مقالة منهجية

تقييم دور الوظيفة المتقدرية في التعب المتصلة بالسرطان

DOI:

10.3791/57736

⸱

مايو 17, 2018

 ,  ,  , 
1National Institute of Nursing Research, National Institutes of Health

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أن هدفنا وضع بروتوكول عملي لتقييم خلل mitochondrial المرتبطة بالتعب في مرضى السرطان. هذا البروتوكول المبتكرة هو الأمثل بالفصاده فقط القياسية التي تشمل الاستخدام السريري والإجراءات المختبرية الأساسية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعب هي مشتركة وموهنة شرط أن يؤثر على معظم مرضى السرطان. وحتى الآن، اختبار التعب تظل ضعيفة تتسم لا تشخيص موضوعيا قياس شدة هذا الشرط. هنا يصف لنا أسلوب أمثل لتقييم الوظيفة المتقدرية من ببمكس التي جمعت من مرضى السرطان يعانون من الإجهاد. باستخدام نظام الجريان خارج الخلية المدمجة وحقن متسلسلة من مثبطات الجهاز التنفسي، قمنا بفحص الحالة الوظيفية المتقدرية PBMC بقياس التنفس المتقدرية القاعدية، وقطع غيار القدرات التنفسية، والنمط الظاهري في الطاقة، الذي يصف مسار الطاقة المفضل الاستجابة للتأكيد. ببمكس الطازجة متوفرة بسهولة في الإعداد السريرية باستخدام ضمادة القياسية. فحص كامل الموصوفة في هذا البروتوكول يمكن أن تكتمل في أقل من 4 ساعات دون مشاركة التقنيات الكيميائية الحيوية المعقدة. بالإضافة إلى ذلك، يصف لنا طريقة تطبيع ما ضروري للحصول على البيانات القابلة لإعادة الإنشاء. الأساليب الإجرائية وتطبيع بسيطة عرضت السماح لجمع العينات المتكررة من نفس المريض وجيل من استنساخه من البيانات التي يمكن مقارنتها بين النقاط الزمنية لتقييم آثار العلاج المحتملة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعب هو شرط انتشارا والمؤلم أن يخلف أثرا سلبيا على نوعية الحياة ل مرضى السرطان1. حتى هذا التاريخ، ما زال غير المحددة بوضوح التعب السرطان وتعتمد فقط على التقارير الذاتية بالمرضى2. ولذلك، هناك حاجة ملحة لتحديد اختبار تشخيص المختبري يمكن تكييفها بسهولة لموضوعي تميز التعب في الإعداد السريرية3،4.

واقترحت الآليات الكامنة متعددة، بما في ذلك خلل الميتوكوندريا، تسبب التعب5. الميتوكوندريا هي العضيات قوة، توفير 95 في المائة احتياجات الطاقة الخلوية عن طريق الفسفرة، وتلعب دوراً هاما في إشارات الكالسيوم والمبرمج، مما يشير إلى المناعة وتنظيم أحداث أخرى داخل الخلايا مما يشير إلى6 . وبناء على ذلك، قد يسهم الاستقلاب المتقدرية البصر والعيوب في إنتاج الطاقة التعب. دعم هذه الفرضية، لاحظنا الدراسات السابقة طفرات في الحمض النووي في المرضى الذين يعانون من متلازمة التعب المزمن7. في حين أنه لم يتضح بعد ما إذا كان أصل الفيزيولوجية المرضية للتعب يكمن داخل الجهاز العصبي المركزي أو في الأنسجة المحيطية، مثل عضلات الهيكل العظمى8،9، يوجد حاليا لا توجد طريقة مباشرة إجراء تقييم دقيق خلل mitochondrial المتصلة بالتعب في الخلايا الحية، ريسبيرينج.

ويوفر العديد من المزايا باستخدام خلايا الدم المحيطية وحيدات النوى (ببمكس) لدراسة الوظيفة المتقدرية. أولاً، ببمكس متوفرة بسهولة في الإعداد السريرية باستخدام ضمادة القياسية، ويمكن أن تكون معزولة بسرعة باستخدام التقنيات المختبرية الأساسية. وثانيا، جمع الدم أقل الغازية من جمع أنسجة أخرى مثل خزعة العضلات. وهكذا، عينات الدم يمكن جمعها من المريض نفسه مرارا وتكرارا على مر الزمن، مما يسهل تقييم طولية من آثار العلاج. من المثير للاهتمام، يبدو الوظيفة المتقدرية في ببمكس يكون ارتباطاً جيدا مع مركز الكلي المتقدرية في نموذج حيوان10. وعلاوة على ذلك، استخدمت الميتوكوندريا الخلايا المناعية كوكيل للكشف عن التغييرات النظامية تحت المرض مختلف الظروف11،12. الميتوكوندريا في تعميم الخلايا المناعية خاصة حساسة للتغيرات في وظائف المناعة والمناعة مما يشير إلى جزيئات مثل السيتوكينات13،،من1415. على سبيل المثال، لوحظ أن ببمكس من المرضى الذين يعانون من أمراض التهابات الروماتيزمية الحادة يحمل الأساس ارتفاع استهلاك الأوكسجين14. وفي المقابل، انخفض استهلاك الأكسجين في ببمكس المعزولة من المرضى مع الجهازية الظروف الملتهبة بما في ذلك الانتان16. تحت ظروف التحريضية، والجذور الحرة التي تنتجها الميتوكوندريا مختلة قد يسهم مرتفعة الأكسدة والالتهاب المطول17. الدور المركزي الميتوكوندريا في إنتاج الطاقة فضلا عن الأكسدة يوحي بالفائدة المحتملة من استخدام الوظيفة المتقدرية كوكيل لدراسة التعب في مرضى السرطان 13.

الدراسات السابقة دراسة الوظيفة المتقدرية تستخدم تقنيات الكيمياء الحيوية، قياس محتمل غشاء الميتوكوندريا أو عزل السكان خلية معينة قد لا تكون سهولة التكيف في الإعداد السريرية5، 14،18. في السنوات الأخيرة، وضع فحوصات الجريان خارج الخلية قد أتاح الباحثون بسهولة ودقة دراسة التغيرات في معدل استهلاك الأوكسجين (OCR) استجابة للحقن الآلي لمثبطات الجهاز التنفسي19،20 , 21 , 22-ومع ذلك، صممت معظم هذه الدراسات لأنواع محددة من الخلايا وقد لا تنطبق في إعداد سريرية شكل كبير الفائق. في هذه المخطوطة، يصف لنا بروتوكولا أمثل لدراسة الوظيفة المتقدرية للاستخدام السريري.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على الدراسة الحالية (NCT00852111) بالمؤسسية استعراض المجلس (مجلس الهجرة واللاجئين) للوطنية معاهد للصحة (المعاهد الوطنية للصحة)، بيثيسدا، ماريلاند. المشاركين المسجلين في هذه الدراسة من الرجال يوثيميك، 18 سنة من العمر أو الأكبر سنا، الذين تم تشخيص سرطان البروستاتا غير المنتشر مع أو بدون عملية استئصال غدة البروستاتا السابقة، وكان من المقرر أن تتلقى العلاج الإشعاعي شعاع خارجي (إبرت). تم استبعاد المشاركين المحتملين إذا كان لديهم مرض تقدمية التي يمكن أن تسبب التعب الكبير، كان المرض النفسي خلال السنوات الخمس الماضية، كان الغدة الدرقية التي لم يتم تصحيحها أو فقر الدم، أو كانت خبيثة ثانية. كما تم استبعاد الأفراد الذين استخدموا المهدئات أو المنشطات أو العوامل المضادة للالتهابات غير الستيرويدية. تم الحصول على عينات الدم مراقبة صحية في الطب "إدارة المعاهد الوطنية للصحة لنقل الدم" من المانحين صحي إطار بروتوكول وافق مجلس الهجرة واللاجئين (NCT00001846). يتم تجنيد جميع المشاركين في مركز الأبحاث الإكلينيكية ماغنوسون في المعاهد الوطنية للصحة. وتم الحصول على الموافقات المستنيرة الخطية الموقعة قبل المشاركة في الدراسة.

1. إعداد قياس الوظيفة المتقدرية (اليوم الأول من التجربة)

  1. هيدرات "خرطوشة الاستشعار" (انظر الجدول للمواد؛ تقريب المدة: 5 دقائق).
    1. قم بإزالة "خرطوشة استشعار" من الحزمة. إضافة 200 ميكروليتر كاليبرانت الحل في كل بئر من لوحة الأداة، ثم ملء كل الخندق مع 400 من حل كاليبرانت ميكروليتر.
    2. لوحة أجهزة الاستشعار العودة إلى لوحة الأداة، التي أصبحت الآن حل كاليبرانت في ذلك. هيدرات الخرطوشة في حاضنة 37 درجة مئوية غير CO2 بين عشية وضحاها.
      ملاحظة: خرطوشة استشعار يحتاج إلى أن يكون رطب للحد ني ح 4 وأقصاها 72 ساعة.

2. إعداد نموذج السريرية (اليوم 2 من التجربة)

  1. قياس التعب استخدام البند 13 "الوظيفية تقييم من المزمن المرض العلاج"-التعب (FACIT-F)2،23،24 في خط الأساس (قبل بدء إبرت) ونقطة الوسط وإنجاز إبرت، ووظيفة 1-السنة-إبرت.
    1. استخدم 0-4 مقياس لكل استجابة البند، حيث يمثل 0 "لا على الإطلاق" و 4 يشير إلى أن المدعي عليه يتصل بالمقابلة بيان "كثيرا." يجب أن تتراوح إجمالي عشرات من 16-53، مع عشرات أقل مما يعكس كثافة عالية من التعب.
    2. تعريف التعب كنقاط FACIT-F أقل من 43، مع نقاط FACIT إف من إيه فور ثري التي تشير إلى غياب أو التعب لا سريرياً-معنى2.
      ملاحظة: درجة FACIT-و 43 أفضل يقسم التعب العشرات من مرضى السرطان و السكان عامة2.
    3. تتضمن البنود 13 التالية في الجدول التعب FACIT: 1) أشعر بالتعب؛ 2) أشعر بضعف جميع أنحاء؛ 3) أشعر فاتر ("جرفت")؛ 4) أشعر بالتعب؛ 5) لدى مشكلة عند بدء تشغيل الأشياء لأنني تعبت؛ 6) أجد صعوبة في إنهاء الأمور لأنني متعب؛ 7) لدى الطاقة؛ 8) وأنا قادرة على القيام بالأنشطة المعتادة بلدي؛ 9) لست بحاجة إلى النوم أثناء النهار؛ 10) أنا متعب جداً لتناول الطعام؛ 11) أحتاج إلى مساعدة في القيام بالأنشطة المعتادة بلدي؛ 12) أنا محبط من يجري متعب جداً للقيام بالأشياء التي أريد القيام به؛ و 13) يجب أن يحد من نشاطي الاجتماعي لأنني متعب.
  2. عزل ببمك من عينات الدم التي جمعت حديثا (التقريبي المدة: ح 1).
    1. جمع 8 مل دم إلى "أنبوب إعداد الخلايا وحيدات النوى" (انظر الجدول للمواد).
      ملاحظة: ينبغي تجهيز عينات الدم ضمن ح 2 من المجموعة. نوعية ببمكس قد تتعرض للخطر في حالة معالجة عينات الدم أكثر من 2 ح بعد جمع العينات.
    2. الطرد المركزي في 1,750 س ز لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (18-25 درجة مئوية). نقل الطبقة غائم إلى أنبوب مخروطي 15 مل. إضافة إلى 15 مل من برنامج تلفزيوني وعكس 5 مرات.
    3. الطرد المركزي في 300 x ز لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية. بعناية إزالة وتجاهل المادة طافية دون بيليه مثيرة للقلق. إعادة تعليق بيليه عن طريق إضافة إلى 10 مل برنامج تلفزيوني، وعكس 5 مرات.
    4. أجهزة الطرد المركزي في 300 x ز لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية. تجاهل السائل طافية وتعليق إعادة الخلايا في 1 مل برنامج تلفزيوني. نقل ببمكس 1.5 مل [ميكروفوج] أنابيب.
    5. الطرد المركزي في 610 x ز لمدة 10 دقائق. بعناية إزالة المادة طافية وريسوسبيند بيليه في 1640 RPMI كاملة (ربمي-1640 تستكمل مع 10% FBS، 10 مم البنسلين/ستربتوميسين).
  3. معطف ألواح الخلية للخلايا غير ملتصقة (التقريبي المدة: 30 دقيقة).
    1. إعداد حل التصاق الخلايا والأنسجة (انظر الجدول للمواد) بتمييع الحل الأسهم في بيكربونات الصوديوم 0.1 M pH 8.0. ينبغي أن يكون الحل العامل في 3.5 ميكروغرام/سم2 من المساحة السطحية.
      ملاحظة: يتضمن هذا الحل بوليفينوليك البروتينات المستخرجة من بلح البحر البحرية، Mytilus edulis. هذه البروتينات هي المكونات الرئيسية للغراء يفرزها بلح البحر لترسيخ نفسها على الأسطح. ونجد أن الخلية-تاك يعمل بشكل الأفضل مع ببمكس.
    2. إضافة 100 ميكروليتر من الحل لاصقة المخفف لكل بئر واحتضان لمدة 20 دقيقة على الأقل في درجة حرارة الغرفة. تغسل ثلاث مرات مع دي الماء والهواء الجاف.

3. قياس الوظيفة المتقدرية

  1. إعداد "مقايسة وسائط الإعلام" (التقريبي المدة: 10 دقيقة).
    ملاحظة: تحليل وسائل الإعلام يجب أن يكون طازج اليوم من التجربة.
    1. إضافة لام الجلوتامين، بيروفات، والجلوكوز قاعدة الوسائط (مكونات نفسه كالمتوسطة (دميم "تعديل النسر" دولبيكو)، ولكن دون أي بيكربونات الصوديوم أو السكر، الجلوتامين، أو بيروفات صوديوم) جعل وسائل الإعلام المقايسة. الاحماء وسائل الإعلام إلى 37 درجة مئوية، ثم ضبط pH إلى 7.4.
      ملاحظة: تركيزات لام الجلوتامين، بيروفات، والسكر هي عادة نفس التركيزات في وسائط النمو العادي، ولكن يمكن تعديلها استناداً المقايسة.
  2. إعداد ببمكس لاختبار "الإجهاد ميتو" (التقريبي المدة: ح 2).
    1. لوحة ببمكس ما يكفي من الخطوة 2 في كل بئر تصل إلى 80-90% كونفلوينسي. في تجربتنا، 1.5 × 105 خلايا/بئر نتائج أكثر اتساقا.
      ملاحظة: آبار A و H هي آبار الخلفية وينبغي إلا تحتوي وسائط المقايسة مع أي من الخلايا. في الآبار ب ز، نوصي بالطلاء على الأقل 3-6 آبار كل عينة المريض لحساب القيم المتطرفة.
    2. تدور لوحات أسفل في 200 غ س ل 2 دقيقة للسماح للخلايا على التمسك بالجزء السفلي من الآبار. تغسل الخلايا مرة واحدة مع وسائل الإعلام المقايسة. هذه الخطوة إزالة المصل وبيكربونات الصوديوم من وسائط النمو.
      ملاحظة: في تجربتنا، خطوة الغسيل عادة إلى إزالة 20-30 ٪ خلايا.
    3. إضافة ميكروليتر 180 مقايسة وسائط الإعلام في كل بئر، بما في ذلك الآبار الخلفية A و H. إينكوباتي في حاضنة غير CO2 37 درجة مئوية لمدة 45-60 دقيقة.
  3. تشغيل اختبار الإجهاد ميتو
    1. إعادة تشكيل المخدرات في "الطقم الإجهاد ميتو" بمقايسة وسائط الإعلام على النحو التالي:
      1. أوليجوميسين: إضافة ميكروليتر 252 مقايسة وسائط الإعلام إلى القنينة لإنشاء حل أسهم في 50 ميكرومتر.
      2. فككب: إضافة ميكروليتر 288 مقايسة وسائط الإعلام إلى القنينة لإنشاء حل أسهم في 50 ميكرومتر.
      3. أنتيميسين A/والروتينون: ميكروليتر 216 إضافة وسائط المقايسة إلى القنينة لإنشاء حل أسهم في 25 ميكرومتر.
    2. أعيد دوامة المخدرات لحوالي 1 دقيقة. تضعف إلى حلول العامل.
      ملاحظة: تركيزات الحلول العامل ينبغي أن تكون معاير وتحدد مسبقاً قبل التجربة تبعاً لنوع الخلية. ببمكس، نجد أن 1 ميكرومتر من أوليجوميسين و 1 ميكرو فككب 0.5 ميكرو أنتيميسين A/والروتينون عمل الأفضل.
    3. "الماصة؛" المخدرات في كل منفذ في خرطوشة استشعار تسلسلياً:
      1. ج: منفذ ماصة 20 ميكروليتر من 10 ميكرو أوليجوميسين، لتركيز نهائي في كل بئر من 1 ميكرومتر.
      2. المنفذ b: 22 ماصة ميكروليتر من 10 ميكرو فككب، لتركيز نهائي في كل بئر من 1 ميكرومتر.
      3. جيم: المنفذ 25 ماصة ميكروليتر من 5 ميكرومترات أنتيميسين A/والروتينون لتركيز نهائي في كل بئر من 0.5 ميكرومتر.
  4. حدد "اختبار الإجهاد ميتو" على أداة التمويه خارج الخلية. اتبع موجه الصك وإدراج خرطوشة الاستشعار. سيتم تنفيذ الصك تلقائياً معايرة أجهزة الاستشعار. إدراج لوحة الخلية بعد معايرة أجهزة الاستشعار، وهذا الصك سوف تنتهي بقية المقايسة. يتم قياس ديناميات الأكسجين في 530 نانومتر (الإثارة)/650nm (الانبعاث)، وهو قياس تركيز البروتون في 470 نانومتر (الإثارة)/530 نانومتر (الانبعاث).

4-تطبيع البيانات الوظيفة المتقدرية

  1. إعداد حل "خلية انتشار المقايسة" (التقريبي المدة: 5 دقائق).
    1. إضافة 48 ميكروليتر الحمض النووي وصمة عار (س 500) وميكروليتر 240 خلفية القامع لمل 11.7 PBS (2 x). وصمة الحمض النووي صبغة الحمض النووي ملزم خلية بيرمينت، والقامع الخلفية هو صبغة تقنيع الذي يمنع الخلايا الميتة أو الخلايا مع سلامة غشاء الخلية الشبهة من يجري الملون. ويضمن الجمع بين صبغ الحمض النووي ملزم والقامع الخلفية أن الخلايا الحية فقط ملطخة.
    2. إضافة تساوي حجم 2 × الحل العامل (180 ميكروليتر) مباشرة في المتوسط في كل بئر بعد اكتمال "اختبار الإجهاد ميتو".
  2. احتضان الخلايا حضور خلية انتشار المقايسة الحل في حاضنة 37 درجة مئوية على 45-60 دقيقة كوانتيفي عدد الخلايا الحية (الفلورسنت) على قارئ لوحة في 508 نانومتر (الإثارة)/527 نيوتن متر (الانبعاث) وتطبيع البيانات التعرف الضوئي على الحروف (التقريبي المدة: 10 دقيقة) .
    ملاحظة: بالإضافة إلى عدد الخلايا الحية، المستخدمين قد أيضا اختيار تطبيع البيانات الخاصة بهم مع العدد الإجمالي للخلايا، وكمية من الحمض النووي، وتركيزات البروتين، إلخ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اختبار الإجهاد ميتو يعتمد على قياس معدل استهلاك الأوكسجين (OCR) بعد حقن متسلسلة من مثبطات الجهاز التنفسي المختلفة لتعيين ملف تعريف المتقدرية كاملة. القياسات التعرف الضوئي على الحروف بعد كل حقن المخدرات يمكن استخدامها لحساب المعلمات التالية ذات الصلة بالصحة المتقدرية: تقاس القاعدية التعرف الضوئي على الحروف أولاً قبل أي حقن المخدرات لتقييم استهلاك الأوكسجين اللازم للوفاء بالراحة مستوى ATP الطلب. ويحسب بطرح معدل التنفس غير الميتوكوندريا من الأساس التعرف الضوئي على الحروف قبل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعب في مرضى السرطان هو شرط منهكة التي ليست محددة بشكل جيد، أو وصف1. تشخيص التعب تتوقف كلياً على الإبلاغ الذاتي، ولا يوجد المعيار الحالي للتشخيص أو العلاج لهذا الشرط، إلى حد كبير بسبب عدم فهم في بل2. من الآليات المقترحة التي تقوم عليها التعب في مرضى السرطان، ضعف في الوظيفة المتقدرية واحد من المسارات الأكثر علاجية استهدافها. ولذلك، قمنا بتطوير طريقة سريعة وعملية لقياس الوظيفة المتقدرية في العينات السريرية التي يمكن استخدامها لتحديد المرضى المعرضين للخطر لتطوير السرطان السمي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه الدراسة معتمد بشكل كامل "شعبة البحوث الداخلية" للمعهد الوطني للتمريض البحث من المعاهد الوطنية للصحة، بيثيسدا، ماريلاند.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

أنبوب BD

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
تحضير الخلايا أحادية النواة CPT Biosciences362761لعزل PBMCs بعد الفصد
RPMI-1640   ؛Corning10-040لصنع وسائط النمو ل PBMCs
مصل الأبقار الجنينية (FBS) Corning35-010-CVلصنع وسائط النمو ل PBMCs
Penicillin / StreptomycinThermoFisher15140122لصنع وسائط النمو ل PBMCs
Cell-TakCorning354240محلول لاصق للخلايا والأنسجة ؛ يسمح لخلايا التعليق بالالتصاق بالسطح
Seahorse XF Caliberrant SolutionAgilent103059-000لخراطيش الترطيب
XFp Fluxpak (الألواح الصغيرة وخراطيش المستشعرات)Agilent103022-100يحتوي على ألواح صغيرة لزراعة الخلايا XFp وخراطيش استشعار وسائط
قاعدة XFAgilent103335-100لصنع وسائط فحص XF
45٪ زراعة الخلايا D- (+) - محلول الجلوكوزCorning25-037-CIلصنع XF الفحص وسائل
الإعلام محلول بيروفات الصوديومCorning 25-000-CIلصنع وسائط فحص XF
محلول L-glutamineThermoFisher25030081 لصنع وسائط فحص XF
Seahorse XFp Mito Stress TestKit Agilent103010-100يحتوي على oligomycin و FCCP و antimycin A / rotenone
CyQUANT مقايسة انتشار الخلايا المباشرةThermoFisherC35011لتقدير الخلايا الحية وتطبيع البيانات
Seahorse XFp AnalyzerAgilentS7802AEAلقياس وظيفة الميتوكوندريا في الخلايا الحية
Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode Reader (أو أي أداة يمكنها تحديد الخلايا الفلورية في لوحة)BioTekBTCYT5PVلقياس الخلايا الحية وتطبيع البيانات

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Berger, A. M., et al. Cancer-Related Fatigue, Version 2.2015. Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 13 (8), 1012-1039 (2015).
  2. Feng, L. R., Dickinson, K., Kline, N., Saligan, L. N. Different phenotyping approaches lead to dissimilar biologic profiles in men with chronic fatigue following radiation therapy. Journal of Pain and Symptom Management. 52 (6), 832-840 (2016).
  3. Feng, L. R., et al. Clinical Predictors of Fatigue in Men With Non-Metastatic Prostate Cancer Receiving External Beam Radiation Therapy. Clinical Journal of Oncology Nursing. 19 (6), 744-750 (2015).
  4. Feng, L. R., Wolff, B. S., Lukkahatai, N., Espina, A., Saligan, L. N. Exploratory Investigation of Early Biomarkers for Chronic Fatigue in Prostate Cancer Patients Following Radiation Therapy. Cancer Nursing. 40 (3), 184-193 (2017).
  5. Myhill, S., Booth, N. E., McLaren-Howard, J. Chronic fatigue syndrome and mitochondrial dysfunction. International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 2 (1), 1-16 (2009).
  6. Pernas, L., Scorrano, L. Mito-Morphosis: Mitochondrial Fusion, Fission, and Cristae Remodeling as Key Mediators of Cellular Function. Annual Review of Physiology. 78 (1), 505-531 (2016).
  7. Vecchiet, L., et al. Sensory characterization of somatic parietal tissues in humans with chronic fatigue syndrome. Neuroscience Letters. 208 (2), 117-120 (1996).
  8. Jones, D. E. J., Hollingsworth, K. G., Taylor, R., Blamire, A. M., Newton, J. L. Abnormalities in pH handling by peripheral muscle and potential regulation by the autonomic nervous system in chronic fatigue syndrome. Journal of Internal Medicine. 267 (4), 394-401 (2010).
  9. Feng, L. R., Suy, S., Collins, S. P., Saligan, L. N. The role of TRAIL in fatigue induced by repeated stress from radiotherapy. Journal of Psychiatric Research. 91, 130-138 (2017).
  10. Karamercan, M. A., et al. Can peripheral blood mononuclear cells be used as a proxy for mitochondrial dysfunction in vital organs during hemorrhagic shock and resuscitation. Shock. 40 (6), (2013).
  11. Ijsselmuiden, A. J. J., et al. Circulating white blood cells and platelets amplify oxidative stress in heart failure. Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine. 5, 811(2008).
  12. Kong, C. -W., et al. Leukocyte mitochondrial alterations after cardiac surgery involving cardiopulmonary bypass: Clinical correlations. Shock. 21 (4), 315-319 (2004).
  13. Straub, R. H. The brain and immune system prompt energy shortage in chronic inflammation and ageing. Nature Reviews Rheumatology. 13, 743(2017).
  14. Kuhnke, A., Burmester, G., Krauss, S., Buttgereit, F. Bioenergetics of immune cells to assess rheumatic disease activity and efficacy of glucocorticoid treatment. Annals of the Rheumatic Diseases. 62 (2), 133-139 (2003).
  15. Kramer, P. A., Ravi, S., Chacko, B., Johnson, M. S., Darley-Usmar, V. M. A review of the mitochondrial and glycolytic metabolism in human platelets and leukocytes: Implications for their use as bioenergetic biomarkers. Redox Biology. 2, Supplement C 206-210 (2014).
  16. Garrabou, G., et al. The Effects of Sepsis on Mitochondria. The Journal of Infectious Diseases. 205 (3), 392-400 (2012).
  17. Mittal, M., Siddiqui, M. R., Tran, K., Reddy, S. P., Malik, A. B. Reactive oxygen species in inflammation and tissue injury. Antioxidants & Redox Signaling. 20 (7), 1126-1167 (2014).
  18. Adrie, C., et al. Mitochondrial Membrane Potential and Apoptosis Peripheral Blood Monocytes in Severe Human Sepsis. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164 (3), 389-395 (2001).
  19. Traba, J., Miozzo, P., Akkaya, B., Pierce, S. K., Akkaya, M. An optimized protocol to analyze glycolysis and mitochondrial respiration in lymphocytes. Journal of Visualized Experiments. (117), e54918(2016).
  20. Nicholls, D. G., et al. Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells. Journal of Visualized Experiments. (46), e2511(2010).
  21. Van den Bossche, J., Baardman, J., de Winther, M. P. J. Metabolic characterization of polarized M1 and M2 bone marrow-derived macrophages using real-time extracellular flux analysis. Journal of Visualized Experiments. (105), e53424(2015).
  22. Boutagy, N. E., et al. Using isolated mitochondria from minimal quantities of mouse skeletal muscle for high throughput microplate respiratory measurements. Journal of Visualized Experiments. (104), e53216(2015).
  23. Yellen, S. B., Cella, D. F., Webster, K., Blendowski, C., Kaplan, E. Measuring fatigue and other anemia-related symptoms with the Functional Assessment of Cancer Therapy (FACT) measurement system. Journal of Pain and Symptom Management. 13 (2), 63-74 (1997).
  24. Yost, K. J., Eton, D. T., Garcia, S. F., Cella, D. Minimally important differences were estimated for six Patient-Reported Outcomes Measurement Information System-Cancer scales in advanced-stage cancer patients. Journal of Clinical Epidemiology. 64 (5), 507-516 (2011).
  25. Kang, J. -G., Wang, P. -y, Hwang, P. M. Methods in Enzymology. Galluzzi, L., Kroemer, G. 542, Academic Press. 209-221 (2014).
  26. Chacko, B. K., et al. Methods for defining distinct bioenergetic profiles in platelets, lymphocytes, monocytes, and neutrophils, and the oxidative burst from human blood. Laboratory Investigation. 93 (6), 690-700 (2013).
  27. Jones, L. J., Gray, M., Yue, S. T., Haugland, R. P., Singer, V. L. Sensitive determination of cell number using the CyQUANT® cell proliferation assay. Journal of Immunological Methods. 254 (1), 85-98 (2001).
  28. Hartman, M. -L., et al. Relation of mitochondrial oxygen consumption in peripheral blood mononuclear cells to vascular function in type 2 diabetes mellitus. Vascular Medicine. 19 (1), London, England. 67-74 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Mitochondrial FunctionCancer FatiguePBMC IsolationExtracellular FluxMito Stress TestSpare Respiratory CapacityBasal RespirationOligomycin FCCPAntimycin RotenoneCell Proliferation Assay

مقالات ذات صلة