مقالة منهجية

التحقيق الإنبات تيليوسبوري باستخدام تحليل ميكروريسبيريشن وميكروديسيكشن

DOI:

10.3791/57628

⸱

مايو 13, 2018

 ,  , 
1Environmental and Life Sciences Graduate Department, Trent University, 2Forensic Science Department, Trent University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فطريات التفحم يسبب الكثير من الأمراض الزراعية المدمرة. أنها مشتتة تيليوسبوريس الخاملة التي تنبت في استجابة لمنبهات بيئية. أننا مخطط طريقتين لتقصي التغيرات الجزيئية أثناء الإنبات: قياس زيادة التنفس للكشف عن التنشيط الأيضي وتقييم الأحداث الجزيئية المتغيرة عن طريق عزل تيليوسبوريس في المراحل المورفولوجية المميزة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فطريات التفحم هي العوامل المسببة للعديد من الأمراض الزراعية المدمرة. أنها تتميز بإنتاج تيليوسبوريس، وعوامل التشتت السميكة. تيليوسبوريس يمكن أن تظل نائمة لعقود. تتميز بانخفاض معدلات التمثيل الغذائي السكون ومؤقتا الحيوي الجزيئات وتقلص إلى حد كبير مستويات التنفس. عند تلقي إشارات البيئية المطلوبة، تنبت تيليوسبوريس لإنتاج خلايا فرداني، الذي يمكن بدء جولات جديدة من العدوى. تيليوسبوري إنبات يتسم باستئناف الحيوي الجزيئات وزيادة التنفس والتغييرات الشكلية المثيرة. من أجل دقة قياس التغيرات في التنفس الخلوي خلال المراحل الأولى من الإنبات، قمنا بتطوير بروتوكول بسيط توظيف ريسبيروميتير كلارك من نوع. وتتميز المراحل اللاحقة للإنبات بالتغييرات الشكلية المحددة، ولكن الإنبات غير متزامنة. قمنا بتطوير تقنية ميكروديسيكشن التي تمكننا من جمع تيليوسبوريس في مراحل إنبات متميزة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتكون فطريات التفحم (سواديات) 1,600 أكثر الأنواع التي تصيب الحشائش بما في ذلك محاصيل الحبوب الهامة من الذرة والشعير والقمح، مما تسبب ببلايين الدولارات في خسائر في المحاصيل سنوياً1. تتميز هذه الفطريات بإنتاج تيليوسبوريس، الذي يكون مظلم مصطبغة جدران الخلية، وهي عوامل التشتت. تيليوسبوريس تعمل على حماية المواد الجينية أثناء ضغوط تفريق بين النباتات المضيفة، ويمكن أن تستمر في حالة سبات عميق لسنوات2. على هذا النحو، تيليوسبوريس عنصر أساسي في انتشار المرض.

من أجل دراسة البيولوجيا تيليوسبوري، يستخدم مختبرنا فطر التفحم نموذج مايديس Ustilago (U. مايديس)، الذي هو عامل المسببة للمرض 'المشتركة التفحم للذرة'. الناضجة مايديس U. تيليوسبوريس تتميز بالقبض على النمو وانخفاض الأيض الخلوية، والمستويات المنخفضة للتنفس الخلوي3. في الظروف البيئية الملائمة (مثلاً.، وجود السكريات محددة)، تيليوسبوريس مايديس U. تنبت واستكمال الانقسام الاختزالي، تنتج باسيديوسبوريس التي يمكن بدء جولات جديدة من العدوى. الإنبات يتميز بزيادة التنفس والنشاط العودة للتمثيل الغذائي والتقدم من خلال المراحل المورفولوجية يمكن ملاحظتها لإنبات4.

وتشمل المرحلة الأولى من الإنبات زيادة التنفس ووظيفة التمثيل الغذائي، ومع ذلك، لا توجد أية مؤشرات المورفولوجية للتغيير. وأجريت القياسات الأصلية لتغيير الجهاز التنفسي في الولايات المتحدة مايديس قبل 50 عاماً، قياس استهلاك الأوكسجين مانوميتريكالي مع جهاز5قارورة واربورغ. وقد وضعنا طريقة بسيطة وجديدة لدراسة التغييرات الدقيقة في التنفس أثناء الإنبات تيليوسبوري بقياس استهلاك الأوكسجين خلال دورة وقت للإنبات باستخدام ميكروريسبيروميتير كلارك من نوع. استخدمنا هذا الأسلوب سابقا لدراسة التغيرات في معدل التنفس بين البرية من نوع مايديس U. فرداني الخلايا وطفرات مع6من الميتوكوندريا المعيبة، وتكيفت البروتوكول هنا لدراسة التغيرات في التنفس تيليوسبوري أثناء الإنبات. وهذا يوفر وسيلة لتحديد دقة توقيت التغيير التنفس حيث أنه يمكن أن نستهدف تيليوسبوريس بعد بدء الإنبات للتحقيق في الأحداث الجزيئية المبكر في الوقت المناسب. يمكن أن تتبع التقدم لإنبات مجهريا بمجرد بروميسيليا يخرج من تيليوسبوري، ولكن الطبيعة غير متزامن تحول دون عزل ما يكفي تيليوسبوريس في مرحلة معينة للتحقيق. قمنا بتطوير تقنية ميكروديسيكشن مماثلة لتلك المستخدمة للاخصاب في الأنابيب لجمع تيليوسبوريس جسديا في مراحل متميزة المورفولوجية للإنبات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-الذرة الكوز العدوى

  1. تنمو ميس زيا (عام البنطم الذهبي) حتى يتم تشكيل الكيزان وبدأت الحرير (حوالي 60 يوما).
  2. الثقافة متوافقة فرداني مايديس U. سلالات تستخدم بروتوكولات قياسية كما سبق وصف7.
  3. إصابة الكيزان الذرة باستخدام البروتوكولات القياسية كما هو موضح سابقا7.

2-تيليوسبوري الحصاد

  1. معدات اﻷوتوكﻻف (مداخل [بشنر] وقوارير [بشنر] والخلاطات، 250 مل زجاجات أجهزة الطرد المركزي، وملاعق مسطحة والمياه) باستخدام معيار جافة دورة مع على الأقل 30 دقيقة التعقيم في 121 درجة مئوية (دورة السائلة القياسية للمياه).
  2. إزالة الكيزان المصابة من النباتات (حوالي 28 – 35 يوما بعد الإصابة) باستخدام الشفرة والكيزان على صينية المشمولة في مقاعد البدلاء حامي.
  3. إزالة الأورام من الكيزان مع شفرة حلاقة وجمع في كوب.
  4. ملء كوب خلاط مختبر 250 مل مع الأورام حتى حوالي 1/3 كامل وإضافة يعقم dH2س حتى كأس خلاط هو حوالي 3/4 الكامل. تعطيل الأورام بالنبض الخلاط منخفضة، حتى تجانس.
  5. قم بتوصيل مضخة فراغ إلى فخ مياه ثم إلى قارورة [بشنر] ل 1.
  6. إدراج كبيرة [بشنر] القمع قارورة وخط أسفل القمع [بشنر] مع أربع طبقات من القماش القطني.
  7. قم بتشغيل مضخة فراغ.
  8. صب جزء من الأورام المتجانس من خلال القماش القطني وكشط مع ملعقة.
  9. صب بعض dH2س القماش القطني من أجل طرد تيليوسبوريس من خلال.
  10. كرر حتى dH2س القادمة من خلال القماش القطني واضح.
  11. انتزاع من القماش القطني يحتوي على مادة الورم المتجانس في عامل التصفية لضمان استرداد الحد الأقصى تيليوسبوري.
  12. عندما يتم الحصول على قارورة [بشنر] 1 لتر قريبة من كامل وإفراغه في قارورة Erlenmeyer كبيرة ووضعه جانبا.
  13. وضع قطعة من القماش القطني جديدة في عامل التصفية وكرر الخطوتين (2.7 – 2.12) إلى كل من الأورام تعطلت وتصفيتها.
  14. صب تيليوسبوريس الذي تم تصفيته في زجاجات يعقم 250 مل الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي في 1,000 س ز لمدة 5 دقائق، وصب المادة طافية.
  15. كرر الخطوة 2، 14 حتى هي القريبون كل من تيليوسبوريس التي تمت تصفيتها باستخدام الطرد المركزي.
  16. تعليق الكريات في كمية صغيرة من الماء ونقلها إلى أنابيب الطرد المركزي 50 مل.
  17. الطرد المركزي هذه الأنابيب في 1,000 س ز لمدة 5 دقائق، وصب المادة طافية.
  18. تعليق بيليه في حوالي 50 مل من dH2س والطرد المركزي هذه الأنابيب في 1,000 س ز لمدة 5 دقائق، وصب المادة طافية. بلطف كشط قبالة الطبقة العليا رمادي مع البسط والتخلص منه. كرر حتى لم يعد هناك طبقة رمادية في الأعلى.
  19. جفاف العينات بين عشية وضحاها في مجفف فراغ.
  20. تخزين تيليوسبوريس المجفف في 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
  21. إذا رغبت في ذلك، تعامل تيليوسبوريس مع كبريتات النحاس8 قبل الحث على الإنبات. إذا لم تعالج، ثم القيام بتحليل مجهرية من تيليوسبوريس للتأكد من العينة تمثل تيليوسبوريس نقية وخالية من البكتيريا أو الملوثات الأخرى.
    1. وزنها إلى حوالي 50 مغ تيليوسبوريس في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل.
    2. إضافة حوالي 1.0 مل من 0.75 في المائة خصصت4 إلى 1.5 مل ميكروسينتريفوجي الأنبوبة التي تحتوي على تيليوسبوريس. "الماصة؛" صعودا وهبوطاً لتعليق تيليوسبوريس في حل4 CuSO متبوعاً بالتحريض العينة ح 3.
    3. الطرد المركزي العينة في 2,500 س ز لمدة 5 دقائق وإزالة المادة طافية. ريسوسبيند بيليه تيليوسبوري بالماء المعقم وكرر الطرد المركزي، وإزالة المادة طافية.
    4. كرر الخطوة 2.21.3 مرتين أخريين.

3-تيليوسبوري الجدوى واختبار الإنبات

  1. تزن حوالي 10 ملغ تيليوسبوريس مايديس U. في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل لتقييم جدواها وتوقيت الإنبات.
  2. وفي السلامة الأحيائية مجلس الوزراء، تعد البطاطا الدكستروز مرق (PDB، 24 غرام/لتر) وتستكمل مع ستربتوميسين سلفات (160 ميكروغرام/مل).
  3. تعليق تيليوسبوريس في 500 ميليلتر من PDB. بلطف "الماصة؛" لخلط وكسر جميع كتل من تيليوسبوريس.
  4. نقل تعليق تيليوسبوري إلى 250 مل يعقم قارورة Erlenmeyer التي تحتوي على 10 مل من PDB.
  5. احتضان قارورة عند 28 درجة مئوية تهز 90 لفة في الدقيقة ح 12 – 16.
  6. في السلامة الأحيائية مجلس الوزراء، إزالة عينة ميليلتر 20 من تيليوسبوريس التي يسببها للإنبات وإعداد شريحة مجهر.
  7. استخدام مجهر، بصريا تقييم مراحل الإنبات الموجودة ووجود التلوث البكتيري.
    1. حساب عدد تيليوسبوريس في المراحل الأولى من خلال الخامس استخدام هيموسيتوميتير وتحديد النسبة المئوية التي قد نامي.
    2. إلا إذا كان في المرحلة الأولى تيليوسبوريس موجودة، والاستمرار في احتضان قارورة لمدة 24 ساعة قبل تقييم الإنبات تيليوسبوري. تستمر الحضانة لمدة أقصاها 48 ساعة قبل اعتبار العينة غير قابل للحياة.
    3. في حالة وجود التلوث البكتيري، تكملة PDB مع كبريتات كاناميسين (50 ميكروغرام/مل) فضلا عن ستربتوميسين سلفات (160 ميكروغرام/مل) وثم كرر الخطوات من 3.1 إلى 3.7. في حالة استمرار التلوث البكتيري، تعامل تيليوسبوريس مع كبريتات النحاس وكرر الخطوات من 3.1 إلى 3.7.

4-تنظيم دورات تعريفية للإنبات لمراقبة التنفس

  1. وزن كمية متساوية (على سبيل المثال-، 50 مغ) من تيليوسبوريس لكل تجربة التنفس.
  2. في مجلس الوزراء السلامة الأحيائية، إضافة تيليوسبوريس إلى دائرة تنفس يعقم.
  3. وتستكمل تعبئة الدائرة مع PDB (24 غرام/لتر) مع ستربتوميسين سلفات (160 ميكروغرام/مل) وسلفات كاناميسين (50 ميكروغرام/مل).
  4. "الماصة؛" صعودا وهبوطاً لإنشاء تعليق تيليوسبوري.
  5. ضع غطاء الدائرة في قاعة لإنشاء ختم الهواء ضيقة.

5-الحصول على قياسات معدل (OCR) استهلاك الأكسجين

  1. مكان الدائرة في الرف الدائرة داخل حمام مائي (يسخن إلى 28 درجة مئوية).
  2. مكان المسبار2 س داخل فتح الدائرة.
  3. رصد نقاط البيانات التي تظهر في الوقت الحقيقي في برنامج "سينسورتريس" معدل، واسمحوا المسبار استقرار (~ 3 دقيقة بعد أن يتم وضع التحقيق في الدائرة).
  4. انقر فوق "إجراء" لقياس مستويات2 س بشكل مستمر ح 6 مع القياسات سجلت فترات s 2.
  5. وقف القياس، وكرر الخطوات 4، 1 – 5.4 لكل عينة تحليلها.
  6. تصدير البيانات إلى Microsoft Excel بالنقر فوق "الملف | تصدير | حفظ ك.xls ".

6-بيانات التحليل

  1. حساب التعرف الضوئي على الحروف
    1. في ملف Excel المصدر تحت علامة التبويب "Within_Rates"، سجل "معدل" لكل قياس الدائرة (نمول/h).
    2. لكل عينة تجريبية، طرح "معدل" دائرة فارغة من "معدل" قاعة العينة التجريبية للحصول على قيمة التعرف الضوئي على الحروف المصوبة، وتأخذ القيمة المطلقة لهذا العدد.
    3. حساب OCR مجموع كل مغ تيليوسبوريس بقسمة قيمة التعرف الضوئي على الحروف مطلقة تصحيحها الخلوي الشامل المستخدمة.
    4. معدل تكرار القيم "التعرف الضوئي على الحروف كل مغ تيليوسبوريس" لكل سلالة.
  2. تحليل البيانات باستخدام الأسلوب الإحصائي المناسب (على سبيل المثال.، الطالب t-الاختبار، وتحليل التباين) باستخدام Microsoft Excel من البرامج الإحصائية الأخرى.
  3. بيانات raw الرسم البياني، وحساب النسبة المئوية للأكسجين المتبقي لكل نقطة مرة كنت ترغب في إنشاء رسم بياني. تقسيم القراءة الأولى بحد ذاته ضرب 100 (الأكسجين 100% المتبقية)، ثم تقسيم كل قراءة اللاحقة بالقراءة الأولى وضرب 100 للحصول على النسبة المئوية للأكسجين المتبقي في الدائرة.

7-تنظيم دورات تعريفية لإنبات تيليوسبوري لعزل تيليوسبوريس في مراحل متميزة للإنبات

  1. إعداد PDB (24 غرام/لتر) تستكمل مع ستربتوميسين سلفات (160 ميكروغرام/مل) في مجال السلامة الأحيائية مجلس الوزراء.
  2. ضع حوالي 10 ملغ تيليوسبوريس مايديس U. في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل.
  3. تعليق تيليوسبوريس في 500 ميليلتر من PDB. بلطف ماصة مزيج حتى هناك لا كتل من تيليوسبوريس في الأجل المتوسط.
  4. نقل تعليق تيليوسبوري قارورة Erlenmeyer يعقم 250 مل تتضمن PDB تستكمل مع ستربتوميسين سلفات.
  5. احتضان قارورة بين عشية وضحاها في 28 درجة مئوية تهز 90 لفة في الدقيقة.

8-إعداد طبق بيتري وميكرومانيبولاتور

  1. تحضير طبق بتري (57 سم2) بصفوف بيبيتينج من قطرات لإعداد ميكروكابيلاري، وجمع العينات.
    1. "الماصة؛" 5 ميليلتر (x 4) dH2س قطرات عبر الجزء العلوي من طبق بيتري.
    2. "الماصة؛" 2 ميليلتر (x3) من الجيش الملكي النيبالي الاستقرار الحل على طبق بيتري التي ستستخدم لجمع العينات.
    3. "الماصة؛" 5 ميليلتر (x 30) قطرات من الإنبات تيليوسبوريس على طبق بيتري.
  2. إضافة 15 مل الزيوت المعدنية إلى طبق بيتري. ضمان شمول جميع قطرات النفط قبل المتابعة.
  3. إعداد ميكروكابيلاري مع قطرها داخلي 15 ميكرون وشفة 1 مم وطول 55 ملم وزاوية نصيحة 20° قبل وضعها في حامل ميكروكابيلاري وغمر في الزيت المعدني حيث سيسمح عمل شعري الزيوت المعدنية للدخول ميكروكابيلاري. الإفراج عن الضغط في ميكروكابيلاري قبل إعادته إلى قطره الماء. نضح لإعداد ميكروكابيلاري بالماء.

9-عزل تيليوسبوريس الخاصة بمرحلة الإنبات

  1. استخدام عناصر التحكم ميكرومانيبولاتور، نقل ميكروكابيلاري استعداد لواحدة من قطرات الإنبات. اختراق الحبرية وانخفاض في ميكروكابيلاري وإحضار فم ميكروكابيلاري حتى تيليوسبوري جيرميناتينج في مرحلة إنبات فائدة.
  2. نضح ببطء للقبض على تيليوسبوري جيرميناتينج. وقف يسفط حالما دخلت تيليوسبوري ميكروكابيلاري. كرر حتى هناك ما يقرب من خمسة تيليوسبوريس في ميكروكابيلاري.
  3. رفع ميكروكابيلاري مع ميكرومانيبولاتور واحضاره إلى الحبرية جمع من الجيش الملكي النيبالي تثبيت الحل. اختراق الحبرية وتيليوسبوريس بحقن الحبرية.
  4. كرر الخطوات من 8.1 إلى 8.3 حتى ألقي القبض على تيليوسبوريس 1,000 تقريبا.

10-استرداد مجموعة الحبرية

  1. "الماصة؛" حتى الحبرية جمع وتحويلها إلى غطاء أنبوب ميكروسينتريفوجي 2.0 مل رناسي/الدناز-مجاناً. بعناية إزالة الزيوت المعدنية مع ماصة دون إزعاج الحبرية جمع.
  2. استخدم في تيليوسبوريس للتطبيقات المصب مثل عزل الحمض النووي الريبي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام الأسلوب القائم على ميكروريسبيروميتير من نوع كلارك لقياس التغيرات في التنفس أثناء السكون تيليوسبوري وإنبات، أكدنا أن يحمل تيليوسبوريس نائمة على مستوى منخفض من التنفس (~ 1,075 µmol/ح/mg) مقارنة الإنبات تيليوسبوريس (~ 2,614 µmol/ح/ملغ؛ الشكل 1A). وهذا يمثل تغييرا ~2.4-fold في المعدل المتوسط للتنفس بين نائمة تيليوسبوريس وتيليوسبوريس التي دفعت للإنبات. وبالإضافة إلى ذلك، قمنا بتحديد أن تيليوسبوريس التي دفعت على الإنبات بتأخير ~ 45 دقيقة في امتصاص الأكسجين...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مسببات الأمراض النباتية بيوتروفيك باسيديوميسيتي تسبب مليارات الدولارات في خسائر في المحاصيل سنوياً. الغالبية العظمى من هذه الجراثيم تنتج تيليوسبوريس التي جزء لا يتجزأ من تشتت الفطرية والتكاثر الجنسي. اكتساب المعرفة التنمية وإنبات تيليوسبوريس أمر بالغ الأهمية لفهم انتشار الأمراض المدمرة الناجمة عن هذه الفطريات. من أجل التعرف على التغيرات الجزيئية في نقاط المراقبة الرئيسية وضعنا طريقة لتحديد توقيت التحولات الفسيولوجية وآخر لعزل تيليوسبوريس في مراحل متميزة للإنبات. سيتو et al. (غير منشورة) أشار إلى خمس مراحل الإنبا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب قد لا يوجد تضارب المصالح المالية أو تضارب المصالح الأخرى بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونود أن نشكر الدكتور بول فروست للاستخدام في بلده ميكروريسبيروميتير، ونيكول فاغنر وأليكس بيل للمساعدة التقنية. تم تمويل هذا العمل من خلال منحة مقدمة إلى B.J.S.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ستربتومايسين كبريتاتBioShopSTP101
كاناميسين كبريتاتبيو شوبKAN201
مرق سكر العنب البطاطاBD Difco254920
1 لتر خلاط مختبر وارينجوارينج7011S
قماش قطنيVWR470150-438
مجفف بولي بروبيلين نالجين مع محبس الجوزThermoFisher Scientific5310-0250<
em>Unisense MicroRespiration system< / em>
MicroRespiration Sensor (O2< / sub>)UnisenseOX10
MicroOptode Meter مكبر للصوتUnisenseN / A
MR-Ch SmallUnisenseMR-CH
Sensor Trace Rate SoftwareUnisenseN / A
MicroRespiration RackUnisenseMR2-Rack
MicroRespiration StirrerUnisenseMR2-Co
Microdissect system< / em>
Axio Vert.A1 مجهر ضوئي مقلوبZeiss
مناور خشنNarishigeMMN-1
ثلاثي المحاور معلقة زيت عصا التحكم الهيدروليكية MicromanipulatorNarishigeMMO-202ND
حاقن صغير هوائيNarishigeIM-11-2
TransferTip (ES)Eppendorf5175107004

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Saville, B. J., Donaldson, M. E., Doyle, C. E. Meiosis - Molecular Mechanisms and Cytogenetic Diversity. Swan, A. , InTech. 411-460 (2012).
  2. Christensen, J. J. Monograph Number 2. , The American Phytopathological Society. Worcester, MA. (1963).
  3. Caltrider, P. D., Gottlieb, D. Respiratory activity and enzymes for glucose catabolism in fungal spores. Phytopathology. 53, 1021-1030 (1963).
  4. Allen, P. J. Metabolic aspects of spore germination in fungi. Ann. Rev. Phytopathol. 3, 313-342 (1965).
  5. Warburg, O. Metabolism of tumours. Biochemische Zeitschrift. 142, 317-333 (1923).
  6. Ostrowski, L. A., Saville, B. J. Natural antisense transcripts are linked to the modulation of mitochondrial function and teliospore dormancy in Ustilago maydis. Mol Microbiol. 103 (5), 745-763 (2017).
  7. Morrison, E. N., Donaldson, M. E., Saville, B. J. Identification and analysis of genes expressed in the Ustilago maydis dikaryon: uncovering a novel class of pathogenesis genes. Canadian Journal of Plant Pathology-Revue Canadienne De Phytopathologie. 34 (3), 417-435 (2012).
  8. Doyle, C. E., Cheung, H. Y. K., Spence, K. L., Saville, B. J. Unh1, an Ustilago maydis Ndt80-like protein, controls completion of tumor maturation, teliospore development, and meiosis. Fungal Genetics and Biology. 94, 54-68 (2016).
  9. Stade, S., Brambl, R. Mitochondrial biogenesis during fungal spore germination: respiration and cytochrome c oxidase in Neurospora crassa. J Bacteriol. 147 (3), 757-767 (1981).
  10. Brambl, R. Characteristics of developing mitochondrial genetic and respiratory functions in germinating fungal spores. Biochim Biophys Acta. 396 (2), 175-186 (1975).
  11. Sacadura, N. T., Saville, B. J. Gene expression and EST analyses of Ustilago maydis germinating teliospores. Fungal Genet Biol. 40 (1), 47-64 (2003).
  12. Hilderbrand, E. M. Techniques for the isolation of single microorganisms. Botanical Review. 4 (12), 38(1938).
  13. Seto, A. M. Analysis of gene transcripts during Ustilago maydis teliospore dormancy and germination. , Trent University. M.Sc. thesis (2013).
  14. Fröhlich, J., König, H. Soil Biology - Intestinal Microorganisms of Termites and Other Invertebrates. König, H., Varma, A. , Springer. 425-437 (2006).
  15. Choi, Y., Hyde, K., Ho, W. Single spore isolation of fungi. Fungal Diversity. 3, 11(1999).
  16. Sherman, F. Getting started with yeast. Guide to Yeast Genetics and Molecular and Cell Biology, Pt B. 350, 3-41 (2002).
  17. Chen, Y., Seguin-Swartz, G. A rapid method for assessing the viability of fungal spores. Canadian Journal of Plant Pathology-Revue Canadienne De Phytopathologie. 24 (2), 230-232 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

RNA

مقالات ذات صلة