Method Article

بروتوكول لالحاده والمزمنة اختبار السمية الإيكولوجية Killifish الفيروز فورزيري نوثوبرانتشيوس

DOI:

10.3791/57308

⸱

April 24th, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Animal Ecology, Global Change and Sustainable Development, University of Leuven, 2Systemic Physiological and Ecotoxicological Research, University of Antwerp, 3Water Research Group, Unit for Environmental Sciences and Management, North-West University, 4Centre for Environmental Management, University of the Free State

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا العمل، ويصف لنا الحشري الحاد والمزمن وبين الأجيال لدراسة آثار الإجهاد مفردة ومجتمعة على killifish الفيروز فورزيري نوثوبرانتشيوس. تم تصميم هذا البروتوكول لدراسة تاريخ حياة الصفات (معدل الوفيات، النمو، الخصوبة، الوزن) وأقصى الحرارية الحرجة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Killifish فورزيري نوثوبرانتشيوس كائن حي نموذجية ناشئة في مجال علم السموم الإيكولوجية وقد ثبت انطباقه في اختبار السمية الحادة والمزمنة. عموما، حساسية الأنواع للمركبات السامة في النطاق مع، أو أعلى، من الأنواع النموذجية الأخرى.

ويصف هذا العمل البروتوكولات للمقايسة الحادة والمزمنة، وبين الأجيال من آثار الضغوطات مفردة ومجتمعة على فورزيري أ.. نظراً للوقت القصير نضوج ودورة الحياة، يسمح هذا النموذج الفقاريات دراسة نهايات مثل وقت النضج والخصوبة في غضون أربعة أشهر. يمكن أن يؤديها تخذها دورة الحياة الكاملة التعرض للمحاكمات في أقل من 8 أشهر. منذ هذه الأنواع تنتج البيض التي تقاوم الجفاف وتظل قابلة للاستمرار لسنوات، الثقافة في الموقع للأنواع غير مطلوبة ولكن يمكن تجنيد الأفراد عند الاقتضاء. البروتوكولات مصممة لقياس سمات تاريخ حياة (معدل الوفيات، النمو، الخصوبة، الوزن) والحرجة الحرارية كحد أقصى.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كانت ملامح حساسية طائفة واسعة من الأنواع إلى سميات استراتيجيا المحدد وصف1 للتشريعات "الأوروبية تصل إلى" (التسجيل والتقييم وترخيص وتقييد المواد الكيميائية). اختبارات السمية الحادة أو قصيرة الأجل كانت تستخدم في الغالب لهذا الغرض كما أنها تعطي إشارة سريعة للحساسية هي من الأنواع. ومع ذلك، في بيئتها الطبيعية، تتعرض الكائنات الحية على مدى فترات أطول بكثير ودورات حياة كاملة أو حتى عدة أجيال يمكن أن المتضررة2. وعلاوة على ذلك، يتعرض الكائنات الحية في البيئات الملوثة عادة إلى الضغوطات واحد أو أكثر في وقت، التي قد تتفاعل مع بعضها البعض، ربما ينتج عن آثار التآزر3. ومن ثم فقد نقلل من اختبارات السمية المحسوبة على أساس الضغوطات الحادة، وواحد آمنة تركيزات المخاطر الفعلية التي تفرضها سميات في البيئات الطبيعية. ولذلك يستحسن،، لدراسة آثار مزمنة ومتعددة الأجيال من التركيزات المقاسة من سميات في سياق بيئياً ذات صلة أيضا التي تدعو إليها "اللجنة الأوروبية"4،5 ووكالة حماية البيئة الأمريكية (المتحدة وكالة حماية البيئة في الولايات)6،7. لا سيما في بحوث الفقاريات، مرتفعة التكاليف من حيث العمل والمال والوقت عند إجراء دراسات التعرض المزمن وبين الأجيال بسبب عمر طويل نسبيا من الفقاريات بالمقارنة مع الكائنات اللافقارية النموذجي. ولذلك، فمن المستحسن اختيار أنسب الأسماك طراز الكائن الحي، واعتماداً على السؤال البحثي. وعلاوة على ذلك، ينبغي أن يكون مجموعة واسعة من الأنواع الفقارية المتاحة من أجل اختبار عمومية الردود عبر الأنواع لتكون قادرة على التكيف مع الأنظمة القائمة على الأنواع الأكثر حساسية. الآن، هناك حاجة إلى وضع جديد، بروتوكولات فعالة مع الأنواع النموذجية الفقارية تتميز بدورات حياة قصيرة لخفض تكاليف أداء التعرض المزمن وبين الأجيال على الفقريات7،8.

Killifish الفيروز فورزيري نوثوبرانتشيوس نموذج أسماك مثيرة لاهتمام لاستخدامها في مثل هذه التجارب التعرض الطويل الأجل بسبب الوقت القصير نضوج ودورة الحياة (جيل الوقت أقل من 4 أسابيع9). وهذا يعني أن النهاية ذات الصلة إيكولوجيا مثل وقت النضج والخصوبة يمكن دراستها في إطار زمني قصير بالمقارنة مع سائر النماذج الأسماك7. وعلاوة على ذلك، هذه الأسماك إنتاج البيض نائمة مقاومة للجفاف، وأن تظل قابلة للاستمرار لعدة سنوات عند تخزينها تحت ظروف قياسية، وبالتالي القضاء على الحاجة إلى استمرار ثقافة9. في دراسات السمية البيئية، وهذا يعني أيضا أن تكرار الأسماك يمكن الجميع أن تحاك في نفس اللحظة الدقيقة، أسفر التزامن الوقت لجميع الحيوانات، وحتى بين مجموعات بيض المنتج في أوقات مختلفة. نحن ننصح باستخدام المختبر سلالة جرز للقيام بتجارب التعرض. هذه السلالة أداء جيدا في الظروف المختبرية، وهو متماثل (باستثناء كروموزومات الجنس) والجينوم هو كذلك تتسم10،11.

في دراسات السمية البيئية، من المهم لتحديد النطاق المناسب لتركيزات الاختبار. يمكن استخدام عدة أساليب مكملة لهذه الغاية. يمكن أن تستند نطاق التركيز الأسمى إلى حساسية الأنواع ذات الصلة، مثل جوينثيري نوثوبرانتشيوس12. بدلاً من ذلك، يمكن أن تستند النطاق حساسية النماذج القياسية الأسماك، مثل الزرد (دانيو rerio)2 التي لها حساسية مماثلة لمعظم سميات (فيليب et al. (في استعراض)). في تركيبة، مع كل من هذه الخيارات، ينبغي أن تجري مجموعة البحث عن التجربة لتحديد نطاق التركيز الأسمى. لاختبار حادة، ينبغي أن تهدف الباحثين لتركيز العلاج مع وفيات 100%، متوسط معدل الوفيات والوفيات 0% بعد 24 ساعة تعرض لأنها سامة. لاختبار المزمن، فمن المستحسن لتشغيل نطاق البحث عن تجربة لمدة أسبوعين للتحقق من إذا وفيات اليرقات في الشرط مع أعلى تركيزات اختبار لا يتجاوز نسبة 10 في المائة خلال هذه الفترة المرجعية.

يمكن البروتوكول بمثابة أساس لأداء التعرض الحاد والمزمن للملوثات المنقولة بالمياه في فورزيري أ، دراسة الآثار المحتملة لعوامل الإجهاد على حد سواء على المستوى الفردي والهاتف الخلوي. يمكن أيضا استخدامه لإجراء البحوث الضغوطات المتعددة لاستيعاب أعلى أهمية إيكولوجية، خلط مختلف المركبات السامة أو دراسة الآثار التفاعلية بين التلوث والإجهاد الطبيعية الأخرى (مثل اﻻفتراس) أو الاصطناعية عوامل الإجهاد (مثل الاحترار بسبب تغير المناخ).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الأساليب الموصوفة هنا أقرتها اللجنة الأخلاقية من كوليوفين.

1-الفقس والصيانة العامة من فورزيري أ.

  1. إعداد الأسماك المتوسطة (pH 7) عند درجة حرارة 14 درجة مئوية وإضافة تنقية المياه "من النوع الثاني"، مع إضافة أملاح موحدة، للتوصيل من 600 المايكروثانيه/سم (24 درجة مئوية).
  2. حدد البيض من الخط المختبر جرز (الجونة-ستراتهم-تشو) التي تم تخزينها تحت ظروف قياسية13. حدد البيض في مرحلة ديي (أي استعداد للتظليل)، يمكن التعرف عليها بوجود العيون الذهبية9 ولطف نقلها مع زوج لينة من الملقط إلى خزان ل 2 بلاستيك (أي أكثر من حوالي 30 بيضة في خزان).
    ملاحظة: من أجل الحصول على عدد كاف من اختبار صحة الكائنات الحية، يفقس البيض مرتين كثيرة كعدد يرقات السمك المطلوب.
  3. أضف 1 سم الوسط الأسماك عند 12 درجة مئوية والسماح لدرجة حرارة الماء تتقارب تدريجيا إلى درجة حرارة الغرفة (24 درجة مئوية)9. وسوف يفقس الأسماك ضمن ح 12 الأولى.
  4. بعد 24 ساعة، تغذية hatchlings جرعة مركزة من فقست حديثا أرتيميانوبلي (للاطلاع على مزيد من التفاصيل عن التردد وكمية من المواد الغذائية، الرجوع إلى بروتوكول تربية Polačik et al. عام 20169) وزيادة عمق المياه إلى 5 سم من إضافة متوسطة السمك.
  5. بعد 36 ساعة، تغذية hatchlings آخر جرعة مركزة من طازجة مظلل الارتيميا النوبليوس وإضافة الأسماك المتوسطة لزيادة عمق المياه إلى 10 سم.
  6. احتضان حاويات الأسماك تحت ظروف درجة حرارة ثابتة (مثلاً في حاضنة أو المناخ غرفة أو حمام الماء الساخن) تحت ح 14 h:10 نظام الضوء: الظلام.
  7. قبل البدء التجربة، حاويات الأسماك المعقدة (دون الأسماك) بتعرض مجمع بملئها بتركيز أعلى من متوسط التعرض وتركها بين عشية وضحاها من أجل الحد من نقل سميات إلى الحاوية في الفعلية التجربة.
  8. ح 48 بعد الفقس، حدد اليرقات المزدهر صحية لبدء التجربة التعرض. تجاهل ما يسمى منزلقات البطن التي كانت غير قادر على ملء المثانة السباحة بها، ونتيجة لذلك الطفو البصر (بالوعة باستمرار إلى الأسفل).

2-المدى القصير التعرض البروتوكول

ملاحظة: ينبغي أن تهدف الباحثين على الأقل 20 replicates (الأسماك 20 في الجرار منفصلة) كل معاملة. بالإضافة إلى علاج تحكم كامل، ينبغي إدراج عنصر تحكم موسر إذا أعد الحل الأسهم المجمع باستخدام المذيبات. ينبغي أن تحتوي على عنصر التحكم المذيبات كمية المذيب تساوي تركيز المذيبات في أعلى تركيز التعرض.

  1. إعداد الحاويات التجريبية (0.5 لتر زجاج الجرار) بوضع العلامات عليها وملئها بمتوسط التعرض المناسبة (تركيزات السمية مختلفة). إضافة المجمع للحصول على التركيز الصحيح.
  2. نقل اليرقات (48 ساعة بعد الفقس) منفردة للحاويات (الأسماك 1 كل حاوية لرصد الفردية).
    ملاحظة: يتم كشفها أسماك منفردة للتقليل من آثار الخلط المحتملة للتفاعل الاجتماعي مثل التنافس على الغذاء والعدوان. ومع ذلك، يسمح الأسماك للتفاعل بصريا وفقا للمعايير الأخلاقية لاستخدام الحيوانات المختبرية.
  3. متابعة هذا التعرض الحاد لمدة تصل إلى أسبوعين. وخلال ذلك الوقت، تغذية الأسماك libitum الإعلانية مع الارتيميا النوبليوس مرتين في اليوم، 7 أيام في الأسبوع الواحد.
  4. تحديث المتوسط يوميا للحفاظ على نوعية المياه والتقليل من الآثار المحتملة لتدهور المركبة. رصد المتغيرات المائية الرئيسية (يجب أن تتجاوز مستويات الأوكسجين الذائب 80%، الموصلية يجب أن تتراوح بين 600 و 700 المايكروثانيه/سم، الأس الهيدروجيني بين 7.8 و 8.2، وصلابة (ككربونات الكالسيوم3) بين 350 و 450 مغ/لتر، التي تقع داخل نطاق شروط التربية المثلى فورزيري أ. 9). أخذ عينات المياه قبل وبعد تحديث المتوسط إلى تحديد تركيزات المركب الفعلي.
  5. نقاط النهاية
    1. فحص الأسماك للوفيات، والإجهاد (مثل السلوك المنحرف: السباحة رأسا على عقب) أو المرض يوميا (الصباح والمساء). راجع المنشور من الأطلال et al. (1999) 12 لمزيد من التفاصيل على ملاحظة معدلات الوفيات أو الإجهاد أو المرض.
    2. حساب LC50 القيم استناداً إلى معدل الوفيات عند نقاط زمنية مختلفة باستخدام منحنيات الاستجابة للجرعة (ريتز وستريبيج، 2005). استخدم الدالة drm في الحزمة جمهورية الكونغو الديمقراطية في v3.2.3 R (فريق آر التنمية الأساسية، 2016) أو نهج إحصائية مماثلة.

3. بروتوكول التعرض المزمن

ملاحظة: تهدف إلى الحد أدنى من الأسماك 25/الشرط في بداية التجربة، للتقليل من فرص نسبة الجنس المنحرف وتلبية المحتملة خلفية الوفيات الناجمة عن أسباب طبيعية (أي. الوفيات المرتبطة بالسن).

  1. الفقس (انظر القسم 1)
  2. المرحلة الأولى (2 أيام بعد الفقس-16 يوما بعد الفقس)
    1. اتبع البروتوكول كما هو موضح في 2، 1-2-4
    2. كما حدث أثناء المرحلة الثانية من التجربة، سوف تتحلل المتوسطة طوال الأسبوع (لا المرطبات، انظر أدناه). تخزين الكمية المطلوبة من المتوسطة لمدة أسبوع في حاويات خاملة كبيرة بغية السماح بتدهور مماثل في المجمع.
  3. المرحلة الثانية (16 يوما ما بعد الفقس-نهاية)
    1. إعداد 2 لتر زجاج التجريبية الجرار من إلى لهم مع المجمع. تعبئة الزجاجات مع متوسط التعرض الصحيح وإضافة أنبوب هواء تهوية الجرة. الأسماك منزل على حدة في هذه الجرار لما تبقى من هذه التجربة. السماح بالتفاعل المرئي لاستيعاب المعايير الأخلاقية.
    2. تحديث المتوسط مرة واحدة في الأسبوع. نقل الأسماك بالشباك بجرة جديدة تحتوي على متوسط التعرض نفسه. أخذ عينات المياه كل يوم طوال أسبوع لرصد تدهور المجمع في كل معاملة تركيز. حساب اختبار منحنى تدهور لكل معاملة إذا ضغوطات متعددة (مثل سمية المركب في أنظمة درجات الحرارة المختلفة). قياس بارامترات اللاأحيائية (درجة الحموضة، درجة الحرارة، والأكسجين المذاب في المائة، الموصلية) ثلاث مرات في الأسبوع.
    3. من 3 أيام بعد الفقس (dph) حتى 23 dph، تغذية الأسماك مرتين يوميا، 7 أيام في الأسبوع متواصلة ad الارتيميا النوبليوس. من 24 dph-dph 37، تكمل النظام الغذائي ليبيتومارتيميا الإعلانية مع المقطعة Chironomus اليرقات. من 38 dph في، تغذية الأسماك مرتين يوميا، 7 أيام في الأسبوع إعلانية libitum تجميد اليرقات Chironomus .
  4. نقاط النهاية
    1. الأسماك الاختيار اليومي ل الوفيات، والإجهاد أو المرض12.
    2. تحديد النمو، وقياس حجم الجسم على أساس أسبوعي (dph 9-16 dph-21 dph-...) بنقل الأسماك إلى طبق بتري مليئة بالمتوسطة من هذه المكامن. 4-5 حجم معايرة الصور من الأسماك من أعلى (على ارتفاع ثابت) وتحليلها رقمياً باستخدام برنامج قياس مكانية (مثل إيماجيج).
      ملاحظة: للسمك الكبار، استخدام طبق بيتري أعلى لتقليل التعامل مع الإجهاد بحفظ جميع الأسماك المغمورة خلال قياس العملية بأكملها.
    3. بصريا نضج الذكور، تفقد الأسماك يوميا لتلوين من dph 15 فصاعدا. تحقق من الزعانف للبوادر الأولى لتلوين الزواج (الخصائص الجنسية الثانوية). استخدم في اليوم الأول الذي هذا مرئياً كوكيل لوقت نضوج الذكور.
    4. الزوجين غير مسحه الأسماك مع الذكور في نفس المجموعة المعاملة أو الذكور غير التجريبية ثلاث مرات في الأسبوع من 30 dph فصاعدا بغية تحديد وقت نضوج الإناث (يوم تودع البيضة الأولى). لهذا، تستخدم بروتوكول التفريخ الموصوفة في 3.4.5.
    5. للخصوبة، نضوج الزوجين الإناث مع الذكور الناضجة 3 مرات/الأسبوع من 30 dph فصاعدا، داخل هذه العلاجات استخدام نظام عبور.
      1. إعداد خزان التفريخ (1 لتر) لكل زوجين، باستخدام متوسط التعرض من الحوض الذكور وتستكمل مع تفريخ الركيزة (غرامة الرمال < 500 ميكرومتر).
      2. نقل كل من الذكور والإناث في خزان التفريخ والسماح لهم بالبيضة لمدة ساعتين. تقليل النشاط البشري أو اضطراب حول الحاويات التفريخ خلال هذه العملية.
      3. وبعد ذلك، نقل بلطف الأسماك مرة أخرى إلى داخل الحاويات الأصلية للسكن، دون خلط غير الضرورية من المياه التي سوف الدوران بيض في الركيزة التفريخ.
      4. تصفية البيض بصب الركيزة التفريخ أكثر 500 ميكرون. عد البيض ونقلها (باستخدام الملقط لينة) إلى موس الخث رطبة في أطباق بتري9،14.
      5. إزالة البيض الميت يوميا. بعد أسبوع، ختم بيتري طبق مع ختم الفيلم وتخزينها في درجة حرارة تسيطر حاضنة في 28 درجة مئوية و 14:10 ح الضوء: الظلام دورة التنمية فورا إلى مرحلة ديي (أي استعداد تفقس بعد حوالي ثلاثة أسابيع). للتخزين على المدى الطويل، تخزين البيض في 17 درجة مئوية في ظلام مستمر على أساسها البيض يدخل في مرحلة سبات عميق وتظل قابلة للاستمرار لسنوات متعددة. عند الاستعانة بالأسماك من هذه البيض نائمة للتجارب، نقل البيض نائمة لظروف 28 درجة مئوية مع 14:10 ح الضوء: الظلام دورة لمدة ثلاثة أسابيع تقريبا للسماح للتنمية إلى مرحلة ديي.
    6. قياس الحد الأقصى الحرارية الحرجة (كتماكس) (وهو تدبير لأداء15) من الأسماك الكبار.
      1. استخدام حمام مائي يتم تسخين 0.33 درجة مئوية/دقيقة بمعدل ثابت والذي يعمم الماء بشكل مستمر. إضافة عدة أحواض 1 لتر لكل الأسماك الفردية.
        ملاحظة: نظراً لضيق المساحة في حوض ماء، من الضروري العمل في العديد من المسلسلات. وينبغي مراعاة الاختلافات المحتملة في الظروف بين سلسلة عند إجراء التحليل الإحصائي بتضمين 'سلسلة' كعامل عشوائي.
      2. بدء المحاكمة بإضافة السمك إلى الحوض عندما المياه في الحوض وصلت درجة حرارة تجريبي تربية الأسماك (عموما 28 درجة مئوية). رصد درجة الحرارة في أحواض 1 لتر من حمام كتماكس كل 5-دقيقة باستخدام مقياس حرارة رقمي (مقياس 0.1 درجة مئوية).
      3. نهاية المحاكمة عندما أخفق في الحفاظ على موقف تستقيم دورسو بطنيا الأسماك أو يبدأ الوخز بشكل كبير16،17. قياس درجة الحرارة في الحوض 1 لتر، وهو درجة الحرارة القصوى الحرجة. نقل الأسماك إلى الإسكانية التجريبية للانتعاش.
    7. قياس الوزن (دقة 0.1 مغ) من الأسماك في اليوم الأخير من التجربة الربت أنها جافة ونقلها على متن قارب وزنها. ملاحظة: جميع الأسماك ينبغي قياس أربع ساعات بعد إطعام الماضي على توحيد وزن الغذاء في الأمعاء.
    8. Euthanize الأسماك باستخدام 0.1% تريكيني.

4-تخذها التعرض البروتوكول

ملاحظة: لقياس تخذها آثار الملوثات على فورزيري أ، يتبع البروتوكول التعرض المزمن المبينة أعلاه للجيل الأول.

  1. مرتين أسبوعيا، التحقق من وضع البيض المنتجة (أي الجيل الثاني) المخزنة في 28 درجة مئوية 14:10 ح الضوء: الظلام دورة شروط بتفتيش أطباق بيتري للأجنة في مرحلة ديي (انظر Polačik وآخرون 9من عام 2016). عندما يتم وضع replicates أكثر من 50 من كل معاملة الوالدين تماما، هاتش لهم بعد على البروتوكول في 1.1.
  2. كشف الأسماك صحية ومزدهرة بالضبط نفس الإعداد والمعالجة كالسمك الأبوية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حساب نتائج التعرض الحاد من فورزيري أ لتركيزات مختلفة من النحاس، كما هو الحال في 2.5.2، وإظهار العلاقات بين كليردوسي-الاستجابة (الشكل 1). وهناك زيادة في معدلات الوفيات مع زيادة تركيز السمية. إنقاص القيم LC50 مع مرور الوقت، مما يعني أن المزيد من الوقت مع تناقص تركيزات، يمر قبل 50% يموت replicates. للحصول على النتائج التفصيلية في التعرض الحاد والمزمن من فورزيري أ للنحاس، فضلا عن المقارنة بين حساسية الأنواع مقارنة بالأنواع الأخرى، ونح...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف الحشري جديدة استخدام فورزيري نوثوبرانتشيوس، كائن حي نموذجية ناشئة، لدراسة الفرد هذا العمل والجمع بين الآثار الطويلة الأجل سميات والعوامل الأخرى المسببة للإجهاد. تم بنجاح تطبيق البروتوكولات المقدمة لقياس حساسية الأنواع إلى صفيف من سميات (النحاس، الكادميوم، 3 و 4-ديتشلوروانيليني ووالكلوربيريفوس). بسبب دورة حياتها سريعة، يسمح هذا الطراز الفقاريات لتقييم المقاسة وآثار تخذها في غضون أربعة أشهر. ميزة كبرى أخرى لاستخدام هذه الأنواع السمكية كنموذج لفحص سمية هو حقيقة أن تنتج البيض مقاومة للجفاف. وهذا يتيح للباحثين تخ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن ممتنون لمجموعة المجال في أوانتويربين ودائرة حماية المحاصيل من أوجينة لتحليل عينات المياه. وقدمت الدعم المقدم من خلال هذا المشروع مركز التميز 'الإيكولوجية والديناميات الاجتماعية التطورية (PF/10/007) من"صندوق أبحاث وفين كو". الدخيل (11Q0516N) ومولت آسيت (فو-SB151323) الدكتوراه و TP (12F0716N) كزميل ما بعد الدكتوراه قبل "فو فلاندرز" (Fonds ويتينشابيليجك أونديرزوك).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
المياه النقية النوع 1 (مللي Q)Millipore
ملح البحرInstant Ocean
2L خزان بلاستيكيSAVICدائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية
خزان بلاستيكي سعة 1 لتر (التفريخ)Avamoplastدائما مواد منفصلة لشبكات التحكم ومعالجة
السميةAqua bilzenدائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية
برطمانات زجاجية سعة 2 لترSepac-Flacoverدائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية
برطمانات زجاجية سعة 5.5 لترSepac-Flacoverدائما مواد منفصلة للتحكم وعلاجات السمية
بيض الأرتيمياتغذية المحيط
chironomusOcean Nutritionالمجمدة
أطباق tricaineSigma aldrich
PetriVWR
ParafilmVWR
الماصاتMLS
الملقطFST
500 & micro ؛ منخل شبكي m/
أنبوب طرد مركزي دقيق عصامي (2 مل)العلامةالتجارية لتخزين الأسماك في
قوارير زجاجيةSigma aldrichلتحليل المياه
وزن قاربMLS
Jiffy 7c الكرياتJiffy
حمام مائيجيلاك
للنيتروجين السائل Ctmaxرقمي
السائل Testo AGtesto 926
HETO سخان حراريAnker Schmitt
معايرة التوازنMettler-Toledo AG
الكاميرا/
منصة للكاميرا/
مجموعة متعددة المعلماتذاتية الصنع HACH
الفريزر (-80 درجة ؛ ج)باناسونيك بدرجة حرارة منخفضة
للغاية <قوي > الاسم < / قوي ><قوي > الشركة < / قوي >< قوي > رقم الكتالوج < / strong > التعليقات < / strong >
Fysio < / strong >
homogenization bufferVWR0.1  م تريس – حمض الهيدروكلوريك ، الرقم الهيدروجيني 8.5 ، 15   ؛ ٪ بولي فينيل بيروليدون ، 153   ؛ ومايكرو. م MgSO4   ؛ و 0.2   ;٪ تريتون X-100
كلوروفورم: الميثانولسيجما ألدريتش
الجلسريل تري بالميتاتسيجما ألدريتش
أميلوجلوكوزيدازسيجما ألدريتشA7420
كاشف فحص الجلوكوزسيجما ألدريتشG3293
صبغة بروتين بيورادVWR
96 جيدا لوحة ميكروتيترGreiner Bio-one
384 لوحات ميكروتيترGreiner Bio-one
2 مل أنابيب زجاجيةFiersلتحليل الدهون
أنابيب eppendorf 2,5 ملVWR
homogeniserUltra-turrax TP 18/10
الطيف الضوئيInfinite M200 TECAN
سخان للأنابيب الزجاجيةHach COD ACTOR
الطرد المركزيEppendorf الطرد المركزي 5415 R
حاضنةبوماكو
للفريزر ميزان حرارة للهواء فريزر مقياس جهاز

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. European-Chemicals-Bureau. TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1). , (2005).
  2. Philippe, C., et al. Acute and chronic sensitivity to copper of a promising ecotoxicological model species, the annual killifish Nothobranchius furzeri. Ecotoxicol Environ Saf. , 26-35 (2017).
  3. Noyes, P. D., Lema, S. C. Forecasting the impacts of chemical pollution and climate change interactions on the health of wildlife. Current Zoology. 61 (4), 669-689 (2015).
  4. Consommateurs, S. S. d Health & Consumer Protection Directorate-General European Commission. 4, Brussels (BE). SANCO/3268/2001 rev. 4 (final) (2002).
  5. Commission, E. E. Guidance document on aquatic ecotoxicology. Under Council directive 91/414/EEC. SANCO/3268/2001 Rev 4. 2002b. , (2002).
  6. EPA. Ecological Effects Test Guidelines, OPPTS 850.1500 Fish life cycle toxicity. , Available from: https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-07/documents/850-1500.pdf (1996).
  7. Philippe, C. Acute and chronic sensitivity to copper of a promising ecotoxicological model species, the annual killifish Nothobranchius furzeri. Ecotoxicol Environ Saf. , (2017).
  8. Ankley, G. T., Villeneuve, D. L. The fathead minnow in aquatic toxicology: past, present and future. Aquatic Toxicology. 78 (1), 91-102 (2006).
  9. Polačik, M., Blažek, R., Reichard, M. Laboratory breeding of the short-lived annual killifish Nothobranchius furzeri. Nature Protocols. 11 (8), 1396-1413 (2016).
  10. Reichwald, K., et al. Insights into Sex Chromosome Evolution and Aging from the Genome of a Short-Lived Fish. Cell. 163 (6), 1527-1538 (2015).
  11. Valenzano, D. R., et al. The African Turquoise Killifish Genome Provides Insights into Evolution and Genetic Architecture of Lifespan. Cell. 163 (6), 1539-1554 (2015).
  12. Shedd, T. R., Widder, M. W., Toussaint, M. W., Sunkel, M. C., Hull, E. Evaluation of the annual killifish Nothobranchius guentheri as a tool for rapid acute toxicity screening. Environ. Toxicol. Chem. 18 (10), 2258-2261 (1999).
  13. Platzer, M., Englert, C. Nothobranchius furzeri: a model for aging research and more. Trends Genet. 32 (9), 543-552 (2016).
  14. Watters, B. The ecology and distribution of Nothobranchius fishes. J Am Killifish Assoc. 42, 58-61 (2009).
  15. Op de Beeck, L., Verheyen, J., Stoks, R. Competition magnifies the impact of a pesticide in a warming world by reducing heat tolerance and increasing autotomy. Environ Pollut. 233, 226-234 (2018).
  16. Patra, R. W., Chapman, J. C., Lim, R. P., Gehrke, P. C. The effects of three organic chemicals on the upper thermal tolerances of four freshwater fishes. Environ. Toxicol. Chem. 26 (7), 1454-1459 (2007).
  17. Beitinger, T. L., Bennett, W. A., McCauley, R. W. Temperature tolerances of North American freshwater fishes exposed to dynamic changes in temperature. Environ Biol Fishes. 58 (3), 237-275 (2000).
  18. Cellerino, A., Valenzano, D. R., Reichard, M. From the bush to the bench: the annual Nothobranchius fishes as a new model system in biology. Biological Reviews. , (2015).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Nothobranchius furzeriEcotoxicity TestingAcute ExposureChronic ExposureLife History TraitsCritical Thermal MaximumFecundity AssessmentMaturation TimeMultigenerational AssayDormant Egg Storage

Related Articles