يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

ثقافة الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية على حمض البولي فينيل الكحول-Co-إيتاكونيك الهلاميات المائية مع صلابة متفاوتة تحت ظروف خالية من كرة

8.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57314

⸱

فبراير 3, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

ويرد على بروتوكول تحضير البولي فينيل الكحول-co-إيتاكونيك الهلاميات المائية الحمضية بصلابة متفاوتة، التي كانت المطعمة مع أو بدون أوليجوبيبتيديس، للتحقيق في تأثير صلابة الحيوية على التفرقة وانتشار الخلايا الجذعية. وتسيطر صلابة من الهلاميات المائية الوقت كروسلينكينج.

الملخص

تأثير الرموز المادية، مثل تصلب الحيوية في انتشار وتمايز الخلايا الجذعية، وكانت قد أجرت التحقيق العديد من الباحثين. ومع ذلك، استخدمت معظم هؤلاء المحققين polyacrylamide الهلاميات المائية لاستزراع الخلايا الجذعية في دراساتهم. ولذلك، نتائجها مثيرة للجدل لأن هذه النتائج قد تنشأ من الخصائص التي تنفرد بها بولياكريلاميدي وليس من الرمز المادي (تصلب) الحيوية. هنا، يمكننا وصف بروتوكول لإعداد الهلاميات المائية، التي لا تستند إلى بولياكريلاميدي، حيث يمكن أن تكون مثقف مختلف الجذعية والخلايا بما في ذلك الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (ES) والبشرية المستحثة pluripotent الخلايا الجذعية (iPS)،. وأعدت الهلاميات المائية مع صلابة متفاوتة من بيوينيرت البولي فينيل الكحول-co-إيتاكونيك حامض (ف-IA)، مع تصلب تسيطر عليها درجة كروسلينكينج بتغيير الوقت كروسلينكينج. وتم التحقيق الهلاميات المائية ف-IA المطعمة مع أو بدون أوليجوبيبتيديس المستمدة من المصفوفة خارج الخلية كمنصة مستقبل لزراعة الخلايا الجذعية وتمايزها. ويرد في الثقافة ومرور السائل السلوى في مجال الخلايا الجذعية والخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية وحقوق دإط الخلايا والخلايا البشرية المتكاملة هنا بالتفصيل. وأظهرت الهلاميات المائية أوليجوبيبتيدي ف-IA متفوقة الأداء، التي كانت تحدثها خصائصها صلابة. هذا البروتوكول تقارير توليف مادة بيولوجية، التلاعب بهم السطحية، جنبا إلى جنب مع التحكم في خصائص صلابة، وأخيراً، أثرها على مصير الخلايا الجذعية باستخدام شروط ثقافة خالية من كرة. استناداً إلى الدراسات التي أجريت مؤخرا، مثل ركائز المعدلة يمكن أن تعمل كمنصات مستقبلا لدعم وتوجيه مصير مختلف خط الخلايا الجذعية للروابط المختلفة؛ وعلاوة على ذلك، تجديد واستعادة وظائف الجهاز المفقودة أو الأنسجة.

المقدمة

يعرف مصير تمايز الخلايا الجذعية إلى نسب محددة للخلايا وانتشار طويلة الأجل للخلايا الجذعية، ولا سيما البشرية المستحثة pluripotent (iPS) الخلايا والخلايا الجذعية الجنينية البشرية (ES)، ينظمها مثبطات، عوامل النمو، و/ أو صغيرة الجزيئات النشطة بيولوجيا في ثقافة وسائل الإعلام. في الآونة الأخيرة، تم الاعتراف العظة المادية الحيوية، لا سيما صلابة خلية الثقافة الحيوية، لتكون عاملاً مهما في توجيه مصير الخلايا الجذعية الانتشار والتمايز1،2، 3،4،،من56. ولذلك، بدأ الباحثون عدة للتحقيق ف....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ووافقت لجان الأخلاقيات للمستشفى لاندسيد تايوان (مجلس الهجرة واللاجئين-13-05) والجامعة المركزية الوطنية التجارب في هذه الدراسة. أجريت جميع التجارب وفقا لجميع المبادئ التوجيهية الحكومية والمؤسسية ذات الصلة وقابلة للتطبيق واللوائح خلال هذه الدراسة.

1-حل وإعداد وسائل الإعلام

  1. تنقية البوليمر
    1. نق ف-IA مع مجموعة حمض الكربوكسيلية مع درجة التحلل من > 96.5 في المائة قبل الغسيل ف-IA مع الإيثانول. 20 غراما من فالف في 200 مل إيثانول في دورق مخروطي 500 مل وتحرض على محرض مغناطيسي ل 24-30 h. تبادل الإيثانول مع الإيثانول الطازجة كل ح 8-10.
    2. إزالة ف-IA من الإيثانول بالترشيح باستخدام قمع [بشنر].
    3. ف الجاف....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ف-IA الهلاميات المائية المطعمة مع أوليجوبيبتيدي المستمدة من إدارة المحتوى في المؤسسة (أوليجوكم) أو إدارة المحتوى في المؤسسة مع مرونة مختلفة أعدتها بعد رد فعل مخطط، كما هو مبين في الشكل 1 ألف، باستخدام أنواع مختلفة من أوليجوكم (الشكل 1B). مرونة من الهلاميات المائية تنظمها كثافة crosslinking التطبيقية (الوقت) (الشكل 1). ف-IA الهلاميات المائية المطعمة مع المستمدة من فيترونيكتين أوليجوبيبتيديس، الذي يحتو.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وتم وضع ف-IA-أوليجوكم والهلاميات المائية ف-IA-إدارة المحتوى في المؤسسة مع صلابة متفاوتة لتوسيع المدى الطويل ES البشرية وخلايا iPS الاحتفاظ بهم بلوريبوتينسي لأكثر من عشر فقرات في ظروف خالية من كرة، فضلا عن ثقافة المؤسسة الخلايا البشرية، إعلان الخلايا، والخلايا الجذعية المكونة للدم25،،من2832. ف-IA الهلاميات المائية المعطل تداولها مع أوليجوكم مرشح ممتاز لمواد زراعة الخلية للتحقيق في تأثير مواد الثقافة الخلية على مصير التمايز وانتشا.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

هذا البحث كان جزئيا تدعمها وزارة العلوم والتكنولوجيا، وتايوان تحت أرقام المنح-003 106-2119-M-008، 105-2119-M-008-006، و 104-2221-E-008-107-MY3. وأيد هذا البحث أيضا "مشروع مستشفى لاندسيد تايوان" (حاصلين-لش-105-أ-001). من المعترف به أيضا معونات "البحث العلمي" (رقم 15 ك 06591) من وزارة التربية والتعليم، والثقافة والرياضة، والعلوم والتكنولوجيا في اليابان. أ هيجوتشي تود أن تقر للبرنامج الدولي للشراكة العلمية (ايسب-0062) "وكالة الجامعة" للدراسات العليا والبحوث، جامعة الملك سعود، الرياض 11451، المملكة العربية السعودية.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
GTPGPQGIAGQRGVVPH اليابانلا شيءالمواصفات: Oligopeptide
الاختصار: Cyclic RGD ، cRGD
GACRGDCLGAPH Japannoneالمواصفات: Oligopeptide
الاختصار: FN1
KGGAVTGRGDSPASSPH Japanلا شيءالمواصفات: Oligopeptide
اختصار: CS1
EILDVPSTPH Japanلا شيءالمواصفات: قليل الببتيد
الاختصار: VN1
KGGPQVTRGDVFTMPPH اليابانلا شيءالمواصفات: Oligopeptide
اختصار: HBP1
GKKQRFRHRNRKGPH اليابانلا شيءالمواصفات: Oligopeptide
اختصار: HBP2C
CGGGKKQRFRHRNRKGPH JAPANNONEالمواصفات: Oligopeptide
اختصار: VN1G
GGGGKGGPQVTRGDVFTMPPH اليابانلا شيءالمواصفات: Oligopeptide
اختصار: VN2C
GCGGKGGGPQVTRGDVFTMPPH اليابانلا شيءالمواصفات: مصفوفة خارج الخلية
الاختصار: rVN
VitronectinThermo Fisher العلميةA14700المواصفات: مصفوفة خارج الخلية
اختصار: FN
FibronectinSigma-Aldrichمواصفات F2006: مادة الطلاء المتوفرة تجاريا
اختصار: Synthemax II
Synthemax IICorning3535المواصفات: بوليمر
بولي فينيل كحول - حمض كو إيتاكونيكاليابان VAM & مواصفات PovalAF-17: مادة
GlutaraldehydeSigma-AldrichG5882المواصفات: Na
2< / sub>SO4< / sub>Sigma-Aldrich239313المواصفات: كيميائي
H2< / sub>SO4< / sub>Sigma-Aldrich339741المواصفات: Chemical
اختصار: EDC
N- (3-Dimethylaminopropyl) -N'-ethylcarbodiimide hydrochlorideSigma-AldrichE7750المواصفات: الكيميائية
الاختصار: NHS
N-hydroxysuccinimideSigma-Aldrich56480المواصفات: كيميائي
بارافورمالديهايدسيجما-ألدريتشP6148المواصفات: مادة
كيميائية Triton-X100Sigma-AldrichT8787المواصفات: مكشطة خلية مستهلكة لثقافة
الخلية Corning3008تخصيص: مستهلكة ثقافة الخلية
Dispase IISigma-AldrichSI-D4693المواصفات: وسط زراعة الخلية
أساسي 6Thermo FisherA1516401تخصيص: وسط زراعة الخلية
أساسي 8A1517001علمي Thermo Fisherالمواصفات: وسط زراعة الخلية
DMEM / F12Thermo Fisher العلمي11330-032المواصفات: وسط زراعة الخلية
DMEMThermo Fisher العلمي12800-017المواصفات: وسط زراعة الخلايا
MCDB 201Sigma-AldrichM6770المواصفات: ES
خلية بشرية ESWiCell Research Institute، Inc..مواصفات WA09: خلية iPS
خلية iPS البشريةRiken CellBank HS0077المواصفات: 35 مم
الاختصار: TCP
TCP طبقCorning353001المواصفات: 60 مم
اختصار:
TCP TCP طبقCorning353002تخصيص: 24 طبق بئر
24 طبق بئرCorning353047تخصيص: حجب وكيل
ألبومين مصل الأبقارSigma-AldrichA8806المواصفات: كاشف الكشف
عن الفوسفاتيز القلوي وصمة عار حيةThermo Fisher العلميةA14353المواصفات: كاشف الكشف
هيماتوكسيلين ويوزينسيجما ألدريتش1.05175المواصفات: طبق تكوين
EB 6 بئر طبق مرفق منخفض للغايةCorning3471المواصفات: مادة الطلاء
الجيلاتينSigma-AldrichG9391المواصفات: مادة الطلاء
MatrigelCorning354230المواصفات: الفئران
NOD-SCID الفئرانمختبرات البحوث التطبيقية الوطنيةلا شيءتخصيص: مصل
الأبقار الجنينالصناعات البيولوجية04-001-1Aتخصيص: مضاد حيوي
المضاد الحيوي المضاد للفطرياتThermo Fisher العلمي15240-062المواصفات: الجسم المضاد للجسم المضاد
ل NanogInvitrogenMA1-017المواصفات: الجسم المضاد للجسم المضاد
ل SSEA4Abcamab16287المواصفات: الجسم المضاد للجسم المضاد
ل OCT3 / 4InvitrogenPA5-27438المواصفات:
الجسم المضاد ل Sox2Invitrogen48-1400المواصفات: الجسم المضاد للجسم المضاد
للعضلات الملساء الأكتينInvitrogenPA5-19465المواصفات: الجسم المضاد للجسم المضاد
ل AFPInvitrogenPA5-21004المواصفات: الجسم
المضاد GFAPInvitrogenMA5-15086المواصفات: الجسم المضاد
Alexa Fluor 555 &ndash ؛ الماعز المترافق الأجسام المضادة للفأرInvitrogenA-21422المواصفات: الجسم المضاد
Alexa Fluor 488 & ndash ؛ الماعز المترافق الأجسام المضادة للأرانبInvitrogenA-11008المواصفات: الجسم المضاد
الكيميائية العلمي مصل

المراجع

  1. Higuchi, A., Ling, Q. D., Chang, Y., Hsu, S. T., Umezawa, A. Physical cues of biomaterials guide stem cell differentiation fate. Chem. Rev. 113, 3297-3328 (2013).
  2. Higuchi, A., et al. Physical cues of cell culture materials lead the direction of differentiation lineages of pluripotent stem cells. J. Mater. Chem. B. 3, 8032-8058 (2015).
  3. ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدراتهيدروجيلات P-IAالزرع الخالي من المكونات الحيوانية الغريبةالتحكم في صلابة الهيدروجيلتطعيم الأوليغوببتيدتمايز الخلايا الجذعيةالمجهر الفلوريبروتوكول تمرير الخلاياتخليق المواد الحيويةالمصفوفة خارج الخلوية