في هذا العمل، ويصف لنا الحشري الحاد والمزمن وبين الأجيال لدراسة آثار الإجهاد مفردة ومجتمعة على killifish الفيروز فورزيري نوثوبرانتشيوس. تم تصميم هذا البروتوكول لدراسة تاريخ حياة الصفات (معدل الوفيات، النمو، الخصوبة، الوزن) وأقصى الحرارية الحرجة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
بروتوكول لالحاده والمزمنة اختبار السمية الإيكولوجية Killifish الفيروز فورزيري نوثوبرانتشيوس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
Killifish فورزيري نوثوبرانتشيوس كائن حي نموذجية ناشئة في مجال علم السموم الإيكولوجية وقد ثبت انطباقه في اختبار السمية الحادة والمزمنة. عموما، حساسية الأنواع للمركبات السامة في النطاق مع، أو أعلى، من الأنواع النموذجية الأخرى.
ويصف هذا العمل البروتوكولات للمقايسة الحادة والمزمنة، وبين الأجيال من آثار الضغوطات مفردة ومجتمعة على فورزيري أ.. نظراً للوقت القصير نضوج ودورة الحياة، يسمح هذا النموذج الفقاريات دراسة نهايات مثل وقت النضج والخصوبة في غضون أربعة أشهر. يمكن أن يؤديها تخذها دورة الحياة الكاملة التعرض للمحاكمات في أقل من 8 أشهر. منذ هذه الأنواع تنتج البيض التي تقاوم الجفاف وتظل قابلة للاستمرار لسنوات، الثقافة في الموقع للأنواع غير مطلوبة ولكن يمكن تجنيد الأفراد عند الاقتضاء. البروتوكولات مصممة لقياس سمات تاريخ حياة (معدل الوفيات، النمو، الخصوبة، الوزن) والحرجة الحرارية كحد أقصى.
المقدمة
كانت ملامح حساسية طائفة واسعة من الأنواع إلى سميات استراتيجيا المحدد وصف1 للتشريعات "الأوروبية تصل إلى" (التسجيل والتقييم وترخيص وتقييد المواد الكيميائية). اختبارات السمية الحادة أو قصيرة الأجل كانت تستخدم في الغالب لهذا الغرض كما أنها تعطي إشارة سريعة للحساسية هي من الأنواع. ومع ذلك، في بيئتها الطبيعية، تتعرض الكائنات الحية على مدى فترات أطول بكثير ودورات حياة كاملة أو حتى عدة أجيال يمكن أن المتضررة2. وعلاوة على ذلك، يتعرض الكائنات الحية في البيئات الملوثة عادة إلى الضغوطات واحد أو أكثر في وقت، التي قد تتفاعل مع بعضها البعض، ربما ينتج عن آثار التآزر3. ومن ثم فقد نقلل من اختبارات السمية المحسوبة ع....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع الأساليب الموصوفة هنا أقرتها اللجنة الأخلاقية من كوليوفين.
1-الفقس والصيانة العامة من فورزيري أ.
- إعداد الأسماك المتوسطة (pH 7) عند درجة حرارة 14 درجة مئوية وإضافة تنقية المياه "من النوع الثاني"، مع إضافة أملاح موحدة، للتوصيل من 600 المايكروثانيه/سم (24 درجة مئوية).
- حدد البيض من الخط المختبر جرز (الجونة-ستراتهم-تشو) التي تم تخزينها تحت ظروف قياسية13. حدد البيض في مرحلة ديي (أي استعداد للتظليل)، يمكن التعرف عليها بوجود العيون الذهبية9 ولطف نقلها مع زوج لينة من الملقط إلى خزان ل 2 بلاستيك (أي أكثر من حوالي 30 بيضة في خزان).
ملاحظة: من أجل الحصول على ع....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
حساب نتائج التعرض الحاد من فورزيري أ لتركيزات مختلفة من النحاس، كما هو الحال في 2.5.2، وإظهار العلاقات بين كليردوسي-الاستجابة (الشكل 1). وهناك زيادة في معدلات الوفيات مع زيادة تركيز السمية. إنقاص القيم LC50 مع مرور الوقت، مما يعني أن المزيد من الوقت مع تناقص تركيزات، يمر قبل 50% يموت replicates. للحصول على النتائج التفصيلية في التعرض الحاد والمزمن من فورزيري أ للنحاس، فضلا عن المقارنة بين حساسية الأنواع مقارنة بالأنواع الأخرى، ونح.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يصف الحشري جديدة استخدام فورزيري نوثوبرانتشيوس، كائن حي نموذجية ناشئة، لدراسة الفرد هذا العمل والجمع بين الآثار الطويلة الأجل سميات والعوامل الأخرى المسببة للإجهاد. تم بنجاح تطبيق البروتوكولات المقدمة لقياس حساسية الأنواع إلى صفيف من سميات (النحاس، الكادميوم، 3 و 4-ديتشلوروانيليني ووالكلوربيريفوس). بسبب دورة حياتها سريعة، يسمح هذا الطراز الفقاريات لتقييم المقاسة وآثار تخذها في غضون أربعة أشهر. ميزة كبرى أخرى لاستخدام هذه الأنواع السمكية كنموذج لفحص سمية هو حقيقة أن تنتج البيض مقاومة للجفاف. وهذا يتيح للباحثين تخ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
نحن ممتنون لمجموعة المجال في أوانتويربين ودائرة حماية المحاصيل من أوجينة لتحليل عينات المياه. وقدمت الدعم المقدم من خلال هذا المشروع مركز التميز 'الإيكولوجية والديناميات الاجتماعية التطورية (PF/10/007) من"صندوق أبحاث وفين كو". الدخيل (11Q0516N) ومولت آسيت (فو-SB151323) الدكتوراه و TP (12F0716N) كزميل ما بعد الدكتوراه قبل "فو فلاندرز" (Fonds ويتينشابيليجك أونديرزوك).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| المياه النقية النوع 1 (مللي Q) | Millipore | ||
| ملح البحر | Instant Ocean | ||
| 2L خزان بلاستيكي | SAVIC | دائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية | |
| خزان بلاستيكي سعة 1 لتر (التفريخ) | Avamoplast | دائما مواد منفصلة لشبكات التحكم ومعالجة | |
| السمية | Aqua bilzen | دائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية | |
| برطمانات زجاجية سعة 2 لتر | Sepac-Flacover | دائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية | |
| برطمانات زجاجية سعة 5.5 لتر | Sepac-Flacover | دائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية | |
| بيض الأرتيميا | تغذية المحيط | ||
| chironomus | Ocean Nutrition | المجمدة | |
| أطباق tricaine | Sigma aldrich | ||
| Petri | VWR | ||
| Parafilm | VWR | ||
| الماصات | MLS | ||
| الملقط | FST | ||
| 500 & micro ؛ منخل شبكي m | / | ||
| أنبوب طرد مركزي دقيق عصامي (2 مل) | العلامة | التجارية لتخزين الأسماك في | |
| قوارير زجاجية | Sigma aldrich | لتحليل المياه | |
| وزن قارب | MLS | ||
| Jiffy 7c الكريات | Jiffy | ||
| حمام مائي | جيلاك | ||
| للنيتروجين السائل Ctmax | رقمي | ||
| السائل Testo AG | testo 926 | ||
| HETO سخان حراري | Anker Schmitt | ||
| معايرة التوازن | Mettler-Toledo AG | ||
| الكاميرا | / | ||
| منصة للكاميرا | / | ||
| مجموعة متعددة المعلمات | ذاتية الصنع HACH | ||
| الفريزر (-80 درجة ؛ ج) | باناسونيك بدرجة حرارة منخفضة | ||
| للغاية <قوي > الاسم < / قوي > | <قوي > الشركة < / قوي > | < قوي > رقم الكتالوج < / strong > | التعليقات < / strong > |
| Fysio < / strong > | |||
| homogenization buffer | VWR | 0.1 م تريس – حمض الهيدروكلوريك ، الرقم الهيدروجيني 8.5 ، 15 ؛ ٪ بولي فينيل بيروليدون ، 153 ؛ ومايكرو. م MgSO4 ؛ و 0.2 ;٪ تريتون X-100 | |
| كلوروفورم: الميثانول | سيجما ألدريتش | ||
| الجلسريل تري بالميتات | سيجما ألدريتش | ||
| أميلوجلوكوزيداز | سيجما ألدريتش | A7420 | |
| كاشف فحص الجلوكوز | سيجما ألدريتش | G3293 | |
| صبغة بروتين بيوراد | VWR | ||
| 96 جيدا لوحة ميكروتيتر | Greiner Bio-one | ||
| 384 لوحات ميكروتيتر | Greiner Bio-one | ||
| 2 مل أنابيب زجاجية | Fiers | لتحليل الدهون | |
| أنابيب eppendorf 2,5 مل | VWR | ||
| homogeniser | Ultra-turrax TP 18/10 | ||
| الطيف الضوئي | Infinite M200 TECAN | ||
| سخان للأنابيب الزجاجية | Hach COD ACTOR | ||
| الطرد المركزي | Eppendorf الطرد المركزي 5415 R | ||
| حاضنة | بوماكو |
المراجع
- European-Chemicals-Bureau. TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1). , (2005).
- Philippe, C., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
