وثمة نهج بديل لدراسة الأحداث الرئيسية في نيوروديجينيريشن باستخدام شرائح المخ الفئران السابقين فيفو

ملخص

نقدم أسلوب الذي يمكن تقديم المزيد من الأفكار في أحداث أوائل الكامنة وراء نيوروديجينيريشن واستنادا إلى تقنية الدماغ المنشأة السابقين فيفو ، الجمع بين مزايا تجارب في الجسم الحي وفي المختبر . وعلاوة على ذلك، فإنه يمثل فرصة فريدة لإجراء مقارنة مباشرة لفريق المعالجة وغير المعالجة في نفس الطائرة التشريحية.

الملخص

وعلى الرغم من العديد من الدراسات التي تسعى إلى تطوير نماذج حيوانية الموثوقة التي تعكس الأولية العمليات الأساسية نيوروديجينيريشن، عدد قليل جداً وقد قبلت على نطاق واسع. هنا، فإننا نقترح إجراء جديد مقتبس من المعروفين السابقين فيفو الدماغ شريحة تقنية، مما يوفر أوثق في فيفو--مثل السيناريو مما في المختبر الأعمال التحضيرية، للتحقيق في أحداث أوائل تسبب ضمور الخلية، كما ويلاحظ في مرض الزهايمر (AD). يتكون هذا الاختلاف من خطوات بسيطة واستنساخه بسهولة، التي تمكن من الحفاظ على سيتوارتشيتيكتوري التشريحية لمنطقة الدماغ المحددة والوظائف المحلية في بيئة فسيولوجية. يمكن الحصول على مختلف المناطق التشريحية من الدماغ نفسه، وإتاحة الفرصة للقيام بتجارب متعددة مع العلاجات المذكورة في الموقع-والجرعة-، وطريقة تعتمد على الوقت. القيود المحتملة التي يمكن أن تؤثر على النتائج ذات الصلة بهذه المنهجية المرتبطة بالمحافظة على النسيج، أي الحفاظ على سلامتها التشريحية خلال خطوات تشريح والحضانة وسمك الفرع، الذي يمكن أن تؤثر تحليل البيوكيميائية والمناعي. ويمكن استخدام هذا النهج لأغراض مختلفة، مثل استكشاف الآليات الجزيئية التي تشارك في الظروف الفسيولوجية أو المرضية، وفحص المخدرات، أو فحوصات الجرعة والاستجابة. وأخيراً، هذا البروتوكول يمكن أيضا خفض عدد الحيوانات المستخدمة في الدراسات السلوكية. تم مؤخرا ووصف التطبيق ذكرت هنا واختبارها لأول مرة على السابقين فيفو الفئران الدماغ الشرائح التي تحتوي على فوريبرين القاعدية (BF)، التي واحدة من المناطق الدماغية التي تؤثر أساسا في الإعلان. على وجه التحديد، وقد ثبت أن إدارة الببتيد السمية المستمدة من ج-محطة أستيلكولينستراز (وجع) يمكن أن يدفع الشخصية مثل الإعلان، تحريك، طول المحور الخلفي أنتيرو لفرنك بلجيكي، تعبير تفاضلي من البروتينات التي غيرت في الإعلان، مثل مستقبلات النيكوتين alpha7 (α7-ناشر)، فوسفوريلاتيد تاو (فتاو)، وبيتا اميلويد (Aβ).

المقدمة

الإعلان علم أمراض مزمنة التي تتسم بضعف تدريجي الأعصاب التي تؤثر على مناطق الدماغ المختلفة، مثل قشرة انتورهينال (المفوضية الأوروبية)، فرنك بلجيكي، والحصين (المفوض السامي) ولمبة شمي (OB)^{1،2،3، 4،5}. المراحل المتأخرة من تطوير الإعلان يؤدي إلى انخفاض المعرفي تدريجي، مما يجعل هذا المرض الأكثر شيوعاً للعته، تستأثر بحوالي 70 في المائة من جميع الحالات⁶. وعلى الرغم من محاولات واسعة النطاق لفهم المراحل الأولية مما تسبب في الإعلان، لا توجد حاليا إشارة تجريبية محددة بتوضيح لهم. وباﻹضافة إلى ذلك،....

البروتوكول

أجريت جميع الدراسات الحيوانية ضمن البروتوكولات المعتمدة.

ملاحظة: في هذا القسم، تسلسل المراحل الرئيسية التي يتم إجراؤها أثناء الإجراء التجريبي والفاصل الزمني المقترح (الشكل 1). وعلاوة على ذلك، ووصف خطوة بخطوة للبروتوكول يكمل لوحة توضيحية، تظهر الإجراءات الحاسمة التي تتراوح بين إزالة الدماغ تجانس الأنسجة بعد فترة الحضانة (الشكل 2). التفاصيل المتعلقة بالمواد والإرشادات لبناء جهاز، وفي المرحلة اللاحقة لتحليل البنك الدولي بوصفه سابقا²².

1-العمليات الجراحية الأدوات وإعدادات فيبرتوم وإعداد العلاج

ملاحظة: تنفيذ ا....

النتائج

البروتوكول المعروضة هنا يشير إلى أن إدارة الببتيد السامة، T30، ينظم بطريقة تعتمد على موقع التعبير عن α7-ناشر، فتاو، و Aβ في المقاطع التي تحتوي على فرنك بلجيكي (الشكل 3A). مستقبلات النيكوتين يظهر زيادة كبيرة في هيميسليسي روسترال معاملة مقارنة بنظيرتها في عنصر التحكم (شريحة 1, p = 0.0310) (الشكل 3B)، بينما الشريحة المتوسطة لا تدل على أي تغيير بين (شرطين شريحة 2, p = 0.1195) (الشكل 3)........

المناقشة

الجانب الرئيسي من هذا البروتوكول، استناداً إلى تقنية الدماغ راسخة السابقين فيفو ، يسمح بشكل متزامن اختبار اثنين هيميسليسيس براق، التي تم الحصول عليها من نفس الطائرة التشريحية، رصد استجابتها بعد تطبيق محدد الشرط (السيطرة أو معاملة)؛ ولهذا يقدم نموذج تجريبي لرقابة مشددة قدر الإمكان. إمكانية تقييم في الوقت والجرعة، وطريقة خاصة بالموقع neurochemicals مختلفة تتصل بضعف الخلايا العصبية، كما رأينا خلال الأحداث الأعصاب²²، يمثل سمة أساسية. وتربط هذه المنهجية مزايا بيئة الفسيولوجية في فيفو .......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم)	سيجما ألدريتش ، ألمانيا	S7653	كاشف لتحضير كلوريد البوتاسيوم
(KCl)	سيجما ألدريتش ، ألمانيا	P9333	كاشف لتحضير aCSF
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3)	سيجما ألدريتش ، ألمانيا	S5761	كاشف لتحضير aCSF
سباعي كبريتات المغنيسيوم (MgSO4 (7H2O))	سيجما ألدريتش ، ألمانيا	63138	كاشف لتحضير aCSF
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة (KH2PO4)	سيجما ألدريتش ، ألمانيا	P5655	كاشف لتحضير aCSF
Hepes	Sigma-Aldrich ، ألمانيا	H7006	كاشف لتحضير aCSF
حمض Hepes	Sigma-Aldrich ، ألمانيا	H3375	كاشف لتحضير aCSF
الجلوكوز	سيجما ألدريتش ، ألمانيا	كاشف G7528	لإعداد aCSF
مجفف كلوريد الكالسيوم	سيجما ألدريتش ، ألمانيا	كاشف 223506	لإعداد aCSF
الببتيد T30	Genosphere Biotechnologies ، فرنسا		تم اختبار الببتيد المشتق من AChE
طقم تشريح جراحي	Precision Instruments ، الولايات المتحدة الأمريكية	البند #: MOUSEKIT	خطوة إزالة الدماغ
شفرات جراحية	سوان مورتون ، المملكة المتحدة	BS 2982	خطوة إزالة الدماغ
ورقة الترشيح	فيشر العلمية ، الولايات المتحدة الأمريكية	11566873	تحضير الدماغ للتقطيع
تحضير الدماغ			للتقطيع
	لايكا ، ألمانيا	VT1000 S	فرش
			التقطيع مناولة الأنسجة
علبة			الأكسجينمرحلة التقطيع والحضانة
1x محلول ملحي عازل للفوسفات (PBS)	فيشر ساينتفيك ، الولايات المتحدة الأمريكية	BP2438-4	خطوة التجانس
مثبطات الفوسفاتيز	فيشر ساينتفيك ، الولايات المتحدة الأمريكية	1284-1650	خطوة التجانس
مثبطات الإنزيم البروتيني	روش الكاملة الموافقة المسبقة عن علم ، الولايات المتحدة الأمريكية	4693116001	خطوة التجانس
Pestles	Starlab ، المملكة المتحدة	I1415-5390	خطوة التجانس
			الطرد المركزي
الدقيق بيرس 660 نانومتر فحص البروتين	الحراري العلمي ، الولايات المتحدة الأمريكية	22660	تركيز البروتين

ملح World الاهتزاز جهاز