والغرض من هذا العمل هو وصف بروتوكول لإنشاء فانتوم المياه الدهون عملية التي يمكن تخصيصها لإنتاج أشباح مع نسب الدهون متفاوتة ووحدات التخزين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
والغرض من هذا العمل هو وصف بروتوكول لإنشاء فانتوم المياه الدهون عملية التي يمكن تخصيصها لإنتاج أشباح مع نسب الدهون متفاوتة ووحدات التخزين.
كما يتم تطوير تقنيات جديدة للأنسجة الدهنية للصورة، أساليب للتحقق من صحة هذه البروتوكولات تكتسب أهمية متزايدة. أشباح، والنسخ التجريبية الأنسجة أو الجهاز للفائدة، توفر حلاً منخفض التكلفة ومرنة. ومع ذلك، دون الوصول إلى معدات مكلفة والمتخصصة، تشييد أشباح مستقرة مع كسور الدهون عالية (مثلاً.، > مستويات كسر الدهون 50% مثل تلك التي ظهرت في النسيج الدهني البنى) يمكن أن يكون صعباً نظراً لطبيعة مسعور من الدهون. ويعرض هذا العمل بروتوكول مفصل ومنخفضة التكلفة لخلق أشباح 5 × 100 مل مع كسور الدهون 0%، 25%، 50%، 75%، و 100% استخدام لوازم المختبرات الأساسية (هوتبلت، قنينة، إلخ.) ومكونات الوصول إليها بسهولة (الماء المقطر، أجار، للذوبان في الماء الفاعل ونزوات الصوديوم، عامل تباين غادولينيوم-ديثيلينيتريامينبينتاسيتاتي (دتبا)، وزيت الفول السوداني والفاعل النفط القابلة للذوبان). البروتوكول قد صممت لتكون مرنة؛ يمكن استخدامه لإنشاء أشباح مع الكسور الدهون المختلفة ومجموعة واسعة من وحدات التخزين. وقيمت أشباح تم إنشاؤها باستخدام هذا الأسلوب في دراسة الجدوى التي مقارنة قيم كسر الدهون من الدهون-المياه التصوير بالرنين المغناطيسي للقيم المستهدفة في أشباح شيدت. أسفرت هذه الدراسة عن معامل ارتباط توافق 0.998 (فاصل الثقة 95%: 0.972 1.00). وباختصار، تثبت هذه الدراسات فائدة أشباح الدهون للتحقق من صحة الأنسجة الدهنية لتقنيات التصوير عبر مجموعة من الأنسجة ذات الصلة سريرياً والأعضاء.
الفائدة في تحديد كمية الأنسجة الدهنية والدهون الثلاثية المحتوى باستخدام طرائق التصوير، مثل التصوير بالرنين المغناطيسي (التصوير بالرنين المغناطيسي)، تمتد عبر العديد من المجالات. وتشمل مجالات البحث التحقيق في مستودعات الأنسجة الدهنية البيضاء والبنى وخارج الرحم تخزين الدهون في الأعضاء والأنسجة مثل الكبد1والبنكرياس2، والهيكل العظمى والعضلات3. كما يتم تطوير هذه التقنيات الجديدة للقياس الكمي الدهنية، أساليب مطلوبة للتأكد من أن المعلمات التصوير تصلح للبحوث والتطبيقات السريرية.
أشباح، والنسخ التجريبية الأنسجة أو الجهاز، توفر أداة مرنة، والتي تسيطر عليها منخفضة تكلفة، لتطوير والتحقق من تقنيات التصوير4. على وجه التحديد، يمكن بناؤها أشباح تتألف من الدهون والماء في حجم نسبة الدهون أو كسر (FF) مماثلة لانسجة الفائدة السريرية. سريرياً، يمكن أن تختلف القيم FF في الأنسجة والأعضاء على نطاق واسع: FF في النسيج الدهني البنى يقع بين 29.7 في المائة و5من 93.9 في المائة؛ الكبد متوسط فرنك فرنسي في ذلك المرضى هو 18.1 ± 9.0%6؛ FF البنكرياس في البالغين المعرضين للخطر لنوع 2 مرض السكري تتراوح بين 1.6% و7من 22.2 في المائة؛ وفي بعض حالات المرض مسبقاً، يمكن أن يكون المرضى الذين يعانون من ضمور العضلات Duchenne القيم فرنك فرنسي تقريبا 90% في بعض العضلات8.
لأن الجزيئات غير القطبية مثل الدهون لا تذوب جيدا في حلول تتألف من الجزيئات القطبية مثل الماء، خلق أشباح مستقرة مع هدف السامي فرنك فرنسي لا تزال صعبة. لفرنك فرنسي يصل إلى 50%، العديد من الأساليب الموجودة يمكن استخدامها لإنشاء المياه الدهون أشباح9،10،،من1112. الأساليب الأخرى التي تحقق أعلى جبهة القوى الاشتراكية عادة يتطلب معدات غالية الثمن مثل الخالطون أو الموجات فوق الصوتية خلية disruptor13،14. على الرغم من أن هذه التقنيات توفر خارطة طريق لارتفاع FF أشباح، قيود المعدات وكميات مختلفة من التفاصيل التجريبية تحد من الجهود الرامية إلى خلق أشباح المياه الدهون استنساخه وقوية.
بناء على هذه التقنيات السابقة، قمنا بتطوير أسلوب لبناء أشباح المياه الدهون فعالة من حيث التكلفة ومستقرة عبر قيم النطاق قابلة للتخصيص من فرنك فرنسي. هذا البروتوكول تفاصيل الخطوات اللازمة لجعل 5 × 100 مل أشباح الدهون مع القيم FF 0%، 25%، 50%، 75%، و 100% استخدام هوتبلت واحد. يمكن تعديلها بسهولة لإنشاء مختلف وحدات التخزين (10 إلى 200 مل) ونسب الدهون (0 إلى 100%). وتم تقييم مدى فعالية هذه التقنية الوهمية في القيم FF التصوير بالرنين المغناطيسي المياه الدهون مقارنة جدوى الدراسة إلى القيم المستهدفة فرنك فرنسي في أشباح شيدت.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1. إعداد محطة العمل والمواد
2-إعداد الحل الماء
3-زيت الحل
4-خلق مستحلب الوهمية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إذا تم إعداد حل المياه بشكل صحيح، يجب أن كونجال كمية صغيرة من الحل بسرعة في قنينة اختبار (الشكل 1، الأيسر). إذا كان الحل الذي يفصل (الشكل 1، حق)، ينبغي إعداد الحل مرة أخرى (وفقا للتعليمات في الخطوة 3، 8 من البروتوكول). إذا كان يفصل شكل مستحلب (أمثلة في الشكل 2، اليسار واليمين)، الوهمية غير قابلة للبقاء ويجب أن يتم تجاهل. عندما يحدث هذا، لأنها عادة ما...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يصف لنا طريقة قوية لخلق أشباح الدهون الماء مناسبة للتحقق من تقنيات التصوير الطبية المستخدمة لقياس محتوى الأنسجة الدهنية والدهون الثلاثية في الجسم الحي. عن طريق إنشاء الخزانات اثنين (واحد لحل النفط) وواحدة لحل المياه، شيدت أشباح مستقرة مع مجموعة متنوعة من القيم FF – بما في ذلك القيم التي تتجاوز 50 في المائة--دون الحاجة إلى معدات مكلفة. ارتفاع FF أشباح (> 50%) توفير الأداة المساعدة لضمان تقنيات التصوير للقياس الكمي الدهنية تصلح للأنسجة أو الأجهزة مع القيم FF العالية، مثل الأنسجة الدهنية براون5
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب يعلن أن أجرى هذا البحث نظراً لعدم وجود أي علاقة تجارية أو مالية يمكن أن يفسر تضارب المصالح محتملة.
دعم التمويل لهذه الأبحاث قدمت المعاهد الوطنية للصحة (NIH) والمعهد الوطني لمرض السكري والجهاز الهضمي، وأمراض الكلي (NIDDK)/R01 المعاهد الوطنية للصحة-DK-105371. ونشكر الدكتور هوتشن (هاري) هو جين تاو لتقديم المشورة والاقتراحات على إنشاء فانتوم المياه الدهون.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الماء المقطر | أمازون | B000P9BY38 | قاعدة من محلول الماء |
| Agar | Sigma Aldrich Incorporated | A1296-100G | عامل التبلور |
| الخافض للتوتر السطحي القابل للذوبان في الماء | Sigma Aldrich Incorporated | P1379-500ML | عامل الفاعل بالسطح / الاستحلاب |
| عامل تباين Gadolinium-DTPA | Bayer Healthcare | 50419-0188-01 | التصوير بالرنين المغناطيسي عامل التباين. |
| بنزوات الصوديوم | Sigma Aldrich Incorporated | 71300-250G | الفول السوداني الحافظ |
| Amazon | 54782-LOU | قاعدة محلول الزيت | |
| الخافض للتوتر السطحي القابل للذوبان في الزيت | Sigma Aldrich Incorporated | S6760-250ML | عامل خافض للتوتر السطحي / مستحلب |
| صفيحة تسخين مع محرك | فيشر Scientific | 07-770-152 | |
| قضبان تحريك (على شكل بيض) | سيجما Aldrich Incorporated | Z127116-1EA | |
| 400 مل دورق | سيجما ألدريتش إنكوربوريتد | CLS1003400-48EA | |
| 250 مل قارورة إرلينماير | سيجما ألدريتش إنكوربوريتد | CLS4450250-6EA | |
| 25 مل ماصة زجاجية حجمية | فيشر Scientific | 13-650-2P | الكمية = 2 |
| 50 مل ماصة زجاجية حجمية | فيشر Scientific | 13-650-2S | الكمية = 2 |
| 75 مل ماصة زجاجية حجمية | فيشر Scientific | 13-650-2T | الكمية = 2 |
| 3.0 مل حقنة | Sigma Aldrich Incorporated | Z248002-1PAK | |
| 1.0 مل حقنة | Sigma Aldrich Incorporated | Z230723-1PAK | |
| Sigma Aldrich Incorporated | S3897-1EA | ||
| (دقة 100 جم × 0.01 جرام) | أمازون | AWS-100-BLK | |
| قوارب الوزن | Sigma Aldrich Incorporated | Z740499-500EA | |
| 120 مل برطمانات زجاجية McMaster | Carr Supply Co | 3801T73 | |
| قفازات مقاومة للحرارة (زوج) إبر | حقنة أمازون | B075GX43MN | |
| Sigma Aldrich Incorporated | Z192341-100EA | ||
| 18 "شريط تحريك ريتريفر | فيشر علمي | 14-513-70 | |
| 1 درام قارورة زجاجية شفافة | فيشر علمي | 03-339-25B |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.