استكشاف إمكانات ورقة الخلايا الجذعية الوسيطة على تطوير سرطانه الخلية الكبدية في فيفو

Summary

نقدم هنا، بروتوكول لتطوير في فيفو سرطان نموذج باستخدام تكنولوجيا خلايا ورقة. نموذج من هذا القبيل يمكن أن تكون مفيدة جداً لتقييم علاجات السرطان.

Abstract

يمكن أن يكون في فيفو حيوان نموذجا يحاكي سرطان البشرية مختلف التطبيقات التي تقدم المعلومات السريرية الهامة. التقنيات المستخدمة حاليا لتطوير نماذج السرطان في فيفو على قيود كبيرة. ولذلك، في هذه الدراسة، ونحن نهدف إلى تنفيذ تكنولوجيا خلايا الورقة وضع نموذج سرطان في فيفو . سرطانه الخلية الكبدية (HCC) هو وضع بنجاح في الفئران عارية استخدام أوراق الخلية التي تم إنشاؤها من العقود الخلية خط الخلايا. الأوراق خلايا السرطان التي تتولد عن طريق الالتصاق داخل الخلايا وتشكيل بنية طبقية، يسيطر عليها المصفوفة خارج الخلية. وهذا يسمح لزرع ورقة HCC في الكبد وإنشاء نموذج الحيوانات الحاملة لاستئصال ورم في غضون شهر. وباﻹضافة إلى ذلك، يجري التحقيق في دور الخلايا الجذعية الوسيطة (MSC) في وضع هذا النموذج السرطان. تم إنشاؤها بالإضافة إلى خلية ورقة العقود، وخط آخر خلية اثنين أوراق: ورقة من الخلايا العقود ونخاع العظم MSCs (BMMSCs) وورقة من الخلايا العقود والحبل السري MSCs (أوكمسكس). الأوراق التي لديها مزيج من الخلايا العقود و MSCs أيضا قادرة على إنتاج من الحيوانات الحاملة للورم. ومع ذلك، إضافة MSCs يقلل من حجم الورم المشكلة، وهذا أثر سلبي على التنمية الورم يختلف حسب المصدر MSCs المستخدمة. وهذا يشير إلى أنه من الممكن استخدام ورقة خلية المصنوعة من بعض أنواع المخططات الثانوية ماجستير في إدارة الورم والتحكم.

Introduction

العقود هي سرطان الكبد المرتبط إلى حد كبير سوء تشخيص الأولية. سنوياً، ما يقرب من نصف مليون يتم تشخيص المرضى الجدد مع العقود، الذين يمثلون 85% من مرضى سرطان الكبد في جميع أنحاء العالم¹. هيباتوكارسينوجينيسيس ليس مرضاً نموذج واحد؛ بدلاً من ذلك، هو عبارة عن مجموعة من الأمراض التي لها ميزات نسيجية مختلفة والتغيرات الوراثية والجينوم، إضافة إلى تباين نتائج تشخيصية¹. ولذلك، تتمثل التحديات الرئيسية في وضع استراتيجية علاجية فعالة للعقود هي المعرفة المحدودة للبيولوجيا العقود وعدم وجود نموذج مناسب الحيوانات التجريبية التي يمكن أن تساعد على فهم هذا المرض معقدة. في فيفو حيوان نموذجا يحاكي سرطان البشرية أمر ضروري لتحديد الجينات....

Protocol

يتبع البروتوكول الرعاية الحيوانية المبادئ التوجيهية التي وضعتها اللجنة الأخلاقية بجامعة الملك سعود. العمليات الجراحية والتخدير والأدوية الأخرى المستخدمة في الحيوانات تقرها اللجنة الأخلاقية بجامعة الملك سعود. يتم تنفيذ جميع الأعمال التجريبية بأفراد مدربين تدريبا مناسباً.

1-خلية ورقة البناء

1. معطف أطباق الثقافة (أطباق الثقافة المراعية لدرجة الحرارة 3.5 سم) مع المصل البقري الجنين غير مخفف (FBS) والتأكد من تغطية جميع سطح الطبق.
   ملاحظة: هذه الخطوة هامة لمفرزة الورقة خلية نظراً لأنه يدعم نمو الخلايا في أحادي الطبقة ويمنع التراكم الخلية.
2. احتضان الأطباق عن 24 ساعة عند 37 درجة مئوية في جو هوميديفيد التي تحتوي على 5% أول أكسيد ال....

Results

توموريجينيسيتي أوراق الخلايا المزروعة في الفئران:

شهر واحد بعد زرع الأعضاء، وضعت كافة أوراق خلية زرع كبد الفئران للأورام (الشكل 3). وكان متوسط حجم الأورام المتقدمة من HepG2، HepG2/بممسك، وأوراق خلية HepG2/أوكمسك 4.5 سم، 4 سم، و 2.5 سم، على التوالي¹⁰.

التحليل النسيجي لانسجة الكبد:

Discussion

كمية واسعة من البحوث مكرس لتطوير كافية في فيفو الإكلينيكية حيوان نموذجا مشابهاً للسرطانات البشرية. في الوقت الراهن، تشمل النهج الرئيسية المستخدمة لإنشاء نماذج حيوانية سرطان الهندسة الوراثية وخلية زرع¹¹. النماذج الحيوانية المعدلة وراثيا أدوات جيدة لتحديد الهوية والتحقق من صحة الجينات المستهدفة، فضلا عن فهم الآليات الجزيئية الكامنة وراء التسمم الناجم عن المخدرات. ومع ذلك، يرتبط هذا النموذج مع بعض القيود؛ على سبيل المثال، تعديل الجين المعطى لا تؤدي دائماً إلى النمط الظاهري المتوقعة

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagents
FBS	Gibco / Invitrogen	10270106
DMEM نسبة عالية من الجلوكوز	سيجما	D5671-500ML
البنسلين / الستربتومايسين   ؛	تقنية الحياة	15070063
ملحي فسيولوجي معقم	سيجما	S0817-1GA
خط خلية HepG2 البشري	ATCC ، الولايات المتحدة	الأمريكية HB-8065
نخاع العظم البشري خط الخلايا الجذعية الجذعية	PromoCell ، الولايات المتحدة الأمريكية	C-12974
أنسجة الحبل السري البشري MSCs	PromoCell ، الولايات المتحدة الأمريكية   ؛	C-12971
الكيتامين 50٪	رومبون ، باير
زيلازين 2٪	رومبون	23076-35-9
ألفادين & ريج ؛   حل.	فارما	LBL0816
المستهلكات:  < / قوي>
15 مل البولي بروبيلين عالية الوضوح PP أنبوب الطرد المركزي	فالكون   ؛	352097
أطباق ثقافة UpCell معقمة مقاس 3.5 سم مع ورق الترشيح (الغشاء)	Sigma	174904-1CS
100-1000 & micro ؛ ل   نصائح الماصة	سيجما	CLS4868-1000EA
الإجراء الأساسي ثنى	Thermofisher	PMD5293.0
Equipment  < / قوي >
ماصة إضافية ، حجم متغير	Eppendorf & reg ؛   البحث والتسجيل;	Z683779-1EA
حاضنة ثقافة الأنسجة 37 درجة ؛ C ، 5٪ CO2< / sub>	أي علامة تجارية
خزانة السلامة البيولوجية	أي علامة تجارية
حاضنة ثقافة الأنسجة 20 درجة ؛ C ، 5٪ CO2< / sub>	أي علامة تجارية
أدوات جراحية معقمة وفئران عارية:
ملقط
مقص
مشرط
خيوط النايلون  5-0	Accutome	AB-3854S	Monofilament ، Lancet
1 مل محاقن Tuberculin	Fisher Scientific	14-826-88
جرذان عارية   ؛			تشارلز