Method Article

طريقتين ديسيلولاريزيشن أنسجة النباتية لتطبيقات هندسة الأنسجة

DOI:

10.3791/57586

⸱

May 31st, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Wisconsin-Madison, 2Department of Orthopedics and Rehabilitation, University of Wisconsin School of Medicine and Public Health, 3Department of Biomedical Engineering, University of Wisconsin College of Engineering, 4Department of Biomedical Engineering, Worcester Polytechnic Institute

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا، واستخدام البروتوكولات التباين اثنين ديسيلولاريزي الأنسجة النباتية: نهج قائم على المنظفات واتباع نهج خالية من المنظفات. كلا الأسلوبين تترك وراءها المصفوفة خارج الخلية في الأنسجة النباتية المستخدمة، التي يمكن أن تستخدم بعد ذلك السقالات لتطبيقات هندسة الأنسجة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ترقيع ذاتي والاصطناعية، والمستمدة من الحيوانات المستخدمة حاليا السقالات لاستبدال الأنسجة على قيود نظراً لانخفاض توافر وسوء توافق مع الحياة، والتكلفة. الأنسجة النباتية لها الخصائص المواتية التي تجعلها مناسبة بشكل فريد لاستخدامه السقالات، مثل مساحة سطح عالية وممتازة والمياه والنقل والاحتفاظ بها، المسامية المترابطة، preexisting شبكات الأوعية الدموية، ومجموعة واسعة من الميكانيكية خصائص. يتم وصف الأساليب الناجحة اثنين من مصنع ديسيلولاريزيشن لتطبيقات هندسة الأنسجة هنا. وتستند الطريقة الأولى الحمامات المنظفات لإزالة المسألة الخلوية، ومشابهة للطرق المحددة سابقا المستخدمة لمسح أنسجة الثدييات. والثاني هو أسلوب خال من المنظفات مقتبس من بروتوكول أن يعزل المفرج أوراق وينطوي على استخدام التبييض ساخنة وحمام الملح لمسح أوراق الشجر وينبع. كلا الأسلوبين العائد السقالات مع خصائص ميكانيكية قابلة للمقارنة، وانخفاض تأثير الأيض الخلوية، مما يسمح للمستخدم بتحديد البروتوكول الذي يناسب أفضل التطبيق المقصود بهم.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هندسة الأنسجة ظهرت في الثمانينات لإنشاء الأنسجة الحية بدائل، ويحتمل أن تكون عنوان كبير والأنسجة النقص1. وقد استخدمت استراتيجية واحد السقالات لتحفيز وتوجيه الجسم لتجديد أنسجة مفقودة أو الأجهزة. ورغم المتقدمة التصنيع النهج مثل الطباعة ثلاثية الأبعاد قد أنتجت السقالات مع الخصائص الفيزيائية الفريدة، القدرة على تصنيع السقالات مع مجموعة متنوعة من خصائص فيزيائية وبيولوجية قابلة للتحقيق لا يزال تحدي2 , 3-وعلاوة على ذلك، بسبب عدم وجود شبكة الأوعية الدموية الوظيفية، هذه التقنيات كانت محدودة في تجديد أنسجة ثلاثية الأبعاد. وقد ساعد استخدام الأنسجة الحيوانية والبشرية ديسيلولاريزيد السقالات في التحاي....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-ديسيلولاريزيشن أنسجة النباتية باستخدام النهج القائم على المنظفات

  1. استخدام الطازجة أو المجمدة hispida واو، عينات أوراق. تجميد عينات جديدة غير مستخدمة في الثلاجة-20 درجة مئوية، ومخزن للاستخدام في المستقبل (حتى سنة).
    ملاحظة: استخدام الأنسجة الجذعية أو أوراق تقريبا أي مصنع المرجوة. مرات التخزين الموسعة يمكن أن تسبب ضررا للأنسجة.
    1. تحديد حجم وشكل العينات بحيث تتم معالجتها على أساس الاستخدام المقصود للعينة (أي عينات قطع إلى شرائح مناسبة تماما لتطبيقات اختبار الميكانيكية، وفي الوقت نفسه عينات القرص 8 مم مفيدة في تطبيقات متعددة تثقيف ). قطع الورقة إلى أقراص 8 ملم مع خزعة حادة ونظيفة لكمه حين المغمورة تحت درجة حرارة الغرف....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كلا الأسلوبين أسفرت عن السقالات التي كانت مناسبة لزراعة الخلايا والأنسجة التطبيقات الهندسية. ويبين الشكل 1 سير العمل العامة لعملية ديسيلولاريزيشن باستخدام جريد سليمة للأسلوب القائم على المنظفات وقطع عينات (8 مم) الخاصة بطريقة خالية من المنظفات. ديسيلولاريزيشن الناجح الأنسجة Ficus hispida عقب كلا الأسلوبين أسفرت عن عينات واضحة وسليمة (الشكل 1A و 1B). كان من الممكن ديسيلولاريزي أنسجة النبات (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، يتم وصف الأساليب اثنين ديسيلولاريزي الأنسجة النباتية. النتائج المعروضة هنا، مقترنة بنتائج الدراسات السابقة25، تشير إلى أنه من المرجح طرح البروتوكولات تنطبق على طائفة واسعة من الأنواع النباتية، ويمكن أن يؤديها على السيقان والأوراق. هذه الإجراءات هي بسيطة ولا تتطلب معدات متخصصة، حيث يمكن القيام ديسيلولاريزيشن النباتية في معظم المختبرات. جدير بالذكر أنه بعد ديسيلولاريزيشن، يجب أن فونكتيوناليزيد السقالات لتسهيل انضمام خلايا الثدييات. ووصف الروغان مختلف التقنيات لتمكين التصاق خلايا الثدييات والنمو.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر جون ويرث من حدائق اولبريتش لتوريد تكرم العينات المستخدمة في هذا المشروع. يتم دعم هذا العمل في الجزء "الوطني للقلب" والرئة، ومعهد الدم (R01HL115282 إلى G.R.G.) المؤسسة الوطنية للعلوم (DGE1144804 إلى J.R.G و G.R.G.)، وقسم الجراحة جامعة ويسكونسن وصندوق الخريجين (H.D.L.). هذا العمل كان أيضا تدعمها جزئيا وكالة حماية البيئة (منحة نجمة رقم 83573701)، والمعاهد الوطنية للصحة (R01HL093282-01A1 و UH3TR000506)، والمؤسسة الوطنية للعلوم (إيجيرت DGE1144804).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
كبريتات دوديسيل الصوديومSigma Life Science75746-1KG
Triton X-100MP Biomedicals، LLC807426خافض للتوتر السطحي غير أيوني مشار إليه في الورق. كاشف لزج للغاية ، يمكن أن يساعد في قطع نهاية طرف الماصة عند رسمه.
مبيض مركز (8.25٪ هيبوكلوريت الصوديوم)كلوركسالبند #: 31009التبييض المركز القياسي.
بيكربونات الصوديومAcros Organics217120010يمكن استبدالها بهيدروكسيد الصوديوم أو كربونات الصوديوم.
8 مم BiopunchHealthLink15111-80يقطع العينات التي تتناسب بشكل جيد مع 24 لوحة بئر
طاولة Belly Dancer-ShakeStovallLife Sciences BDRAA115Sاستخدم سرعات منخفضة لعدم إتلاف الأنسجة. يمكن استخدام أي نموذج / علامة تجارية لطاولة الاهتزاز.
للوحة Isotemp الساخنة / المثيرةفيشر العلمياستخدام أي نمط / علامة تجارية للوحة الساخنة / التقليب.
يمكن استخدامدورق أي حجم طالما أنه يناسب عيناتك ولا يزدحمها.
تريس هيدروكلوريدفيشر ScientificBP153-500
DMEMCorningMT50003PC
Quant-iT Picogreen DSDNA assayLife TechnologiesP11496يمكن استخدام أي كمية قياس dsDNA في متناول اليد.
يمكن

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vacanti, J. Tissue engineering and regenerative medicine: from first principles to state of the art. Journal of Pediatric Surgery. 45 (2), 291-294 (2010).
  2. Kim, S., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Plant DecellularizationDetergent Bath MethodDetergent Free MethodBleach Salt BathTissue Engineering ScaffoldsPlant Tissue ProcessingMechanical Property AnalysisCellular Metabolic ImpactStem Cell GrowthProtective Equipment Use

Related Articles