وتعرض هذه الورقة إجراء شامل لتقييم في المختبر ما إذا كان يوجد ورم الكلاسيكية تولد الأوعية في هيمانجيوبلاستوماس (HBs) ودورها في ميزانيات. وتسليط الضوء على الطابع المعقد لغبطة-نيوفاسكولاريزيشن النتائج توحي بأن هذا النموذج الموحد لتولد الأوعية فقط إليه تكميلية في غبطة-نيوفاسكولاريزيشن.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إجراء شامل تقييم أداء نيوفاسكولاريزيشن هيمانجيوبلاستوما المفترضة استخدام كروي تنتشر في التحليل في المختبر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المنظمة الجينات القامع الورم فون هيبل-لينداو (VHL) يلعب دوراً حاسما في تطوير هيمانجيوبلاستوماس (HBs) داخل النظام العصبي المركزي (CNS) البشرية. ومع ذلك، أصل الخلوية وعملية تطورية من ميزانيات (بما في ذلك نيوفاسكولاريزيشن) تظل مثيرة للجدل، والأوعية المناهضة ل VHL-HBs، استناداً إلى الكلاسيكية غبطة الأوعية، أسفرت عن نتائج مخيبة للآمال في التجارب السريرية. هو إحدى العقبات الرئيسية للترجمة السريرية الناجحة لعلاج الأوعية الدموية المناهضة الافتقار إلى فهم دقيق نيوفاسكولاريزيشن في هذا الورم والأوعية الدموية. في هذه المقالة، نقدم إجراء شامل لتقييم في المختبر ما إذا كان يوجد ورم الكلاسيكية تولد الأوعية في ميزانيات، فضلا عن دورها في ميزانيات. مع هذا الإجراء، يمكن أن دقة فهم تعقيد neovascularization غبطة الباحثين وتحديد وظيفة هذا النموذج الموحد للأوعية في ميزانيات. يمكن استخدام هذه البروتوكولات لتقييم العلاج المضادة الأوعية الدموية الواعدة للأورام، التي لديها إمكانات متعدية الجنسيات عالية لعلاج الأورام أو للمعاونة في الاستغلال الأمثل لعلاج الأوعية المضادة HBs في المستقبل الترجمات. وتسليط الضوء على الطابع المعقد لغبطة neovascularization النتائج توحي بأن هذه الأوعية النموذج الموحد فقط إليه تكميلية في neovascularization غبطة.
المقدمة
Hemangioblastomas (HBs) هي أورام حميدة في الأوعية الدموية التي تم العثور عليها حصرا داخل الإنسان الجهاز العصبي المركزي (CNS). أنها تتطور في المرضى الذين يعانون من مرض فون هيبل-لينداو (VHL) أو الآفات متفرقة. VHL-هكسابايت يصعب علاج من خلال العلاج الجراحي بسبب تكرار المتكرر والآفات المتعددة التي تنجم عن هذا الوراثية واضطراب1. على الرغم من أن المنظمة الجينات القامع الورم VHL اعتبرت السبب الجذري tumorigenesis VHL-هكسابايت، منشأ الخلوية (بما في ذلك نيوفاسكولاريزيشن) والعملية التطورية لميزانيات تظل مثيرة للجدل إلى حد كبير2. ولذلك، فهم أفضل للآليات البيولوجية غبطة-نيوفاسكولار قد توفر أفكاراً مفيدة في الأوعية الدموية المناهضة الا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وكان تنفيذ هذا الأسلوب وفقا للمبادئ التوجيهية المعتمدة وأنظمة البحث أخلاقيات اللجنة من هواشان مستشفى جامعة فودان. وتلت تدابير السلامة القياسية المناظرة في كل خطوة. لعرض تقديمي تخطيطي، يرجى الرجوع إلى الشكل 1.
1-الخلية الثقافة وبناء بلازميد
- الاحتفاظ بشكل روتيني تعديل الخلية البشرية الوريد السري غشائي (هوفيك) في دولبيكو المتوسطة النسر (دميم) تستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين (FBS)، 100 وحدة/مل من البنسلين و 100 ميكروغرام/مل من ستربتوميسين في هوميديفيد 5% CO2 حاضنة عند 37 درجة مئوية.
- هضم بلازميد PLKO.1 مع أبي واكوري لتوليف بلغة شرنا. تأكد من تسلسل اليغنوكليوتيد ناقل شرنا VHL تتججتجتكتككاجاتكتتتتج ككج....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وتؤخذ الصور الأصلية بالمجهر المقلوب الخفيفة. الصور النمطية للسيطرة على المجموعة والمجموعة VHL مبينة في الشكل 2-A1 و الشكل 2-A2. طول تبرعم من السيطرة على المجموعة أقصر من مجموعة VHL.
بعد تحميل الصور، يوفر منصة على الإنترنت تحليل النتائج مباشرة. الناتج يتكون من جزئين: الصورة المجهزة ونتائج التحليل المطابق. صور المجهزة من السيطرة على المجم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في الآونة الأخيرة، كانت تحفزها حقول متعددة من بحوث البيولوجيا الأوعية الدموية دراسة بطانة الأوعية15. في هذه المقالة، قمنا بتطوير كروي غشائي تنتشر تقنية كنموذج تجريبي لدراسة تشكيل السفينة التي تنبع من مورث VHL فقدان وظيفة في خلايا بطانية التلاعب بها لتحديد الجزيئات رواية مرشحة تتالي الأوعية. على حد علمنا، هذا هو أول تقرير لدراسة آثار الأوعية خلايا بطانية معدلة الفلزية.
نيوفاسكولاريزيشن الأنسجة (بما في ذلك ورم الأنسجة) هو عملية معقدة يحدث عن طريق الأوعية فاسكولوج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل منح من لجنة شانغهاي للعلوم والتكنولوجيا (15411951800، 15410723200). الكتاب أود أن أشكر البروفيسور يومي ون والبروفيسور تشاو تشاو جامعة "إدارة فودان الكائنات الدقيقة المسببة للأمراض" الخاصة بالمساعدة التقنية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الخلية البطانية للوريد السري البشري | خلية Fudan IBS | FDCC-HXN180 | |
| dulbecco النسر المعدل s متوسط | جيبكو | 11995040 | |
| مصل الأبقار الجنيني | Gibco | 26400044 | |
| PLKO.1-puro vector | Addgene | # 8453 | |
| التعبئة البلازميد psPAX2 ؛ | Addgene | # 12260 | |
| مغلف بلازميد pMD2.G | Addgene | # 12259 | |
| 3D مستدير القاع 96 بئر لوحات | S-Bio | MS-9096M | |
| matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
| Opti-MEM medium | Gibco | 31985-070 | متوسط المصل المخفض ؛ |
| الجل ذات 15 بئر | عن طريق موازنة & mu ؛ – شريحة تكوين الأوعية الدموية قبل الاستخدام داخل الحاضنة بين عشية وضحاها | ||
| مكملات نمو الخلايا البطانية | Sciencell | # 1052 | |
| طبق ثقافة 10 سم | Corning | Scipu000813 | |
| Puromycin | Gibco | A1113802 | |
| typsin-EDTA | Gibco | 25200056 | |
| نظام عداد الخلايا الآلي ؛ | الصور BioTech | ||
| وينماسيس | http://mywim.wimasis.com |
المراجع
- Lonser, R. R., et al. von Hippel-Lindau disease. Lancet. 361 (9374), 2059-2067 (2003).
- Hussein, M. R. Central nervous system capillary haemangioblastoma: the pathologist's viewpoint. Int J Exp Pathol. 88 (5), 311-324 (2007).
- Ma, D., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
