مقالة منهجية

مما يجعل الناجم عن تصريف جسيمات شبيهة بالفيروس سي نيون بالكيمياء ديبروموماليميدي-ثنائي كبريتيد

6.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/57712

⸱

مايو 27, 2018

 ,  ,  , 
1Department of Chemistry & Biochemistry, University of Texas at Dallas, 2Undergraduate Biology, University of Texas at Dallas, 3Undergraduate Healthcare Studies, University of Texas at Dallas, 4Departments of Chemistry & Biochemistry and Biomedical Engineering, University of Texas at Dallas

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا، على إجراء فلوريسسينتلي فونكتيوناليزي ديسولفيديس في عزام Qβ مع ديبروموماليميدي. يصف لنا التعبير Qβ وتنقية وتركيب جزيئات فونكتيوناليزيد ديبروموماليميدي ورد فعل الاقتران بين ديبروموماليميدي و Qβ. يمكن استخدام الجسيمات مترافق نيون الصفراء الناتجة كتحقيق الأسفار داخل الخلايا.

الملخص

الارتفاع الأخير في جسيمات شبيهة بالفيروس (فلبس) في الطب الحيوي وأبحاث المواد يمكن أن يعزى إلى سهولة التركيب الحيوي وحجم منفصلة، وقابلية البرمجة الوراثية وتحلل الأحيائي. في حين أنهم عالية قابلة لردود الفعل بيوكونجوجيشن لإضافة يغاندس الاصطناعية على سطحها، النطاق في منهجيات بيوكونجوجيشن في هذه كابسيدس ولد مائي محدودة نسبيا. لتسهيل توجيه البحوث الحيوية الوظيفية، يجب النظر في ردود الفعل بيوكونجوجيشن غير التقليدية. رد فعل الموصوفة في هذا البروتوكول يستخدم ديبروموماليميديس استحداث وظائف جديدة في المذيب سندات ثنائي كبريتيد المكشوفة من عزام استناداً إلى Qβ عاثية. وعلاوة على ذلك، المنتج النهائي فلوري، الذي له فائدة إضافية لتوليد مسبار تتبعها في المختبر استخدام مجموعة عوامل تصفية متوفرة تجارياً.

المقدمة

استخدام نانو الحجم كابسيدس الفيروسية قد برز كحقل مثيرة، التي تهدف إلى توسيع نطاق التطبيقات في البحوث الطبية الحيوية1،،من23. ريكومبينانتلي أعرب عن جسيمات شبيهة بالفيروس (فلبس) تستمد هيكلياً من الفيروسات، لكنها تفتقر إلى المواد الوراثية الفيروسية الأصلية يجعلها الجسيمات النانوية البروتينية غير المعدية. السمات السطحية هي مبرمج وراثيا وهو أعرب كل قفيصه مطابق تماما لتلك التي قبل وبعد ذلك، من الممكن أن تعرف موقع وعدد من سلاسل الجانب التفاعلي من الأحماض الأمينية بدقة متنافر. في كثير من الحالات، تمتلك كلا من الأسطح الخارجية والداخلية أنواع كثيرة من مخلفات المذيبات من الأحماض الأمينية المكشوفة، التي يمكن أن تكون فونكتيوناليزيد عمليا من خلال ردود الفعل بيوكونجوجيشن-ردود الفعل التي تشكل سندات تساهمية بين بيوموليكولي والاصطناعية جزيء4،5.

ردود فعل بيوكونجوجيشن مساعدة الجزيئات الحيوية ذات الاهتمام بوظائف أكثر تنوعاً بطريقة مباشرة نسبيا. يمكن توليفها من قبل الجزيئات ذات الاهتمام، مثل العقاقير العلاجية6،7 من العلامات الفلورية والبوليمرات8،9 وتتميز قبل هي التي تعلق على سطح فلبس. عزام شائع بوجه خاص في الطب الحيوي والأبحاث الحيوية قد كان عزام استناداً إلى Qβ عاثية، الذي، كما أعرب عن ريكومبينانتلي، هو icosahedral قفيصه فيروسية نانومتر 2810. مواقع رد الفعل الأكثر شيوعاً في Qβ ليسينيس بفارق كبير، على الرغم من أننا قد أبلغت مؤخرا الاقتران الناجح11 من مركبات ديبروموماليميدي إلى ديسولفيديس انخفاض هذا الخط مسام Qβ عن طريق فعل بيكر هادليتون. رد فعل العائدات مع حسن العائد، ونفس القدر من الأهمية، دون فقدان الثبات الحراري للجسيمات. في الوقت نفسه، يولد رد الفعل هذا الأسفار الناجم عن تصريف الأفعال، التي يمكن استخدامها لتعقب امتصاص هذه الجزيئات داخل الخلايا. في هذا العمل، ونظهر على تصريف من البولي إيثيلين غليكول (شماعة) على السطح Qβ من خلال رد فعل هادليتون-بيكر، الذي ينتج fluorophore صفراء زاهية. ثم يمكن تعقب هذه الجسيمات كما أخذوا الخلايا. البروتوكول هنا سوف تساعد الباحثين توليد الجديد سي نيون الجسيمات النانوية البروتينية استناداً إلى Qβ، على الرغم من أن المبادئ قابلة للتطبيق إلى واحدة من العديد من فلبس الأخرى التي تحتوي على المذيبات disulfides المكشوفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-إعداد

  1. أجار ليسوجيني مرق (رطل) وصب لوحات12.
  2. تحويل BL21(DE3) مع بلازميد pET28 التي تحتوي على تسلسل البروتين معطف wtQβ.
    1. ذوبان الجليد كولاي BL21(DE3) الخلايا المختصة في حمام الثلج. مكان 50 ميكروليتر من الخلايا في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
    2. إضافة 2 ميكروليتر من بلازميد في أنبوب واحد ونفض الغبار بلطف الأنبوب. ثم احتضان على الجليد لمدة 30 دقيقة.
    3. صدمة الحرارة الخلايا ل 45 ثانية في حمام مائي في الضبط 42 درجة مئوية. ضع الأنبوبة في حمام الثلج فورا بعد صدمة الحرارة، واحتضان لمدة 5 دقائق.
    4. إضافة ميكروليتر 950 رطل من وسائط الإعلام التي لا تحتوي على أي من المضادات الحيوية.
    5. اهتزاز الثقافة 200 لفة في الدقيقة لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
    6. لوحة 100 ميكروليتر من الثقافة في لوحات أجار رطل (مع كاناميسين) واحتضان لوحة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. حدد مستعمرات بيضاء عند الحاجة.
  3. جعل الإعلام سوبر الأمثل مرق (سوب).
    1. اﻷوتوكﻻف اثنين 2 ل حير قوارير ارلينمييير في دورة سوبيردري.
    2. في بيئة معقمة، تزن وإضافة ز 20.0 من تريبتوني، ز 5.0 من الخميرة استخراج، ز 2.469 اللامائى سلفات المغنيزيوم، 0.584 ز من كلوريد الصوديوم و 0.186 غرام من كلوريد البوتاسيوم لكل قارورة.
    3. إحضار وحدة التخزين إلى 1 لتر بالماء عالي النقاوة في كل قارورة والاوتوكلاف على دورة السائل.
    4. وبمجرد وسائل الإعلام سوب وصلت درجة حرارة الغرفة بعد التعقيم، إضافة 1 مل كاناميسين (100 مغ/مل) لكل لتر من وسائل الإعلام وتخزين في 4 درجات مئوية.
  4. جعل العازلة فوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
    1. جعل الحل مونوباسيك البوتاسيوم 1 م بتذويب ز 68.045 البوتاسيوم مونوباسيك في 500 مل الماء عالي النقاوة.
    2. جعل البوتاسيوم 1 م حل مائي بتذويب ز 87.09 البوتاسيوم مائي في 500 مل الماء عالي النقاوة.
    3. إضافة مل 38.5 الحل مونوباسيك البوتاسيوم ومل 61.5 البوتاسيوم مائي باستخدام زجاجة 1 لتر.
    4. ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.00 إذا لزم الأمر، وعلى كمية من 1 ل.
  5. إجراء 5 – 40% التدرجات السكروز في المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
    1. في أنابيب الطرد المركزي 50 مل، إعداد الحلول مع 5 – 40% (زيادة في زيادات بمقدار 5 في المائة) السكروز المذاب في المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
    2. إيداع 3.3 مل محلول 5% في الجزء السفلي من أنبوب البولي السفلي الجولة 38 مل باستخدام حقنه إبرة طويلة وكرر هذه العملية لخمسة أنابيب أخرى.
    3. إيداع 3.3 مل محلول السكروز 10% في الجزء السفلي من الأنبوب بعناية، وإزالة الإبرة بشأن عدم الإزعاج التدرج بعناية. كرر هذه الأنابيب الخمسة الأخرى.
       
  6. الاستمرار في إيداع طبقات 3.3 مل من حلول السكروز، زيادة من 15% إلى 40% في كل أنبوب، مع الحذر أن لا تخل بالتدرج.
  7. عند الانتهاء، تغطي قمم التدرجات مع إحباط وتخزينها في-80 درجة مئوية.

2-التعبير عن Qβ

  1. مسح منطقة مقاعد البدلاء مع التبييض 1:1/الإيثانول.
  2. جعل ثقافتين 3 مل من كاتب في بيئة معقمة بإضافة واحد مستعمرات كولاي BL21(DE3) إلى 3 مل الإعلام سوب في بيئة معقمة.
  3. تنمو على شاكر 250 لفة في الدقيقة في غرفة رطوبة النسبية (rH) 37 درجة مئوية و 0% بين عشية وضحاها.
  4. تطعيم الثقافة المبتدئين في سوب وسائط الإعلام:
    1. تقلع كل الثقافات كاتب 3 مل شاكر، وفي بيئة معقمة، صب كل ثقافة كاتب في واحد من اثنين ل 2 في حيرة قوارير Erlenmeyer مع 1 لتر وسائط سوب الطازجة في كل.
    2. وضع وسائل الإعلام الملقحين على شاكر 250 لفة في الدقيقة في غرفة rH 37 درجة مئوية و 0%.
  5. تنمو هذه البكتيريا في شاكر 250 لفة في الدقيقة في غرفة rH 37 درجة مئوية و 0% حتى OD600 يصل إلى 0.9-1.0.
  6. أضف 1 مل من م 1 الأيزوبروبيل β-د-1 ثيوجالاكتوبيرانوسيدي (إيبتج) باستخدام ماصة P1000 للحث على التعبير البروتين.
  7. ترك وسائل الإعلام على شاكر في 250 دورة في الدقيقة في غرفة 37 درجة مئوية و 0% رطوبة نسبية بين عشية وضحاها.
  8. إزالة الوسائط من شاكر في صباح اليوم التالي وأجهزة الطرد المركزي من استخدام زجاجات 1000 مل في 20,621 × ز ح 1 في 4 درجات مئوية لحصاد الخلايا.
  9. تجاهل المادة طافية وجمع بيليه الخلية.
    1. صب المادة طافية قارورة مع حوالي 5 مل التبييض لقتل البكتيريا. هذا النفايات.
    2. استخدام ملعقة كشط بيليه الخلية من الجزء السفلي من الزجاجة للطرد المركزي ووضع بيليه في أنبوب 50 مل أجهزة الطرد مركزي.

3-تنقية Qβ

  1. ريسوسبيند بيليه الخلية مع ~ 20-30 مل من المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
  2. تأكد من استثارة لا قطع، والخلايا باستخدام معالج ميكروفلويديزير وفقا للبروتوكول الخاص بالشركة المصنعة (انظر الجدول للمواد). الخلايا مرتين على الأقل لزيادة عائد الجسيمات.
  3. الطرد المركزي في في أجهزة الطرد المركزي 250 مل الزجاجات 20,621 س ز للموارد البشرية 1 في 4 درجات مئوية.
  4. تجاهل بيليه، وقياس حجم المادة طافية في مل. ضرب هذه القيمة بواسطة 0.265 وإضافة هذا المبلغ من غرام كبريتات الأمونيوم إلى المادة طافية.
  5. ضجة في 4 درجات مئوية على الأقل 1 ح على لوحة ضجة 200 لفة في الدقيقة يعجل بالبروتين.
  6. الطرد المركزي في 250 مل الزجاجات 20,621 ز س ح 1 في 4 درجات مئوية.
  7. تجاهل المادة طافية وريسوسبيند بيليه مع حوالي 10 مل من المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
  8. إضافة كميات متساوية من 1:1 كلوروفورم/n-butanol بعينه النفط الخام ومزيج من فورتيكسينج لبضع ثوان.
  9. الطرد المركزي في أنابيب مل 38 في 20,621 × ز لمدة 30 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  10. استعادة الطبقة المائية العليا استخدام ماصة باستور. الحذر من عدم القيام بأي من الهلام مثل الطبقة التي شكلت بين الطبقة المائية والعضوية.
  11. ذوبان الجليد ستة التدرجات السكروز مسبقة الصنع 5 – 40% وتحميل حوالي 2 مل الاستخراج على كل منهما.
  12. أولتراسينتريفوجي في 99,582 س ز ح 16 عند 4 درجة مئوية مع تباطؤ مجاناً.
  13. تسليط ضوء التي ينبعث منها الضوء صمام ثنائي (LED) تحت كل أنبوبة وفرقة زرقاء وينبغي أن تصبح مرئية. استرداد هذه الجسيمات بحقنه إبرة طويلة.
  14. أولترابيليت الجسيمات في 370,541 س ز ح 2.5 في 4 درجات مئوية.
  15. تجاهل المادة طافية وريسوسبيند بيليه شفافة لتنقية الجزيئات مع المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).

4-التقييم الكمي، وتأكيدا للمنتج

  1. استخدام "مقايسة برادفورد" لتحديد كمية المنتج13.
  2. الحد من التشغيل وعدم تقليل الصوديوم دوديسيل كبريتات التفريد جل polyacrylamide (الحزب الديمقراطي الصربي صفحة) للتأكد من المنتج14.
    ملاحظة: الحد من الحزب الديمقراطي الصربي صفحة يستخدم للتأكد من الوزن الجزيئي للبروتين معطف؛ عدم خفض مخزونات النشر الاستراتيجي-الصفحة لتأكيد هيكل ترتيب أعلى.

5-التصريف DB المركبات في Qβ

  1. الحد من ديسولفيديس في Qβ.
    1. حل ز 0.0020 من tris(2-carboxyethyl) الفوسفين (تسيب) في 1 مل من الماء عالي النقاوة لجعل حل أسهم 100 x.
      ملاحظة: تعد تسيب الطازجة قبل التخفيض.
    2. إضافة 200 ميليلتر من Qβ (5 ملغ/mL) في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
    3. اتبع بإضافة 20 ميليلتر من 100 x TCEP الأسهم الحل.
    4. احتضان في درجة حرارة الغرفة ح 1.
  2. إعادة سد ثنائي كبريتيد انخفاض استخدام ديبروموماليميدي البولي إيثيلين غليكول (DB-الربط).
    1. حل 0.0017 ز من البولي إيثيلين ديبروموماليميدي غليكول (DB-شماعة) في 100 ميليلتر من DMF.
    2. إضافة ميليلتر 680 من حل فوسفات الصوديوم 10 مم (درجة الحموضة 5.00).
    3. أضف تخفيض Qβ إلى حل DB-شماعة ومراقبة عملية خلط تحت مصباح الأشعة فوق البنفسجية 365 نانومتر. يمكن تصور الأسفار صفراء زاهية فورا مع مصباح الأشعة فوق البنفسجية يده 365 نيوتن متر عند خلط.
    4. واسمحوا رد فعل المضي قدما بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة (RT) على المشواة.
  3. تنقية الخليط رد الفعل بتصفية الطرد المركزي (كومو = كاتشين 10) ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني x 1 في 3,283 س ز لمدة 20 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  4. رصد الاقتران بغير تخفيض مخزونات النشر الاستراتيجي-الصفحة وأصلي [اغروس] هلام التفريد.
    ملاحظة: تشغيل فلبس كجزيئات سليمة في الأصلية [اغروس] هلام، وفصلهم بناء على تهمة والحجم والشكل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يمكن توليفها على المشتقات ديبروموماليميدي من خلال رد فعل التكثيف بين الخل ديبروموماليميدي والامينات الأولية15. وبدلاً من ذلك، كان استغلال معتدل طريقة اصطناعية16 استخدام N-ميثوكسيكاربونيل المنشط 3 و 4-ديبروموماليميدي هنا نتيجة للتفاعل مع ميثوكسيبولييثيليني غليكول (شماعة) الغلة DB-شماعة (الشكل 1). الرنين المغناطيسي النووي استخدمت لتحديد هيكل المركبة (الشكل 2). عزام Qβ هو 28 نانومتر ic...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مقارنة لتنقية البروتين أصغر حجماً، هي خطوة فريدة من نوعها في تنقية عاثية Qβ الطرد المركزي السكروز التدرج. بعد الخطوة استخراج كلوروفورم/n-butanol، هو زيادة تنقية Qβ استخدام التدرجات السكروز 5-40 في المائة. أثناء الطرد المركزي، يتم فصل الجزيئات استناداً إلى أحجام الخاصة بهم. السفر الجسيمات الأكبر حجماً إلى منطقة كثافة أعلى، بينما جسيمات أصغر البقاء في منطقة أقل كثافة. Qβ يسافر إلى الثلث السفلي من التدرج، ولا يزال هناك بينما أصغر البروتين الشوائب محاصرون في الجزء العلوي من الأنبوب الطرد المركزي. تعليق غرواني Qβ يظهر تيندال ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

شكر وتقدير

J.J.G. يعترف بمؤسسة "العلوم الوطنية" (هيئة الهجرة واللاجئين-1654405) و "السرطان منع الأبحاث معهد تكساس" (كبريت) (RP170752s) لما تقدمه من الدعم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مرق LB (ميلر)   ؛EMD Millipore1.10285.0500
Tryptone ، PowederResearch Products InternationalT60060-1000.0
مستخلص الخميرة ، منتجات أبحاث PowederInternationalY20020-1000.0
كبريتات المغنيسيوم اللامائيةP212121CI-06808-1KG
كلوريد الصوديوم (بلوري / معتمد ACS)فيشر ScientificS271-10
كلوريد البوتاسيومفيشر العلميBP366-500
Elga PURELAB Flex 3 نظام تنقية المياهفيشر 4474524
البوتاسيوم أحادي القاعدةفيشر ScientificBP362-1
فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة اللامائيفيشر العلميP288-500
السكروزفيشر العلميS25590B
الإيثانولفيشر العلميBP2818500
الأيزوبروبيل & beta ;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)سيجما ألدريتشI6758-1G
Fiberlite F10-4x1000 LEX الدوار  فيشر ساينتفيك096-041053
كبريتات الأمونيومP212121KW-0066-5KG
كلوروفورمألفا إيسار32614-M6
1-بوتانولفيشر ScientificA399-4
SW 28 Ti الدوار ، دلو متأرجح ، ألومنيومبيكمان كولتر342204: SW 28 Ti دوار / 342217: مجموعة
من النوع 70 Ti الدوار ، زاوية ثابتة ، تيتانيوم ، 8 × 39 مل ،بيكمان كولتر337922
كوماس (برادفورد) فحص البروتينفيشر العلميPI23200
منتجات أبحاث هيدروكلوريدتريس الدوليةT60050-1000.0
رباعي ميثيل إيثيلين ديامينألفا إيسارJ63734-AC
تريس (2-كربوكسي إيثيل) فوسفين هيدروكلوريدسيجما ألدريتشC4706-2G
2 3-Dibromomaleimide 97٪سيجما ألدريتش553603-5G
بولي إيثيلين جلايكولألفاإيسار 41561-22
فوسفات الصوديومفيشرAC424375000
أكريلاميد / مكرر أكريلاميدP212121RP-A11310-500.0
كبريتات دوديسيل الصوديومسيجما ألدريتشL3771-100G
أمونيوم بيرسولفاتفيشر ScientificBP179-100
FV3000 مجهر المسح الضوئي بالليزر متحدالبؤر أوليمبوس & nbsp ؛FV3000 
Labnet مسدس قابل للتعديل الدوار  توماس ساينتفيك 1190P25 
1000 مل زجاجة سورفال عالية الأداء ، كمبيوتر شخصي ، مع غطاء من الألومنيوم   ؛Thermo Scientific010-1459
Nalgene مع أغطية ، أنابيب البولي بروبيلين كوبوليمرالحرارية العلمية3141-0250
Nunc مستديرة القاع ؛ 38 مل ؛ PCThermo Scientific3117-0380
2 لتر قوارير Erlenmeyer ذات الفم الضيق مع حافةالتحمل Pyrex4980-2L
Amicon Ultra-4 وحدات تصفية الطرد المركزيMillipore SigmaUFC801024
M-110P معالج مواد الموائعالدقيقة MicrofluidicsM-110P
Nalgene أنابيب الطرد المركزي المستديرة السفليةالسرعة زجاجة علمية3117-0380PK
، مع مجموعة غطاء ،41121703بيكمان
كولتر ، متدرجة - بولي بروبيلين 250 ملPolyLab80005
533LS-E Series معقمات بالبخارGetinge533LS-E
TrueLine ، لوحة ثقافة الخلية ، معالجة ، PS ، 96 بئر ، مع غطاءLabSourceD36-313-CS
فالكون 15 مل أنبوب الطرد المركزي المخروطيفيشر Scientific14-959-53A
أنبوب الطرد المركزي الدقيق: 1.5 ملفيشر ساينتفيك05-408-129
VWR Os-500 شاكر المداريVWR منتجات Scientifc14005-830
أنظمة Tetra HandcastBio-Rad1658000FC
بولي بروبيلين ، 250 ملبيكمانكولتر 41121703
مقياس الطيف الفلوري NanoDropThermo Fisher Scientific3300
إبرة طويلة هاميلتون 7693
إكسل انترناشيونال 5 إلى 6 سم مكعب محاقن لور لوكفيشر Scientific14-841-46
P1000 PipetmanGilsonF123602
P200 PipetmanGilsonF123601
P100 PipetmanGilsonF123615
P20 PipetmanGilsonF123600
P10 PipetmanGilsonF144802
Intel Weight PM-100 Laboratory Classic عالي الدقة مختبرالتوازن ذكي IWT_PM100
Falcon 50 مل أنبوب الطرد المركزي المخروطيفيشر Scientific14-432-22
4 & ndash ؛ 15٪ جل ميني بروتين TGX ، 10 بئر ، 50 وميكرو ؛ لبيو راد456-1084
الجرافةالعلميزجاجات الطرد المركزي شديدة عالية أسطوانة من البولي كربونات

المراجع

  1. Pokorski, J., Breitenkamp, K., Liepold, L., Qazi, S., Finn, M. G. Functional Virus-Based Polymer-Protein Nanoparticles by Atom Transfer Radical Polymerization. J. Am. Chem. Soc. 133 (24), 9242-9245 (2011).
  2. Capehart, S., Coylet, M., Glasgow, J., Francis, M. Controlled Integration of Gold Nanoparticles and Organic Fluorophores Using Synthetically Modified MS2 Viral Capsids. J. Am. Chem. Soc. 135 (8), 3011-3016 (2013).
  3. Li, S., et al. Template-Directed Synthesis of Porous and Protective Core-Shell Bionanoparticles. Angew. Chem. Int. Ed. 55 (36), 10691-10696 (2016).
  4. Chen, Z., Li, N., Li, S., Dharmarwardana, M., Schlimme, A., Gassensmith, J. J. Viral Chemistry: The Chemical Functionalization of Viral Architectures to Create New Technology. WIREs. Nanomed. Nanobiotechnol. 8 (4), 512-534 (2015).
  5. Chalker, J. M., Bernardes, G. J. L., Lin, Y. A., Davis, B. G. Chemical modification of proteins at cysteine: opportunities in chemistry and biology. Chem. - Asian J. 4 (5), 630-640 (2009).
  6. Le, D. H., Lee, K. L., Shukla, S., Commandeur, U., Steinmetz, N. F. Potato Virus X, a Filamentous Plant Viral Nanoparticle for Doxorubicin Delivery in Cancer Therapy. Nanoscale. 9 (6), 2348-2357 (2017).
  7. Chen, L., Wu, Y., Yuan, L., Wang, Q. Virus-templated FRET Platform for the Rational Design of Ratiometric Fluorescent Nanosensors. Chem. Comm. 51 (50), 10190-10193 (2015).
  8. Lee, P., et al. Polymer Structure and Conformation Alter the Antigenicity of Virus-like Particle-Polymer Conjugates. J. Am. Chem. Soc. 139 (9), 3312-3315 (2017).
  9. Zhang, X., et al. Polymer-Protein Core-Shell Nanoparticles for Enhanced Antigen Immunogenicity. ACS Macro Lett. 6 (4), 442-446 (2017).
  10. Brown, S. D., Fielder, J. D., Finn, M. G. Assembly of Hybrid Bacteriophage Qbeta virus-like particles. Biochemistry. 48 (47), 11155-11157 (2009).
  11. Chen, Z., et al. Fluorescent Functionalization across Quaternary Structure in a Virus- like Particle. Bioconjugate Chem. 28 (9), 2277-2283 (2017).
  12. Addgene. Pouring LB Agar Plates. , Available from: https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/ (2016).
  13. Bio-Rad. Bradford Protein Assay. , Available from: http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/4110065A.pdf (2017).
  14. Bio-Rad. Guide to Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Detection. , Available from: http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6040.pdf (2017).
  15. Smith, M., et al. Protein Modification, Bioconjugation, and Disulfide Bridging Using Bromomaleimides. J. Am. Chem. Soc. 132 (6), 1960-1965 (2010).
  16. Castaneda, L., et al. A Mild Synthesis of N-functionalised Bromomaleimides, Thiomaleimides and Bromopyridazinediones. Tetrahedron Lett. 54 (27), 3493-3495 (2013).
  17. Fiedler, J., et al. Engineered Mutations Change the Structure and Stability of a Virus- Like Particle. Biomacromolecules. 13 (8), 2339-2348 (2012).
  18. Manzenrieder, F., Luxenhofer, R., Retzlaff, M., Jordan, R., Finn, M. G. Stabilization of Virus-like Particles with Poly(2-oxazoline)s. Angew. Chem. Int. Ed. 50 (11), 2601-2605 (2011).
  19. Chen, Z., Li, N., Chen, L., Lee, J., Gassensmith, J. J. Dual Functionalized Bacteriophage Qβ as a Photocaged Drug Carrier. Small. 12 (33), 4563-4571 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

QBeta SDS PAGE

مقالات ذات صلة