Method Article

إجراء شامل تقييم أداء نيوفاسكولاريزيشن هيمانجيوبلاستوما المفترضة استخدام كروي تنتشر في التحليل في المختبر

DOI:

10.3791/57183

⸱

April 12th, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, Huashan Hospital, Fudan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتعرض هذه الورقة إجراء شامل لتقييم في المختبر ما إذا كان يوجد ورم الكلاسيكية تولد الأوعية في هيمانجيوبلاستوماس (HBs) ودورها في ميزانيات. وتسليط الضوء على الطابع المعقد لغبطة-نيوفاسكولاريزيشن النتائج توحي بأن هذا النموذج الموحد لتولد الأوعية فقط إليه تكميلية في غبطة-نيوفاسكولاريزيشن.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المنظمة الجينات القامع الورم فون هيبل-لينداو (VHL) يلعب دوراً حاسما في تطوير هيمانجيوبلاستوماس (HBs) داخل النظام العصبي المركزي (CNS) البشرية. ومع ذلك، أصل الخلوية وعملية تطورية من ميزانيات (بما في ذلك نيوفاسكولاريزيشن) تظل مثيرة للجدل، والأوعية المناهضة ل VHL-HBs، استناداً إلى الكلاسيكية غبطة الأوعية، أسفرت عن نتائج مخيبة للآمال في التجارب السريرية. هو إحدى العقبات الرئيسية للترجمة السريرية الناجحة لعلاج الأوعية الدموية المناهضة الافتقار إلى فهم دقيق نيوفاسكولاريزيشن في هذا الورم والأوعية الدموية. في هذه المقالة، نقدم إجراء شامل لتقييم في المختبر ما إذا كان يوجد ورم الكلاسيكية تولد الأوعية في ميزانيات، فضلا عن دورها في ميزانيات. مع هذا الإجراء، يمكن أن دقة فهم تعقيد neovascularization غبطة الباحثين وتحديد وظيفة هذا النموذج الموحد للأوعية في ميزانيات. يمكن استخدام هذه البروتوكولات لتقييم العلاج المضادة الأوعية الدموية الواعدة للأورام، التي لديها إمكانات متعدية الجنسيات عالية لعلاج الأورام أو للمعاونة في الاستغلال الأمثل لعلاج الأوعية المضادة HBs في المستقبل الترجمات. وتسليط الضوء على الطابع المعقد لغبطة neovascularization النتائج توحي بأن هذه الأوعية النموذج الموحد فقط إليه تكميلية في neovascularization غبطة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hemangioblastomas (HBs) هي أورام حميدة في الأوعية الدموية التي تم العثور عليها حصرا داخل الإنسان الجهاز العصبي المركزي (CNS). أنها تتطور في المرضى الذين يعانون من مرض فون هيبل-لينداو (VHL) أو الآفات متفرقة. VHL-هكسابايت يصعب علاج من خلال العلاج الجراحي بسبب تكرار المتكرر والآفات المتعددة التي تنجم عن هذا الوراثية واضطراب1. على الرغم من أن المنظمة الجينات القامع الورم VHL اعتبرت السبب الجذري tumorigenesis VHL-هكسابايت، منشأ الخلوية (بما في ذلك نيوفاسكولاريزيشن) والعملية التطورية لميزانيات تظل مثيرة للجدل إلى حد كبير2. ولذلك، فهم أفضل للآليات البيولوجية غبطة-نيوفاسكولار قد توفر أفكاراً مفيدة في الأوعية الدموية المناهضة الا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان تنفيذ هذا الأسلوب وفقا للمبادئ التوجيهية المعتمدة وأنظمة البحث أخلاقيات اللجنة من هواشان مستشفى جامعة فودان. وتلت تدابير السلامة القياسية المناظرة في كل خطوة. لعرض تقديمي تخطيطي، يرجى الرجوع إلى الشكل 1.

1-الخلية الثقافة وبناء بلازميد

  1. الاحتفاظ بشكل روتيني تعديل الخلية البشرية الوريد السري غشائي (هوفيك) في دولبيكو المتوسطة النسر (دميم) تستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين (FBS)، 100 وحدة/مل من البنسلين و 100 ميكروغرام/مل من ستربتوميسين في هوميديفيد 5% CO2 حاضنة عند 37 درجة مئوية.
  2. هضم بلازميد PLKO.1 مع أبي واكوري لتوليف بلغة شرنا. تأكد من تسلسل اليغنوكليوتيد ناقل شرنا VHL تتججتجتكتككاجاتكتتتتج ككج....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتؤخذ الصور الأصلية بالمجهر المقلوب الخفيفة. الصور النمطية للسيطرة على المجموعة والمجموعة VHL مبينة في الشكل 2-A1 و الشكل 2-A2. طول تبرعم من السيطرة على المجموعة أقصر من مجموعة VHL.

بعد تحميل الصور، يوفر منصة على الإنترنت تحليل النتائج مباشرة. الناتج يتكون من جزئين: الصورة المجهزة ونتائج التحليل المطابق. صور المجهزة من السيطرة على المجم.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الآونة الأخيرة، كانت تحفزها حقول متعددة من بحوث البيولوجيا الأوعية الدموية دراسة بطانة الأوعية15. في هذه المقالة، قمنا بتطوير كروي غشائي تنتشر تقنية كنموذج تجريبي لدراسة تشكيل السفينة التي تنبع من مورث VHL فقدان وظيفة في خلايا بطانية التلاعب بها لتحديد الجزيئات رواية مرشحة تتالي الأوعية. على حد علمنا، هذا هو أول تقرير لدراسة آثار الأوعية خلايا بطانية معدلة الفلزية.

نيوفاسكولاريزيشن الأنسجة (بما في ذلك ورم الأنسجة) هو عملية معقدة يحدث عن طريق الأوعية فاسكولوج.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل منح من لجنة شانغهاي للعلوم والتكنولوجيا (15411951800، 15410723200). الكتاب أود أن أشكر البروفيسور يومي ون والبروفيسور تشاو تشاو جامعة "إدارة فودان الكائنات الدقيقة المسببة للأمراض" الخاصة بالمساعدة التقنية.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
الخلية البطانية للوريد السري البشريخلية Fudan IBSFDCC-HXN180
dulbecco النسر المعدل s متوسط جيبكو11995040
مصل الأبقار الجنينيGibco  26400044
PLKO.1-puro vectorAddgene# 8453
التعبئة البلازميد psPAX2   ؛Addgene# 12260
مغلف بلازميد pMD2.GAddgene# 12259
3D مستدير القاع 96 بئر لوحاتS-BioMS-9096M
matrigelBD Biosciences354234
Opti-MEM mediumGibco31985-070متوسط المصل المخفض   ؛
الجل ذات 15 بئرعن طريق موازنة & mu ؛ – شريحة تكوين الأوعية الدموية قبل الاستخدام داخل الحاضنة بين عشية وضحاها
مكملات نمو الخلايا البطانيةSciencell# 1052
طبق ثقافة 10 سمCorningScipu000813
PuromycinGibcoA1113802
typsin-EDTAGibco25200056
نظام عداد الخلايا الآلي   ؛الصور BioTech
 وينماسيسhttp://mywim.wimasis.com 
مركز يمكن تقليل فقاعات الهواء في برنامج تحليل

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lonser, R. R., et al. von Hippel-Lindau disease. Lancet. 361 (9374), 2059-2067 (2003).
  2. Hussein, M. R. Central nervous system capillary haemangioblastoma: the pathologist's viewpoint. Int J Exp Pathol. 88 (5), 311-324 (2007).
  3. Ma, D., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hemangioblastoma NeovascularizationSpheroid Sprouting AssayVHL Gene SilencingEndothelial Cell CultureLentiviral Vector TransfectionHUVEC Cell LineSprout Length AnalysisIn Vitro AngiogenesisTumor VasculogenesisCapillary Formation Assay

Related Articles