نقدم بروتوكولا للتحقيق في المؤشرات الحيوية التعبير مرناً للخلايا المستمدة من السمحاق (PDCs) الناجم عن فيتامين ج (فيتامين ج) و 1, 25-ديهيدروكسي فيتامين د [1,25-(OH)2د3]. وبالإضافة إلى ذلك، نقوم بتقييم قدرة PDCs تفرق في أوستيوسيتيس وتشوندروسيتيس و adipocytes.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من السمحاق السنخية البشرية وآثار فيتامين د على نشاط الخلايا المستمدة من السمحاق أوستيوجينيك
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) الموجودة في مجموعة متنوعة من الأنسجة، ويمكن أن تكون متباينة في العديد من أنواع الخلايا، بما في ذلك خلايا الاوستيوبلاستس. بين مصادر MSCs الأسنان، هو السمحاق أنسجة يسهل الوصول إليها، والتي تم تحديدها لاحتواء MSCs في طبقة كامبيوم. إلا أن هذا المصدر لم حتى الآن على نطاق واسع تدرس.
فيتامين د3 و 1,25-(OH)2د3 ثبت لتحفيز في المختبر التمايز من MSCs إلى خلايا الاوستيوبلاستس. وبالإضافة إلى ذلك، يسهل فيتامين ج الكولاجين تشكيل والعظام نمو الخلايا. ومع ذلك، حقق أي دراسة بعد آثار فيتامين (د)3 وفيتامين ج على MSCs.
نقدم هنا، وسيلة لعزل MSCs من السمحاق السنخية البشرية، والنظر في الفرضية القائلة بأن 1,25-(OH)2د3 قد بذل تأثير أوستيويندوكتيفي على هذه الخلايا. ونحن أيضا التحقيق في وجود MSCs في السمحاق السنخية البشرية وتقييم التصاق الخلايا الجذعية وانتشار. لتقييم قدرة فيتامين ج (كعنصر تحكم) وتركيزات مختلفة من 1,25-(OH)2د3 (10−10و 10−9، 10−8و 10−7 م) لتغيير مفتاح المؤشرات الحيوية مرناً في العظام التعبير مرناً MSCs معزولة عن الفوسفاتيز القلوية (حزب العمال الأسترالي)، سيالوبروتين (BSP) وعامل الربط الأساسية ألفا-1 (CBFA1)، الكولاجين-1 osteocalcin (OCN) يتم قياس استخدام الوقت الحقيقي البلمرة المتسلسل (RT-PCR).
المقدمة
على الرغم من أن العديد من التقنيات ذات الصلة قد وضعت في السنوات الأخيرة، العظام التعمير تظل محدودة بقيود متعددة، وتقدير مدى إعادة البناء الضرورية وكثيراً ما يستحيل. تكبير الأنسجة الثابت مطلوب لتحقيق الأهداف الجمالية والفنية على حد سواء بالإضافة إلى نسبة نجاح الطويل الأجل مواتية. وتشمل الأساليب المستخدمة عادة لمثل هذه الإجراءات تطعيم العظم الغازي و allogenic، إكسينوجرافتينج، وتطعيم العظم اللوبلاستيك. بين مختلف أنواع الفساد العظام، وترقيع العظام الغازي تعتبر الأكثر فعالية. ومع ذلك، كانت المانحة الموقع الاعتلال والشبهة الأوعية الدموية والأنسجة محدودية توافر1 العوائق الرئيسية لتطعيم العظم الغازي. وباﻹضافة إلى ذلك، ارتبطت ترقيع العظام allogenic وتكث....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأقر بروتوكول الدراسة "المؤسسية استعراض المجلس تشانغ الأمنيون التذكارية المستشفى". وقدمت جميع المشاركين الموافقة الخطية.
1-إعداد الأنسجة
- حصاد الأنسجة بيريوستيل من المرضى أثناء جراحة الأسنان (الشكل 1). بعد تفكير رفرف تحت التخدير الموضعي، يأخذ قطعة من نسيج سمحاق العظام السنخية باستخدام فاصل periosteal31.
- بعد الحصاد، تخزين شرائح الأنسجة periosteal حوالي 5 مم × 2 مم في الفوسفات مخزنة المالحة دولبيكو (دببس) مع يو/مليلتر 300 البنسلين و 300 ملغ/مل من ستربتوميسين. نقل الأنسجة إلى المختبر خلال 24 ساعة.
- فرم الشظايا الأنسجة periosteal السنخية مع المشارط حتى مفروم جيدا ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ترد البيانات لجميع الاختبارات الكمية، كما يعني ± الانحراف المعياري (SD). أجريت جميع التحليلات الإحصائية باستخدام الطالب t-اختبار. وفي المجموع، تم الحصول على العينات 34 مع متوسط عمر المشاركين من 48.1 ± 12.3 يوسف أحد عشر من هذه العينات التي تم الحصول عليها من المرضى الذكور و 23 من المرضى الإناث. وتم الحصول على عينات ثمانية وعشرون من المناطق المولى وستة من المناطق الأمامية؛ وتم الحصول على 26 من الفك الأعلى و 8 من الفك السفلي. وكانت مدة يعني بين إجراءات طب الأسنان والثقافة ± 0.5 0.1 .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
طريقة علاجية المتقدمة مؤخرا، إلا وهي الأنسجة الهندسة التي تستتبع MSCs، له فوائد عديدة. MSCs، التي موجودة في العديد من أنواع الأنسجة، هي multipotent الخلايا التي يمكن أن تفرق في مجموعة متنوعة من خلايا الأنسجة ميسوديرمال الوظيفية37 وغيرها من الخلايا مثل خلايا الاوستيوبلاستس.
السمحاق بمثابة محراب للخلايا السلف وإمدادات المفرج غنية للعظام من مظاريف38. في دراستنا، عينات التحقيق 34، أثمر 20 بنجاح المستعمرات MSC، مع معدل نجاح عزل 58.8 في المائة. MSCs ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
وأقر "مجلس المراجعة المؤسسية" "البحوث من تشانغ الأمنيون التذكارية المستشفى اﻻكلينيكي" (IRB99-1828B و C 100-3019، 99-3814B، ج 102-1619، 101-4728B وج 103-4223) بروتوكول الدراسة. وأيد هذه الدراسة تشانغ الأمنيون التذكاري مستشفى (CMRPG392071، CMRPG3A1141، CMRPG3A1142، و NMRPG3C0151). تم تحرير هذه المخطوطة عن طريق "تحرير والاس الأكاديمية".
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.25٪ تريبسين-EDTA | جيبكو | 25200-056 | |
| 2-phospho-L-ascorbic acidملح ثلاثي الصوديوم | Sigma | 49752 | |
| أطباق استزراع 35 مم | Corning | 430165 | |
| 3-isobutyl-1-methylxanthine | Sigma | I5879 | |
| 6 & nbsp; لوحة البئر | Corning | 3516 | |
| الفوسفاتيز القلوي | ABI | Hs01029144_m1 | |
| نشاط الفوسفاتيز القلوي مجموعة الفحص اللوني | BioVision | K412-500 | |
| النسخ العكسي لفيروس الأرومة النخاعية للطيور | Roche | 10109118001 | |
| CD146 | BD | 561013 | |
| CD19 | BD | 560994 | |
| CD34 | BD | 560942 | |
| CD44 | دينار | بحريني 561858 | |
| CD45 | BD | 561088 | |
| CD73 | BD | 561014 | |
| CD90 | BD | 561974 | |
| Cell Banker1 | ZEAOAQ | 11888 | |
| عامل الربط الأساسي alpha-1 | ABI | Hs00231692_m1 | |
| ديكساميثازون | سيجما | D4902 | |
| DPBS | Gibco | 14190250 | |
| FBS | Gibco | 26140-079 | |
| GAPDH | ABI | Hs99999905_m1 | |
| HLA-DR | BD | ||
| إندوميتاسين | Sigma | I7378 | |
| الأنسولين | sigma< em> | 91077C | |
| الأنسولين – transferrin– السيلينيوم-A | Sigma | I1884 | |
| MicroAmp Fast 96 لوحة تفاعل جيد (0.1 مل) | Life | 4346907 | |
| MicroAmp فيلم لاصق بصري | Life | 4311971 | |
| الحد الأدنى من المتوسط الأساسي 1X تعديل ألفا | HyClone | SH30265.02 | |
| البنسلين / الستربتومايسين | جيبكو | 15140-122 | |
| عازلة النفاذية | eBioscience | 00-8333-56 | |
| بيروفات الصوديوم | جيبكو | 11360070 | |
| STRO-1 | BioLegend | 340103 | |
| SYBER Green PCR Master Mix | Applied Biosystems | 4309155 | |
| TaqMan Master Mix | Life | 4304437 | |
| تحويل عامل النمو - وبيتا ؛ | سيجما | T7039 | |
| كاشف Trizol (لعزل الحمض النووي الريبي) | Life | 15596018 | |
| &-glycerophosphate | Sigma | G9422 | |
| كولاجين -1 | Invitrogen | التمهيدي الأمامي 5 'CCTCAAGGGCTCCAACGAG-3 التمهيدي العكسي 5'-TCAATCACTGTCTTGCCCCA-3'OCN | |
| Invitrogen | التمهيدي الأمامي 5'-GTGCAGCCTTTGTGTCCAAG-3' التمهيدي العكسي 5'-GTCAGCCAACTCGTCACAGT-3'BSP | ||
| Invitrogen | التمهيدي الأمامي 5' AAAGTGAGAACGGGGAACCT-3' التمهيدي العكسي 5'-GATGCAAAGCCAGAATGGAT-3'بادئات | ||
| ALP التجارية | |||
| بادئات |
المراجع
- Kao, R. T., Murakami, S., Beirne, O. R. The Use of Biologic Mediators and Tissue Engineering in Dentistry. Periodontol. 50, 127-153 (2000).
- Rosenbaum, A. J., Grande, D. A., Dines, J. S. The Use of Mesenchymal Stem Cells in Tissue Engineering: A Global Assessment. Or....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
