تقييم دور الوظيفة المتقدرية في التعب المتصلة بالسرطان

Summary

أن هدفنا وضع بروتوكول عملي لتقييم خلل mitochondrial المرتبطة بالتعب في مرضى السرطان. هذا البروتوكول المبتكرة هو الأمثل بالفصاده فقط القياسية التي تشمل الاستخدام السريري والإجراءات المختبرية الأساسية.

Abstract

التعب هي مشتركة وموهنة شرط أن يؤثر على معظم مرضى السرطان. وحتى الآن، اختبار التعب تظل ضعيفة تتسم لا تشخيص موضوعيا قياس شدة هذا الشرط. هنا يصف لنا أسلوب أمثل لتقييم الوظيفة المتقدرية من ببمكس التي جمعت من مرضى السرطان يعانون من الإجهاد. باستخدام نظام الجريان خارج الخلية المدمجة وحقن متسلسلة من مثبطات الجهاز التنفسي، قمنا بفحص الحالة الوظيفية المتقدرية PBMC بقياس التنفس المتقدرية القاعدية، وقطع غيار القدرات التنفسية، والنمط الظاهري في الطاقة، الذي يصف مسار الطاقة المفضل الاستجابة للتأكيد. ببمكس الطازجة متوفرة بسهولة في الإعداد السريرية باستخدام ضمادة القياسية. فحص كامل الموصوفة في هذا البروتوكول يمكن أن تكتمل في أقل من 4 ساعات دون مشاركة التقنيات الكيميائية الحيوية المعقدة. بالإضافة إلى ذلك، يصف لنا طريقة تطبيع ما ضروري للحصول على البيانات القابلة لإعادة الإنشاء. الأساليب الإجرائية وتطبيع بسيطة عرضت السماح لجمع العينات المتكررة من نفس المريض وجيل من استنساخه من البيانات التي يمكن مقارنتها بين النقاط الزمنية لتقييم آثار العلاج المحتملة.

Introduction

التعب هو شرط انتشارا والمؤلم أن يخلف أثرا سلبيا على نوعية الحياة ل مرضى السرطان¹. حتى هذا التاريخ، ما زال غير المحددة بوضوح التعب السرطان وتعتمد فقط على التقارير الذاتية بالمرضى². ولذلك، هناك حاجة ملحة لتحديد اختبار تشخيص المختبري يمكن تكييفها بسهولة لموضوعي تميز التعب في الإعداد السريرية^3،4.

واقترحت الآليات الكامنة متعددة، بما في ذلك خلل الميتوكوندريا، تسبب التعب⁵. الميتوكوندريا هي العضيات قوة، توفير 95 في المائة احتياجات الطاقة الخلوية عن طريق الفسفرة، وتلعب دوراً هاما في إشارات الكالسيوم والمبرمج، مما يشير إل....

Protocol

تمت الموافقة على الدراسة الحالية (NCT00852111) بالمؤسسية استعراض المجلس (مجلس الهجرة واللاجئين) للوطنية معاهد للصحة (المعاهد الوطنية للصحة)، بيثيسدا، ماريلاند. المشاركين المسجلين في هذه الدراسة من الرجال يوثيميك، 18 سنة من العمر أو الأكبر سنا، الذين تم تشخيص سرطان البروستاتا غير المنتشر مع أو بدون عملية استئصال غدة البروستاتا السابقة، وكان من المقرر أن تتلقى العلاج الإشعاعي شعاع خارجي (إبرت). تم استبعاد المشاركين المحتملين إذا كان لديهم مرض تقدمية التي يمكن أن تسبب التعب الكبير، كان المرض النفسي خلال السنوات الخمس الماضية، كان الغدة الدرقية التي لم يتم تصحيحها أو فقر الدم، أو كانت خبيثة ثانية. كما تم استبعاد الأفراد الذين استخدموا المهدئات أو المنشطات أو العوامل المضا....

Results

اختبار الإجهاد ميتو يعتمد على قياس معدل استهلاك الأوكسجين (OCR) بعد حقن متسلسلة من مثبطات الجهاز التنفسي المختلفة لتعيين ملف تعريف المتقدرية كاملة. القياسات التعرف الضوئي على الحروف بعد كل حقن المخدرات يمكن استخدامها لحساب المعلمات التالية ذات الصلة بالصحة المتقدرية: تقاس القاعدية التعرف الضوئي على الحروف أولاً قبل أي حقن المخدرات لتقييم استهلاك الأوكسجين اللازم للوفاء بالراحة مستوى ATP الطلب. ويحسب بطرح معدل التنفس غير الميتوكوندريا من الأساس التعرف الضوئي على الحروف قبل.......

Discussion

التعب في مرضى السرطان هو شرط منهكة التي ليست محددة بشكل جيد، أو وصف¹. تشخيص التعب تتوقف كلياً على الإبلاغ الذاتي، ولا يوجد المعيار الحالي للتشخيص أو العلاج لهذا الشرط، إلى حد كبير بسبب عدم فهم في بل². من الآليات المقترحة التي تقوم عليها التعب في مرضى السرطان، ضعف في الوظيفة المتقدرية واحد من المسارات الأكثر علاجية استهدافها. ولذلك، قمنا بتطوير طريقة سريعة وعملية لقياس الوظيفة المتقدرية في العينات السريرية التي يمكن استخدامها لتحديد المرضى المعرضين للخطر لتطوير السرطان السمي.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
تحضير الخلايا أحادية النواة CPT	Biosciences	362761	لعزل PBMCs بعد الفصد
RPMI-1640   ؛	Corning	10-040	لصنع وسائط النمو ل PBMCs
مصل الأبقار الجنينية (FBS) Corning		35-010-CV	لصنع وسائط النمو ل PBMCs
Penicillin / Streptomycin	ThermoFisher	15140122	لصنع وسائط النمو ل PBMCs
Cell-Tak	Corning	354240	محلول لاصق للخلايا والأنسجة ؛ يسمح لخلايا التعليق بالالتصاق بالسطح
Seahorse XF Caliberrant Solution	Agilent	103059-000	لخراطيش الترطيب
XFp Fluxpak (الألواح الصغيرة وخراطيش المستشعرات)	Agilent	103022-100	يحتوي على ألواح صغيرة لزراعة الخلايا XFp وخراطيش استشعار وسائط
قاعدة XF	Agilent	103335-100	لصنع وسائط فحص XF
45٪ زراعة الخلايا D- (+) - محلول الجلوكوز	Corning	25-037-CI	لصنع XF الفحص وسائل
الإعلام محلول بيروفات الصوديوم	Corning	25-000-CI	لصنع وسائط فحص XF
محلول L-glutamine	ThermoFisher		25030081 لصنع وسائط فحص XF
Seahorse XFp Mito Stress Test	Kit Agilent	103010-100	يحتوي على oligomycin و FCCP و antimycin A / rotenone
CyQUANT مقايسة انتشار الخلايا المباشرة	ThermoFisher	C35011	لتقدير الخلايا الحية وتطبيع البيانات
Seahorse XFp Analyzer	Agilent	S7802AEA	لقياس وظيفة الميتوكوندريا في الخلايا الحية
Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode Reader (أو أي أداة يمكنها تحديد الخلايا الفلورية في لوحة)	BioTek	BTCYT5PV	لقياس الخلايا الحية وتطبيع البيانات