وتجري تقييمات مستمرة لتقنيات الإنجاب المساعدة (الفنون) لتحسين النتائج والحد من المخاطر المرتبطة بها. تصف هذه المخطوطة اجراء لنقل الاجنه بالحد الأدنى من التوغل مع بروتوكول فعال للحجز بالتبريد يسمح باستخدام الأرانب كنموذج حيواني مثالي لتكاثر البشر.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نقل الاجنه طفيف التوغل والتزجيج الجنيني في مرحله الجنين الأمثل في نموذج الأرنب
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وتؤثر تقنيات الإنجاب المساعدة (الفنون) ، مثل ثقافة الاجنه في المختبر أو التجميد الجنيني ، علي أنماط التنمية الطبيعية التي تترتب عليها عواقب ما قبل الولادة وبعدها. لضمان البراءة من التطبيقات الفنية ، والدراسات في النماذج الحيوانية ضرورية. الاضافه إلى ذلك ، وكخطوه أخيره ، تتطلب دراسات تنميه الاجنه تقييم قدرتها علي تطوير نسل صحي كامل الأجل. هنا ، لا غني عن نقل الاجنه إلى الرحم للقيام بأي تجربه ذات صله بالفنون.
وقد استخدم الأرنب كنموذج الكائن الحي لدراسة تكاثر الثدييات لأكثر من قرن. بالاضافه إلى قربها الوراثي للأنواع البشرية وحجمها الصغير وتكلفه صيانتها المنخفضة ، فان لها خصائص انجابيه مهمة مثل الاباضه المستحثة ، والتسلسل الزمني للتطور الجنيني المبكر علي غرار البشر والحمل القصير التي تسمح لنا لدراسة عواقب تطبيق الفن بسهوله. وعلاوة علي ذلك ، يتم تطبيق الفنون (مثل حقن السائل المنوي داخل الجنين ، وثقافة الاجنه ، أو التجميد) مع الكفاءة المناسبة في هذا النوع.
باستخدام تقنيه نقل الاجنه بالمنظار وبروتوكول الحفظ بالتبريد المقدمة في هذه المقالة ، ونحن وصف 1) كيفيه نقل الاجنه من خلال تقنيه سهله وطفيفه التوغل و 2) بروتوكول فعال للتخزين علي المدى الطويل من الأرنب الاجنه لتوفير القدرات اللوجستية المرنة الوقت والقدرة علي نقل العينة. وتشير النتائج التي تم الحصول عليها بعد نقل أجنه الأرانب في مراحل تنموية مختلفه إلى ان المستنقع هو المرحلة المثالية لشفاء ونقل أجنه الأرانب. التالي ، فانه يلزم نقل الاجنه الجنينية ، مما يبرر العملية الجراحية. وعلاوة علي ذلك ، يتم بنجاح المزجج الأرنب الاجنه ومنظار نقلها ، مما يثبت فعاليه التقنيات الموصوفة.
المقدمة
وبهدف تجاوز العقم البشري أو تحسين نشر الماشية ذات القيمة الجينية العالية والحفاظ علي الموارد الوراثية الحيوانية ، فان مجموعه من التقنيات تسمي مجتمعه تكنولوجيات الإنجاب المساعدة ، مثل الاباضه الفائقة ، في تم تطوير الإخصاب الأنبوبي ، وثقافة الاجنه ، أو التجميد ،1،2. حاليا ، يتم إعطاء العلاجات الهرمونية لتحفيز المبيضين وإنتاج عدد كبير من بصيلات المبيض عدد الجريبات الغاريه1. البويضات التي يتم جمعها من هذه البصيلات يمكن نضجها ، المخصبة ، وتطويرها في المختبر حتى يتم اما بالتبريد أو نقلها إلى الأمهات البديلة3. ومع ذلك ، خلال هذه العلاجات ، ويتعرض الامش....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع الإجراءات التجريبية المستخدمة في هذه الدراسة وفقا للتوجيه 2010/63/EU EEC للتجارب الحيوانية واستعرضتها ووافقت عليها اللجنة الاخلاقيه لتجريب الماشية في الجامعة الvalènciaه ، اسبانيا (قانون البحث: 2015/VSC/PEA/00170). XGD ، FMJ ، MPVC و JSV يحمل شهادة تفويض صادره عن الاداره الحكومية بلنسية لتجربه علي الحيوانية. ويؤذن ل XGD في الموقع بالاشراف علي رعاية ورعاية الماشية اثناء التجربة.
1. نقل الاجنه
- اعداد الإناث المستفيدات
- استخدام الإناث الناضجة جنسيا فقط (> 4.5 أشهر من العمر).
- قبل أسبوع واحد من ET ، وتكييف الإناث إلى 16 ح الضوء/8 ح النظام المظلم لبدء نمو جرابي وتعزيز تقبل الإناث.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الحد الأدنى الغازية نقل بالمنظار من الاجنه الطازجة أو المزجج يضع الأرنب بين أفضل النماذج الحيوانية للدراسات الانجابيه. ويبين الجدول 1 نتائج الاجنه المنقولة الطازجة في مراحل تنموية مختلفه (الشكل 4). معدل البقاء علي قيد الحياة عند الولادة (النسبة المئوية من الاجنه مما ادي إلى الجرو) أثبتت فعاليه تقنيه بالمنظار الموصوفة في هذه الورقة. وقد تحققت القيم الأعلى عندما أجريت العمليات الخاصة بالاجنه في مرحله المستنقعات ، سواء كانت في وقت مبكر أو في الم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
منذ أول حاله الولادة الحية موثقه من الاجنه المنقولة9، وقد أصبحت هذه التقنية وأنواع الأرانب حاسمه في الدراسات الانجابيه. والي جانب ذلك ، تتطلب الدراسات البحثية المتعلقة بالاجنه ، التي تنطوي علي التلاعب والإنتاج والتجميد وما إلى ذلك ، كخطوه أخيره ، تقييم قدره الاجنه علي توليد نسل صحي كامل الأجل. ولذلك ، فان تقنيه نقل الاجنه لا غني عنها13،28. علي مر السنتين ، تم استبدال الطرق الجراحية المستخدمة في البداية لنقل الاجنه في رحم الام تدري.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
وقد دعم هذا العمل بأموال من وزاره الاقتصاد والقدرة التنافسية في اسبانيا (AGL2017-85162-1-R) وبرنامج البحوث المتعلقة بالعموميات في فالنسيا (PrometeoII 2014/036). نسخه النص الإنكليزي المنقحة من قبل n. Macowan خدمه اللغة الانجليزيه
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ألبومين مصل الأبقار (BSA) | VWR | 332 | |
| بوبرينورفين هيدروكلوريد | ألفيت إسكارت & iacute; | 626 | أن يأمر بها طبيب بيطري مرخص. |
| بوسيرلين أسيتات | سيجما ألدريتش | B3303 | |
| صابون كلوريكسيدين ثنائي جلوكونات | Alvet Escart & iacute; | 0265DCCJ500B | |
| محلول كلورهيكسيدين ثنائي جلوكونات | Alvet Escart í | 0265DCCA500B | |
| CO2< / sub> | Air Liquide | 99921 | CO2 N48. |
| حاضنة CO2 | فيشر | 15385194 | |
| ميثيل سلفوكسيد | سيجما ألدريتش | W387509 | |
| Dulbecco ' s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS) | سيجما ألدريتش | D5773 | بدون كلوريد الكالسيوم. |
| ماكينة حلاقة كهربائية | Oster Golden A5 | 078005-140-002 | |
| كاميرا المنظار | البصري إسبانيا S.A | OP-714 | |
| منظار داخلي مع صمام نشرة سيليكون | Karl Storz Endoscopia Ib & eacute; ريكا S.A. | 30114GK | موديل مبزل خفيف الوزن. |
| Enrofloxacin | Alvet Escart í | 9993046 | أن يكون بطلب من طبيب بيطري مرخص. |
| إبرة Epicraneal 23G | Alvet Escart í | 514056353 | يمكن أيضا استخدام الإبر الأصغر. |
| قسطرة فوق الجافية | Vygon Corporation | 187.10 | |
| إبرة فوق الجافية | Vygon Corporation | 187.10 | |
| Ethylene Glycol | Sigma Aldrich | 102466-M | |
| مرهم العين | Alvet Escart & iacute ؛ | 5273 | |
| هيدروكلوريد الكيتامين | Alvet Escart & iacute ؛ | 184 | أن يأمر بها طبيب بيطري مرخص. |
| معدات تنظير البطن | Karl Storz Endoscopia Ib & eacute; ريكا S.A. | 26003 AA | هوبكنز & ريج; منظار البطن ، منظار البطن المستقيم 0 مم ، بطول 30 سم ، قناة عمل 5 مم. |
| مصدر الضوء | Optomic Spain S.A | Fibrolux 250 | |
| سائل هواء النيتروجين | السائل P1505XXX | ||
| ثاني أكسيد الكربون الميكانيكي Inufflator | Karl Storz Endoscopia Ib & eacute ؛ ريكا S.A. | Endoflator® | |
| Meloxicam | Alvet Escart í | 9993501 | أن يكون بطلب من طبيب بيطري مرخص. |
| أطباق بتري ، 35 مم | Sigma Aldrich | CLS430165-500EA | |
| ضمادة بلاستيكية (Nobecutan) IBOR | medica | 7140028 | |
| ماصة بلاستيكية 0.25 مل | IMV - تقنيات | 6431 | |
| محلول يوديد بوفيدون | Alvet Escart & iacute ؛ | 02656DPYS500S | |
| مقص | ROBOZ | RS-5880 | أي مقص فولاذي صغير مستقيم من الدرجة الجراحية سيعمل. |
| أنبوب سيليكون ل insufflator | Karl Storz Endoscopia Ib & eacute ؛ ريكا S.A. | 20400040 | |
| المجهر المجسم | Leica | MZ16F | هناك خيارات أرخص مثل Leica MZ8 أو Nikon SMZ-10 أو SMZ-2B ، على سبيل المثال لا الحصر. |
| قفازات معقمة | Alvet Escart & iacute ؛ | 087GL010075 | |
| ثوب معقم | Alvet Escart í | 12261501 | |
| قناع معقم | Alvet Escart & iacute ؛ | 058B15924B | |
| قابس القش | IMV - تقنيات | 6431 | |
| حقنة | سكروز سيجما ألدريتش | S7903 | |
| 11750425 | علمية فيشر | سعة 1 مل | |
| ، قسطرة بولية 11773313 | فيشر | ||
| 5 مل IMV - تقنيات | 17722 | ||
| حمام مائي | RAYPA | BAE-4 | |
| Xylazine | Alvet Escart & iacute ؛ | 525225 | أن يطلبها طبيب بيطري مرخص. |
| جامعة الأرانب | Polit & egrave ؛ cnica de Val & egrave; يمكن | استخدام خطوط الأمومة الأخرى ، مثل الخط الخامس أو الخط HP. |
المراجع
- Chen, M., Heilbronn, L. K. The health outcomes of human offspring conceived by assisted reproductive technologies (ART). Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 8 (4), 388-402 (2017).
- Lavara, R., Baselga, M., Marco-Jiménez, F., Vicente, J. S.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
