قمنا بتطوير نظام بسيط وتنوعاً لتغذية القراد الصلب في الأرانب المختبرية. لدينا بروتوكول غير شاقة يستخدم مواد يسهل الوصول إليها ويمكن تعديلها تبعاً لاحتياجات مختلف البيئات التجريبية. يسمح الأسلوب الرصد مريحة و/أو أخذ العينات من القراد طوال فترة الرضاعة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج تنوعاً من الإصابة بالقراد الصلب في الأرانب المختبرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
استخدام الحيوانات الحية في بحوث التجزئة حاسم بالنسبة لمجموعة متنوعة من الأغراض التجريبية بما في ذلك الحفاظ على المستعمرات القراد الصلب في المختبر. في القراد، جميع مراحل النمو (باستثناء البيض) هيماتوفاجوس، والحصول على وجبة دم عند إرفاق مضيفيهم الفقاريات أمر ضروري للنجاح في إنجاز دورة حياتها. هنا نظهر أسلوب بسيط يستخدم كبسولات أوبينابل بسهولة لتغذية القراد الصلب في الأرانب. وتشمل مزايا الطريقة المقترحة بساطته، وقصيرة المدة وتنوعاً والأهم من التكيف مع احتياجات متطلبات تجريبية محددة. الأسلوب الذي يجعل من الممكن استخدام دوائر متعددة (بأحجام مختلفة) في الحيوان نفسه، الذي يسمح بتغذية متعددة المراحل أو مجموعات تجريبية مختلفة مع خفض شرط الحيوانية عموما. المواد غير مزعجة ويمكن الوصول إليها بسهولة استخدامها يقلل عدم الراحة للحيوانات، والتي يمكن بسهولة استردادها من تجربة وعرضت لاعتماده أو إعادة استخدامها إذا كان بروتوكول أخلاقي يسمح لها.
المقدمة
القراد الصلب (اكسودودي) معروفة جيدا المفصليات تغذية بطيئة ويمكن تركيبها على مضيف لعدة أيام، أو أسابيع، تبعاً للأنواع الأحيائية والتنمية المرحلة1. هذه المفصليات هيماتوفاجوس إلزامية ناقلات لمجموعة متنوعة من العوامل المعدية, مثل البكتيريا، البروتوزوا والفيروسات، وهكذا تشكل خطرا كبيرا على البشر وصحة الحيوان1. عند دراسة البيولوجيا التجزئة أو تقييم أساليب التحكم الجديدة، إنشاء التجزئة الفعالة نظام التغذية بالغ الأهمية من أجل فعالية تصميم التجارب وإنجاز الأهداف الدراسة. في الآونة الأخيرة، كانت عدة نظم التغذية التجزئة المصطنعة (تجنب استخدام الحيوانات الحية) المتقدمة2،،من34 وينبغي استخدامها كلما كان ذلك ممكناً. بيد أن هذه النظم لم تكن قادرة على تحل تماما محل التجزئة التي تتغذى على الحيوانات الحية، وأنها ليست بدائل مناسبة لكثير من الظروف الفسيولوجية اللازمة للدراسات العلمية. ولذلك، في بعض الحالات، استخدام المضيفين الحيوانات التجريبية أمر حاسم لضمان ملاءمة النتائج التجريبية.
أرانب نيوزيلندا المختبرية أظهرت أن يكون المضيفين الأكثر مناسبة ويمكن الوصول إليها لعدة إيكسوديد التجزئة الأنواع5،،من67،،من89. كثيرا ما تستخدم استراتيجيات مشتركة اثنين من التجزئة تتغذى الأرانب: أ) تتغذى على آذان الأرانب مغطاة بالقطن من القماش أو الجوارب6،7، وب) التغذية في أكياس القطن9أو النايلون زجاجات10 أو النيوبرين الدوائر11 لصقها إلى الخلف للأرنب. تغذية على آذان أرنب ليس نظاما أنيقة، للقراد (المراحل المبكرة خاصة أو اليرقات أو الحوريات) قد الزحف ونعلق في عمق قناة الإذن، وهو غير مريحة للحيوان ويجعل مراقبة تغذية القراد و/أو الاسترداد محتقن علامات التجزئة الصعبة. هذا النظام أيضا تقتصر على اثنين فقط من المجموعات التجزئة على آذان تغطيها كاملة socks يحميها الياقات الاليزابيثي، تمثل مشقة كبيرة للحيوان. أخرى نظم9،10،11 بالتأكيد أكثر تقدما وأيضا مناسبة لصيانة مستعمرة القراد الصلب. ومع ذلك، فهي محدودة في عدد المجموعات التجريبية على الأرنب فضلا عن الأحجام/الأشكال القابلة للتعديل لدوائر التغذية. وبالإضافة إلى ذلك، غالباً ما تتطلب هذه البروتوكولات ضربت أرجل الأرنب الخلفي لتجنب خدش واستخدام أطواق الاليزابيثي لمنع الاستمالة.
هنا نقترح طريقة بسيطة وغير مجهدة وفعالة جداً لتغذية مجموعات متعددة من القراد الصلب في الدوائر المغلقة لصقها على الأرنب مرة أخرى تشملها سترة، مما يلغي الحاجة للياقات الاليزابيثي أو ضربت خلال التجربة. على وجه التحديد، يستخدم نظامنا مطاطا كبسولات مصنوعة من ورقة رغوة خلات (إيفا) الإيثيلين الفينيل تغطيها شبكة البعوض ولصقها على الأرنب حلق مرة أخرى مع الغراء مطاط غير مهيج تمتين سريعة (3 دقائق). هذا الأسلوب يتيح المرفق كبسولات متعددة الشكل أو الحجم المطلوب، وبضعة أسابيع بعد التجربة هي الأرانب تعافي تماما. النظام مناسبة أساسا للمراحل القراد الصلب نيمفال والكبار، ولكن مع القليل من التعديل يمكن استخدامه لليرقات التغذية كذلك. الأساليب المستندة إلى رغوة إيفا للقراد الصلب التغذية قد أن تتكيف مع أنواع أخرى من الفقاريات المضيفين، الأغنام مثلاً (التي تظهر كأحد البدائل في هذه الورقة).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: في هذه الدراسة، أبقى الأرانب في أقفاص القياسية مع الغذاء والمياه libitum الإعلانية في الوكالة الفرنسية للغذاء، والبيئة والصحة المهنية ومرافق السلامة (الضمان) المعتمدين لدى الحيوان في ميسونسالفورت، فرنسا. الحيوانات وتم رصد مرتين يوميا باثنين من الفنيين ذوي الخبرة لأي ردود فعل الجلد غير طبيعي أو مشاكل صحية أو مضاعفات. تم تأمين الغرفة التجريبية بتأطير داخلية المدخل مع الشريط على الوجهين لتجنب حوادث الهروب من القراد. الأسلوب الذي يعمل بشكل أفضل إذا كان شخصان العمل كفريق واحد، ولكن من الممكن إكمال واحد توازن بشخص من ذوي الخبرة. على الرغم من أن معظم الأرانب سهلة الانقياد والهدوء، قد تحدث علامات الإجهاد خلال التلاعب. لضمان أن أرنب لا تجرح نفسها التي تكافح، قد أنجزت ضبط النفس دليل بالضغط بلطف من القفا العنق في يد واحدة بينما جهة أخرى يدعم ذلك أرباع هند. الستة الشهر القديم، رامبوييه أبقى في مركز للبحوث الطبية الحيوية (CRBM) مرافق الأغنام الإناث في المدرسة البيطرية الوطنية من Alfort (انفة)، حيث المياه والغذاء ad متواصلة، التي تم توفيرها وتم إيداعه مرتين يوميا.
ملاحظة: لدينا مختبر تلقت الإذن باستخدام الأرانب والأغنام للتجزئة التغذية "لجنة الأخلاقيات" للحيوان جاء تجارب الضمان/آنفا/أوبيك وتسمح 01741.01 أرقام 11/10/16-5B، على التوالي. منذ استخدمنا فقط خالية من مسببات المرض القراد في تجاربنا، عرضت جميع الأرانب المستخدمة في هذه الدراسة لاعتماد عن طريق "الرابطة الأرنب الأبيض"، باريس، فرنسا.
1-إعداد كبسولات
- تقطع بالحجم المرغوب الكبسولة من ورقة رغوة إيفا (الشكل 1أ). جولة الخارجي زوايا (الشكل 1ب) الكبسولة لتقليل مفرزة العرضي عند الالتصاق على جلد الأرانب.
ملاحظة: سمك الإطار الكبسولة يجب أن يكون حوالي 8 مم. استخدم ورقة رغوة سميكة 5 مم لليرقات والحوريات، والأنواع الصغيرة التجزئة الكبار مثل إيكسوديس. ورقة رغوة سمك 1 سم يعتبر مناسباً لحجم كبير القراد الكبار مثل ذبابة القراد sp.، هيالوما sp.، إلخ ويختلف الحجم الكبسولة استناداً إلى متطلبات التجريبية. على سبيل المثال، للأزواج الكبار Ixodes 20 أو 200 الحوريات أو اليرقات 1,000، نحن نستخدم حجم كبسولة داخلية 5 × 5 سم2, 6 × 7 سم2 أو 7 × 9 سم2، على التوالي. - قص 8 مم شرائط ذاتية اللصق هوك الشريط (انظر الجدول للمواد)، والتمسك بها لإعداد الإطار رغوة إيفا (الشكل 1ج).
- قص الشريط (انظر الجدول للمواد) شرائط الحجم نفسه من حلقة ذاتية اللصق وربطهم إلى الجانبين هوك تعلق على الإطار إيفا رغوة (الشكل 1د).
- خفض الحجم المناسب لشبكة البعوض غرامة (حجم فتحات الشباك أقل من 50 ميكرومتر) إلى حجم الإطار رغوة إيفا والتمسك بها إلى حلقة ذاتية اللصق (الشكل 1E و 1F). قص يتدلى إذا لزم الأمر.
ملاحظة: يمكن استخدام هذا النوع من كبسولة لتغذية الحوريات والبالغين من الأنواع القراد الصلب، بينما يلزم وجود نظام ختم مختلفة من الكبسولات لتغذية اليرقات (تكميلية الشكل 1) لمنع الهروب العرضي لليرقات عن طريق يثبت الجانب هوك وحلقة.
2-إعداد الأرنب قبل الإصابة بالقراد
- حلاقة منطقة أرنب الظهر والجانبين ليتم استخدامها مع لوس أنجليس كليبرز (الشكل 2أ).
- تطبيق غير مهيج الغراء مطاط لكامل سطح الكبسولة المعدة والانتظار لمدة 1 دقيقة (الشكل 2ب).
- الصق الكبسولة بالضغط على الجلد (خاصة في الزوايا) مع الأصابع لمدة 3 دقائق (الشكل 2 و 2D).
ملاحظة: عند الالتصاق كبسولة واحدة أو أكثر، تأكد من إبقاء على الأقل 5 ملم مسافة بينهما (الشكل 2E و 2F). ونحن عادة تجنب منطقة العمود الفقري، ولكن يمكن استخدامها إذا لزم الأمر. - رفع قليلاً كبسولات للتحقق بصريا من تمسكهم بالجلد. إذا تم العثور على مناطق غير مرفقة، تطبيق الغراء باستخدام ملعقة واضغط لمدة 3 دقائق أخرى.
- تطبيق شريط الحماية على آثار أقدام خلفية الأرنب لمنع الضرر سترة (الشكل 2ز).
ملاحظة: هذه الخطوة اختيارية، وهو أساسا لمنع الأضرار سترة، وعدم الأضرار بالكبسولة القراد. - وضع في سترة أرنب بوضع الأرجل الأمامية من خلال الفتحات وشد الرقبة، صنع أرنب التأكد من التنفس تظل مريحة. ولا وضع الساقين الخلفية عن طريق التسييج مطاطا في هذه الخطوة وترك السوستة مفتوحة (الشكل 2ح).
3-القراد الإصابة
- ضع القراد في محقن بلاستيك (1 أو 5 مل تبعاً لعدد الأفراد) مع الإبرة-نهاية قص وتوصيله بالقطن (الشكل 1ز). إذا كانت كمية صغيرة من علامات التجزئة تكون موبوءة، استخدام الملقط.
ملاحظة: للسماح صيانة مستعمرة القراد القراد انجورجيد female(s) لوضع البيض الفقس لاحقاً داخل المحقن (5 أو 10 مل) تغطيها شبكة البعوض مغلفة ب المطاط فرقة12 لتفادي التلاعب شاقة من اليرقات في الوقت أنهم تطبيق المضيف (الشكل 1ح). أيضا، قد يسمح لليرقات محتقن تماما أن تساقط في المحاقن (1I "الشكل تكميلية"؛ 5 أو 10 مل) للإصابة المباشرة من الأرنب مع الحوريات. - ضع المحاقن عمق الكبسولة عن طريق الفتح الزاوية وتطعيم القراد عن طريق دفع المكبس المحاقن. تويست المكبس تجاه جلد الأرانب لإزالة القراد المتبقية التي تعلق على المكبس ببطء، وفي نفس الوقت تخلعها من الكبسولة (الشكل 2أنا).
ملاحظة: إذا كان بعض الأفراد الزحف خارج الكبسولة، تعود عليهم باستخدام الملقط. - إغلاق الكبسولة قبل ريفاستينينج الشريط هوك وحلقة.
- وضع الأرجل الخلفية للأرنب في مؤخرة مغلقة التسييج مطاطا سترة والرمز البريدي.
ملاحظة: جعل أن سبابة يمكن أن تناسب بين رقبة السترة والارنب لضمان الراحة وأيضا لتجنب المضغ على السترة. - عودة الأرنب إلى القفص (الشكل 2ياء).
ملاحظة: الوقت من الإصابة لجمع حافل القراد تختلف بين التجزئة مختلفة الأنواع والمراحل التنموية. على سبيل المثال، سكابولاريس إيكسوديس و Ixodes ريسينوس، مدد التغذية للكبار، والحوريات واليرقات هي 6-9، 3-4، و 2-3 أيام، على التوالي. يمكن الاطلاع على قائمة بالمراجع ل 29 دورة حياة القراد الصلب مختلفة تحت ظروف المختبر ليفين وشمشير (2016)9.
4-جمع ورصد علامات التجزئة
- أن الأرنب من القفص إلى مقاعد البدلاء وفك السترة.
- كبح جماح الأرنب بيديك بلطف. فتح الكبسولة بواسطة أونفاستينينج الشريط هوك وحلقة (الشكل 2 K و 2 L) وجمع القراد بالفرشاة اليرقات محتقن (تكميلية الشكل 1) أو الحوريات إلى طبق بلاستيك أو استخدام الملقط للكبار (الشكل 2L ). إذا كانت تغذية جزئيا (غير حافل) القراد مطلوبة, استخدام التجزئة الإعصار أو الملقط لفصل لهم.
ملاحظة: إذا كان الحفاظ على المستعمرات التجزئة يرجى الاطلاع على الملاحظة في الخطوة 3، 1. الحفاظ على محتقن القراد في المناسبة الرطبة وظروف الحرارة وفقا للأنواع خاصة القراد. - إذا لزم الأمر، ريفاستين الشريط هوك وحلقة لإغلاق الكبسولة.
5-استرداد الأرنب
- إزالة شبكة البعوض تماما من الكبسولة وترك السترة على الأرنب (الشكل 2متر).
- انتظر 3-4 أسابيع، وفي محاولة لإزالة الكبسولة بلطف التشذيب أحد أركانه (الشكل 2ن). إذا كان لا يزال راسخا مرفقا الكبسولة، كرر هذه الخطوة بعد أسبوع واحد.
- قم بإزالة الغلاف وتمكنك من استرداد الأرنب في القفص.
ملاحظة: بمجرد إيقاف الكبسولة، تحقق جلد الأرانب لردود أفعال غير طبيعية. على الرغم من أن عادة لا يوجد علاج غير مطلوب، يمكن استخدام محلول المطرية في حالة تهيج. - إذا كان السماح للبروتوكول وتجارب، يمكن إعادة استخدامها الأرنب المستردة (الشكل 2س) أو المعروضة للتبني.
ملاحظة: سيظهر الأرانب للحصول على مقاومة القراد مرة تتعرض للتجزئة المتكررة الجراد13؛ ولذلك، لا ينصح رينفيستيشنز ما لم يتطلب التجربة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هنا نقترح للمرة الأولى طريقة مفصلة خطوة بخطوة تغذية القراد الصلب في رغوة إيفا كبسولات المطبقة على ظهر أرنب حلق، تغطيها سترة (الشكل 1 و الشكل 2). هذا البروتوكول مناسبة لأنواع مختلفة من التجارب عند مجموعات التجزئة مختلفة على نفس المضيف مطلوبة، ويمكن أن تستخدم أيضا لتربية جماعية للقراد الصلب. القراد تغذية النجاح في المختبر معظمها يعتمد على اللياقة البدنية للأفراد القراد ومدى ملاءمة المضيف أرنب للأنواع خاصة القراد، ب...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
أن أهم خطوة في هذا البروتوكول كامل هو الغراء الكبسولة بحزم للجلد حلق. لهذا السبب، الضغط المستمر لمدة 3 دقائق على الأقل الهامة، لا سيما في الزوايا. عند تطعيم القراد في الكبسولة، من المهم أن تنطبق عليها عميقا في الركن المقابل من واحدة مفتوحة إلى تجنب التجزئة الهروب أثناء الختم. عند التخطيط للتجارب، تأكد من أن جميع الكبسولات مشمولة في سترة لتجنب الأضرار بمضغ أو الخدش. تأكد من أن منطقة الرقبة السترة ضيق ما يكفي لمنع مضغ لكن فضفاضة بما فيه الكفاية أن الأرنب لا تزال مريحة.
واحدة من المزايا الرئيسية ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
ونعترف المساعدة التقنية لافلين Le ناعور، المعهد الوطني الفرنسي للبحوث الزراعية (الموارد الطبيعية) والعين بيرنييه (معهد) وبيديل Le Océane (الضمان). وأيد المازين كونسويلو على زمالة من "مختبر للتميز"، التكاملية البيولوجيا للناشئة من الأمراض المعدية (لابيكس عبيد)، معهد باستور. وتم شراء الأرانب والأغنام بشؤونها. جزء من هذا العمل بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة منحة RO1AI090062 "بارك يوسف". الدكتور جيفري لام بلير المسلم لاستعراض المخطوطة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الأرانب النيوزيلندية (2.5-3.5 كجم) | نهر تشارلز | رمز السلالة 571 | |
| الأغنام Rambouillet | مزرعة محلية خالية من القراد | أنثى تبلغ من العمر | |
| رغوة EVA بسمك 5 مم & nbsp ؛ | متجر تأثيري | EVA-PE451 كجم (950 مم × 450 مم) | 10 مم يمكن استخدام رغوة PE45 كجم من متجر تأثيري لأنواع القراد الكبيرة البالغة |
| ورقة رغوة 9 بوصة × 12 بوصة 6 مم - أبيض | أمازون | FOAMSHT6-20 | 6 مم - رغوة EVA يمكن طلبها عبر أمازون كبديل للرغوة من متجر تأثيري |
| سترات أرنب كاملة الطول ؛ | هارفارد للأجهزة | 620077- متوسط, 6270078 - كبير | |
| غراء اللاتكس غير السام | تمزق الترطيب | النسيج & لاصق جلدي | |
| أنبوبي قطن تقويم العظام مخزون | BSN Medical | 9076 (عرض 12-15 سم) شبكة | |
| البعوض | Loisirs Creatifs | ناعم جدا مرشح النايلون شبكة النسيج | أي شبكة بعوض, أو مادة ستارة مع حجم شبكة أقل من 50 & م مناسب. |
| Leukoplast | BSN الطبية S.A.S | LF 72361-02 | |
| شريط لاصق بخطاف وحلقة | AIEX store | AIEX 39.37 قدما / 12 مترا لفة شريط لاصق ذاتي الخطاف والحلقة ، عرض 20 مم ، لون أبيض | Fullfiled بواسطة Amazon |
| غراء سريع التجفيف ؛ | Fixtout | الفائق |
المراجع
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L'hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , Dover Pubs. New York. (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , Science Publishers Inc. Enfield. (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , Elsevier. San Diego. (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
