBLE304006
Anti-mCD45-APCBiolegendBLE103112
EasySep مجموعة اختيار PE البشريةStem Cell Technologies18000
EasySep  magnet تقنيات الخلايا الجذعية18551
المؤقت

المراجع

  1. Shlush, L. I., et al. Tracing the origins of relapse in acute myeloid leukaemia to stem cells. Nature. , (2017).
  2. Terwijn, M., et al. Leukemic stem cell frequency: a strong biomarker for clinical outcome in acute myeloid leukemia. PLoS One. 9 (9), e107587(2014).
  3. Jordan, C. T., et al. The interleukin-3 receptor alpha chain is a unique marker for human acute myelogenous leukemia stem cells. Leukemia. 14 (10), 1777-1784 (2000).
  4. van Rhenen, A., et al. The novel AML stem cell associated antigen CLL-1 aids in discrimination between normal and leukemic stem cells. Blood. 110 (7), 2659-2666 (2007).
  5. Bonardi, F., et al. A proteomics and transcriptomics approach to identify leukemic stem cell (LSC) markers. Mol Cell Proteomics. 12 (3), 626-637 (2013).
  6. Kikushige, Y., Miyamoto, T. Identification of TIM-3 as a Leukemic Stem Cell Surface Molecule in Primary Acute Myeloid Leukemia. Oncology. 89, Suppl 1. 28-32 (2015).
  7. Bonnet, D., Dick, J. E. Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell. Nat Med. 3 (7), 730-737 (1997).
  8. Kersten, B., et al. CD45RA, a specific marker for leukaemia stem cell sub-populations in acute myeloid leukaemia. Brit J Haematol. 173 (2), 219-235 (2016).
  9. Goardon, N., et al. Coexistence of LMPP-like and GMP-like leukemia stem cells in acute myeloid leukemia. Cancer Cell. 19 (1), 138-152 (2011).
  10. Ng, S. W., et al. A 17-gene stemness score for rapid determination of risk in acute leukaemia. Nature. 540 (7633), 433-437 (2016).
  11. Shultz, L. D., et al. Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells. J. Immunol. 174 (10), 6477-6489 (2005).
  12. Roloff, G. W., Lai, C., Hourigan, C. S., Dillon, L. W. Technical Advances in the Measurement of Residual Disease in Acute Myeloid Leukemia. J Clin Med. 6 (9), (2017).
  13. Swamydas, S., Lionakis, M. S. Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments. J Vis Exp. (77), e50586(2013).
  14. Gabert, J., et al. Standardization and quality control studies of 'real-time' quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia - a Europe Against Cancer program. Leukemia. 17 (12), 2318-2357 (2003).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

CD34 CD38 CD45RA CD90
التدفق الخلوي لتقدير لوكيميا الخلايا الجذعية في الابتدائي سرطان الدم النقوي الحاد والمريض-المشتقة-تكثيفها، في التشخيص والمتابعة حتى
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.