Method Article

طريقة بسيطة لعزل بروتوبلاستس فول الصويا وتطبيق لتحليل التعبير الجيني عابر

DOI:

10.3791/57258

⸱

January 25th, 2018

 , 
1Department of Biology, California State University, Northridge

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قمنا بتطوير بروتوكول بسيطة وفعالة لإعداد كميات كبيرة من فول الصويا بروتوبلاستس لدراسة آليات تنظيمية والإشارات المعقدة في الخلايا الحية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فول الصويا (ماكس جليكاين (لام) مير.) هو أنواع محاصيل هامة، وأصبحت نموذجا البقول للدراسات الخاصة بالمسارات الجينية والبيوكيميائية. ولذلك، من المهم إقامة نظام تعبير الجيني عابر فعالة في فول الصويا. هنا، نحن تقرير بروتوكول بسيط لإعداد بروتوبلاستس فول الصويا وتطبيقه للتحليلات الفنية عابرة. ووجدنا أن يترك أونيفولياتي الشباب من بذور فول الصويا أدى إلى كميات كبيرة من بروتوبلاستس عالية الجودة. عن طريق تحسين أسلوب تحويل الكالسيوم توسطت شماعة، حققنا التحول عالية الكفاءة باستخدام فول الصويا أونيفولياتي بروتوبلاستس. هذا النظام يوفر نموذج كفاءة وتنوعاً للنظر في آليات تنظيمية والإشارات المعقدة في الخلايا الحية من فول الصويا، وقد تساعد على تحسين فهم العمليات الخلوية والتنموية والفسيولوجية المتنوعة من البقوليات.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوبلاستس هي الخلايا النباتية التي تحتوي على جدران الخلايا إزالة. كما يحتفظون بمعظم الميزات وأنشطة الخلايا النباتية، بروتوبلاستس هي نظام نموذجا جيدا لمراقبة وتقييم الأحداث الخلوية المتنوعة، وهي أدوات قيمة لدراسة تهجين جسمية1 ومصنع التجدد2. بروتوبلاستس على نطاق واسع أيضا استخدمت محطة التحول3،،من45، نظراً لجدران الخلايا إلا تعرقل مرور الحمض النووي في الخلية. بروتوبلاستس تمتلك بعض الاستجابات الفسيولوجية والعمليات الخلوية للنباتات سليمة، ومن ثم تقديم قيمة أساسية في البحوث الأساسية لدراسة البروتين سوبسيلولار التعريب

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-نمو النباتات

  1. زرع بذور فول الصويا 5-10 (ويليامز 82) في وعاء 13 سم في الدفيئة ظروف طويلة أيام (الخفيفة في 1,500 µmol m-2 s-116 ح) عند 25 درجة مئوية على مزيج التربة المخصصة لفول الصويا (1: نسبة 1:1 للتربة، البيرليت ونسف الرمال).

2-إعداد بلازميد الحمض النووي

  1. استخدام تلميح ماصة معقمة أو مسواك، اختيار مستعمرة واحدة أو الأسهم والغليسيرول المجمدة من كولاي يحمل بلازميد يحتوي على الجينات للفائدة وتطعيم أنه في 20 مل بيرتاني لوريا (رطل) المتوسطة السائل مع المضادات الحيوية المناسبة في قارورة 50 مل.
  2. احتضان قارورة على 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها في شاكر. جمع البكتيريا سينتريفوجينج التع....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم اختبار أجهزة مختلفة من فول الصويا 10-يوم قديمة لإعداد جبلة مجردة (الشكل 1)، ولوحظت غلة تحت المجهر (الشكل 2). كان لا يكاد يهضم جدران الخلايا من hypocotyl وابيكوتيل، وبقيت بعض الخلايا المتصلة ببعضها البعض (الشكل 2، ج 2). وفي كوتيليدون (الشكل 2D) والجذر (الشكل 2A)، أزيلت جدران الخلية فقط في جزء صغير من الخلايا. وفي المقابل، .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول لعزل بروتوبلاستس فول الصويا والتطبيق لدراسات التعبير عابر قد تم اختبارها بدقة، ويعمل بشكل جيد للغاية في المختبر. الإجراءات بسيطة وسهلة، وتتطلب معدات عادية وأقل تكلفة. لدينا بروتوكول ينتج كميات كبيرة من بروتوبلاستس موحدة وعالية الجودة بالمقارنة مع أساليب سبق الإبلاغ عنها34،35،36،،من3738. ومع ذلك، نظراً لوجود العديد من العوامل التي تؤثر على غلة جب.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل "برنامج بحوث الجينوم المصنع" من "المؤسسة الوطنية للعلوم" (NSF--بجرب--دائرة الرقابة الداخلية--1339388).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
MESSigma AldrichM8250-100G
Cellulase CELFWorthington Biological CorporationLS002611
Pectolyase Y-23BioWorld9033-35-6
CELLULASE "ONOZUKA" R-10yakult10g
MACEROZYME R-10yakult10g
MannitolICN الطب الحيوي152540
CaCl 2 < / sub>FisherC79-500g
BSANEBR3535S
DTTSigma AldrichD5545-5G
NaClSigma AldrichS7653-1kg
KClFisherP217-500g
MgCl 2< / sub>Sigma AldrichM8266-100g
PEG4000Fluka81240
شبكة نايلونكارولينا652222N
لوحات زراعة الأنسجة الولاياتالمتحدة الأمريكية ScientificCC7682-7506
شفرات الحلاقةفيشر12-640
مقياس الدمhausserscientific1483
QIAprep Spin Miniprep KitQiagen27104
EZNA البلازميد miniprep kitأوميغاD6942-01
GeneJET Plasmid MiniprepKit Thermo ScientificK0502
الطرد المركزي 5810eppendorf5811000827
الطرد المركزي 5424eppendorf22620401
Jencons Powerpette Plus Pipet ControllerJencons14526-202
Zeiss 710 مجهر متحد البؤرZeissN / A
غير لاصق ، أنابيب Microfuge خالية من RNase ، 1.5 ملAmbionAM12450
15 مل أنابيب الطرد المركزيDenvilleC1018-P
50 مل أنابيب الطرد المركزيDenvilleC1060-P
مصل العجل حديثيالولادة التربة 16010159
العلمية الحراريةحضانة
بيرلايتفيجورو100521091
طوربيدJKS Ventures
LB Broth ، لينوكس (مسحوق)فيشرBP1427-500
إنجرام ساند

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Melchers, G., Labib, G. Somatic hybridisation of plants by fusion of protoplasts. Mol. Gen. Genet. 135 (4), 277-294 (1974).
  2. Gresshoff, P. M. In vitro culture of white clover: callus, suspension, protoplast culture, and plant regeneration. Bot. Gaz. 141 (2), 157-164 (1980).
  3. Lörz, H., Baker, B., Schell, J. Gene transfer to cereal cells mediated by protoplast transformation. Mol. Gen. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Soybean ProtoplastsProtoplast IsolationPEG TransformationTransient Gene ExpressionEnzyme DigestionW5 SolutionConfocal MicroscopyHemocytometer CountingUnifoliate LeavesSoybean Seedlings

Related Articles