توفر هذه المقالة نهج تحديث للنظام الكلاسيكي الدجاج السمان الوهم لدراسة تكوين الجهاز، ومن خلال الجمع بين رواية الإجراءات التجريبية في المختبر و في ovo .
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نهج خطوتين لاستكشاف ومتأخرة-المراحل الأولى من تشكيل الهيئة في نموذج إنفلونزا الطيور: الغدة الصعترية ونموذج Organogenesis الغدد الجار درقية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
كان الجنين إنفلونزا الطيور، كنموذج تجريبي، أهمية قصوى للاكتشافات الأصيلة في علم الأحياء التنموي. من بين العديد من الطرق وتشكيل التركيبات السمان-الدجاج واستخدام الغشاء تشوريوالانتويك (كام) لمواصلة تطوير أنسجة خارج الرحم تاريخ يعود إلى القرن الماضي. في الوقت الحاضر، يقدم المزيج من هذه الأساليب الكلاسيكية مع المنهجيات الحديثة في المختبر آفاق الرواية مواصلة استكشاف تشكيل الجهاز.
هنا يصف لنا نهجاً خطوتين للدراسة ومتأخرة-المراحل الأولى من أورجانوجينيسيس. بإيجاز، منطقة الجنينية التي تحتوي على الإقليم المفترض للجهاز يتم عزل من الأجنة السمان، ونمت في المختبر في نظام أورجانوتيبيك (ما يصل إلى 48 ساعة). وفي وقت لاحق يتم المطعمة الأنسجة المستزرعة على كام جنين الدجاج. بعد 10 أيام تنمية في ovo ، يتم الحصول على أجهزة شكلت بالكامل من الأنسجة المطعمة. يسمح هذا الأسلوب أيضا تحوير مما يشير إلى مسارات الإدارة العادية لوكلاء الدوائية والتلاعب بالجينات الأنسجة في جميع أنحاء الخطوات الإنمائية في المختبر و في ovo . بالإضافة إلى ذلك، وضع الأنسجة يمكن جمعها في أي إطار زمني تحليل التعبير الجيني الشخصية (باستخدام PCR الكمي (قبكر), [ميكروارس], إلخ) ومورفولوجيا (تقييم مع الأنسجة التقليدية وإيمونوتشيميستري).
يمكن استخدام الإجراء التجريبي المبين كأداة لمتابعة تكوين الجهاز خارج الجنين إنفلونزا الطيور، من المراحل المبكرة من organogenesis تماما تشكيلها والأجهزة الفنية.
المقدمة
أجنة الطيور قد استخدمت على نطاق واسع في دراسات علم الأحياء التنموي المنوي. وتشمل المزايا الرئيسية لنموذج إنفلونزا الطيور إمكانية فتح البيضة، ووصول سهلة نسبيا للجنين، والقدرة على أداء ميكرومانيبوليشن. بعض الأمثلة تشمل نظام كلاسيك الدجاج السمان الوهم لدراسة الخلية مصير1، وتطبيق عوامل نمو معينة ل الجنين2، ونمو الهياكل الخلوية حمل خارج الرحم في كام1،3، 4.
للحصول على أفكار جديدة إلى مراحل متميزة لتكوين الجهاز، وضعنا مؤخرا أسلوب الذي يجمع بين تقنيات التطعيم بالتلاعب في المختبر من الأنسجة الجنينية5. تمكين النهج خطوتين التمييز والاستكشاف لكلا-وأواخر-المراحل الأولى من أورجانوجينيسيس، التي غالباً ما تكون محدودة بسبب تفاعلات الأنسجة المعقدة وديناميكية عالية2. وعلاوة على ذلك، عدم وجود علامات خاصة بالانسجة مناسبة كثيرا ما يحد من الاستخدام الكائنات المعدلة وراثيا النماذج الحيوانية6. هذا الأسلوب رواية النهج خطوتين إلى حد كبير ويتغلب على هذه القيود.
دراسة المراحل الأولى لتكوين الجهاز، في خطوة أولى، معزولة الإقليم الجنينية السمان تتألف من بداية الجهاز المرتقب ونمت في نظام أورجانوتيبيك في المختبر ح 48. خلال هذه الفترة، يمكن أن يؤديها التشكيل الدوائية لمسارات إشارات محددة إلى إضافة الأدوية إلى5،المتوسطة الثقافة7. بالإضافة إلى ذلك، يمكن جمعها في أي مرحلة من النمو في المختبر الأنسجة المستزرعة وسبر للتعبير الجيني (باستخدام أساليب مثل قبكر، [ميكروارس]، إلخ).
في الخطوة الثانية، ثم يتم المطعمة الأنسجة المستزرعة ح 48 على كام جنين الدجاج (ج) في يوم الجنينية (ه) 8 (cE8) (همبرغر وهاملتون (ح ح)-مراحل 33-35)8. كام يتصرف كمورد الأوعية الدموية من المواد الغذائية، ويسمح للغاز التبادلات1،3،4 للأنسجة المطعمة التمكين على التنمية في ovo لفترات أطول من الوقت. هذه خطوة تجريبية خاصة أيضا مناسبة لدراسة المراحل المتأخرة من أورجانوجينيسيس، كما يمكن الحصول على أجهزة شكلت بالكامل بعد 10 أيام في ovo التنمية5،،من910،11 . بسهولة إجراء التحليل المورفولوجي بالانسجة التقليدية لتأكيد تشكيل الجهاز السليم، ويمكن تحديد الجهات المانحة المنشأ من الخلايا إيمونوهيستوتشيميستري باستخدام الأجسام المضادة إبلاغها (أيماب السمان بيرينوكلير (قكبن)). خلال فترة الحضانة كام، يمكن أيضا تزايد حضور وكلاء الدوائية الطعوم وجمعها في أي مرحلة من التنمية لتقييم تطور organogenesis.
النهج خطوتين، الموصوفة هنا في العمق، واستخدمت فعلا في فيغيريدو et al. 5 لاستكشاف وضع الغدة الدرقية إنفلونزا الطيور/الغدة الصعترية primordium المشتركة. وبناء على ذلك، ستعرض الملازمة لخصوصيات الأقاليم الجنينية ومراحل التنمية المشتركة في أورجانوجينيسيس الغدة الصعترية والغدد الدرقية أدناه.
الغدة الصعترية والغدد الدرقية ابيثيليا، على الرغم من الناحية الوظيفية المتميزة، تستمد من الأنسجة الحقائب البلعوم (PP)12. في إنفلونزا الطيور، ابيثيليا هذه الأجهزة تنبع من الثالثة والرابعة PP الأنسجة (3/4PP)12، بينما في الثدييات ظهارة الغدة الصعترية مستمد من 3PP وظهاره الغدة الدرقية الغدد مستمد من 3PP و 3/4PP في الماوس والبشرية، على التوالي من13،،14.
واحدة من المراحل الأولى في تشكيل هذه الأجهزة هو ظهور الغدة الصعترية المنفصلة والمجالات جارات الدرق في بريمورديوم المشتركة. الدجاج، ويمكن تحديد هذه المجالات بالتهجين في الموقع ، مع علامات جزيئية محددة، في E4.515. كما عائدات التنمية، هذه الهيئة ترافع تفريد وفصل من البلعوم، بينما كبسولة الوسيطة رقيقة، شكلتها الخلايا المستمدة من قمة العصبية، يحيط بهم (في E5؛ 27 هستاجي). وفي وقت لاحق من استعمر ظهارة الغدة الصعترية الخلايا المكونة للدم السلف (في E6.5؛ هستاجي 30)12.
كما هو الحال في الدراسات الكلاسيكية الدجاج السمان1،12، نهج خطوتين مفيد بشكل خاص لدراسة تشكيل الهيئات المكونة للدم/اللمفاوية، الغدة الصعترية هي5. كما explant السمان، مع بداية الجهاز، هو المطعمة في جنين الدجاج قبل استعمار الخلايا المكونة للدم السلف، تتشكل الغدة الصعترية تشيميريك مع الدجاج السلف التي يحملها الدم الخلايا التسلل إلى نظير الظهارية الغدة الصعترية السمان. هذا الأسلوب، لذلك، أداة مفيدة لاستكشاف المساهمة الخلايا المكونة للدم في تطوير نظام حمتو/اللمفاوية إنفلونزا الطيور.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
كل هذه التجارب اتبع المبادئ التوجيهية الأخلاقية دي التاريخ مركز الطب والرعاية الحيوانية يسبوا.
1-حضانة السمان المخصبة وبيض الدجاج
- احتضان السماني الياباني (طائر طائر japonica) وبيض الدجاج (Gallus gallus) مخصبة لأيام 3 و 8، على التوالي.
- وضع البيض مع الدائرة الجوية (نهاية غير حادة البيض) التي تواجه في حاضنة هوميديفيد في 38 درجة مئوية.
- استخدم بيض السمان حوالي 20 وبيض الدجاج 40 لإجراء هذه التجربة.
ملاحظة: ينبغي مضاعفة هذه الأرقام عند وضع هذا الإجراء للمرة الأولى.
2-عزل المنطقة الجنينية السمان التي تحتوي على أراضي الظني ترافع الغدة الصعترية وجارات الدرق
ملاحظة: إجراء البيض إجراءات التلاعب في ظروف معقمة باستخدام غطاء الاندفاق الصفحي أفقي وتعقيم الأدوات والمواد.
- إعداد وعاء كبير البورسليكات زجاج حول 3/4 مليئة بالمياه المالحة الباردة مخزنة الفوسفات (PBS) الحل.
- فتح بيض السمان بعد 3 أيام حضانة بالتنصت على شل وقطع افتتاح دائري على الجانب المعاكس من نهايته حادة مع مقص منحنى. بعناية إزالة قطعة من قذيفة ونقل الجنين إلى وعاء الزجاج مليئة ببرنامج تلفزيوني الباردة.
- عقد الجنين السمان (q) في E3 (qE3) (مرحلة السمان المقابلة إلى السمو-المرحلة 21 من الدجاج) بمساعدة الملقط رقيقة. إجراء قطع في الغشاء فيتيلين تخيم صفار البيض باستخدام مقص منحنى. تواصل قطع حولها، وخارجياً إلى محيط السفن خارج الجنينية.
- نقل الجنين إلى صغيرة صحن حوالي 3/4 مليئة ببرنامج تلفزيوني الباردة بمساعدة الملقط رقيقة. دقة يغسل الجنين من الصفار المرفقة المتبقية.
- استخدام من المصفاة لنقل الجنين إلى كوب 100 مم طبق بيتري مع الأسود قاعدة (انظر الجدول للمواد) التي تحتوي على 10 مل من برنامج تلفزيوني الباردة.
- ضع طبق بيتري تحت ستيريوميكروسكوبي.
ملاحظة: من هذه النقطة إلى الأمام، تنفيذ إجراءات الجراحة تحت ستيريوميكروسكوبي للتكبير التدريجي. كمصدر لإضاءة، فإنه ينصح باستخدام مصابيح LED التي أدرجت في ستيريوميكروسكوبي أو الألياف البصرية، تفكر في الحمل الحراري محدودة. - عقد الجنين إلى الجزء السفلي من اللوحة مع دبابيس الحشرات رقيقة. ضع أربعة دبابيس تشكيل شكل مربع في منطقة خارج الجنينية.
- إزالة الأغشية الجنينية خارج المنطقة الرأسي بمساعدة الملقط رقيقة ووضع دبوس الخامس هناك.
ملاحظة: إذا كان يتم بشكل صحيح وضع الجنين، ثم حويصلة عتيق وأنبوب القلب، و 1st, 2ndوالأقواس البلعوم 3rd (PAs) يجب أن تكون مرئية. - تشريح المنطقة الجنينية الفائدة، أي، 3rd و 4th البلعوم قوس المنطقة (3/4PAR)، باستخدام مقص العين يكر.
- بدء قطع طوليا وموازية لمحور الجنين، بين منطقة أنبوب سميط/العصبية، ونظام تقييم الأداء.
- إزالة أنبوب القلب بطنيا متوضعة بقطع عليه. حفظ المقص في نفس الموضع، تدوير طبق بيتري لإعادة تعيين موضع الجنين تبعاً لاتجاه الخفض.
- قطع بين 2nd و 3rd نظام تقييم الأداء، وأدناه 4th السلطة الفلسطينية.
- فصل الأغشية المتبقية من 3/4PAR بمساعدة الملقط رقيقة.
- نضح الأنسجة المعزولة (3/4PAR) ونقل لهم طبق زجاج 3/4 مليئة ببرنامج تلفزيوني الباردة استخدام ماصة بلاستيكية معقمة 2 مل.
ملاحظة: الآخرة، الأنسجة يمكن أن تزرع في المختبر يصل إلى 48 ساعة أو يكون المطعمة فورا على كام جنين الدجاج في E8. - يبقى الطبق الزجاج الذي يحتوي على 3/4PAR معزولة على الجليد أثناء التحضير للفحص في المختبر .
3. في المختبر بالانزيم أورجانوتيبيك: ثقافة المنطقة الجنينية التي تحتوي على أراضي الظني ترافع الغدة الصعترية وجارات الدرق
- تعد الثقافة المتوسطة مع "المتوسط" RPMI 1640 تستكمل مع 10% FBS و 1% البنسلين/ستربتوميسين.
ملاحظة: يمكن إضافة الكواشف الدوائية القابلة للذوبان إلى المتوسطة (على سبيل المثال، LY-411.575 (Ly) دي-بينزازيبيني أو سيكلوباميني وفيسموديجيب، تحول دون تحقيقها والقنفذ (ح ح) مما يشير إلى مسارات، على التوالي. لهذا التحليل، استخدام 50-200 نانومتر لي أو 5-15 ميكرون من دي-بينزازيبيني لتمنع الشق إشارات في 3/4PAR. استخدام 20 ميكرون من سيكلوباميني أو 10 ميكرون من فيسموديجيب لتمنع سمو إشارات في 3/4PAR5. - إعداد ثقافة explant 3/4PP في لوحة 6-جيدا في المختبر .
- سد بئر واحدة من لوحة 6-جيدا مع 5 مل من الثقافة المتوسطة. ضع 24 مم إدراج غشاء البولي (انظر الجدول للمواد) في البئر بمساعدة الملقط رقيقة.
- تحت ستيريوميكروسكوبي، نقل اكسبلانت 3/4PAR من الطبق الزجاج على سطح الغشاء بالانزلاق بلطف بمساعدة ملعقة زرع (أو الملعقة) ورقيقة الملقط. ضع اكسبلانتس مع الجانب البطني الأعلى والجانب الظهرية على اتصال الغشاء. إضافة explants يصل إلى سبعة في إدراج غشاء. انتقل إلى الخطوة 3، 4.
- بدلاً من ذلك، اكسبلانتس الثقافة في غشاء فلاتر العائمة.
- تعد 35 مم طبق بيتري مع 5 مل من الثقافة المتوسطة. بمساعدة الملقط رقيقة، تعويم غشاء تصفية (انظر الجدول للمواد)، والحفاظ على سطح جاف على اتصال بالهواء.
- تحت ستيريوميكروسكوبي، نقل اكسبلانت 3/4PAR من الطبق الزجاج إلى تصفية الغشاء بانزلاق لطيف مع المساعدة من زرع ملعقة (أو الملعقة) ورقيقة الملقط. ضع اكسبلانتس مع الجانب البطني الأعلى والجانب الظهرية على اتصال الغشاء. إضافة explants يصل إلى 8 كل غشاء التصفية.
- ضع explants أعد الخطوات 3.2 و 3.3 في حاضنة هوميديفيد عند 37 درجة مئوية مع 5% CO2بعناية.
- وبعد فترة حضانة 48 ساعة، إزالة لوحة 6-جيدا وملم 35 طبق بيتري من الحاضنة.
- جمع explants مثقف من إدراج غشاء اللوحة 6-جيدا.
- إضافة برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة (RT) إلى إدراج غشاء.
- فصل اكسبلانتس من الغشاء بالتنظيف قوية باستخدام ماصة بلاستيكية معقمة 2 مل.
- مع المساعدة من البسط والملقط رقيقة، نقل explants مثقف لطبق زجاج 3/4 مليئة ببرنامج تلفزيوني في الرايت
- وبالمثل، جمع explants مثقف من تصفية غشاء عائمة في 35 ملم من طبق بيتري.
- نقل عامل التصفية الغشاء مع الملقط رقيقة إلى طبق بتري 35 ملم جديدة مليئة ببرنامج تلفزيوني في الرايت
- فصل اكسبلانتس من غشاء التصفية باستخدام بيبيتينج قوية ماصة بلاستيكية معقمة 2 مل.
- بمساعدة الملقط رقيقة، الاضطلاع بتصفية غشاء explant خالية بعد أن يؤكد أنه لا يزال لا explants مرفقة به.
- مع ملعقة والملقط رقيقة، ونقل اكسبلانتس إلى طبق زجاج مليئة ببرنامج تلفزيوني في الرايت
- جمع explants مثقف من إدراج غشاء اللوحة 6-جيدا.
- نقل explants مثقف مع ملعقة إلى 1 مل كاشف لعزل الحمض النووي الريبي واستخدام دراسات التعبير الجيني.
تنبيه: التعرض لهذا الكاشف (انظر الجدول للمواد) يمكن أن يكون خطرا على صحة خطيرة. ارتداء النظارات الواقية المناسبة والملابس والقفازات. اتبع الإرشادات التي تظهر في التعامل مع وقراءة صحائف بيانات السلامة توفرها الشركة المصنعة. - وبدلاً من ذلك، graft الأنسجة المستزرعة على كام أجنة الدجاج في E8. اتبع الخطوة 4.
4-إعداد كام
- إزالة بيض الدجاج مع 8 أيام تنمية الجنينية من الحاضنة.
ملاحظة: تم المحتضنة البيض مع الدائرة الجوية التي تواجه صعودا في 38 درجة مئوية في حاضنة هوميديفيد. - تغطية نهاية حادة من البيض مع الشريط البلاستيك الشفاف للحيلولة دون الوقوع في دائرة الهواء قطعة من shell. انقر فوق shell وقطع افتتاح دائري في البيض مع مقص منحنى. الدائرة الجوية يجب أن تكون مرئية.
- إزالة الغشاء الأبيض الدائرة الجوية بحذر مع الملقط رقيقة. ومن ثم كام مرئية ويمكن الوصول إليها لزرع الأنسجة حمل خارج الرحم.
ملاحظة: لا تستخدم برنامج تلفزيوني لهيدرات كام، قبل أو بعد زرع الأعضاء، وبما يعزز برنامج تلفزيوني انزلاق وفقدان اكسبلانتس. إذا كان الغشاء يجف، تجاهل البيض.
5-تطعيم Explants مثقف على كام
- إنشاء الجروح آفات الأوعية الدموية الصغيرة في سفن أصغر حجماً من كام مع ميكروسكالبيل في حامل.
ملاحظة: استخدام تلميح ماصة باستور لإزالة الدم بالشعرية في حالة النزيف الزائد. - استخدام ملعقة والملقط رقيقة لنقل explant مثقف إلى منطقة الجرحى كام.
- قص قطعة من ورقة تصفية أكبر قليلاً من explant ووضعه على رأس اكسبلانت.
ملاحظة: يساعد الورقة تصفية تتبع موقع explant بعد تطويره في كام. أيضا، فإنه يتيح اليومية إيصال المخدرات إلى explant خلال التنمية في ovo ، إذا لزم الأمر (كما هو موضح في الخطوة 5، 6). - إغلاق النافذة البيضة مع الشريط البلاستيك الشفاف والتعرف عليه باستخدام قلم رصاص فحم.
ملاحظة: الشريط البلاستيك يحمي الجنين من الجفاف خلال فترة الحضانة. - احتضان البيض التلاعب بها لمدة 10 أيام في حاضنة هوميديفيد في 38 درجة مئوية. اتبع الخطوة 6.
- خطوة اختيارية: إدارة المخدرات اليومية خلال فترة الحضانة.
- للحصول على عامل التصفية، جزئيا برفع الشريط البلاستيك. إضافة 100 ميليلتر من المخدرات الحل، قطره قطره، على رأس الورقة. إعادة ختم النافذة ووضع البيض مرة أخرى في حاضنة هوميديفيد في 38 درجة مئوية.
ملاحظة: لهذا التحليل، سوف الجرعة من 20 ميكرومتر من سيكلوباميني تمنع سمو الإشارات خلال في ovo التنمية5.
- للحصول على عامل التصفية، جزئيا برفع الشريط البلاستيك. إضافة 100 ميليلتر من المخدرات الحل، قطره قطره، على رأس الورقة. إعادة ختم النافذة ووضع البيض مرة أخرى في حاضنة هوميديفيد في 38 درجة مئوية.
6-تكوين الجهاز حمل خارج الرحم في كام بعد 10 أيام تنمية في Ovo
- بعد 10 أيام حضانة، إزالة البيض من الحاضنة وسحب الشريط البلاستيك بعناية.
- قطع كام حول المنطقة عامل تصفية باستخدام مقص منحنى ونقل explant المستمدة من كام مع أوراق الترشيح لزجاج صغيرة وعاء حوالي 3/4 مليئة ببرنامج تلفزيوني الباردة.
- بمساعدة الملقط رقيقة نقل explant المستمدة من كام إلى 100 مم طبق بيتري مع قاعدة السوداء التي تحتوي على 10 مل من برنامج تلفزيوني. إزالة ورق الترشيح والزيادة في استخدام يكر العين المقص والملقط رقيقة الغشاء بلطف.
- نقل كام-اكسبلانت إلى حل مثبت (3.7 ٪ منهاج العمل في برنامج تلفزيوني) مع المصفاة. Euthanize أجنة الدجاج دون إزالتها من البيض بصنع قطع دقيقة في منطقة العنق للجنين بمساعدة مقص كبير.
- تقييم تشكيل الهيئة في أقسام البارافين explants المستمدة من كام بالانسجة التقليدية وإيمونوهيستوتشيميستري.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ما ورد أعلاه وصف تفاصيل البروتوكول أسلوب الذي يسمح التحقيق من على حد سواء-وأواخر-المراحل الأولى من أورجانوجينيسيس، غالباً ما تكون محدودة بالتفاعلات الخلوية والجزيئية المعقدة.
هذا الأسلوب كان يعمل سابقا في فيغيريدو et al. 5 لكشف دور الشق وسمو إشارات في التنمية بريمورديوم الغدة الدرقية إنفلونزا الطيور/الغدة الصعترية المشتركة.
هنا، تظهر نت...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
أحد جوانب حاسمة لنجاح هذا الأسلوب هو نوعية كل من الدجاج والسمان البيض. النظر في فترات حضانة طويلة، لا سيما أثناء الفحص في ovo ، ذات نوعية جيدة من بيض الدجاج يحسن معدلات البقاء (تصل إلى 90 في المائة) في نهاية الإجراء. ولتحقيق ذلك، اختبار البيض من مختلف الموردين. احتضان البيض unmanipulated لفترات طويلة (تصل إلى 16-17 يوما) وتحقق تنميتها. ينبغي أن يقدم أكثر من 80% الأجنة التي سينظر فيها دفعة جيدة نوعية، التطور الطبيعي. من المهم أيضا لضمان أن توفر كل خطوة الاحتضان استنساخه بمراحل التطوير المتزامن لضمان موثوقية والنت...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
الكتاب ممتنون لانطونيو نظراً وايزابيل الكوبايا باريرا ليونور لقراءة نقدية من المخطوطة، أن بادما أكابيدي للفيديو والسرد، والقيام Proa فيتور من "دائرة علم الأنسجة" ه هيستولوجيا دي معهد بيولوجيا التنمية، دي كلية الطب دي لشبونة، جامعة دي لشبونة، لتقديم الدعم التقني. ونحن مدينون لا سيما كايرو باولو و "هوجو سيلفا" من مقاتلي دي أوديوفيسوايس (الوحدة السمعية البصرية)، دي كلية الطب دي لشبونة، جامعة دي يسبوا على التزامهم المعلقة بإنتاج هذا الفيديو. ونعترف Microsystems إيكا يرجى توفير ستيريوسكوبي مزودة بنظام الفيديو وإلى إينتيرافيس--شركة زراعية-سنة, S.A للمساهمة مع السمان يخصب البيض. هذا العمل كان يدعمه دي كلية الطب دي لشبونة، جامعة دي لشبونة (فمول).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| بيض الدجاج المخخص (Gallus gallus< / em>) | Pintobar ، مزرعة دواجن البرتغال | ؛ | |
| بيض السمان المخصب (Coturnix coturnix) | Interaves, Portugal | Bird farm | |
| 15 مل أنابيب الطرد المركزي PP | كورنينج | 430052 | |
| 50 مل أنابيب الطرد المركزي PP Corning | 430290 | ||
| 60 × 20 مم أطباق بيركس | مجموعة دوران | 21 755 41 | |
| 100 × 20 مم أطباق بيركس | مجموعة دوران | 21 755 48 | |
| إدراج غشاء البولي كربونات ؛ | كورنينج | 3412 | 24 مم transwell مع 0.4 مم إدراج غشاء بولي كربونات المسام |
| مرشح غشاء | Millipore | DTTP01300 | 0.6 مم مرشح غشاء Isopore |
| 6 ألواح ثقافة بئر | Nunc ، طبق بتري | 140675 | |
| Scientific ، 35 × 10 مم | Sigma-Aldrich | P5112 ؛ | |
| أطباق | من السوبر ماركت | ||
| ماصات النقل | Samco Scientific ، Thermo Fisher Scientific | 2041S | 2 مل ماصة بلاستيكية |
| ماصة زجاجية باستور | نورماكس | 5426015 | |
| Whatman & nbsp ؛ ورق ترشيح نوعي | Sigma-Aldrich | WHA1001090 | ورق ترشيح |
| شريط بلاستيكي | شفاف من السوبر ماركت ؛ | ||
| السيتوكيراتين (عموم ؛ حمضي وأساسي ، سيتوكيراتين من النوع الأول والثاني) ، استنساخ Lu-5 | BMA Biomedicals | T-1302 | |
| هيدرات سيكلوبامين | سيجما ألدريتش | C4116 | مثبط دوائي لإشارات Hh |
| مصل الأبقار الجنيني | Invitrogen ، Thermo Fisher القياسي العلمي | FBS | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | |
| البنسلين الستربتومايسين | Invitrogen ، ثيرمو فيشر Scientific | 15140-122 | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) | GIBCO ، ثيرمو فيشر العلمي | 10010023 | |
| الأجسام المضادة QCPN | دراسات النمو الورم الهجين بنك | QCPN | |
| RPMI 1640 متوسط ، مكمل جلوتا ماكس ؛ | جيبكو ، ثيرمو فيشر ساینتفيك | 61870010 | |
| بلوسيل RTV141A / ب سيليكون مطاط صناعي 1.1 كجم طقم | ELKEM / Silmid | RH141001KG | لتحضير القاعدة الخلفية لطبق بتري |
| Stemolecule LY411575 | Stemgent | 04-0054 | مثبط دوائي لإشارات الشق |
| كاشف TRIzol Reagent | Invitrogen ، كاشف 15596026 العلمي Thermo Fisher | لعزل الحمض النووي الريبي الكلي | |
| Dumont # 5 Fulps | Fine Science | Tools 11251-30 | ملقط رفيع |
| مقص بون ناعم للغاية ، | أدوات العلوم الدقيقة | 14085-08 | مقص منحني |
| دبابيس الحشرات ؛ | أدوات العلوم الدقيقة | 26001-30 | |
| ملعقة صغيرة | أدوات العلوم الدقيقة | 10087-12 | ملعقة زرع |
| دبابيس دقيقة | أدوات العلوم الدقيقة | 26002-20 | Microscalpel |
| Moria حامل دبوس مطلي بالنيكل | أدوات العلوم الدقيقة | 26016-12 | حامل |
| موريا مثقبة | العلوم الدقيقة | 10370-17 | مقشدة |
| Wecker مقص العين | أدوات العلوم الدقيقة | 15010-11 | |
| كاميرا | لايكا مايكروسيستمز | MC170 HD | |
| Stereoscope | Leica Microsystems | Leica M80 | |
| مجهر | Leica Microsystems | 2500 |
المراجع
- Le Douarin, N. M. The Nogent Institute-50 years of embryology. Int J Dev Biol. 49 (2-3), 85-103 (2005).
- Chuong, C. M., Wu, P., Plikus, M., Jiang, T. X., Bruce Widelitz, R. Engineering stem cells into organs: topobiological transformations demonstrated by beak, feather, and other ectodermal organ morphogenesis. Curr Top Dev Biol. 72, 237-274 (2006).
- Davey, M. G., Tickle, C. The chicken as a model for embryonic development. Cytogenet Genome Res. 117 (1-4), 231-239 (2007).
- Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering. Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).
- Figueiredo, M., Silva, J. C., et al. Notch and Hedgehog in the thymus/parathyroid common primordium: Crosstalk in organ formation. Dev Biol. 418 (2), 268-282 (2016).
- National Research Council. Chapter 6 - Recent Advances in Developmental Biology. Scientific Frontiers in Developmental Toxicology and Risk Assessment. , The National Academies Press. Washington, DC. (2000).
- Moura, R. S., Coutinho-Borges, J. P., Pacheco, A. P., Damota, P. O., Correia-Pinto, J. FGF signalling pathway in the developing chick lung: expression and inhibition studies. PLoS One. 6 (3), e17660(2011).
- Hamburger, V., Hamilton, H. A series of normal stages in the development of the chick embryo. J. Morphol. 88, 49-92 (1951).
- Takahashi, Y., Bontoux, M., Le Douarin, N. M. Epithelio-mesenchymal interactions are critical for Quox 7 expression and membrane bone differentiation in the neural crest derived mandibular mesenchyme. EMBO J. 10 (9), 2387-2393 (1991).
- Maeda, Y., Noda, M. Coordinated development of embryonic long bone on chorioallantoic membrane in ovo prevents perichondrium-derived suppressive signals against cartilage growth. Bone. 32 (1), 27-34 (2003).
- Ishida, K., Mitsui, T. Generation of bioengineered feather buds on a reconstructed chick skin from dissociated epithelial and mesenchymal cells. Dev Growth Differ. 58 (3), 303-314 (2016).
- Le Douarin, N. M., Jotereau, F. Tracing of cells of the avian thymus trough embryonic life in interspecific chimeras. J. Exp. Med. 142, 17-40 (1975).
- Farley, A. M., et al. Dynamics of thymus organogenesis and colonization in early human development. Development. 140, 2015-2026 (2013).
- Gordon, J., Bennett, A. R., Blackburn, C. C., Manley, N. R. Gcm2 and Foxn1 mark early parathyroid- and thymus-specific domains in the developing third pharyngeal pouch. Mech Dev. 103, 141-143 (2001).
- Neves, H., Dupin, E., Parreira, L., Le Douarin, N. M. Modulation of Bmp4 signalling in the epithelial-mesenchymal interactions that take place in early thymus and parathyroid development in avian embryos. Dev Biol. 361 (2), 208-219 (2012).
- Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1. Nat Genet. 27 (3), 286-291 (2001).
- Nie, X., Brown, C. B., Wang, Q., Jiao, K. Inactivation of Bmp4 from the Tbx1 expression domain causes abnormal pharyngeal arch artery and cardiac outflow tract remodeling. Cells Tissues Organs. 193 (6), 393-403 (2011).
- Zou, D., Silvius, D., Davenport, J., Grifone, R., Maire, P., Xu, P. X. Patterning of the third pharyngeal pouch into thymus/parathyroid by Six and Eya1. Dev Biol. 293 (2), 499-512 (2006).
- Uematsu, E., et al. Use of in ovo. chorioallantoic membrane engraftment to culture testes from neonatal mice. Comp Med. 64 (4), 264-269 (2014).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
