علينا أن نظهر ثلاث تقنيات إعداد الأنسجة المختلفة للتصور المناعي للفئران بيريسيتيس microvascular الشبكية و أي البرد-أقسام والجامع--يتصاعد والعزلة ناقص التوتر لشبكة الأوعية الدموية.
مقالة منهجية
علينا أن نظهر ثلاث تقنيات إعداد الأنسجة المختلفة للتصور المناعي للفئران بيريسيتيس microvascular الشبكية و أي البرد-أقسام والجامع--يتصاعد والعزلة ناقص التوتر لشبكة الأوعية الدموية.
بيريسيتيس الشبكية دوراً هاما في العديد من أمراض العين. المناعي تلطيخ التقنيات الشبكية السفن وميكروفاسكولار بيريسيتيس المركزي لبحوث طب العيون. من المهم أن تختار طريقة مناسبة لتصور بيريسيتيس ميكروفاسكولار. يصف لنا بيريسيتي ميكروفاسكولار الشبكية المناعي تلطيخ في البرد-أقسام وكل--يتصاعد وناقص التوتر المفرج المعزولة باستخدام الأجسام المضادة لعوامل النمو المشتقة من الصفيحات مستقبلات بيتا (PDGFRβ) والأعصاب/الدبقية مستضد 2 (NG2). وهذا يسمح لنا لتسليط الضوء على مزايا وعيوب كل من الأعمال التحضيرية ثلاثة أنسجة لتصور بيريسيتيس ميكروفاسكولار الشبكية. Cryo-أقسام تقديم التصور ترانسيكشونال من جميع طبقات الشبكية لكن تحتوي على إلا عدد قليل من التخفيضات عرضية عرضية ميكروفاسكولاتوري. الجامع-جبل يوفر لمحة عامة عن المفرج الشبكية كاملة، ولكن التصور ميكروفاسكولاتوري يمكن أن تكون مزعجة. ناقص التوتر العزل يوفر طريقة لتصور المفرج الشبكية كاملة بإزالة الخلايا العصبية، ولكن هذا يجعل الأنسجة هشة للغاية.
بيريسيتيس الشبكية هي تركيز العديد من مختبرات الأبحاث هذه الخلايا تلعب دوراً كبيرا في سلامة المفرج. الحالات المرضية مثل اعتلال الشبكية السكري1والاسكيمية2و3 من الزرق بخصائص الأوعية الدموية التي تنطوي على وظيفة بيريسيتيس. تم العثور على بيريسيتيس في بليكسوسيس الشعرية الشبكية الداخلية. وفروع الشريان الشبكية المركزية التي تزود الشبكية الداخلية في طبقتين من بليكسوسيس الشعرية. سرير الأوعية الداخلية يقع بين الخلية العقدة وطبقات النووية الداخلية. طبقة أعمق أكثر كثافة وتعقيداً وهو مترجم بين طبقات النووي الداخلي والخارجي4،5. وبالإضافة إلى ذلك، تحتوي ب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول هو الأمثل، وبرهنت على الفئران ألبينو الذكور البالغين. في جميع إجراءات تجريبية، يعاملون الحيوانات وفقا للوائح في "بيان آرفو" "استخدام الحيوانات" في أوفثالميك والرؤية للبحث. وقد euthanized الحيوانات بثاني أكسيد الكربون والتفكك عنق الرحم اللاحقة.
1-فأر نسيج الشبكية الاستعدادات
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
توفر البروتوكولات الناجحة ثلاثة استعدادات الشبكية المختلفة لتصور بيريسيتيس ميكروفاسكولار. كل من هذه الأساليب تستخدم التعريب المشارك إيمونوريكتيفيتي PDGFRβ وفي NG2 وموقف بيريسيتيس الذي يلتف حول فوريدينتيفيكيشن البطانة الشعرية الفريدة.
مع البرد-المقاطع، يمكن تحديد طبقات الخلايا العصبية الفلورسنت كثافة أنوية المسمى DAPI والداخلية وبليكسوسيس الشعرية العميقة تحتوي على بيريسيتيس التي تعرض إيممونوريكتيفيتي PDGFRβ وفي NG2 (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
نحن نقدم ثلاث تقنيات إعداد الشبكية التي يمكن تطبيقها في دراسة ميكروفاسكولار بيريسيتيس الشبكية. فيما يلي، نقدم مقارنة بين كل من الطرق وتسليط الضوء على الخطوات الحاسمة في البروتوكولات.
مع تقطيع البرد، هو قطع الشبكية في أقسام السهمي و ومن ثم فإنه من الممكن الحصول على عينات عديدة من الشبكية نفسها. المقاطع الأرقام الناتجة عن هذا الأسلوب جعله خياراً مثاليا لخصوصية جسم واختبار المعايرة كما أنه يمنع التضحية الحيوانية لا لزوم لها. الأعمال التحضيرية حاسمة بالنسبة لنتائج جيدة. من الأهمية بمكان حين تشريح .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
الأبحاث بتمويل من مؤسسة Lundbeck، الدانمرك.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الجيلتين من جلد الخنازير | Sigma-Aldrich | G2625-500G | |
| الألبومين من بياض بيض الدجاج | Sigma-Aldrich | A5253-500G | |
| Deoxyribonuclease (DNAse) I من البنكرياس البقري | Sigma-Aldrich | D5025-15KU | مذاب في 0.15 M كلوريد |
| الصوديوم ألبومين مصل البقر (BSA) | VWR | 0332-100G | |
| مصل الحمار | العادي جاكسون ImmunoResearch | 017-000-121 ، الكثير 129348 | |
| الأرنب المضاد ل PDGFR & beta ؛ | سانتا كروز | sc-432 | 1:100 |
| ماوس مضاد ل NG2 | Abcam | ab50009 | 1:500 |
| Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch | 711-585-152 | 1:100 |
| Fluorescein (FITC) AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H + L) Jackson | ImmunoResearch | 715-095-151 | 1:100 |
| Cy2 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H + L) | Jackson ImmunoResearch | 711-225-152 | 1:100 |
| Cy3 AffiniPure Donkey المضاد للفأر IgG (H + L) Jackson | ImmunoResearch | 715-165-150 | 1:100 |
| 4'، 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) | Sigma-Aldrich | D9542-1MG | مذاب في DMSO |
| مضاد للبهتان تصاعد متوسط | مختبرات ناقلات | H-1000 | |
| وسيط تركيب مضاد للبهتان مع DAPI | Vector مختبرات | H-1200 | |
| Nunc Lab-Tek II شريحة غرفة 4 آبار | Thermo Fisher Scientific | 154526 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن