هذا البروتوكول تمتثل السياسة "جامعة كوينزلاند" المبينة في الرعاية المسؤولة واستخدام الحيوانات في التدريس والبحث (PPL 4.20.11)، فضلا عن الصحة الوطنية ومجلس البحوث الطبية في المدونة الأسترالية للرعاية واستخدام الحيوانات لأغراض علمية (8th طبعة عام 2013).
تنبيه: الحرص على عدم تكون انفينوماتيد عند التعامل مع الأخطاء قاتل. الحرص على حماية العينين عند التعامل مع الأنواع التي يبصقون السم دفاعيا. رعاية في جميع أنحاء لا تصيب الحيوانات التجريبية. ويشمل هذا الرصد للضغط على قيود مثل الأربطة المطاطية، وضمان أن ململه لم يتم كسر.
ملاحظة: بشكل اختياري، تخدير الحيوانات قبل التعرض ل أول أكسيد الكربون2 0.5-2 دقيقة أو التبريد إلى 4-10 درجة مئوية قبل الحصاد السم في يهدف 1-3 لتسهيل نقل آمنة وضبط النفس. التنويم غير مطلوب تماما ولكن قد يسهل ضبط النفس الآمنة للعينات السريع أو قوية. ومع ذلك، يجب أن تكون الحيوانات مستيقظا للسماح لحصاد السم. تبقى التطبيقات المتلقين للمعلومات في الاعتبار عند اتخاذ قرار بإضافة مثبطات البروتياز أم لا.
1-حصاد السم السموم التي اليكتروستيموليشن
- الحصول على عينات حية لحصاد السموم منه.
- استخدام ملاقط بلاستيكية معدّة سلفا مع أقطاب الإيجابية والسلبية التي شنت على أي تلميح. قم بتوصيل ملاقط مكهرب اليكتروستيمولاتور أو مصدرا للجهد المستمر الذي يسمح التعديل للجهد.
- الصغيرة (~ 10 مم) والكبيرة (~ 25 مم) قاتل البق، تستخدم الفولتية ذروة 15 و 25 الخامس على التوالي.
- لأكبر هيتيروبتيرانس مثل البق المياه العملاقة، استخدام يصل إلى 40 الخامس.
- كبح جماح البق يعيش بالربط منها إلى النظام الأساسي، باستخدام شريط المطاطي عبر الصدر.
- مكان غيض ململه في تلميح جمع مناسبة. قاتل الأخطاء، استخدام تلميح ماصة P200. للأخطاء المياه العملاقة، قص أقصى قبالة تلميح P200 لزيادة حجم الفتحة.
- بلطف مع زوج مغلقة من ملاقط نظيفة ململه رفع ودفع الفتحة مفتوحة من طرف جمع أكثر من نهاية ململه.
- إذا رغبت في ذلك، امتصاص ~ 5 ميليلتر الماء عالي النقاوة قبل وضع في ململه في جمع معلومات سرية. وهذا يقلل خسائر السم المتبقية داخل معلومات سرية، على الرغم من أن السم المقطوع سوف تضعف.
- تطبيق اليكتروستيموليشن. تراجع أقطاب كهربائية محفزة في هلام موصلة، مثل الجلسرين NaCl/50% 2.5 م. تطبيق أقطاب كهربائية للصدر. بيلوستوماتيدس، لا تنطبق قطبين الظهرية السطح الخلفي من الرأس.
- تخزين السم لمنع أوتوديجراديشن. بعد هو مقذوف السم، بسرعة نقلها إلى أنبوب في-20 درجة مئوية أو-60 درجة مئوية، أو أنبوب يحتوي على كوكتيل مثبط البروتياز.
- كرر الخطوات من 1.5 و 1.6 حتى يكتسب السم كافية أو لا السم آخر المقبلة.
2-حصاد السم السموم بالتحرش
- إعداد الحيوانات لحصاد السم ومكان غيض من ململه في دهليز جمع، كما هو موضح في الأقسام الفرعية 1.1 و 1.3-1.4.
- إذا كان السم هو مقذوف تلقائياً، انتقل إلى الخطوة 2، 3. إذا لم يكن الأمر كذلك، مضايقة الحيوانات بلطف لمسها في البطن والساقين وهوائيات مع الملقط حتى يتم إنتاج السم.
- بسرعة نقل السم لأنبوب في-20 درجة مئوية أو-60 درجة مئوية، أو أنبوب يحتوي على مبطلات مثبط كوكتيل، إذا رغبت في ذلك.
3-حصاد السم السموم بالمضايقة من السم "البصق" الأنواع
- تخدير أو تخدير جزئيا، الحشرة قبل إزالته من مرفقها لمنع أي البصق دفاعي سابق لأوانه.
- إثارة السم البصق السلوك. احتواء وتغيير موضع الحشرة باستخدام غطاء عميق على مستوى 90 × 16 مم طبق بيتري. عقد الغطاء الخلفي قليلاً و 1-4 سم فوق الحشرة للحيلولة دون هروب. معظم الحشرات سوف يبصقون عدة مرات، وكثيراً ما في تتابع سريع. كفالة يتم جمع جميع السم على الجزء السفلي الطبق.
- جمع السم على الجزء السفلي صحن بيتري قبل الشطف مع 10 ميليلتر من الماء عالي النقاوة. نقل بسرعة إلى أنبوب في-20 درجة مئوية أو-60 درجة مئوية، أو أنبوب يحتوي على كوكتيل مثبط البروتياز.
4-حصاد السم السموم بتشريح الغدة
- التضحية بالحيوانات. تخدير بشدة أو قتل الحيوانات باستخدام > 5 دقائق التعرض لأول أكسيد الكربون2. أنابيب خالصة CO2 مباشرة في الهواء-ثقوب الضميمة الإسكان للحيوان.
- رقم التعريف الشخصي للحشرات إلى علبة تشريح. لقاتل البق، تشريح عبر السطح البطني (4.3). لعملاق المياه البق، تشريح من خلال سطح الظهرية (4.4).
- التشريح البطني
- إدراج ثلاثة دبابيس في البطن الخلفي باستمرار الحشرات دون ثقب في الغدد السم.
- قص شق خط الوسط قصيرة في السطح البطني للبطن باستخدام مشرط مصغرة. استخدام مقص مصغرة لتوسيع شق خط الوسط الأسفل للرأس، مع الحرص على خفض الهيكل الخارجي فقط ولا تضر الهياكل الداخلية.
- للكشف عن الهياكل الداخلية، إجراء تخفيضات جانبية متعددة تمتد من شق خط الوسط إلى جانب الحشرة. ثم، دبوس مرة أخرى كل رفرف البطني الهيكل الخارجي للكشف عن الهياكل الداخلية.
- لكبير قاتل البق، جعل أربعة شقوق جانبية، في البطن منتصف البطن، الأمامي، بين الساقين الأولى والثانية، وأمام المحطة الأولى.
- تشريح الظهرية
- إزالة أجنحة قرب القاعدة. إدراج ثلاثة دبابيس في البطن الخلفي باستمرار الحشرات دون ثقب في الغدد السم.
- قص شق خط الوسط من الرأس إلى البطن باستخدام مقص مصغرة والمبضع، مع الحرص على خفض الهيكل الخارجي فقط ولا تضر الهياكل الداخلية.
- قوة إلى جانب النصفي للحشرة. ضع عدة دبابيس أفقياً على طول الحشرة ترك تجويف داخلي مكشوف.
- إزالة عضلات الطيران باستخدام الملقط.
- الفيضانات في علبة تشريح. إضافة برنامج تلفزيوني حتى الأخطاء هي مغمورة للسماح بتعويم حتى الهياكل الداخلية وتصور بسهولة أكبر.
- استخدام الملقط، والمقص الصغير، بعناية إزالة الضام والنسيج العصبي والقصبة الهوائية. تظهر غدد السم ممدود، الهياكل الشفافة التي تمتد على طول كل جانب من القناة الهضمية.
- تحديد الغدة الرئيسية بمظهره المميزة، مع الفصوص الأمامي والخلفي وهما القنوات اجتماعها نقير.
- إذا رغبت في ذلك، تحديد الغدة التبعي عن طريق تتبع القناة من نقير. مجاناً الغدة الرئيسية بقطع القنوات اثنين المنبثقة عن نقير.
- حصاد لومن الغدة المرجوة. نقل الغدة إلى ميكروسينتريفوجي على الجليد التي تحتوي على 30 ميليلتر من برنامج تلفزيوني أو برنامج تلفزيوني بالإضافة إلى مثبطات البروتياز كوكتيل. لانس في الغدد بدبوس حاد نظيفة.
- دوامة 10 s وأجهزة الطرد المركزي (1 دقيقة، ز × 5,000، 4 درجة مئوية) إفراغ لومن الغدة. إزالة الأنسجة الغدية استخدام الملقط.
- توضيح استخراج السم. أجهزة الطرد المركزي (5 دقائق، 17,000 ز ×، 4 درجة مئوية) لإزالة أي جزيئات صلبة، الاحتفاظ بالمادة طافية ونبذ بيليه. تخزين في-20 درجة مئوية أو-60 درجة مئوية لمنع تدهور أوتوبروتيوليتيك.