يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

استراتيجيات أخذ العينات وتجهيزها لعينات الأنسجة المصرف البيولوجي من النماذج الطبية الخنزير

15.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57276

⸱

مارس 6, 2018

 , 
1Institute of Veterinary Pathology at the Centre for Clinical Veterinary Medicine, LMU Munich

في هذه المقالة

ملخص

هي أثبت التطبيق العملي والأداء لطرق لتوليد عينات الأنسجة التمثيلية من نماذج حيوانية الخنزير لمجموعة واسعة من التحليلات المصب في مشاريع المصرف البيولوجي، بما في ذلك فولوميتري، عينة عشوائية منتظمة، وتجهيز فرق لعينات الأنسجة لأنواع التحليلات الجزيئية والسمات النوعية والكمية.

الملخص

في البحوث الطبية متعدية الجنسيات، أصبحت نماذج الخنزير اطراد أكثر شعبية. النظر في القيمة العالية للحيوانات الفردية، ولا سيما من الخنازير المعدلة وراثيا نماذج، وعدد الحيوانات المتوفرة لهذه النماذج محدودة غالباً، إنشاء مجموعات المصرف (البيولوجي) لعينات الأنسجة المجهزة على نحو كاف يناسب طائفة واسعة من أساليب التحاليل اللاحقة، بما في ذلك التحليلات غير محدد في النقطة الزمنية لأخذ العينات، تمثل النهج ذات مغزى الاستفادة الكاملة من قيمة متعدية للنموذج. فيما يتعلق بالخصائص المميزة للتشريح الخنزير، أنشئت مؤخرا مبادئ توجيهية شاملة لجيل موحدة للممثل، ونماذج عالية الجودة من الخنزير وأنسجة مختلفة. هذه المبادئ التوجيهية شرطان أساسيان لإمكانية تكرار نتائج النتائج وقابليتها للمقارنة بين مختلف الدراسات والمحققين. تسجيل البيانات الأساسية، مثل الأوزان الجهاز ووحدات التخزين، وتحديد مواقع أخذ العينات، وإعداد عينات الأنسجة إلى يتم إنشاؤها، فضلا عن التوجه، وحجمها وتجهيز واتجاهات التشذيب، هي من العوامل ذات الصلة تحديد جينيراليزابيليتي وقابليتها للاستخدام من العينة للتحليلات المورفولوجية الجزيئية والنوعي والكمي. هنا، مظاهرة توضيحية، عمليا، خطوة بخطوة التقنيات الأكثر أهمية لجيل ممثل، عينة المصرف البيولوجي متعددة الأغراض من أنسجة الخنزير ويرد. الأساليب الموصوفة هنا تشمل تحديد حجم الجهاز/الأنسجة والكثافة، تطبيق إجراء المرجحة حجم عينة عشوائية منتظمة لأجهزة متني بتحديد مدى تقلص الأنسجة عد نقطة، تتصل بتضمين النسيجي من العينات، وتوليد العينات عشوائياً موجها لتحليلات ستيريولوجيكال الكمية، مثل الخواص موحدة عشوائي (أيار) المقاطع الناجمة عن أساليب "أورينتاتور" و "إيسيكتور"، والزي العمودي عشوائي (فور) المقاطع.

المقدمة

الطب متعدية الجنسيات، والخنازير شائعة بشكل متزايد لاستخدامها كنماذج1،2،3،،من45، نظراً لأوجه الشبه مفيدة عدة بين الخنزير من الحيوانات الكبيرة و تشريح جسم الإنسان وعلم وظائف الأعضاء، وتوافر الوسائل البيولوجية الجزيئية المنشأة السماح لجيل من مصممة خصيصا، والكائنات المعدلة وراثيا خنزير نماذج لمجموعة واسعة من الأمراض الشروط1،4.

بالمقارنة مع نماذج القوارض، العدد من حيوانات طراز خنزير كل منها التي يمكن توفيرها لإجراء تجارب عليها في أي وقت غير محدود. هذا سبب الفاصل الزمني جيل الخنزير حوالي سنة واحدة، والجهود المالية والوقت الكثيفة اللازمة لتوليد نماذج الخنزير وتربية الحيوانات. ولذلك، الحيوانات الفردية من طراز خنزيري، فضلا عن العينات التي يمكن أن تتولد من هذه الخنازير، قيمة للغاية، لا سيما إذا كان وراثيا نماذج النقانق و/أو القضايا التجريبية على المدى الطويل (مثلاً، مضاعفات متأخرة ويتم فحص الأمراض المزمنة) في الأفراد الذين تتراوح أعمارهم بين2،،من67.

أثناء الدراسة، وأي أداء التحليلات الإضافية التي كانت مقرره في تصميم الدراسة التجريبية الأولية لا يمكن لاحقاً تتحول إلى أن تكون ذات الصلة، مثلاً، بعنوان اكتشف متميزة المسائل الناشئة من قبل نتائج غير متوقعة. إذا لم تتوفر عينات مناسبة لمثل هذه التجارب الإضافية، قد يكون غير متناسب ارتفاع التكاليف والنفقات كثيفة الوقت اللازمة لتوليد إضافية الخنازير وعينات الأنسجة. أن نكون مستعدين لمثل هذه الاحتمالات، وجيل مجموعات المصرف البيولوجي المصانة احتياطية عينات من مختلف الأجهزة أو الأنسجة البيولوجية-السوائل، مناسب كما وكيفا لمجموعة واسعة من التحليلات اللاحقة، يعتبر هاما نهج2،،من67. الاستفادة المثلى من نموذج حيوان الخنزير، توافر عينات كافية المصرف البيولوجي كما يوفر إمكانية فريدة لتنفيذ طائفة واسعة من أساليب التحليل المختلفة على المواد عينة مماثلة على مستوى جهاز متعدد في نفسه ونظمت الحيوانات الفردية، مثلاً، بتوزيع العينات للعلماء من مختلف الأفرقة العاملة في أبحاث شبكة2،،من67. بالإضافة إلى ذلك، الاستراتيجية '' تطلعي '' أخذ العينات في بيوبانكينج يساهم أيضا في خفض عدد الحيوانات اللازمة في دراسة. مزايا نموذج الخنزير بيوبانكينج ثبت مؤخرا في جهاز متعدد، دراسة مولتيوميكس، فحص الجهاز عبر الحديث في نموذج الخنزير معدلة وراثيا للسكري الطويلة الأمد، باستخدام عينات من "المصرف البيولوجي خنزير" ميونيخ ميدي 2.

وهناك بعض المتطلبات الإلزامية التي يجب أن تمتثل عينات المصرف البيولوجي عموما إثبات الموثوقية والقابلية للتفسير لنتائج التحليلات التي يؤديها في وقت لاحق. يجب أن يكون إنشاء العينات تكاثر، ويجب أن تكون ممثلة، أيعلى نحو كاف مما يعكس الميزات المورفولوجية والجزيئية المهتمة الأنسجة/جهاز أخذ العينات من7. يجب أن تكون مناسبة لمجموعة واسعة من أنواع التحليل المصب، تؤخذ بكميات كافية العينات وتجهيزها وفقا للمطالب (بما في ذلك ظروف الوقت ودرجة الحرارة) أساليب تحليلية مختلفة، بما في ذلك وصفية تحاليل نسيجية، مثل كريوهيستولوجي والبارافين والأنسجة البلاستيك، immunohistochemistry، التهجين في الموقع ، والتحليل المجهري الإلكترون ultrastructural والتحليلات التشخيصية المختبرات السريرية، كذلك صيغته الجزيئية تحاليل الحمض النووي والجيش الملكي النيبالي، والبروتينات ونواتج الأيض.

للسماح بتقييم مجموعة واسعة من المعلمات المورفولوجية كمية مميزة مثل الأرقام أو وحدات التخزين أو أطوال أو المساحات السطحية لهياكل الأنسجة متميزة بالتحليلات الكمية ستيريولوجيكال، قسم تجارب معشاة طائرات عينات نسيجية لكل الأجهزة/الأنسجة تحتاج إلى إعداد7،،من89،،من1011. في الدراسات المورفولوجية الكمية، والتحديد الدقيق للحجم الكلي للأنسجة، والجهاز، أو حجرة الجهاز، أخذ العينات من (أي، المساحة المرجعية) من الأهمية بمكان7،9 , 12 لحساب الكميات المطلقة من المعلمات المهتمة داخل الجهاز كل منهما أو الأنسجة، أو الكائن الحي. في نهاية المطاف، قد أثر انكماش الأنسجة المتصلة بتضمين أثناء إعداد مقاطع نسيجية تكون مصممة وتؤخذ في الاعتبار13. ولذلك، تحليلات ستيريولوجيكال الكمية، لا سيما من العينات المحفوظة (الثابتة عينات الأنسجة، كتل الأنسجة المضمنة، أقسام النسيجي، إلخ) من الدراسات السابقة في بعض الأحيان محدودة للغاية أو حتى مستحيلاً12، خاصة إذا لم يتم فولوميتري لكل الأجهزة/الأنسجة، إذا تم تطبيق لا تصميم العينات كافية لتبرير عينات تمثيلية، إذا كانت الأرقام والمبالغ من العينات الفردية المتاحة غير كافية، أو التجهيز عينات غير متوافق مع تقدير لمعلمة (معلمات) المورفولوجية كمية من الفائدة. بسبب العوامل المؤثرة المحتملة المتعددة، مدى ملاءمة مواد الأرشيف-عينة لإجراء تحليلات متميزة من المعلمات المورفولوجية الكمية يتعذر الرد على نحو لا لبس فيه، ولكن يعتمد على تقييم دقيق لكل حالة على حدة.

وهكذا، حسب الموقع، الحجم، عدد، وتجهيز واتجاه التشذيب، والتوجه لعينات يحتمل أن تؤثر على نتائج التحاليل اللاحقة، هذه العوامل ذات أهمية كبيرة ويجب النظر في تصميم أي دراسة تجريبية. وفيما يتعلق بهذه الجوانب والسمات الخاصة للتشريح الخنزير، إرشادات أخذ العينات شاملة ومفصلة وواسعة النطاق قد أنشئ مؤخرا نماذج حيوانية تتكيف مع الخنزير، توفير إشارة قوية موحدة، واستنساخه ، وكفاءة توليد عينات زائدة عن الحاجة، ومعالجتها على نحو كاف وذات جودة عالية من أكثر من 50 مختلفة الخنزير والأنسجة6،7.

الوصف المنهجي، وفيديو تعليمي المبين في هذه المادة توفر تفصيلية وتوضيحية ومفهومة، خطوة بخطوة تعليمات للأداء العملي لمجموعة متنوعة من التقنيات فولوميتري، أخذ عينات من أنسجة الخنزير و الأجهزة، ومعالجة عينات الأنسجة لأساليب مختلفة من تحليل المتلقين للمعلومات. التقنيات الموصى بها التي تشمل أساليب لتحديد حجم الجهاز/الأنسجة وكثافات استناداً إلى مبادئ أرخميدس وكافالييري9، بما في ذلك تحديد الأبعاد لانكماش أنسجة ثلاثية الأبعاد ذات الصلة تضمين في وسائل الإعلام المختلفة التضمين14 أثناء تجهيزها للفحص النسيجي، تطبيق عمليا حجم المرجحة المنتظمة عينة عشوائية نهج، تجهيز العينات عينات الأنسجة لمختلف اللاحقة تحليلات7،8،،من915، وتوليد مناسب الموجهة وتجهيز العينات المحتملة التحليلات الكمية ستيريولوجيكال7،8، 9،،من1011. بجوار تطبيقها في مشاريع المصرف البيولوجي الخنزير، الأساليب الواضحة ملائمة عموما لجميع الدراسات دراسة الخصائص المورفولوجية histo الكمية الأجهزة/الأنسجة. علاوة على ذلك، يتم تصميم العينات العشوائية المنتظمة مفيدة بصفة خاصة لجيل عينات ممثلة في تجارب باستخدام أساليب التحليل الجزيئي للكشف عن التعديلات وفرة من، مثلاً، والكشف، والبروتينات، أو نواتج الأيض في مختلف الأعضاء والأنسجة.

تقدم الفقرات التالية عرضاً موجزاً لهذه الأساليب، أثناء أدائهم العملي هو الموصوفة في المقطع بروتوكول.

تحديد حجم الجهاز/الأنسجة
تحديد الأوزان الجهاز ووحدات التخزين مهم في العديد من إعدادات التجريبية، كما قد تشير هذه العوامل إلى دراسة التغييرات، يحتمل أن تتصل تجريبيا العوامل ذات الأهمية. الحجم الإجمالي الجهاز/الأنسجة مطلوب أيضا عادة حساب المعايير الكمية المطلقة، (مثلاً، عدد الخلايا الإجمالي)، من كثافة الحجم العددي ستيريولوجيكالي المقدر (أي، والعدد من الخلايا كل وحدة التخزين من الأنسجة)7،12. وبصرف النظر عن تقنيات استخدام معدات تقنية معقدة، مثل التصوير المقطعي بالكمبيوتر، وهناك أساسا ثلاثة الأساليب العملية التي تستخدم عادة لتحديد الحجم المطلق لجهاز أو الأنسجة. يمكن تحديد حجم الجهاز بواسطة "القياس الحجمي المباشر" وفقا لمبدأ أرخميدس، أي، قياس حجم الماء أو المحلول الملحي شردهم هيكل عندما غمرت تماما. أجهزة الخنزير كبيرة نسبيا، هذه النهج غير عملي وعرضه لعدم الدقة، نظراً لأنها تتطلب قوارير كبيرة جداً الحجمي/قياس. أكثر سهولة، يمكن حساب حجم الجهاز/الأنسجة من الوزن والكثافة7،،من1216، الذي يمكن تحديد كفاءة استخدام "أسلوب غمر"7،12 ،16 (البروتوكول خطوة 1.1.). يمكن أيضا تقدير حجم الجهاز/الأنسجة باستخدام النهج فولوميتري استناداً إلى "مبدأ كافالييري" (1598-1647). بعبارات بسيطة، مبدأ كافالييري ينص على أن إذا هي مقطوع كائنين في طائرات موازية لطائرة على أرض، ولمحات المقاطع قطع طريق الكائنين في المقابل المسافات من الطائرة على الأرض نفس المناطق، الكائنين تحتوي وحدة التخزين نفسها. وهكذا يمكن تقدير حجم الكائنات على شكل تعسفي كنتاج لمناطقهم الشخصية قسم في الطائرات قسم مواز، بعيد المنال على قدم المساواة، والمسافة بين الطائرات القسم. وهذا أمر يمكن فهمه بالقياس التالية: النظر في الكدسات اثنين تتألف من نفس العدد من القطع متطابقة وتوضع جنبا إلى جنب، مكدس واحد مع منظم عملات مكدسة فوق بعضها البعض في الغلة شكل أسطواني مكدس عمله، والآخر كومة من القطع النقدية مع قبالة مركز وضع القطع النقدية (الشكل 3A). على الرغم من اختلاف الأشكال الموجودة في كلا كدسات عمله، على وحدات التخزين هي نفسها، منذ مجالات القطع على المستويات المقابلة لكلا كدسات (أيمجالات لمحات مقاطع المتوازية تخترق كلا كدسات العملة في مسافات متساوية من الأرض) متطابقة. ويرد تقدير الكم من الأعضاء والأنسجة باستخدام كافالييري المبدأ7،،من1215 الخنزير في الخطوة 1.2.

تحديد مدى تقلص الأنسجة المتصلة بتضمين النسيجي
في تحليلات للعديد من المعلمات المورفولوجية الكمية المقاسة في أقسام الأنسجة النسيجي، قد أثر انكماش الأنسجة المتصلة بالتضمين التي تحدث خلال الأنسجة المعالجة للأنسجة تكون مصممة وأخذها في الاعتبار. مدى تقلص الأنسجة المتصلة بالتضمين قد يكون المتغير، ويعتمد على كل من الأنسجة، والمعالجة، والتضمين متوسطة8،،من1317،،من1819. عموما، تحدث التغييرات المتعلقة بتضمين حجم عينة الأنسجة (أي، معظمهم من انكماش) في جميع الأبعاد الثلاثة للفضاء، ومن ثم يؤثر على كافة المعلمات الأبعاد وتقدر الكمية تحليلات ستيريولوجيكال8 . أساسا، ويمكن تقدير مدى تقلص الأنسجة المتصلة بالتضمين، معبراً عنها بمعامل انكماش الأنسجة الخطي (fS)، كما هو موضح في الخطوة 1، 3. ويستخدم لتصحيح معلمات المورفولوجية الكمية (انكماش حساسة)14.

المرجحة حجم عينة عشوائية منتظمة من الأجهزة/الأنسجة
لإنشاء مجموعة المصرف البيولوجي من عينات الجهاز/أنسجة الخنزير، أثبتت النهج المرجحة حجم عينة عشوائية منتظمة مثل كما هو موضح في الخطوة 2 أن التقنيات العملية، وتوفير الوقت، وتتسم بالكفاءة لجيل ممثل، عينات الأنسجة المتعددة الأغراض7،،من89،15.

جيل من المقاطع "عشوائي موحد الخواص" والمقاطع "الرأسية موحدة عشوائي" للتحليلات الكمية ستيريولوجيكال
عينات الأنسجة المصرف البيولوجي بحاجة إلى أن تكون مناسبة لمجموعة واسعة من أساليب التحليل ستيريولوجيكال الكمية المختلفة لتقدير أقصى قدر معلمات التي لا يمكن تحديده دون عينة إعداد الكافي. يمكن تحديد معلمات ستيريولوجيكال الكمية كلها تقريبا، استخدام "الخواص (مستقلة) موحدة عشوائي (أيار) أقسام"8،9. في المقاطع أيار، هو العشوائية ثلاثي الأبعاد اتجاه الطائرة مقطع عينة الأنسجة. ويمكن تحقيق ذلك بالتوزيع العشوائي للموقف الذي عينة الأنسجة بالنسبة إلى موقف الطائرة القسم, كما هو مطبق في أسلوب "إيسيكتور"11 (الخطوة 3، 1 من البروتوكول)، أو بواسطة التعشيه التوجه للطائرة الباب نسبة إلى عينة الأنسجة، كما هو الحال في أسلوب "أورينتاتور"10 (الخطوة 3، 2 من البروتوكول). في عينات الأنسجة، مثل الجلد أو الغشاء المخاطي العينة عرض محور عمودي بطبيعة الحال الراهنة، أو المعرفة والتعرف عليها بشكل صحيح، إعداد "موحدة عشوائي (فور) المقاطع العمودية" (البروتوكول خطوة 3.3.) مقطوع تماما داخل الطائرة من بهم المحور الرأسي هو مفيد8،20. لخطاب كامل الأسس النظرية لأخذ العينات في أيار/فور ومناقشة شاملة المحتملة تحليلات ستيريولوجيكال الكمية المصب، ويحال القارئ المهتمة بالكتب المدرسية للكمية ستيريولوجي في الحياة العلوم8،9.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

جميع الأساليب الموصوفة هنا استخدام عينات الأنسجة المستمدة من الحيوانات الميتة، والامتثال الكامل للنظام القانوني الألماني للرفق بالحيوان.

1-فولوميتري

  1. غمر تقنية لتحديد كثافة الأنسجة/الجهاز (1 الرقم و الرقم 2) 7 , 12 , 16
    1. إعداد المواد: مشرط ريش والمناشف الورقية والملقط غرامة، جداول المختبرات القياسية، الزجاج أو قنينة بلاستيكية، ملحي 0.9% وأصحاب العينة المشيدة ذاتيا (الشكل 2A).
    2. المكوس قطعة من الأنسجة (الحد الأقصى لحجم: 2 × 2 × 2 سم3) من الجهاز/الأنسجة، على وجه التحديد من حجرة الجهاز للفائدة. الأجهزة الصغيرة، مثل الغدة النخامية أو الغدة الصنوبرية، يتم قياسها بكاملها.
      تنبيه: تأكد من أن حجم العينة لا سيما أصغر من القطر الداخلي للكأس (الخطوة 1.1.5 وما يليها)، ومستوى التعبئة للسماح باكتمال غمر العينة دون الاتصال بالجدران الداخلية للكأس في خطوة 1.1.7.
    3. مسحه العينة مع منشفة ورقية لإزالة السوائل الزائدة من الدم/الأنسجة بدقة.
    4. وزن العينة على مقياس دقة وتسجيل وزن العينة (mS). تحديد وزن عينات الأنسجة الصغيرة بملغ أقرب (الشكل 1A).
    5. ضع كوب مملوءة بدرجة حرارة الغرفة ملحي 0.9% على المقياس. لا شغل تماما الكأس، للسماح لغمر عينة الأنسجة في الخطوة اللاحقة دون تجاوزه.
      تحذير: استخدام حجم الكأس مناسب للحجم ووزن sample(s) الأنسجة التي يمكن قياسها ونطاق القياس الفعال للجدول. للحصول على عينات أكبر تصل إلى 2 × 2 × 2 سم3، حجم كوب من 50 – 100 مل المناسب في تركيبة مع مقياس قياس من ما يقرب من 100 ملغ إلى 500 غرام، بينما لعينات صغيرة، استخدم قنينة حجم 5 – 10 مل في تركيبة مع جداول الدقة مع قياس يتراوح بين حوالي 0.1 ملغ و 20 غرام.
    6. غمر صاحب العينة (أي، حلقة جامدة بما فيه الكفاية من سلك رفيع أو شيئا من هذا القبيل، الشكل 2 ألف) في المياه المالحة إلى موضع ملحوظ (الأسهم في الشكل 1B, 2B الشكل، و الشكل 2). ثم إعادة تعيين (الفارغ) عرض الجدول إلى صفر.
    7. إرفاق عينة الأنسجة بدقة لصاحب العينة وغمر العينة في المياه المالحة تماما حتى يتم التوصل إلى موقف ملحوظ على صاحب العينة (الأسهم في الشكل 1B, 2B الشكل، و الشكل 2).
      تنبيه: العينة المغمورة وصاحب العينة يجب إلا يكون الاتصال مع الجدران الداخلية أو أسفل الكأس أو على سطح المياه المالحة.
    8. حين عقد صاحب العينة والعينة المغمورة في هذا الموقف، تسجيل الوزن المعروض في الجدول (مل)، إشارة إلى وزن المحلول الملحي شردهم عينة الأنسجة (الشكل 1 ج، الشكل 2، و الشكل 2).
    9. حساب حجم العينة (VS) من مل، وكثافة المحلول الملحي في درجة حرارة الغرفة (20 درجة مئوية) (ρالمالحة = 1.0048 g/cm³) الخامسS = mL/ Ρالمالحة [ز/g/cm³] (الشكل 1).
    10. حساب كثافة عينات الأنسجة (ρعينة) من الوزن (أيكتلة) العينة (mS) وحجمه (VS): ρعينة = مS /VS[g/cm³] (الشكل 1).
    11. لأجهزة قياس بكاملها، كرر القياس ثلاث مرات وحساب الجهاز متوسط الكثافة من قيم قياس واحد. الأجهزة الكبيرة/الأنسجة، إجراء القياسات المتكررة مع عينات مختلفة من حجرة الجهاز/الأنسجة/الجهاز نفسه، وحساب متوسط كثافة من القياسات واحد، تبعاً لذلك.
    12. حساب الحجم الإجمالي لحجرة الجهاز/الأنسجة/الجهاز من الوزن والكثافة (الشكل 1).
  2. تطبيق كافالييري-طريقة لتحديد حجم الجهاز الخنزير 7
    1. إعداد المواد: صور حاكم، قدمه ذات الورنيّة، سكين، مقص، ملقط، القلم للماء، والبلاستيك الشفاف، الماسح الضوئي، الكاميرا، وعبر شبكات مطبوعة على الورق الشفاف البلاستيك.
    2. ضع كامل الجهاز/الأنسجة على سطح عادي (قطع قاعدة) وقياس الطول (l) للجهاز على طول محورها الطولي (الشكل 3B، الشكل 5A).
    3. قطع الجهاز كاملة/الأنسجة إلى مسافة واحدة موازية شرائح متعامد على المحور الطولي الجهاز (الشكل 3، الرقم 5 (ب)). اختر مسافة d بين فرعين (أي، سمك الفاصل الزمني/قسم تقطيع، عادة حوالي 1 سم) صغيرة بما فيه الكفاية الحصول على عدد كاف من ألواح الأنسجة/الجهاز. عشوائياً موقف القسم الأول على مسافة بين 0 والفاصل الزمني لتقطيع من الهامش للجهاز. بينما تشريح، القاضي بصريا بالموقف والتوجه لكل طائرة القسم، للحصول على حوالي الجهاز المتوازي/الأنسجة في ألواح من سمك موحد تقريبا.
      ملاحظة: العدد اللازم من ألواح الأنسجة/جهاز يعتمد على الشكل والحجم لفحص الجهاز/الأنسجة. إذا كانت الأجهزة الصغيرة أو العينات يجب أن تكون مقطوع في ألواح رقيقة من دي فايف مم، تضمين العينات في أجار قبل تمزيقها (راجع الخطوة 1.3.3.) واستخدام جهاز تقني لتقطيع العينة جزءا لا يتجزأ من أجار. فترات تقطيع المستحب تجريبيا للخنزير الأكثر والأنسجة، وكذلك أمثلة لأجهزة تشريح، مبينة في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "7.
    4. ضع جميع الجهاز/أنسجة ألواح على نفس السطح أسفل على قاعدة شاملة (أي، دأبت على الحق أو الطائرة الجزء الأيسر من كل لوح الجهاز، 3D الشكل، الشكل 5) والعد الألواح (n).
    5. الحصول على ملفات قسم من ألواح الأنسجة بواحدة من الطرق التالية:
      1. بعناية وضع ألواح الأنسجة على الورق الشفاف البلاستيك المسمى على نحو ملائم، مع المحافظة على التوجه لتلك السطوح القسم العلوي والسفلي. تتبع الخطوط العريضة لألواح الأنسجة على الورق الشفاف البلاستيك باستخدام قلم لماء (3E الشكل1-2).
      2. أخذ صور فوتوغرافية لألواح الأنسجة، عقد الكاميرا عمودياً فوق السطوح القسم (3F الشكل). لمعايرة، ضع مسطرة حجم إلى جانب ألواح الأنسجة.
      3. مسح ألواح الأنسجة على ماسح ضوئي مسطح مع المحافظة على التوجه لتلك السطوح القسم العلوي والسفلي (الشكل 3). لمعايرة، ضع مسطرة حجم إلى جانب ألواح الأنسجة.
    6. قياس مجالات القسم (تم تتبعها أو تصويرها أو الممسوحة ضوئياً) لمحات من جميع أنسجة ألواح بواحدة من الطرق التالية:
      1. تراكب أو ركب الملامح لوح الجهاز تتبع مع حجم مناسب، طباعة معايرة الشبكة من الصلبان متباعدة بالتساوي على شفافية البلاستيك وعدد جميع الصلبان ضرب منطقة الشخصية (الرقم 3 أي3-4؛ قارن إلى الشكل 5). حساب مساحة المقطع الشخصية لكل لوح الجهاز بضرب العدد الصلبان ضرب منطقة الشخصية بالمنطقة المقابلة للصليب واحد.
        ملاحظة: للحصول على حجم دقيقة بما فيه الكفاية تقديرات، اختر شبكة مشتركة مع مسافة صغيرة بما فيه الكفاية بين الصلبان المجاورة، حيث أن يعبر في متوسط على الأقل 100 سوف تصل السطوح قسم من الألواح جهاز واحد في كل دراسة حالة للدراسة . الأحجام المستحب تجريبيا عبر الشبكة لأعضاء وأنسجة الخنزير الأكثر مبينة في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "7.
      2. قياس المجالات من ألواح الأنسجة في الصور الرقمية من الصور/المسح الضوئي باستخدام المناسبة المتاحة تجارياً أو مجانية مورفوميتري الناعمة-وتطبيقات الأجهزة (الشكل 3 ح)، مثل نظام تجاري صورة تحليل21، أو إيماجيج22.
        تنبيه: ملاحظة أن أحد الأنسجة بلاطة (الأول أو آخر) ينصب على الماسح الضوئي يستريح على سطحه الطبيعية، على التوالي، ويواجه الكاميرا مع سطحه الطبيعية. ولذلك، الممسوحة ضوئياً صورة صورة صور هذه البلاطة، لن تظهر على سطح قسم. ولذلك، يتم قياس أي ملف تعريف المجال قسم في الصورة الصورة/الصورة الممسوحة ضوئياً من هذه البلاطة الأنسجة (الرقم 3I). أيضا ملاحظة الإسقاط الزائد الموجودة في الصور الممسوحة ضوئياً، والصور الفوتوغرافية من ألواح الجهاز/الأنسجة، أي، فقط قياس مجالات ملامح المقطع الفعلي، ولكن ليس من الأنسجة في صورة الكذب وراء سطح البلاطة القسم (الشكل 12 جه).
    7. حساب حجم الجهاز يقدر كنتاج لمجموع كل قسم مجالات المقابلة الشخصية جميع ألواح الأنسجة للحالة الواحدة (أياستمرار لليمين أو اليسار، على التوالي، على سطح الجزء العلوي أو السفلي من كل جهاز لوح ومتوسط سمك ألواح (أي، حاصل قسمة قياس طول المحور الرأسي الجهاز (l) وعدد ألواح)15.
  3. تحديد مدى انكماش أنسجة ثلاثية الأبعاد ذات الصلة بتضمين أثناء تجهيز عينات الأنسجة لعلم الأنسجة
    1. إعداد المواد: مبضع ريش والملقط واجار، قوالب صب المعادن، والماسح الضوئي الرقمي وحاكم الحجم (مثلاً، ورق الرسم البياني).
    2. قطع سطح قسم طائرة جديدة، من عينة أنسجة ثابتة.
      ملاحظة: إذا كان بسهولة باستخدام عينات من تضمين الأنسجة (الناعمة) تشوه (الأنسجة الدهنية والأنسجة هلامية)، عينة الأنسجة الثابتة في أجار قبل تقطيع (الشكل 4 أ).
    3. لتضمين عينة في أجار:
      1. مزيج مسحوق أجار القياسية المستخدمة للأحياء المجهرية الثقافة المتوسطة مع حجم مناسب للمياه (حوالي 0.5 – 1 ز أجار/10 مل من الماء) في كوب زجاج. يقلب الخليط والحرارة في فرن ميكروويف في 700 ث حتى الغليان 3 – 5 س. يقلب الخليط وجلب ليغلي مرة أخرى ل s 3 – 5.
      2. بشكل اختياري، لزيادة على النقيض أجار إلى عينة الأنسجة، صبغ أجار السائل، مثلاً، بالحبر الأسود (إضافة الحبر 1 مل 10 مل أجار السائل الساخن ويقلب بشدة).
      3. صب أجار الساخنة في قالب صب (مثلاً، العفن معدنية المستخدمة البارافين التضمين، الرقم 10 ألف-دال)، وغمر عينة الأنسجة الثابتة في أجار الحارة. واسمحوا أجار بارد حتى التجميد، وإزالة العفن، وخفض كتلة أجار مع الأنسجة المضمنة باستخدام مبضع أو شفرة حلاقة.
        تنبيه: أثناء التعامل مع أجار السائل الساخن، ارتداء نظارات واقية وقفازات. عينات الأنسجة عملية ثابتة في الحل فورمالدهايد تحت عادم هود وارتداء نظارات واقية وقفازات المختبر.
    4. ضع العينة مع سطحه المقطع أسفل على ماسح ضوئي مسطح، جنبا إلى جنب مع حاكم حجم ومسح سطح القسم (الشكل 4 أ، ب).
    5. تحديد المنطقة سطح مقطع عينة الأنسجة الثابتة (f) في المسح الرقمي، باستخدام واحدة من التقنيات الموضحة في الخطوة 1.2.6 (الشكل 4 باء).
    6. تضمين العينة في المتوسط التضمين البلاستيكية، مثل الإيبوكسي (مثلاً، ابن) أو جليكولميثاكريلاتي/ميثيلميثاكريلاتي (GMA/مجلس العمل المتحد)23، البروتوكولات القياسية التالية23،،من2425 ( الشكل 4). ضمان المحافظة على سطح مقطع عينة الثابتة الممسوحة ضوئياً في الخطوة السابقة (1.3.4) في العينة جزءا لا يتجزأ من البلاستيك.
      ملاحظة: للحفاظ على التوجه لقسم سطح العينة أثناء معالجة العينة، استمرار وضع العينة مع سطحه القسم المقصود تواجه هبوطاً في الكاسيت التضمين أو قالب الصب، أو وضع علامة المقطع المقصود السطح (أو الجانب الآخر من العينة) مع الحبر.
    7. قص مقطع النسيجي من كتلة البلاستيك المقابلة لسطح العينة الأنسجة الثابتة (الخطوة 1.3.2) الفرع الأصلي استخدام تحميل المقطع على شريحة زجاجية (الشكل 4) مبضع (الشكل 4)، ووصمة بشكل روتيني ( مثلاً، وتوضع وويوزين وصمة عار، ح & ه)24،25.
      تنبيه: لتلقي مقطع النسيجي تقريبا في نفس الطائرة كسطح المقطع الأصلي من عينة الأنسجة الثابتة، بعناية على ضبط موقف كتلة البلاستيك في جبل مبضع قبل تمزيقها.
    8. مع المقطع الملون التي تواجه هبوطاً على ماسح ضوئي مسطح جنبا إلى جنب مع حاكم حجم مكان الشريحة وتفحص المقطع (4E الشكل).
    9. تحديد مجال المقطع عينة الأنسجة جزءا لا يتجزأ من البلاستيك(ﻫ)في المسح الرقمي، باستخدام واحدة من التقنيات الموضحة في الخطوة 1.2.6 (4F الشكل).
    10. حساب انكماش الأنسجة المتصلة بتضمين متوسط (لكل الأنسجة والمتوسطة التضمين) من مجالات قياس الملامح القسم المقابلة لعينات الأنسجة قبل وبعد تضمين في تضمين المتوسطة من البلاستيك. ويحسب معامل الانكماش الخطي وs كالجذر التربيعي لحاصل قسمة مجالات لمحات قسم من عينات الأنسجة ن بعد تضمينها في البلاستيك التضمين المتوسطة (أ) (ه) وفي المناطق الملامح القسم المقابلة لعينات الأنسجة نفسها قبل تضمينها في البلاستيك التضمين المتوسطة (f) (الشكل 4)14.

2-حجم المرجحة عينة عشوائية منتظمة بنقطة الفرز وتجهيز عنها الأنسجة لأنواع التحليل المصب7

  1. إعداد المواد: المسطرة، الفرجار، سكين، مقص، ملقط، القلم للماء، نقطة/عبر شبكات مطبوعة على الورق الشفاف البلاستيك، وجداول الأرقام العشوائية.
    ملاحظة: نسخ قوالب لعبر الشبكات (5-60 مم) يتم توفيرها في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "7.
  2. ضع الجهاز/الأنسجة على سطح عادي (قطع قاعدة) وقياس الطول (l) للجهاز على طول محورها الطولي (الشكل 5A، الشكل 6A).
  3. قطع الجهاز/الأنسجة كاملة إلى مسافة واحدة موازية شرائح متعامد على محورها الطولي (الشكل 5 (ب)). اختر مسافة d بين فرعين (أيتقطيع المقطع الفاصل الزمني/سمك، عادة حوالي 1 سم) صغيرة بما يكفي للحصول على عدد كاف من شرائح الأنسجة/الجهاز. عشوائياً موقف القسم الأول على مسافة بين 0 والفاصل الزمني لتقطيع من الهامش للجهاز. بينما تشريح، القاضي بصريا بالموقف والتوجه لكل طائرة الفرع للحصول على ألواح متوازية تقريبا الجهاز/الأنسجة من سمك موحد تقريبا.
    ملاحظة: العدد اللازم من ألواح الأنسجة/الجهاز يعتمد على حجم الأنسجة/الجهاز فحص وعدد مواقع عينات الأنسجة. إذا كانت الأجهزة الصغيرة أو العينات يجب أن تكون مقطوع في ألواح رقيقة من دي فايف مم، تضمين العينات في أجار قبل تمزيقها (راجع الخطوة 1.3.3.) واستخدام الأجهزة التقنية لتقطيع العينة جزءا لا يتجزأ من أجار. وترد في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "7فترات تقطيع المستحب تجريبيا للخنزير الأكثر والأنسجة، وكذلك أمثلة لتشريح الأجهزة.
  4. ضع جميع الجهاز/أنسجة ألواح على نفس السطح أسفل على قاعدة قطع (الشكل 6B).
  5. تراكب ألواح الأنسجة مع شبكة عبر حجم مناسب مطبوعة على شفافية بلاستيك عن طريق وضع الأبعد ترك العلوي عبر الشبكة عبر نقطة عشوائية من الأنسجة (الشكل 5-د، الشكل 6B).
    ملاحظة: اختر شبكة مشتركة مع مسافة صغيرة بما فيه الكفاية بين الصلبان المجاورة، حيث أنه في كل حالة دراسة لهذه الدراسة، سوف تصل الصلبان على الأقل ضعف عدد surface(s) قسم من حجرة الأنسجة أخذ عينات، كعدد العينات التي يجب أن يؤخذ من هذه المقصورة الأنسجة. الأحجام المستحب تجريبيا عبر الشبكة لأعضاء وأنسجة الخنزير الأكثر مبينة في "المواد التكميلية" من الأنسجة أخذ العينات أدلة للخنزير الطب الحيوي "نماذج" "7.
  6. مارك وعدد جميع الصلبان ضرب الأنسجة (على التوالي، المقصورة الأنسجة الفرعية أخذ عينات). استمرار تطبيق طريقة موحدة للعد والترقيم من الصلبان ضرب حجرة الأنسجة أخذ عينات في جميع الأنسجة ألواح، مثلاً، بترقيم متعاقبة من الصلبان كل منها في كل سطر بسطر، من اليسار إلى اليمين ومن من الأعلى إلى الأسفل، أو، مثلاً، بترقيم الصلبان في بلاطة نسيج واحد تلو الآخر في اتجاه عقارب الساعة، بدءاً من الصليب الأقرب إلى موقف 12:00 م، كما أظهرت القبض في الشكل 5E.
  7. قسمة العدد الصلبان ضرب حجرة الأنسجة/الأنسجة لتكون عينات (n) عدد العينات إلى يتم إنشاؤها للحصول على الفاصل الزمني العينة المنتظمة (i).
  8. تحديد موضع المعاينة الأولى باختيار عدد عشوائي x في الفاصل الزمني بين 1، و. لهذا، استخدم جدول رقم عشوائي. وضع علامة على موضع أخذ العينات الأول (x) وكل القادم x + i، x + 2أنا x + 3ط، إلخ، عبر ضرب حجرة الأنسجة/الأنسجة أخذ عينات على شفافية البلاستيك استخدام قلم لماء (5F الشكل).
    ملاحظة: الجداول رقم عشوائي يمكن سهولة وسرعة إنشاء باستخدام أرقام عشوائية على إنترنت.
  9. العلامة الأنسجة تقاطع المواقع المقابلة للملحوظة بزيادة شفافية البلاستيك قليلاً ووضع قطعة صغيرة من ورق حلويات فارغة ونظيفة على سطح البلاطة الأنسجة باستخدام زوج من ملاقط (الشكل 5، 6E الشكل ).
  10. المكوس عينة أنسجة من مواقع عينات (ح رقم 5، 6F الشكل، الشكل 7 أ)، وكذلك تقسيم لأنواع مختلفة من التحاليل اللاحقة (الشكل 6، الشكل 7 أ-ب)، كما هو محدد في الجدول 1.
  11. وبعد أخذ العينات، تنظيف الورق الشفاف البلاستيك بالماء الدافئ والصابون، وجافة، وإعادة استخدامها.

3-توليد عشوائي موحد الخواص (أيار) المقاطع والمقاطع الرأسية موحدة عشوائي (فور) للتحليلات الكمية ستيريولوجيكال

  1. تقنية "إيسيكتور"
    1. إعداد المواد: شفرات الحلاقة أو مبضع واجار، وقوالب الصب كروية (مثلاً، صب قوالب لحلوى، التي يمكن الحصول عليها من الموردين حلواني)، والمشابك foldback والملقط.
    2. ضع قطعة حجم الكافي (1 × 1 × 1 سم3) الثابتة، بشكل منهجي عشوائياً عينات أنسجة في قالب صب كروية وعقد معا المشابك foldback، وملء القالب مع أجار السائل الحار (الشكل 8 أ-ه).
    3. إزالة المجال أجار (الشكل 8F) من قالب الصب بعد التجميد لاجار.
    4. لفة في المجال أجار مع العينة جزءا لا يتجزأ من النسيج عبر الجدول، وقف، والفرع هو في موقف عشوائي.
      ملاحظة: الطائرة قسم الناتج قسما أيار (الرقم 8F-ز).
    5. المضي قدما بتضمين عينات الأنسجة في راتنج البلاستيك مثل التقييم البحري العالمي/مجلس العمل المتحد، الحفاظ على اتجاه المقطع أيار طائرة (انظر 1.3.5).
  2. تقنية "أورينتاتور"
    1. إعداد المواد: شفرات الحلاقة أو مبضع، أجار، الملقط، جدول/جداول الأرقام العشوائية، ويطبع الدوائر اكويانجولار، وجيب التمام المرجحة.
      ملاحظة: تتوفر نسخ القوالب من الدوائر في المنشورات السابقة8،26.
    2. ضع العينة من الأنسجة الثابتة (أو الأنسجة الثابتة جزءا لا يتجزأ من أجار) في طباعة دائرة اكويانجولار مع حافة واحدة موازية إلى 0-180 ° الاتجاه (الشكل 9 ألف، الرقم 10E).
    3. تحديد زاوية عشوائية باستخدام جدول الأرقام العشوائية. البحث عن علامات المطابقة في نطاق دائرة اكويانجولار، الذي يستند العينة. استخدام هذه العلامات، قطع مقطع من خلال العينة (أو عن طريق أجار المحيطة بالعينة جزءا لا يتجزأ من النسيج)، مع الطائرة الفرع موجهة موازية لاتجاه الزاوية العشوائية المشار إليها في نطاق دائرة اكويانجولار، والرأسية إلى يستريح سطح العينة (9B الشكل-C، الرقم 10F).
    4. وضع كتلة الأنسجة مع سطح المادة التي تم إنشاؤها في الخطوة السابقة التي تواجه الجانب السلبي في دائرة المرجحة جيب التمام مع حافة سطح يستريح توضع موازية لاتجاه 1-1 (الشكل 9، الرقم 10 ح).
    5. كرر الخطوة 3.2.3 وقص مقطع جديد من خلال العينة بزاوية عشوائية مصممة باستخدام الجدول رقم عشوائي (9E الشكل-واو، الرقم 10I-ي).
      ملاحظة: الطائرة القسم الناتجة قسم أيار.
    6. إذا كان ذلك مناسباً، تحدد مجال الشخصية قسم أيار عينة الأنسجة الثابتة للبت في انكماش الأنسجة المتصلة بالتضمين (الشكل 9-ي) كما هو موضح في الخطوة 1، 3، والمضي قدما لتضمين عينات الأنسجة في البلاستيك الراتنج مثل التقييم البحري العالمي/مجلس العمل المتحد.
  3. جيل مقاطع الرأسية موحدة عشوائي (فور)
    1. إعداد المواد: شفرات الحلاقة أو مبضع، أجار، الملقط، جدول/جداول الأرقام العشوائية، ويطبع من الدوائر اكويانجولار.
      ملاحظة: تتوفر نسخ القوالب من الدوائر في المنشورات السابقة8،26.
    2. تحديد محور عمودي ضمن العينة الأنسجة الثابتة التي دائماً معترف بها في العينة/الأقسام أثناء الخطوات اللاحقة.
      ملاحظة: عادة ما يتم اختيارها المحور العمودي على سطح العينة الأنسجة الطبيعية كالمحور العمودي.
    3. إذا كان ذلك مناسباً، تضمين العينة في أجار (الشكل 11 باء).
      ملاحظة: تضمين أجار قبل فور-أو أيار-تقطيع العينة الثابتة المفضل عموما لعينات صغيرة ورقيقة وهشة، أو لينة. أيضا استخدام التضمين أجار من عينات لتسهيل وضع العينة فور مقطعة أثناء تضمين اللاحقة للعينة في المتوسط راتنج البلاستيك.
    4. ضع العينة في طباعة دائرة اكويانجولار، مع المحور الرأسي أورثوجونالي موجهة إلى طائرة الجدول الجدول/الورقة (الشكل 11).
    5. قص العينة بزاوية عشوائية (تحديد باستخدام جدول أرقام عشوائية) مع الطائرة مقطع متعامد إلى الجدول وموازية للمحور الرأسي الحصول على طائرة قسم فور (الشكل 11).
    6. إذا كان ذلك مناسباً، تحدد مجال الشخصية قسم أيار عينة الأنسجة الثابتة للبت في انكماش الأنسجة المتصلة بالتضمين كما هو موضح في الخطوة 1، 3 (مقارنة الرقم 9-ي)، والمضي قدما لتضمين عينات الأنسجة في راتنج البلاستيك مثل التقييم البحري العالمي/مجلس العمل المتحد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تقنية غمر لتحديد كثافة الأنسجة/الجهاز

رقم 12A ب- يظهر تصميم الممثل كثافة وحجم الكلي الخنزير باستخدام تقنية غمر هو موضح في الخطوة 1، 1 (الشكل 1و الشكل 2). وترد نتائج أكثر تمثيلاً لقياسات كثافة إضافية الخنزير والأنسجة في الجدول 2. يظهر قائمة أكثر شمولاً من مرجع كثافات متنوعة الخنزير الأنسجة والأعضاء في الأنسجة أ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

جيل من المصرف البيولوجي عينة مجموعات من النماذج الحيوانية النقانق يتطلب تقنيات قوية والبروتوكولات لتحديد حجم الجهاز/الأنسجة، جيل استنساخه من الممثل، عينات الأنسجة الزائدة مناسبة لمجموعة واسعة نطاق من أساليب تحليل مختلفة، التعشيه التوجه لأقسام عينة للتحاليل الكمية ستيريولوجيكال. الأساليب الموصوفة في هذه المادة هي تتكيف مع أحجام الخنزير والأنسجة، وقد وضعت بشكل فعال تلبية هذه المطالب2،7. أنها تقوم على أساس المبادئ المنهجية المعترف بها جيدا، وأثبتت سابقا الطابع العمل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

يشكر المؤلفون Pichl ليزا للمساعدة التقنية الممتازة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AgarCarl Roth GmbH ، ألمانياأجار (مسحوق) ، Cat.: 5210.3قم بإذابة ما يقرب من 1 جم من الأجار في 10 مل من الماء البارد في كوب زجاجي أو بلاستيكي ، سخنه في فرن الميكروويف على حرارة 700 واط ، ثم اغلي المحلول مرتين مع التحريك الشديد. يلقي في القالب بينما لا يزال دافئا ويترك للتصلب. تحذير: أثناء التعامل مع أجار السائل الساخن، ارتد نظارات واقية وقفازات.
الفرجارHornbach Baumarkt GmbH ، بورنهايم ، ألمانياSchieblehre Chrom / Vernickelt 120 مم Cat.: 3664902أي نوع من الفرجار (ميكانيكي أو إلكتروني) سيفي بالغرض أيضا.
قوالب الصب (المعدنية)Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermü nde, ألمانياEinbettschä lchen aus Edelstahl ، 14 × 24 × 5 مم ، Cat.: 14302bأي نوع آخر من قوالب الصب المعدنية المستخدمة في تضمين البارافين سيفي بالغرض أيضا.
يتم توفير قوالب نسخ الشبكات المتقاطعة (5 مم - 6 سم)n.a.n.a.يتمقوالب نسخ الشبكات المتقاطعة (5 مم - 6 سم) في ملف البيانات التكميلي ل Albl et al.  توكسيكول باثول. 44 ، 414-420 ، doi: 10.1177 / 0192623316631023 (2016)
قوالب نسخ الدوائر متساوية الزوايا وموزونة جيب التمامn.a.n.a.يتمتوفير قوالب نسخ الدوائر متساوية الزوايا وموزونة جيب التمام في Nyengaard & amp; جوندرسن < / قوي >. Eur Respir Rev. 15 ، 107-114 ، doi: 10.1183 / 09059180.00010101 (2006) وفي Gundersen et al.< / strong> المبادئ التجميدية وإجراءات أخذ العينات لأخصائيي علم الأمراض السمومية. في: Haschek و Rousseaux & acute ؛ كتيب علم أمراض السموم. الطبعة الثالثة ، 215-286 ، ISBN: 9780124157590 (2013).
المشابك القابلة للطي (مقاطع الموثق YIHAI ، 15 مم و 19 مم)شركة Ningbo Tianhong Stationery Coltd. ، الصينY10006 و Y10005أي نوع آخر من المشابك القياسية القابلة للطي في المكتب ستفي بالغرض أيضا.
ملقط (تشريحي)NeoLab Migge GmbH ، هايدلبرغ ، ألمانياneoLab Standard -Pinzette 130 مم ، anatomisch ، تشغيل ، Cat.: 1-1811أي نوع من الملقط التشريحي سيفي بالغرض.
محلول الفورمالديهايد 4٪SAV-Liquid Produktion GmbH ، فلينتسباخ ، ألمانياالفورمالديهايد 37/40٪ ، القط: 1000411525005خفف إلى 4٪ من محلول مركز. المخزن المؤقت إلى درجة الحموضة المحايدة. ارتداء الحماية المناسبة للعين واليدين والجهاز التنفسي. معالجة عينات الأنسجة المثبتة في محلول الفورمالديهايد تحت غطاء العادم وارتداء نظارات واقية وقفازات مختبرية.
ورق الرسم البياني (للمعايرة)Bü romarkt B & ouml; ttcher AG ، جينا ، ألمانيا. www.bueromarkt-ag.dePenig Millimeterpapier A4 ، Cat.: 2514أي نوع من ورق الرسم البياني (المقاس بالمليمتر) سيفي بالغرض.
أكواب المختبر (5 مل ، 10 مل ، 50 مل ، 100 مل)NeoLab Migge GmbH ، هايدلبرغ ، ألمانياBecherglas SIMAX & reg ؛ ، Nidrige Form ، Borosilikatglas 3.3 Cat.: E-1031 ، E-1032 ، E-1035 ، E-1036أي نوع من الأكواب الزجاجية أو البلاستيكية بحجم 5 & 100 مل سيفي بالغرض.
مقاييس (مقاييس) المختبرMettler Toledo GmbH ، Gie & szlig ؛ أون, ألمانياPM6000أي مقاييس مختبرية قياسية مع قياس يتراوح بين 0.1 مغ إلى تقريبا 20 ز, على التوالي بين 100 مغ إلى تقريبا 500 ز سوف تفعل
سارتوريوس AG, Gö ttingen ، ألمانياBP61S
شفرات MicrotomeEngelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermü nde ، ألمانياFEATHER Microtome blasdes S35 ، Cat.: 14700أي نوع من الشفرات الدقيقة ذات الاستخدام الواحد سيفي بالغرض.
برنامج / نظام قياس المورفومتر / قياس الخطةالمعهد الوطني للصحة (NIH)ImageJتنزيل من https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997).
Zeiss-Kontron ، Eching ، ألمانيانظام تحليل الصور Videoplan TMكاميرا صور نيكون
D40نوع من الكاميرات الرقمية التي يمكن تركيبها على حامل ثلاثي القوائم سيفي بالغرض.
الورق الشفاف البلاستيكيAvery Zweckform GmbH ، Oberlaindern ، ألمانياليزر علوي-Folie DINA4 Cat.:  3562أي شفافية بلاستيكية قابلة للطباعة (بالليزر) ستفي بالغرض.
يمكن إنشاء جداول الأرقام العشوائية(بأعداد محددة من الأرقام العشوائية وضمن فترات زمنية محددة) ، باستخدام مولدات الأرقام العشوائية ، مثل: https://www.random.org/
شفرات الحلاقةPlano GmbH ، Wetzlar ، ألمانياT5016أي نوع من شفرات الحلاقة سيفي بالغرض.
حاكمب & uuml; romarkt B & ouml; ttcher AG ، جينا ، ألمانيا. www.bueromarkt-ag.deOffice Point Lineal 30 سم ، Kunststoff ، شفاف ، Cat.: ln30أي نوع من المسطرة ذات الحجم cm-mm سيفي بالغرض أيضا.
محلول ملحي (0.9٪)Carl Roth GmbH ، ألمانياNatriumchlorid ، >99٪ Cat.: 0601.1لتحضير 0.9٪ محلول ملحي ، قم بإذابة 9 جم كلوريد الصوديوم في 1000 مل من الماء المقطر عند 20 درجة مئوية.
شفرات مشرطAesculap AG & Co KG ، Tuttlingen ، ألمانياشفرات BRAUN الجراحية N & deg ؛ 22أي نوع من شفرات المشرط سيفي بالغرض.
الماسحHewlett-Packardhp scanjet 7400cأي نوع من الماسحات الضوئية المكتبية القياسية القادرة على المسح بدقة من 150-600 نقطة في البوصة ستفي بالغرض.
العثور على أمثلة لأجهزة التقطيع التي تم إنشاؤها ذاتيا في السجل التشريحي Knust، et al.< / strong>. 292 ، 113-122 ، doi: 10.1002 / ar.20747 (2009) وفي ملف البيانات التكميلية ل Albl et al.   < / strong> Toxicol Pathol. 44 ، 414-420 ، دوي: 10.1177 / 0192623316631023 (2016).
الصب الكروية (على سبيل المثال ، بقطر 25.5 مم)Pralinen-Zutaten.de ، Windach ، ألمانياPralinen-Hohlkugeln Vollmilch ،ذاتية الصنع ، أو الحصول عليها من موردي الحلويات الآخرين (لبرالين). قوالب الصب المشار إليها هنا هي في الواقع حزمة / تغليف أجسام حلوى البرالين المجوفة (تناول أولا حلوى البرالين ثم استخدم العبوة لتوليد أقسام القطاع الأول)
سلك رفيعBasteln & هواية شوبس ، سترا & szlig ؛ أفرث ، ألمانيا. www,bastel-welt.deMessingdraht (0.3 مم) Cat.: 216464742أي نوع آخر من الأسلاك الرقيقة سيفي بالغرض.
المناديل الورقيةNeoLab Migge GmbH ، هايدلبرغ ، ألمانياDeclcate مناديل المهام البيضاء ، القط: 1-5305أي نوع آخر من المناديل الورقية المختبرية سيفي بالغرض أيضا.
قلم مقاوم للماءStaedler Mars GmbH & شركة KG, Nü rnberg ، GrmanyLumocolor دائم 313 ، 0.4 مم ، S ، أسود ، Cat.: 313-2أي نوع آخر من القلم المقاوم للماء سيفي بالغرض أيضا.
توفير أي بسهولة الضوئي يمكن قوالب يمكن أيضا أن تكون قوالب الصب الكروية مقاس 25.5 مم

المراجع

  1. Aigner, B., et al. Transgenic pigs as models for translational biomedical research. J Mol. Med. 88, 653-664 (2010).
  2. Blutke, A., et al. The Munich MIDY Pig Biobank: A unique resource for studying organ crosstalk in diabetes. Mol Metab. 6, 931-940 (2017).
  3. Klymiuk, N., et al. Dystrophin-deficient pigs provide new insights into the hierarchy of physiological derangements of dystrophic muscle. Hum Mol Genet. 22, 4368-4382 (2013).
  4. Klymiuk, N., Seeliger, F., Bohlooly, Y. M., Blutke, A., Rudmann, D. G., Wolf, E. Tailored pig models for preclinical efficacy and safety testing of targeted therapies. Toxicol Pathol. 44, 346-357 (2016).
  5. Renner, S., et al. Permanent neonatal diabetes in INSC94Y transgenic pigs. Diabetes. 62, 1505-1511 (2013).
  6. Abbott, A. Inside the first pig biobank. Nature. 519, 397-398 (2015).
  7. Albl, B., et al. Tissue sampling guides for porcine biomedical models. Toxicol Pathol. 44, 414-420 (2016).
  8. Gundersen, H. J. G., Mirabile, R., Brown, D., Boyce, R. W. Stereological principles and sampling procedures for toxicologic pathologists. Haschek and Rousseaux's Handbook of Toxicologic Pathology. Haschek, W. , 3rd ed, Academic Press. London. 215-286 (2013).
  9. Howard, C. V., Reed, M. G. Unbiased Stereology: Three-Dimensional Measurement in Microscopy. , 2nd ed, Garland science/Bios Scientific Publishers. Oxford. 1-277 (2005).
  10. Mattfeldt, T., Mall, G., Gharehbaghi, H., Moller, P. Estimation of surface area and length with the orientator. J Microsc. 159, 301-317 (1990).
  11. Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. G. The isector: A simple and direct method for generating isotropic, uniform random sections from small specimens. J Microsc. 165, 427-431 (1992).
  12. Tschanz, S., Schneider, J. P., Knudsen, L. Design-based stereology: Planning, volumetry and sampling are crucial steps for a successful study. Ann Anat. 196, 3-11 (2014).
  13. Dorph-Petersen, K. A., Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. Tissue shrinkage and unbiased stereological estimation of particle number and size. J Microsc. 204, 232-246 (2001).
  14. Mattfeldt, T. Stereologische Methoden in der Pathologie [Stereologic methods in pathology]. Normale und pathologische Anatomie. Doerr, W., Leonhardt, H. , Georg Thieme Verlag. Stuttgart-New York. (1990).
  15. Gundersen, H. J., Jensen, E. B. The efficiency of systematic sampling in stereology and its prediction. J Microsc. 147, 229-263 (1987).
  16. Scherle, W. A simple method for volumetry of organs in quantitative stereology. Mikroskopie. 26, 57-60 (1970).
  17. Nielsen, K. K., Andersen, C. B., Kromann-Andersen, B. A comparison between the effects of paraffin and plastic embedding of the normal and obstructed minipig detrusor muscle using the optical disector. J Urol. 154, 2170-2173 (1995).
  18. Schneider, J. P., Ochs, M. Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306, L341-L350 (2014).
  19. von Bartheld, C. S. Distribution of particles in the z-axis of tissue sections: Relevance for counting methods. NeuroQuantology. 10, 66-75 (2012).
  20. Baddeley, A. J., Gundersen, H. J., Cruz-Orive, L. M. Estimation of surface area from vertical sections. J microsc. 142, 259-276 (1986).
  21. Blutke, A., Schneider, M. R., Wolf, E., Wanke, R. Growth hormone (GH)-transgenic insulin-like growth factor 1 (IGF1)-deficient mice allow dissociation of excess GH and IGF1 effects on glomerular and tubular growth. Physiol Rep. 4, e12709(2016).
  22. Rasband, W. S. ImageJ. , U.S. National Institutes of Health. Bethesda, Maryland, USA. Available from: http://rsb.info.nih.gov/ij (1997).
  23. Hermanns, W., Liebig, K., Schulz, L. C. Postembedding immunohistochemical demonstration of antigen in experimental polyarthritis using plastic embedded whole joints. Histochemistry. 73, 439-446 (1981).
  24. Böck, P. Romeis Mikroskopische Technik. , Urban und Schwarzenberg. München, Wien, Baltimore. 17. Auflage 1-697 (1989).
  25. Suvarna, K. S., Layton, C., Bancroft, J. D. Bancroft's theory and practice of histological techniques. Suvarna, K. S., Layton, C., Bancroft, J. D. , Churchill Livingstone. 1-654 (2013).
  26. Knust, J., Ochs, M., Gundersen, H. J., Nyengaard, J. R. Stereological estimates of alveolar number and size and capillary length and surface area in mice lungs. Anat Rec (Hoboken). 292, 113-122 (2009).
  27. Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. G. Sampling for stereology in lungs. Eur Respir Rev. 15, 107-114 (2006).
  28. Junatas, K. L., et al. Stereological analysis of size and density of hepatocytes in the porcine liver. J Anat. 230, 575-588 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

أخذ عينات الأنسجة الخنزيريةمعالجة عينات البنك الحيويتقنية الغمرطريقة الموجهالمقاطع العشوائية الموحدة متناحية الخواصتحديد كثافة الأنسجةأخذ العينات الموزونة حجمياًالتحليل المجسمقياس حجم الأعضاءتوليد المقاطع العشوائية
استراتيجيات أخذ العينات وتجهيزها لعينات الأنسجة المصرف البيولوجي من النماذج الطبية الخنزير
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.