Hypofunction الغدة اللعابية نتيجة متكررة للعلاج بالإشعاع وأمراض المناعة الذاتية. التقييم استنساخه من وظيفة الغدة اللعابية في نماذج الماوس لهذه الأمراض تحديا تقنيا. وهنا يتم وصف طريقة بسيطة لقياس دقيق واستنساخه لإنتاج اللعاب في الفئران.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
طريقة لقياس وظيفة الغدة اللعابية في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المرضى الذين يعانون من المتلازمة في سيورغن، أحد أمراض المناعة الذاتية التي تؤثر في إفرازات الغدد، تطوير التهاب الغدة اللعابية وخفضت إنتاج اللعاب. وبالمثل، يتم إنتاج اللعاب لخطر شديد في المرضى الذين يتلقون العلاج الإشعاعي لسرطان الرأس والعنق. تسهيل فهم إمراضية المرض نماذج القوارض، وضعت لتقليد هذه الشروط السريرية، والسماح لوضع استراتيجيات علاجية جديدة. ولذلك، القدرة على دقة، وتكاثر، ومرارا وتكرارا قياس وظيفة الغدة اللعابية في نماذج حيوانية أمر بالغ الأهمية. وبناء على الإجراءات المذكورة سابقا في الأدب، وضعت أسلوب يفي بهذه المعايير وكان يستخدم لتقييم وظيفة الغدة اللعابية في الفئران. ميزة إضافية لهذا الأسلوب الجديد هو أنه يتقن بسهولة، وقد تباين بين المشغل صغيرة. يتم تقييم الدالة الغدة اللعابية كمبلغ (الوزن أو الحجم) أو معدل اللعاب تنتج استجابة للتحفيز pilocarpine (مل/دقيقة). تجمع اللعاب مصدر جيد لتحليل محتوى البروتين، وتركيزات الغلوبولين المناعي، والجزيئات الحيوية الأخرى.
المقدمة
تنتج الغدد اللعابية اللعاب في الاستجابة لمجموعة متنوعة من المحفزات العصبية والميكانيكية1. ويجري من خلال النظام العصبي متعاطفة والجهاز السمبتاوي مستقبلات ادريناليه واتروبين في الغدة المحفزات. بيلوكاربيني هو عامل اتروبين، الفقرة--مقلدات الذي يعمل أساسا على المستقبلات المسكارينيه. في الغدة اللعابية، فإنه يحفز إنتاج اللعاب بالنيابة على مستقبلات أستيل المسكارينيه M31. مؤشرا لقدرة الغدد اللعابية للاستجابة لتحفيز إنتاج اللعاب بعد الإدارة pilocarpine ويستخدم عادة كمقياس لوظيفة الغدة اللعابية.
القياس الدقيق لإنتاج اللعاب أمر بالغ الأهمية في دراسة أمراض الغدة اللعابية بما في ذلك متلازمة في سيورغن
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأقر البروتوكول، المذكورة أدناه برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة وأنه يتبع المبادئ التوجيهية الأخلاقية التي وضعتها "المعاهد الوطنية للصحة". جميع البيانات الواردة في هذا التقرير تم إنشاؤها بواسطة استخدام الفئران الإناث التي كانت الأسابيع 10-12 من العمر. واستخدمت السلالات التالية من الفئران: C57BL/6، بالب/ج، DBA1، 129S، و F1 (B6XA/ي). جميع الفئران يسكنون في أقفاص الحاجز (5 الحيوانات في قفص) في ظروف معينة خالية من مسببات الأمراض وتوفير الأعلاف والمياه ad متواصلة.
1-إعداد
- لإعداد حل أسهم هيدروكلوريد pilocarpine، تزن 10 مغ المجمع وحل في 1.776 مل من المحلول الملحي متساوي التوتر العقيمة التي فورتيكسينج، تعطي حلاً أسهم من 5.63 mg/mL....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في النظم النموذجية التجريبية الماوس، يتم استخدام القدرة على إنتاج اللعاب استجابة للتحفيز بيلوكاربيني كمؤشر لوظيفة الغدة اللعابية. في الفئران الإناث C57BL/6 عمره 11 أسبوع تقاس طريقة مسحه إنتاج اللعاب. الشكل 1A، يتم التعبير عن النتائج بكمية اللعاب (mg) جمعت بعد جرعات متزايدة من بيلوكاربيني. في الجرعة 1 ملغ/كغ من وزن الجسم، بدأ بعض الفئران العارضة الشدة (تهز غير الطوعي ويرتجف). ومن ثم لم يتم اختبار الجرعات العالية من pilocarpine، تتجاوز 1 مغ/كغ من وزن الجسم في ه.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
إنتاج اللعاب هو عملية معقدة، ويتأثر بعوامل عديدة. ولذلك، يمكن قياس وظيفة الغدة اللعابية في الحيوانات المختبرية تحديا. تحديا إضافيا أن القياسات المتكررة لوظيفة الغدة اللعابية في الحيوان نفسه المطلوب لإثبات ظهور المرض أو إظهار الاسترداد بعد العلاج.
الأسلوب مسحه الموصوفة في هذا التقرير بسيطة من الناحية التقنية للقيام بخيارات متعددة لتمثيل البيانات. النتائج التي تم الحصول عليها يتم استنساخه، مع اختلاف بسيط بين المشغل. الأسلوب يمكن الكشف عن انخفاض في إنتاج اللعاب في نماذج مختلفة من اختلال وظيفي في .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب قد لا يوجد تضارب في الكشف عن.
شكر وتقدير
وأيد هذه الدراسة منحة من المعاهد الوطنية للصحة، والمعهد الوطني لطب الأسنان والجمجمة البحوث (DE025030).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <>مواد كيميائية قوية لجمع اللعاب< / قوي> | |||
| بيلوكاربين هيدروكلوريد | ألفا إيسار ، توكسبري ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية | B21410 | مخفف في محلول ملحي معقم متساوي التوتر. قم بتخزين كميات الاستخدام الفردي من مخزون 100X بسعر -80oC |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthesia Mix Solution | امزج 1 مل من هيدروكلوريد الكيتامين + 0.5 مل زيلازين + 8.5 مل من محلول ملحي معقم متساوي التوتر في قارورة معقمة. يمكن استخدامه لمدة 3 أشهر. | ||
| زيتامين (هيدروكلوريد الكيتامين) | Vet One ، Boise ، Idaho ، الولايات المتحدة الأمريكية | C3N VT1 | المخزون هو 100 مجم / مل |
| Anased (Xylazine) | Med-Vet International ، Metawa ، IL ، الولايات المتحدة الأمريكية | RXANASED-20 | المخزون هو 20 مجم / مل |
| محلول ملحي معقم متساوي التوتر | Vet One ، Boise ، أيداهو ، الولايات المتحدة الأمريكية | 501032 | يستخدم |
| كمخفف دموع اصطناعية (مرهم تشحيم للعيون) | هنري شين ، دبلن ، أوهايو ، الولايات المتحدة الأمريكية | 48272 | تستخدم لمنع العينين من الجفاف أثناء الإجراء |
| <قوي>الاسم | Company | Catalog Number | Comments |
| مواد لجمع اللعاب | |||
| SalivaBio مسحة للأطفال | Salimetrics، LLC Carlsbad، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | N / A | مسحات ملفوفة بشكل فردي |
| 50 مل أنابيب البولي بروبلين | VWR ، Radnor ، PA ، الولايات المتحدة الأمريكية | 89004-364 | قطع الجزء السفلي من 1 سم من الأنبوب. تأكد من أن الحافة المقطوعة ناعمة. |
| أنابيب الطرد المركزي الدقيقة 0.6 مل | VWR ، رادنور ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 87003-290 | قم بعمل ثقوب في الجزء السفلي من الأنبوب بإبر قياس 18 ساخنة |
| الطرد المركزي الدقيقة 2 مل | VWR ، رادنور ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 87003-298 | |
| محاقن الأنسولين مع إبر متصلة بشكل دائم | Becton Dickinson and Company ، Franklin Lakes ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية | 324702 | |
| 18 قياس إبر | مخروطية عاديةبكتون ديكنسون وشركاه ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية | 305195 | |
| شفرة مشرط معقمة # 11 | Integra York Inc PA ، الولايات المتحدة الأمريكية | 4-311 | |
| ملقط تشريح دقيق | Roboz ، Gaithersburg ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية | RS-5139 | زاوي مسنن 0.8 مم ، شريط ملصق بطول 4 بوصات |
| سانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية ، دالاس ، تكساس ، الولايات المتحدة الأمريكية | SC-224487 | ||
| مؤقت 3 قنوات | Amazon.com ، سياتل ، واشنطن ، الولايات المتحدة الأمريكية | B06W2KCYVN | |
| الميزان التحليلي | Mettler توليدو ، كولومبوس أوهايو ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| strong>Name< / strong> | Company | Catalog Number | Comments |
| Chemicals / الكواشف لإحداث الخلل الوظيفي في اللعاب< / قوي> | |||
| LPS | Invivogen ، سان ديجو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | tlrl-b5lps | يذوب في الماء الخالي من السموم الداخلية ، ويخزن محلول المرق بمعدل 5 مجم / مل. يخفف في HBSS معقم 100 ميكروغرام / مل - حقن 100 ميكرولتر / moue ip |
| Imject Alum adjuvant | Thermo Scientific | 77161 | تمييع 1: 1 في محلول ملحي معقم. حقن داخل الصفاق 0.1 مل / فأر |
| أرنب مضاد مضاد ل Ro52 | تم إنشاؤه في المختبر | تحصين الأرانب بالفأر المؤتلف Ro52 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chemicals/ Kits لتحليلات اللعاب | |||
| <قوي >تقدير ليزوزيم اللعاب< / قوي> | |||
| EnzChek Lysozyme Assay Kit | المجسات الجزيئية ، يوجين ، أوريغون ، الولايات المتحدة الأمريكية | E-22013 | تستخدم وفقا لتعليمات الشركة المصنعة |
| Name< / strong> | Company | Catalog Number | Comments |
| <قوي > تقدير اللعابي IgA بواسطة شطيرة ELISA< / strong> | |||
| Mouse IgA | Southern Biotech ، برمنغهام ، AL ، الولايات المتحدة الأمريكية | 0106-01 | معايير شطيرة ELISA - نطاق 30 نانوغرام / مل إلى 0.5 نانوغرام / مل |
| الماعز المضادة للفأر IgA غير المسمى | Southern Biotech ، برمنغهام ، AL ، الولايات المتحدة الأمريكية | 1040-01 | معطف عند 1 ميكروغرام / مل في عازلة بيكربونات |
| الماعز المضادة للفأر IgA HRP | Southern Biotech ، برمنغهام ، AL ، الولايات المتحدة الأمريكية | 1040-05 | الجسم المضاد للكشف المستخدم في 1: 4000 |
| TMB الركيزة | Becton Dickinson and Company ، Franklin Lakes ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية | 555214 | تستخدم وفقا لتعليمات الشركة المصنعة |
| Immulon 4HBX Microtiter 96 ألواح بئر | Thermo Scientific ، روتشستر ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية | 3855 | |
| Name | Company | < قوي > رقم الكتالوج < قوي > | < قوي > تعليقات < / قوي > |
| < قوي > تقدير البروتين اللعابي < / قوي > | |||
| Bio-Rad بروتين فحص صبغ كاشف الصبغة مركز | BioRad ، هرقل ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 5000006 | لتقدير البروتين وفقا لتعليمات الشركة المصنعة |
المراجع
- Proctor, G. B. The physiology of salivary secretion. Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).
- Fox, R. I. Sjögren's syndrome. Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).
- Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
