لتوسيع قدرة المختبرات في جميع أنحاء العالم لتقييم الأهلية للمرضى المصابين بسرطان الرئة للمعاملة مع بيمبروليزوماب، بطريقة موثوقة واستنساخه، قمنا بتطوير مقايسة يستخدم تركيز الضد 3 22 على نطاق واسع أوتوستاينير المناعي، لعينات خزعة وعلم الخلايا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
3 22 باستخدام الأجسام المضادة-PD-L1 تركز على خزعة وعينات عنق من مرضى سرطان الرئة من الخلايا غير الصغيرة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وافقت الأحادي بيمبروليزوماب لعلاج المرضى المصابين بسرطان الرئة الخلية غير الصغيرة PD-L1-الإعراب عن المتقدم (NSCLC) السطر الأول والثاني. إجراء اختبار للتعبير PD-L1 مع 3 22 رفيق PD-L1 إيمونوهيستوتشيميستري (المدينة) التشخيص المقايسة، الذي يعطي نسبة ورم نقاط (TPS)، وقد صودق على أنسجة الورم. لقد طورنا أمثل تطوير مختبر تجربة (LDT) يستخدم الركاز 3 22 جسم (Ab) في أوتوستاينير المدينة متاحة على نطاق واسع لعينات خزعة وعلم الخلايا. تم تقييم مع 120 أبواب إقران كل ورم الأنسجة وعينات خزعة TPS PD-L1 ومع 70 إقران عينات خزعة وعنق (يغسل الشعب الهوائية، n = 40؛ الاراقة الجنبي، ن = 30). قص Ab 3 22 LDT المستندة إلى التركيز أظهرت ارتفاع معدل التوافق بين خزعة (~ 100%)، وعلم الخلايا العينات (~ 95 ٪) بالمقارنة مع "المدينة" PD-L1 التعبير المحدد باستخدام مقايسة رفيق 3 22 PD-L1 "المدينة" في كل النقاط النقاط (% إيه وان، إيه فايف زيرو %). وستوسع LDT الأمثل المعروضة هنا، باستخدام تركيز Ab 3 22 لتحديد التعبير PD-L1 في كلا ورم الأنسجة وعينات عنق، قدرة المختبرات في جميع أنحاء العالم لتقييم أهلية مرضى NSCLC للعلاج مع بيمبروليزوماب الأحادي بطريقة موثوقة واستنساخه.
المقدمة
وقد أظهرت التجارب السريرية الأخيرة كفاءة بيمبروليزوماب، أنسنة [مونوكلونل] IgG4 كابا ايستب جسم الذي يمنع التفاعل بين موت الخلايا المبرمج 1 (PD-1)، وأن يغاندس، PD-L1 و PD-L2، في علاج المرضى الذين يعانون من متقدمة NSCLC1،2،،من34.
حاليا، هو الموافقة على بيمبروليزوماب المعاملة للإعراب عن PD-L1 NSCLC في كلا المرضى العلاج-السذاجة مع تعبير PD-L1 TPS إيه فايف زيرو % ولا من مستقبلات عامل نمو البشرة (EGFR) أو الأورام اللمفاوية المتحولة كيناز (ALK) الورم الجينوم الانحرافات3 وعن سبق تعامل المرضى مع TPS ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع إجراءات أقرتها لجنة الأخلاقيات المحلية (البشرية لجنة أخلاقيات البحوث، المركز الاستشفائي الجامعي دي نيس/Tumorothèque BB-0033-00025).
ملاحظة: هذا البروتوكول تحديداً يعدل لاستخدام التركيز جسم 3 22 على الملطخ المدينة الآلي متاحة تجارياً (يشار إليها أوتوستاينير هنا، انظر الجدول للمواد) لعينات الخلايا وورم الخزعات.
1-إعداد عينات الأنسجة السرطانية
- إصلاح الأنسجة السرطانية في 10% فورمالين مخزنة محايدة (NBF) في كاسيت.
ملاحظة: ورم الأنسجة من أورام الرئة الدانية عموما الحصول على طريق القصبات، يؤديها الأمراض الصدرية، أو أخصائي الرئة تحت التخدير المعتدل. للآفات الطرفية وأمراض الرئة منتشر، يشا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
استخدام الإجراء المعروضة هنا، وعلى النحو المبين بالتفصيل في هذه المجموعة الأخيرة منشورات10،11، صدق LDT الأمثل سريرياً مع 120 FFPE NSCLC المحفوظات خزعة عينات أخذت من المرضى الذي خضع لجراحة بتر أو خزعة في مستشفى الجامعة باستور، نيس، بين آذار/مارس 2007 وآذار/مارس عام 2016. وعلاوة على ذلك، لتقييم التعبير PD-L1 لعينات الخلايا، تم تقييم النقاط التجارية في 70 عينات خزعة النسيج المزدوجة وكتل الخلايا التي تم إعدادها من يغسل الشعب الهوائية .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ونحن قد التحقق من صحة LDT أمثل استخدام تركيز الضد PD-L1 3 22, بمقارنته مع ال10،اختبار التجاري المصادق عليه سريرياً المقابلة11. 3 22 تتركز LDT المستندة إلى جسم أظهرت ارتفاع معدل التوافق بين خزعة (~ 100 ٪) وعينات عنق (~ 95 ٪) عند مقارنتها بتعبير "المدينة" PD-L1 تحدد باستخدام مقايسة PD-L1 "المدينة" 3 22 في إيه وان % TPS و % إيه فايف زيرو TPS قطع النقاط. كما أوصت مؤخرا "الرابطة الدولية" "دراسة سرطان الرئة"، ينبغي أن تكون مجالات إيجابية PD-L1 نفسها بالنسبة لحوالي 10 ع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
أشرفت على هذه الدراسة من شركة ميرك & Co., Inc.، كينيلورث، نيوجيرسي، الولايات المتحدة الأمريكية. الممولين أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | محلول حافظ لعينات علم الخلايا |
| Novaprep & reg ؛ HQ + B | Novacyt | NA | محلول حال للبلغم |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 نظام وحدة التحكم في تضمين | الأنسجة ساكورا | 5229 TEC 5 | |
| شريحة زجاجية مجهرية SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| مسحوق DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| هايدولف مالتي ريكس فورتكس شاكر | ثيرمو فيشر ساینتيفيك | 13-889-410 | |
| شاندون سيتوبلوك | ثيرمو فيشر العلمي | 7401150 | |
| 22C3 الأجسام المضادة المركزة المضادة ل PD-L1 | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | # 750-600 | |
| OptiView HQ Universal | Linker Ventana | # 760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | # 760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2< / sub> | Ventana | # 760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | # 760-099 | |
| OptiView تضخيم Multimer | Ventana | # 760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | # 760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | # 760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | # 790-2208 | |
| Blue Reagent | Ventana | # 760-2037 | |
| تكييف الخلايا 1 (CC1) Ventana | # 950-124 | ||
| Tissue-Tek فيلم غطاء | شبشب ساكورا | 4742 |
المراجع
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
