Method Article

إدارة بسيطة وفعالة والتصور من المجهرية الدقيقة في الدورة الدموية للأسماك الصغيرة باستخدام الحقن الكلي

DOI:

10.3791/57491

⸱

June 17th, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Biology at Irkutsk State University, 2Institute of Biology at Karelian Research Centre of Russian Academy of Sciences, 3Baikal Research Centre, 4Institute of Materials Research and Engineering, Agency for Science, Technology, and Research (A*STAR), 5University of Oulu, Optoelectronics and Measurement Techniques Laboratory

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوضح هذا المقالة مبادئ حقن سريعة، وكسبها من الفلورسنت المجهرية الدقيقة في circulatory system الأسماك الصغيرة والتصور في فيفو من المجهرية الدقيقة في دم الأسماك.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويمكن تطبيق الإدارة النظامية للجسيمات الصغيرة الحجم في حي للتصور المفرج، العقاقير واللقاحات، زرع الخلايا المحورة وراثيا وأجهزة الاستشعار البصرية صغيرة. ومع ذلك، ميكروينجيكشنز عن طريق الحقن الوريدي في الحيوانات الصغيرة، والتي تستخدم في الغالب في المختبرات البيولوجية والبيطرية، صعبة جداً وتتطلب موظفين مدربين. هنا، نحن تثبت طريقة قوية وفعالة لإدخال المجهرية الدقيقة في نظام الدورة الدموية للكبار الزرد (دانيو rerio) بحقن في الكلي الأسماك. تصور المجهرية الدقيقة أدخلت في المفرج، نقترح تقنية تصوير إينترافيتال بسيطة في الخياشيم السمكية. في فيفو رصد درجة الحموضة الدم الزرد كان إنجازه باستخدام الفلورية المغلف حقن التحقيق، سنارف-1، لإثبات واحدة من التطبيقات الممكنة لوصف تقنية. هذا المقال يقدم وصفاً مفصلاً لتغليف صبغة حساسة لدرجة الحموضة ويوضح مبادئ حقن سريعة والتصور كبسولات رقيقة جداً التي تم الحصول عليها في فيفو تسجيل إشارة الفلورسنت. تتميز الطريقة المقترحة لحقن بمعدل وفيات منخفض (0-20 في المائة) وكفاءة عالية (النجاح 70-90 ٪)، وأنه من السهل أن المعهد باستخدام المعدات المتاحة عموما. يمكن تنفيذ جميع الإجراءات الموصوفة في أنواع الأسماك الصغيرة الأخرى، مثل أسماك الغابى والميداكا.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إدارة الجسيمات الصغيرة الحجم في جسم حيوان مهمة هامة في مجالات مثل المخدرات و تسليم اللقاحات1والمفرج التصور2و زرع الخلايا المحورة وراثيا3وزرع أجهزة الاستشعار البصرية صغيرة 4 , 5-إجراءات غرس جسيمات microscale في نظام الأوعية الدموية في الحيوانات المختبرية الصغيرة غير صعبة، خاصة بالنسبة للكائنات المائية الحساسة. لعينات البحث شعبية مثل الزرد، فإنه ينصح أن يكون توضيح هذه الإجراءات باستخدام بروتوكولات الفيديو.

ميكروينجيكشنز إينتراكاردياك والشعرية تتطلب موظفين مدربين ومرافق الجراحة فريدة لتقديم ميكروبجيكتس في الدم الزر....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الإجراءات التجريبية أجريت وفقا لتوجيه الاتحاد الأوروبي 2010/63/الاتحاد الأوروبي للتجارب على الحيوانات، ووافق عليها "الحيوان مواضيع البحوث اللجنة من معهد علم الأحياء" في إركوتسك جامعة ولاية.

1-تصنيع كبسولات رقيقة جداً

ملاحظة: تعد كبسولات رقيقة جداً تحمل صبغة فلورسنت استخدام جمعية طبقة بطبقة مكونة من7،بولييليكتروليتيس المشحونة معاكس8. وأجريت جميع الإجراءات في درجة حرارة الغرفة.

  1. لتوليف المسامية ميكروكوريس3 كربونات أرفق صبغة الفلورسنت، مزيج 2 مل الحل سنارف-1-ديكستران (يمكن استخدام معظم صبغة الفلورسنت البوليمر زمنياً مثل فيتك-جيش صرب ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تأتي النتائج التي تم الحصول عليها من واحدة من الفئات الرئيسية الثلاث للبروتوكول المقدم: تشكيل المجهرية الدقيقة الفلورسنت بتغليف صبغة الفلورسنت (الشكل 1)، حقن كبسولات رقيقة جداً مع مزيد من المرئيات في الكلي جيل الشعيرات الدموية (الشكل 2 و 3) و، أخيرا، في فيفو الطيفية تسجيل الأسفار سنارف-1 لمراقبة الدم مستويات الأس الهيدروجيني (الشكل 4).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وللتدليل على الحقن المجهرية الدقيقة في الكلي الزرد، استخدمنا شبه نفاذية كبسولات رقيقة جداً محملة صبغ مؤشر. وهكذا، يتضمن البروتوكول إرشادات لتصنيع كبسولات رقيقة جداً استخدام الجمعية طبقة بطبقة polyelectrolytes المشحونة معاكس7،8،،من1516،17 ،18 (الشكل 1A). استفادة من هذه التكنولوجيا أنه من السهل ال.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلف الاعتراف إلى حد كبير مساعدة بوغدان أوسادتشيي وقد بروتاسوف (جامعة ولاية إيركوتسك، روسيا) في إعداد البروتوكول الفيديو. وأيد هذا البحث "المؤسسة الروسية" للعلوم (#15-14-10008) و "مؤسسة روسية" عن "البحوث الأساسية" (#15-29-01003).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
SNARF-1-dextrain ، 70000 ميجاواتمسبار الفلورسنت Thermo Fisher ScientificD3304. يمكن استخدام أي صبغة فلورية أخرى مناسبة مرتبطة بالبوليمر كحشو كبسولة دقيقة
مترافق الألبومين والفلورسين إيزوثيوسيانات (FITC-BSA)SIGMAA9771مسبار الفلورسنت
Rhodamine B isothiocyanate-Dextern (RITC-dextran)SIGMAR9379مسبار الفلورسنت
كلوريد الكالسيومSIGMAC1016CaCO3< / sub> تشكيل
القوالبكربونات الصوديومSIGMAS7795CaCO3< / sub> تشكيل قوالب
بولي (هيدروكلوريد أليلامين) ، MW 50000 (PAH)SIGMA283215بوليمر كاتيوني
بولي (صوديوم 4-ستايرينسولفونات) ، MW 70000 (PSS)SIGMA243051بوليمر أنيوني
بولي إل ليسين [20 كيلو دالتون] مطعمة بالبولي إيثيلين جلايكول [5 كيلو دالتون] ، ز = 3.0 إلى 4.5 (PLL-g-PEG)SuSoSPLL (20) - ز [3.5] -PEG (5)البوليمر النهائي لزيادة التوافق الحيوي للكبسولات الدقيقة
كلوريد الصوديومSIGMAS8776لإذابة البوليمرات المطبقة
نظام تنقية المياهMilliporeSIMSV0000لتحضير الماء منزوع الأيونات
المحرك المغناطيسيSteglerلتشكيل
قوالب CaCO3< / sub>Eppendorf  البحوث  ماصة زائدة، 1000 وميكرو؛ حلولالجرعاتل Eppendorf
Eppendorf  البحوث  بالإضافة إلى ماصة ، 10 & ميكرو ؛ حلولالجرعاتL Eppendorf
أطراف الماصة ، نطاق الحجم 200 إلى 1000 & LF.L. حلولالجرعاتالطبية 28093
أطراف الماصة ، نطاق الحجم 0.1-10   ؛ مو حلولالجرعاتZ640069 Eppendorf
أجهزة الطرد المركزي الصغيرة Microspin 12 ،BioSanلإجراء الغسيل بالطرد المركزي للكبسولة
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة ، 2 ملEppendorfZ666513تخليق وتخزين
خلاط Intelli-خلاط RM-1LELMY Ltd.للحد من تجميع الكبسولة
الدقيقة منظفللحد من تجميع الكبسولات الدقيقة
هواتف الرأس  لحماية الأذنين من الموجات فوق الصوتية
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيكSIGMAEDSلإذابة قوالب CaCO3< / sub>
فوسفات أحادي الصوديومSIGMAS9638تحضير مخازن الأس الهيدروجيني
فوسفات ثنائي الصوديومSIGMAS9390تحضير مخازن الأس الهيدروجيني
هيدروكسيد الصوديومSIGMAS8045لضبط درجة الحموضة لمحلول EDTA والمخازن المؤقتة
غرفة ترموستاتلتجفيف الكبسولات الدقيقة على شريحة زجاجية
تعداد خلايامقياس الدم للتحقيق في حجم وتوزيع وتركيز الكبسولات الدقيقة المحضرة
مجهر الفلورسنت Mikmed 2LOMOفي الجسم الحي تصور الكبسولات الدقيقة في دم الأسماك
مجموعة من مرشحات الفلورسنت ل SNARF-1 (يجب اختيارها اعتمادا على طراز المجهر ؛ يتم تقديم مثال)Chroma79010تصور الكبسولات الدقيقة مع مجسات الفلورسنت
مطياف الألياف QE Proبصرياتمعايرة الكبسولات الدقيقة تحت المجهر
الألياف الضوئية QP400-2-VIS NIR ، 400 & mu ؛ م ، 2 مبصرياتلتوصيل مقياس الطيف بمنفذ المجهر
الموازاة F280SMA-AThorlabsلتوصيل مقياس الطيف بمنفذ المجهر
المجهر الزجاجيFisherbrand12-550-A3معايرة الكبسولات الدقيقة تحت المجهر
أغطية ، 22 × 22 مملؤلؤةMS-SLIDCVمعايرة الكبسولات الدقيقة تحت المجهر
الشعيرات الدموية الدقيقة الزجاجية Intra MARK ، 10 & micro ؛ LBlaubrandBR708709لجمع دم السمك
زيت القرنفلSIGMAC8392تخدير الأسماك
لانسيت رقم 11Apexmed international BVP00588لقطع ذيل السمكة وتحرير الإبرة الفولاذية من طرف حاقن الأنسولين الذاتي
الهيبارين ، 5000 U / mLCalbiochemL6510-BCلعلاج جميع الأسطح التي تتلامس مع دم الأسماك أثناء جمع دم الأسماك
Seven 2 Go Pro pH-meter مع قطب كهربائي دقيقMettler Toledoلتحديد درجة الحموضة في دم الأسماك
إبر قلم الأنسولين Micro-Fine Plus ، 0.25 × 5 ممبيكتون وديكنسون وشركاهلإجراء الحقن. أي إبرة رقيقة (Ø 0.33 مم أو أقل) مناسبة
الشعيرات الدموية الزجاجية, 1 × 75 ممHirschmann Laborgerä te GmbH & Co9201075لإجراء الحقن
شعلةلحام إبرة فولاذية إلى حاقن زجاجي شعري
دقيق IM-9BNARISHIGEللحصول على جرعات دقيقة من كبسولات دقيقة معلقة
أطباق بتري ، 60 مم × 15 مم ، البوليسترينSIGMAP5481للتلاعب بالأسماك تحت التخدير
ملعقةبلاستيكيةللتلاعب بالأسماك تحت التخدير
إسفنجةللتلاعب بالأسماك تحت التخدير
مقص تشريحThermo Scientific31212لإزالة غطاء الخياشيم من رأس السمكة
ماصة باستور ، 3.5 ملZ331767لترطيب خياشيم السمك
عالي السرعة الدقيقة بالموجات فوق الصوتية غرفة الدم المحيطات المحيط شريحة غاز رطبة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rivas-Aravena, A., Sandino, A. M., Spencer, E. Nanoparticles and microparticles of polymers and polysaccharides to administer fish vaccines. Biol. Res. 46 (4), 407-419 (2013).
  2. Yashchenok, A. M., Jose, J., Trochet, P., Sukhorukov, G. B., Gorin, D. A.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microparticle InjectionFish KidneyIntravital ImagingMicrocapsule PreparationFluorescent ProbeBlood pH MonitoringZebrafish Circulatory SystemLayer by Layer EncapsulationGill VisualizationSpectral Analysis

Related Articles