يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

البرد الشبكية-الفروع، الجامع--يتصاعد، والتحضيرات ناقص التوتر المفرج معزولة للتصور المناعي من بيريسيتيس ميكروفاسكولار

10K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/57733

⸱

أكتوبر 7, 2018

 ,  , 
1Department of Clinical Experimental Research, Glostrup Research Institute, 2Department of Clinical Sciences, Division of Experimental Vascular Research, Lund University

في هذه المقالة

ملخص

علينا أن نظهر ثلاث تقنيات إعداد الأنسجة المختلفة للتصور المناعي للفئران بيريسيتيس microvascular الشبكية و أي البرد-أقسام والجامع--يتصاعد والعزلة ناقص التوتر لشبكة الأوعية الدموية.

الملخص

بيريسيتيس الشبكية دوراً هاما في العديد من أمراض العين. المناعي تلطيخ التقنيات الشبكية السفن وميكروفاسكولار بيريسيتيس المركزي لبحوث طب العيون. من المهم أن تختار طريقة مناسبة لتصور بيريسيتيس ميكروفاسكولار. يصف لنا بيريسيتي ميكروفاسكولار الشبكية المناعي تلطيخ في البرد-أقسام وكل--يتصاعد وناقص التوتر المفرج المعزولة باستخدام الأجسام المضادة لعوامل النمو المشتقة من الصفيحات مستقبلات بيتا (PDGFRβ) والأعصاب/الدبقية مستضد 2 (NG2). وهذا يسمح لنا لتسليط الضوء على مزايا وعيوب كل من الأعمال التحضيرية ثلاثة أنسجة لتصور بيريسيتيس ميكروفاسكولار الشبكية. Cryo-أقسام تقديم التصور ترانسيكشونال من جميع طبقات الشبكية لكن تحتوي على إلا عدد قليل من التخفيضات عرضية عرضية ميكروفاسكولاتوري. الجامع-جبل يوفر لمحة عامة عن المفرج الشبكية كاملة، ولكن التصور ميكروفاسكولاتوري يمكن أن تكون مزعجة. ناقص التوتر العزل يوفر طريقة لتصور المفرج الشبكية كاملة بإزالة الخلايا العصبية، ولكن هذا يجعل الأنسجة هشة للغاية.

المقدمة

بيريسيتيس الشبكية هي تركيز العديد من مختبرات الأبحاث هذه الخلايا تلعب دوراً كبيرا في سلامة المفرج. الحالات المرضية مثل اعتلال الشبكية السكري1والاسكيمية2و3 من الزرق بخصائص الأوعية الدموية التي تنطوي على وظيفة بيريسيتيس. تم العثور على بيريسيتيس في بليكسوسيس الشعرية الشبكية الداخلية. وفروع الشريان الشبكية المركزية التي تزود الشبكية الداخلية في طبقتين من بليكسوسيس الشعرية. سرير الأوعية الداخلية يقع بين الخلية العقدة وطبقات النووية الداخلية. طبقة أعمق أكثر كثافة وتعقيداً وهو مترجم بين طبقات النووي الداخلي والخارجي4،5. وبالإضافة إلى ذلك، تحتوي بعض أجزاء من الشبكية أيضا على شبكة ثالثة تسمى الشعيرات الدموية بارابابيلاري شعاعي. هذه طويلة، مستقيم الشعيرات الدموية التي تقع بين الألياف العصبية ونادراً ما أناستوموسي مع بعضها البعض أو بليكسوسيس اثنين الأخرى6. داخل الجدار الشعرية، بيريسيتيس المضمنة في الغشاء الطابق السفلي وخط على الجانب أبلومينال من الخلايا البطانية في الأوعية الدموية.

وحتى الآن، هناك لا علامة بيولوجية فريدة من نوعها لهذه بيريسيتيس التي يمكن تمييزها عن غيرها من الخلايا والأوعية الدموية. عامل النمو المشتقة من الصفيحات مستقبلات بيتا (PDGFRβ) والأعصاب/الدبقية مستضد 2 (NG2) هي علامات شائعة الاستخدام الذي يقدم في بيريسيتيس ولكن أيضا غيرها من الخلايا والأوعية الدموية. تحديد بيريسيتيس تعقيداً بسبب وجود مجموعات فرعية بيريسيتي التي تختلف في التعبير مورفولوجيا والبروتين7. تعتمد حاليا، تحديد أفضل مزيج من علامات البروتين وتحديد المواقع المميزة من بيريسيتي في جدار الأوعية الدموية. علينا أن نظهر هنا ثلاث تقنيات إعداد الأنسجة المختلفة للمناعي تلطيخ PDGFRβ/NG2 بيريسيتيس microvascular الشبكية الفئران، أي، cryo-أقسام، الجامع--يتصاعد، وناقص التوتر العزلة شبكة الأوعية الدموية.

مع البرد-المقاطع، يتم قطع الشبكية والصلبة عن طريق العصب البصري. وهذا يسمح للتصور من جميع هياكل طبقات من الخلايا العصبية. طبقات الشبكية عشرة متميزة الظاهر كجانب تتبادل الهياكل النووية ومحواري/الجذعية التي يمكن تصور مع بقع مثل الهيماتوكسيلين/ويوزين أو الفلورسنت النووية 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI)8. تختلف متطلبات الأيض بين طبقات9 وأنه يوفر طريقة لتحديد سمك أو إجمالي غياب طبقة معينة (مثلاً، فقدان خلايا الشبكية العقدة إحدى السمات المميزة الاسكيمية الشبكية10، 11). ويتضح المفرج كما عرضية يخترق الشبكية، مما يجعل من الممكن لدراسة كل على حدة بليكسوسيس الشعرية داخل طبقات الشبكية كل منهما12،13.

أكثر تقليديا، تجري التحقيقات المتعلقة بشبكة الاتصال الشبكية المفرج في الشبكية كل--يتصاعد. مع هذا الإعداد الأنسجة، قطع شبكية العين وسويت بالأرض كبنية على شكل زهرة. الأسلوب هو أسلوب إعداد أنسجة سريعة نسبيا التي يمكن أن تسلط الضوء على المفرج الشبكية الشاملة في الهندسة المعمارية وذلك كثيرا ما تطبق في تحقيق نيوفاسكولاريزيشن في الشبكية موريني. التصور الناجح من ميكروفاسكولاتوري في الجامعة التي شنت شبكية العين يقال أيضا في وضع الماوس الولدان والفئران الشبكية14،،من1516،،من1718، 19-تكشف هذه الدراسات نشاطا بيريسيتيك أكثر تحديداً مع أكبر المناطق الخالية من شعري في الكبار مقارنة ب المواليد الشبكية14.

هو طريقة أخرى لتصور ميكروفاسكولاتوري الشبكية بعد عزلة ناقص التوتر. نتائج هذا الأسلوب إعداد الأنسجة في الأوعية الدموية الشبكية والشعيرات الدموية سراحهم من الخلايا العصبية. عادة هذا النوع من التصوير ثنائي الأبعاد لشبكة الأوعية الدموية الشبكية معزولة المنجزة بعد التربسين الشبكية الهضم20 والمستخدمة لتقييم تشوهات الأوعية الدموية اعتلال الشبكية السكري بما في ذلك فقدان بيريسيتي والشعرية تنكس20،،من2122. ويوفر طريقة العزل ناقص التوتر التحقيقات الجينات الأوعية الدموية الشبكية والاستجابات التنظيمية البروتين كما فعلوا مع RT-PCR وغرب النشاف23،،من2425. نحن نقدم هنا بروتوكولا لتلطيخ المناعي التعويم الحر للمفرج الشبكية معزولة ناقص التوتر كبديل الهضم التربسين لدراسة بيريسيتيس ميكروفاسكولار.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

البروتوكول هو الأمثل، وبرهنت على الفئران ألبينو الذكور البالغين. في جميع إجراءات تجريبية، يعاملون الحيوانات وفقا للوائح في "بيان آرفو" "استخدام الحيوانات" في أوفثالميك والرؤية للبحث. وقد euthanized الحيوانات بثاني أكسيد الكربون والتفكك عنق الرحم اللاحقة.

1-فأر نسيج الشبكية الاستعدادات

  1. قسم البرد
    1. جعل الشقوق سم من ~0.5 الأمامي والخلفي في الجفن الفئران مع مشرط.
      1. اختياري: استخدام موقد النافذة، علامة العين في الزاوية الداخلية توجيه العين بطريقة موحدة خلال التضمين والسماح لتقطيع كريوستات الرأسي من خلال العصب البصري.
    2. الاستيلاء على العين بالملقط وآماله بعناية إلى جانب تعريض الأنسجة المحيطة بها. انوكليتي العين بإجراء تخفيضات مع مقص التشريح في النسيج الضام والعضلي.
      تنبيه: لا سحب العين من الصعب جداً أن الضغط المفرط على العصب البصري قد يسبب انفصال الشبكية.
    3. وضع العين بإيجاز في 4% فورمالدهايد في مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) لتحقيق استقرار قبل القيام ثقب أولية في ليمبوس القرنية بتطبيق الضغط الخفيف بطرف مشرط.
    4. تحت مجهر، قص على طول ليمبوس القرنية مع مقص تشريح لإزالة القرنية وإزالة العدسة مع الملقط قبل غمر في 4% فورمالدهايد في برنامج تلفزيوني عن ح 2 – 4.
    5. أشطف بالتتابع في المخزن المؤقت للفوسفات في Sörensen مع السكروز 10% و 25% السكروز.
    6. تضمين في المتوسط يازولا أعد مع 3 ٪ الجيلاتين من الخنزير الزلال الجلد و 30% من البيض الدجاج.
      ملاحظة: البروتوكول يمكن أن يكون مؤقتاً هنا مع تخزين الأنسجة في-20 درجة مئوية.
  2. الجامعة-جبل
    1. جعل ~0.5 الأمامي والخلفي سم الشقوق في الجفن الفئران مع مشرط.
    2. الاستيلاء على العين بالملقط وآماله بعناية إلى جانب تعريض الأنسجة المحيطة بها. انوكليتي العين بإجراء تخفيضات مع مقص التشريح في النسيج الضام والعضلي.
      تنبيه: لا سحب العين من الصعب جداً أن الضغط المفرط على العصب البصري قد يسبب انفصال الشبكية.
    3. وضع العين بإيجاز في 4% فورمالدهايد في برنامج تلفزيوني لتحقيق استقرار قبل القيام ثقب أولية في ليمبوس القرنية بتطبيق الضغط الخفيف بطرف مشرط.
    4. تحت مجهر، قص على طول ليمبوس القرنية مع مقص تشريح إزالة القرنية وإزالة العدسة بالملقط.
    5. فصل الشبكية من ظهارة صباغ الشبكية نحو العصب البصري بالملقط باستخدام حركات فتحه صغيرة لتجنب تمزيق الرئيسية.
    6. مجاناً شبكية العين في العصب البصري مع مقص التشريح وجعل الشقوق أربعة من بضعة مليمترات طول من محيط الشبكية نحو رأس العصب البصري.
    7. تنتشر الشبكية على شريحة زجاجية والسماح للتجفيف لمدة 5 – 10 دقائق.
    8. إصلاح في 4% فورمالدهايد لمدة 20 – 30 دقيقة قبل تتساقط فورمالدهايد على شبكية العين.
      تنبيه: لا تنطبق مباشرة على الشبكية كما أنه قد فصل من الزجاج.
    9. شطف مع برنامج تلفزيوني. لتحقيق أفضل النتائج، وصمة المناعية مباشرة بعد الشطف.
  3. عزل ناقص التوتر
    1. جعل ~0.5 الأمامي والخلفي سم الشقوق في الجفن الفئران مع مشرط.
    2. الاستيلاء على العين بالملقط وآماله بعناية إلى جانب تعريض الأنسجة المحيطة بها. انوكلياتي العين بإجراء تخفيضات مع مقص التشريح في النسيج الضام والعضلي.
      تنبيه: لا سحب العين من الصعب جداً أن الضغط المفرط على العصب البصري قد يسبب انفصال الشبكية.
    3. جعل ثقب أولية في ليمبوس القرنية عن طريق تطبيق الضغط الخفيف بطرف مشرط.
    4. تحت مجهر، قص على طول ليمبوس القرنية مع مقص تشريح إزالة القرنية وإزالة العدسة بالملقط.
    5. فصل الشبكية من ظهارة صباغ الشبكية نحو رأس العصب البصري بالملقط باستخدام حركات فتحه صغيرة لتجنب تمزيق الرئيسية.
    6. مجاناً شبكية العين في العصب البصري مع مقص التشريح ووضع الشبكية في 1 مل مياه في صفيحة 24-جيدا ويهز 200 لفة في الدقيقة مع مدار اهتزاز 1.5 مم عن ح 1 في درجة حرارة الغرفة.
      ملاحظة: الآخرة، الشبكية سوف تظهر أقل المعرفة عند الحواف.
    7. إضافة 200 يو الدناز 1 ننأى بالحطام تفكيك خلية من المفرج الشبكية ويهز لآخر 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
      ملاحظة: قد تبدأ الحطام إلى النموذج في الآبار.
    8. شطف الحد الأدنى 3 مرات في المياه لمدة 5 دقائق مع الهز 150 – 300 لفة في الدقيقة لإزالة الحطام الخلايا العصبية. ينبغي أن تصبح الشبكية أكثر شفافية مع كل شطف الإرشادية لإزالة الحطام الخلوية العصبية.
      1. استخدام خلفية داكنة لننظر إلى لوحة 24-جيدا نرى بوضوح المفرج الشبكية معزولة أرقامها.
      2. (اختياري): إذا كان المفرج لا تظهر خالية من طبقات الخلايا العصبية (شبه شفاف) عند هذه النقطة أما إضافة المزيد من الخطوات شطف، زيادة سرعة الهز أو استخدام بيبيت لنضح السائل على المفرج.
        تنبيه: أما الخطوات الاختيارية التي قد تضر المفرج.
    9. إصلاح 10 دقيقة في 1 مل بارافورمالدهيد 4% في برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة وشطف 3 مرات في برنامج تلفزيوني.
      ملاحظة: البروتوكول يمكن أن يكون مؤقتاً هنا مع تخزين الأنسجة في 4 درجات مئوية.

2-إيمونوهيستوتشيميستري

  1. تلوين الأقسام البرد
    1. قطع 10 ميكرون cryo-المقاطع الشبكية جزءا لا يتجزأ من الجيلاتين تمزيقها الرأسي من خلال العصب البصري ووضع cryo-المقاطع على الشريحة الزجاجية واسمحوا جافة (الحد الأدنى ح 1).
    2. غمر الشريحة الزجاجية في برنامج تلفزيوني مع 0.25% X-100 تريتون (برنامج تلفزيوني-تي) لمدة 15 دقيقة.
    3. التنقيط 1: 100 PDGFRβ والأجسام المضادة الأساسي 1: 500 في NG2 المخفف في برنامج تلفزيوني-T + 1% جيش صرب البوسنة على المقطع البرد واحتضان في غرف الحضانة عند 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
    4. غمر الشريحة الزجاجية 2 مرات في برنامج تلفزيوني-T لمدة 15 دقيقة والتنقيط 1: 100 الماوس المضادة مرتبطة أليكسا فلور 594 و 1: 100 أرنب المضادة ربط فيتك الثانوية الأجسام المضادة المخفف في برنامج تلفزيوني-T مع جيش صرب البوسنة 3% على البرد-المقاطع.
    5. احتضان الشريحة الزجاجية ح 1 في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
    6. شطف الشريحة الزجاجية في برنامج تلفزيوني-تي 2 × 15 دقيقة.
      ملاحظة: اختياري: لتلطيخ مزدوجة وثلاثية إيمونوفلوريسسينت، تلطيخ متسلسلة يمكن تنفيذها بواسطة تكرار الإجراء من 2.1.3 إلى 2.1.6 اثنين وثلاثة مرات، على التوالي.
    7. جبل cryo-المقاطع الملون مع يتلاشى لمكافحة تصاعد DAPI تحتوي على المتوسط وساترة.
  2. تلوين كل-جبل
    1. التنقيط وبرنامج تلفزيوني-T على الجامعة-جبل واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة.
    2. من أجل إيقاف والتنقيط 1: 100 PDGFRβ والأجسام المضادة الأساسي 1: 500 في NG2 المخفف في برنامج تلفزيوني-T + 1% جيش صرب البوسنة واحتضان في غرف رطبة في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها.
    3. من أجل إيقاف والتنقيط في برنامج تلفزيوني-T شطف الشريحة الزجاجية في 2 × 15 دقيقة.
    4. من أجل إيقاف والتنقيط على 1: 100 أرنب لمكافحة Cy2-و 1: 100 الماوس المضادة مرتبطة Cy3 الثانوية جسم المخفف في برنامج تلفزيوني-T مع جيش صرب البوسنة 3% لاحتضان ح 1 في غرفة رطبة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
    5. من أجل إيقاف والتنقيط في برنامج تلفزيوني-T شطف في 2 × 15 دقيقة في الظلام.
      ملاحظة: اختياري: لتلطيخ مزدوجة وثلاثية إيممونوفلوريسسينت، تلطيخ متسلسلة يمكن تنفيذها بواسطة تكرار الإجراء من 2.2.2 إلى 2.2.5 اثنين وثلاثة مرات، على التوالي.
    6. جبل الملون كلياً-جبل مع يتلاشى لمكافحة تصاعد DAPI تحتوي على المتوسط وساترة.
  3. تلوين للمفرج معزولة ناقص التوتر
    1. كتلة المفرج معزولة ناقص التوتر ح 1 مع الهز في 100 لفة في الدقيقة ودرجة حرارة الغرفة مع 500 ميليلتر/جيدا من 10% حمار المصل المخفف في برنامج تلفزيوني.
    2. تبني بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة ويهز 100 لفة في الدقيقة مع 600 ميليلتر/البئر 1: 100 PDGFRβ وأجسام الأولية NG2 1: 500 المخفف في المصل حمار 10% في برنامج تلفزيوني.
    3. شطف الشبكية شبكة x 3 في برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق واحتضان في 1: 100 الماوس المضادة ترتبط أليكسا فلور 594 و 1: 100 أرنب المضادة ربط فيتك الثانوي الأجسام المضادة المخفف في المصل حمار 10% في برنامج تلفزيوني تهتز في 100 لفة في الدقيقة ودرجة حرارة الغرفة ح 1 في الظلام.
    4. شطف في برنامج تلفزيوني-T لمدة 5 دقائق واحتضان 0.2 نانوغرام/مل DAPI في برنامج تلفزيوني-T لمدة 15 دقيقة تليها يشطف دقيقة 3 x 5 في برنامج تلفزيوني-تي في الظلام.
    5. قص طرف بيبيت باستور البلاستيك وترطيب مع برنامج تلفزيوني-تي واستخدامه لنقل شبكة الاتصال الشبكية لشريحة دائرة زجاجية 4-جيدا.
      ملاحظة: الخطوة مويستينينج المهم تجنب المفرج الشبكية الخلاف إلى داخل بيبيت باستور.
    6. تتكشف المفرج الشبكية. تجنب لمس المفرج الشبكية مع ملقط كما يمكن أن يسبب هذا المفرج متشابكة.
      ملاحظة: تتكشف يمكن القيام به عن إمالة الشريحة الدائرة ذهابا وإيابا أو يسفط قطرات من السائل على المفرج الشبكية.
    7. إزالة المتوسطة من الآبار. التوتر السطحي للسائل سوف تتسطح المفرج على الجزء السفلي من الشريحة.
    8. ضمان تتكشف الصحيح تحت مجهر قبل إزالة البلاستيك الآبار من الشريحة الدائرة.
    9. جبل المفرج الملون مع المتوسطة يتلاشى لمكافحة تصاعد وساترة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

توفر البروتوكولات الناجحة ثلاثة استعدادات الشبكية المختلفة لتصور بيريسيتيس ميكروفاسكولار. كل من هذه الأساليب تستخدم التعريب المشارك إيمونوريكتيفيتي PDGFRβ وفي NG2 وموقف بيريسيتيس الذي يلتف حول فوريدينتيفيكيشن البطانة الشعرية الفريدة.

مع البرد-المقاطع، يمكن تحديد طبقات الخلايا العصبية الفلورسنت كثافة أنوية المسمى DAPI والداخلية وبليكسوسيس الشعرية العميقة تحتوي على بيريسيتيس التي تعرض إيممونوريكتيفيتي PDGFRβ وفي NG2 (

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نحن نقدم ثلاث تقنيات إعداد الشبكية التي يمكن تطبيقها في دراسة ميكروفاسكولار بيريسيتيس الشبكية. فيما يلي، نقدم مقارنة بين كل من الطرق وتسليط الضوء على الخطوات الحاسمة في البروتوكولات.

مع تقطيع البرد، هو قطع الشبكية في أقسام السهمي و ومن ثم فإنه من الممكن الحصول على عينات عديدة من الشبكية نفسها. المقاطع الأرقام الناتجة عن هذا الأسلوب جعله خياراً مثاليا لخصوصية جسم واختبار المعايرة كما أنه يمنع التضحية الحيوانية لا لزوم لها. الأعمال التحضيرية حاسمة بالنسبة لنتائج جيدة. من الأهمية بمكان حين تشريح ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

الأبحاث بتمويل من مؤسسة Lundbeck، الدانمرك.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الجيلتين من جلد الخنازيرSigma-AldrichG2625-500G
الألبومين من بياض بيض الدجاجSigma-AldrichA5253-500G
Deoxyribonuclease (DNAse) I من البنكرياس البقريSigma-AldrichD5025-15KUمذاب في 0.15 M كلوريد
الصوديوم ألبومين مصل البقر (BSA)VWR0332-100G
مصل الحمارالعادي جاكسون ImmunoResearch017-000-121 ، الكثير 129348
الأرنب المضاد ل PDGFR & beta ؛سانتا كروزsc-4321:100
ماوس مضاد ل NG2Abcamab500091:500
Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgGJackson ImmunoResearch711-585-1521:100
Fluorescein (FITC) AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H + L) JacksonImmunoResearch715-095-1511:100
Cy2 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H + L)Jackson ImmunoResearch711-225-1521:100
Cy3 AffiniPure Donkey المضاد للفأر IgG (H + L) JacksonImmunoResearch715-165-1501:100
4'، 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)Sigma-AldrichD9542-1MGمذاب في DMSO
مضاد للبهتان تصاعد متوسطمختبرات ناقلاتH-1000
وسيط تركيب مضاد للبهتان مع DAPIVector مختبراتH-1200
Nunc Lab-Tek II شريحة غرفة 4 آبارThermo Fisher Scientific154526

المراجع

  1. Eshaq, R. S., Aldalati, A. M. Z., Alexander, J. S., Harris, N. R. Diabetic retinopathy: Breaking the barrier. Pathophysiology. , (2017).
  2. Cai, W., et al. Pericytes in Brain Injury and Repair After Ischemic Stroke. Translational Stroke Research. , (2016).
  3. Trost, A., et al. Brain and Retinal Pericytes: Origin, Function and Role. Frontiers in Cellular Neuroscience. 10, 20(2016).
  4. Ramos, D., et al. The Use of Confocal Laser Microscopy to Analyze Mouse Retinal Blood Vessels. Confocal Laser Microscopy - Principles and Applications in Medicine, Biology, and the Food Sciences. Lagali, N. , InTech. (2013).
  5. Moran, E. P., et al. Neurovascular cross talk in diabetic retinopathy: Pathophysiological roles and therapeutic implications. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiolog. 311, H738-H749 (2016).
  6. Henkind, P. Microcirculation of the peripapillary retina. Transactions - American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 73, 890-897 (1969).
  7. Attwell, D., Mishra, A., Hall, C. N., O'Farrell, F. M., Dalkara, T. What is a pericyte? Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 36, 451-455 (2016).
  8. Fernandez-Bueno, I., et al. Histologic Characterization of Retina Neuroglia Modifications in Diabetic Zucker Diabetic Fatty Rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58, 4925-4933 (2017).
  9. Yu, D. -Y., Yu, P. K., Cringle, S. J., Kang, M. H., Su, E. -N. Functional and morphological characteristics of the retinal and choroidal vasculature. Progress in Retinal and Eye Research. 40, 53-93 (2014).
  10. Allen, R. S., et al. Severity of middle cerebral artery occlusion determines retinal deficits in rats. Experimental Neurology. 254, 206-215 (2014).
  11. Kyhn, M. V., et al. Acute retinal ischemia caused by controlled low ocular perfusion pressure in a porcine model. Electrophysiological and histological characterisation. Experimental Eye Research. 88, 1100-1106 (2009).
  12. Blixt, F. W., Radziwon-Balicka, A., Edvinsson, L., Warfvinge, K. Distribution of CGRP and its receptor components CLR and RAMP1 in the rat retina. Experimental Eye Research. 161, 124-131 (2017).
  13. Sarlos, S., Wilkinson-Berka, J. L. The renin-angiotensin system and the developing retinal vasculature. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 46, 1069-1077 (2005).
  14. Wittig, D., Jaszai, J., Corbeil, D., Funk, R. H. W. Immunohistochemical localization and characterization of putative mesenchymal stem cell markers in the retinal capillary network of rodents. Cells Tissues Organs. 197, 344-359 (2013).
  15. Tual-Chalot, S., Allinson, K. R., Fruttiger, M., Arthur, H. M. Whole mount immunofluorescent staining of the neonatal mouse retina to investigate angiogenesis in vivo. Journal of Visualized Experiments. , e50546(2013).
  16. Park, D. Y., et al. Plastic roles of pericytes in the blood-retinal barrier. Nature Communications. 8, 15296(2017).
  17. Hughes, S., Chan-Ling, T. Characterization of smooth muscle cell and pericyte differentiation in the rat retina in vivo. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45, 2795-2806 (2004).
  18. Lange, C., et al. Intravitreal injection of the heparin analog 5-amino-2-naphthalenesulfonate reduces retinal neovascularization in mice. Experimental Eye Research. 85, 323-327 (2007).
  19. Higgins, R. D., et al. Diltiazem reduces retinal neovascularization in a mouse model of oxygen induced retinopathy. Current Eye Research. 18, 20-27 (1999).
  20. Chou, J. C., Rollins, S. D., Fawzi, A. A. Trypsin digest protocol to analyze the retinal vasculature of a mouse model. Journal of Visualized Experiments. , e50489(2013).
  21. Hazra, S., et al. Liver X receptor modulates diabetic retinopathy outcome in a mouse model of streptozotocin-induced diabetes. Diabetes. 61, 3270-3279 (2012).
  22. Zhang, L., Xia, H., Han, Q., Chen, B. Effects of antioxidant gene therapy on the development of diabetic retinopathy and the metabolic memory phenomenon. Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253, 249-259 (2015).
  23. Dagher, Z., et al. Studies of rat and human retinas predict a role for the polyol pathway in human diabetic retinopathy. Diabetes. 53, 2404-2411 (2004).
  24. Navaratna, D., McGuire, P. G., Menicucci, G., Das, A. Proteolytic degradation of VE-cadherin alters the blood-retinal barrier in diabetes. Diabetes. 56, 2380-2387 (2007).
  25. Gustavsson, C., et al. Vascular cellular adhesion molecule-1 (VCAM-1) expression in mice retinal vessels is affected by both hyperglycemia and hyperlipidemia. PLoS One. 5, e12699(2010).
  26. Kornfield, T. E., Newman, E. A. Regulation of blood flow in the retinal trilaminar vascular network. Journal of Neuroscience. 34, 11504-11513 (2014).
  27. Puro, D. G. Retinovascular physiology and pathophysiology: new experimental approach/new insights. Progress in Retinal and Eye Research. 31, 258-270 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

PDGFR beta NG2
البرد الشبكية-الفروع، الجامع--يتصاعد، والتحضيرات ناقص التوتر المفرج معزولة للتصور المناعي من بيريسيتيس ميكروفاسكولار
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.