البروتوكولات من أجل دراسة ربط الكاتيونات الذهب (Au(III)) إلى والتشكلات المختلفة من ألبومين المصل البقري (BSA)، فضلا عن وصف الأسفار جيش صرب البوسنة والاتحاد الأفريقي فريدة من نوعها تعتمد كونفورماشونال ترد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تشكيل لومينوفوري في والتشكلات المختلفة من ألبومين المصل البقري قبل الربط من الذهب الثلاثي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وغرض البروتوكولات المقدمة دراسة عملية ربط Au(III) لجيش صرب البوسنة، تسفر عن تكيف fluorescence الحمراء الناجمة عن تغير (λم = 640 nm) مجمعات BSA-Au(III). الطريقة ضبط الأس الهيدروجيني لإظهار أن ظهور ومضان أحمر يرتبط بالتحولات التوازن الناجم عن درجة الحموضة من والتشكلات جيش صرب البوسنة. إلا يمكن أن تشكل مجمعات BSA-Au(III) نيون أحمر مع تعديل درجة الحموضة عند أو فوق 9.7، الذي يتوافق مع تكيف "نموذج" لجيش صرب البوسنة. ويرد وصف البروتوكول لضبط جيش صرب البوسنة إلى الاتحاد الأفريقي نسبة المولى ورصد الوقت-مسار عملية الربط Au(III). الحد الأدنى لعدد من Au(III) في جيش صرب البوسنة، لإنتاج ومضان أحمر، أقل من سبعة. ونحن تصف البروتوكول في خطوات لتوضيح وجود عدة مواقع الربط Au(III) في جيش صرب البوسنة. أولاً، عن طريق إضافة النحاس (Cu(II)) أو النيكل (الكاتيونات Ni(II)) تليها Au(III)، هذا الأسلوب يكشف موقع ربط ل Au(III) لا فلوروفوري الأحمر. ثانيا، عن طريق تعديل جيش صرب البوسنة قبل ثيول وضع سقف للوكلاء، كشف موقع الربط Au(III) نونفلوروفوري تشكيل آخر. ثالثا، تغيير تشكيل جيش صرب البوسنة ناهضة ووضع سقف للسندات ثنائي كبريتيد، موضحة ملزمة Au(III) ممكن (ق). يمكن تطبيق البروتوكول، للسيطرة على جيش صرب البوسنة والتشكلات وربط Au(III)، ووصف عموما لدراسة التفاعلات بين البروتينات والمعادن الكاتيونات الأخرى.
المقدمة
مجمع جيش صرب البوسنة والاتحاد الأفريقي لنستعرض الأشعة فوق البنفسجية (الأشعة فوق البنفسجية)-الأسفار الحمراء منفعل، مع ملحوظة ستوكس التحول، وقد تم تصنيعه من الأصل قبل شيه وآخرون. 1-الأسفار الحمراء الفريدة ومستقرة يمكن العثور على التطبيقات المختلفة في ميادين مثل الاستشعار2،،من34أو5،،من67التصوير أو لطب النانوي8 ،،من910،11،....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-تجميع مجمع BSA-Au(III)
- حل 25 ملغ من جيش صرب البوسنة في 1 مل الماء الصف كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك]) في قنينة رد فعل 5 مل.
ملاحظة: يجب أن يظهر الحل واضح. - حل ثلاثي كلوريد (ثالثا) الذهب (حمض تشلورووريك) بتركيز من 5 ملم في المياه الصف [هبلك].
ملاحظة: يجب أن يظهر الحل الأصفر. سيؤدي إلى حل حمض تشلورووريك على استعداد في هذا التركيز جيش صرب البوسنة إلى الاتحاد الأفريقي نسبة 01:13.- وبدلاً من ذلك، يعد حلاً لحمض تشلورووريك بتركيز من أي مكان بين 0.38 مم (BSA:Au = 1:1) إلى 20 مم (BSA:Au = 01:50) في [هبلك] الصف المياه.
ملاحظة: سيؤدي إلى نسب مختلفة من جيش صرب البوسنة للذهب في أنماط مختلفة جذريا fluorescence الأحمر خريطة الإثارة-الا....
- وبدلاً من ذلك، يعد حلاً لحمض تشلورووريك بتركيز من أي مكان بين 0.38 مم (BSA:Au = 1:1) إلى 20 مم (BSA:Au = 01:50) في [هبلك] الصف المياه.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
من الأسفار مجمع BSA-Au(III)، وقد لوحظ أن تحويل الفلورية الزرقاء الأصيلة لجيش صرب البوسنة (λم = 400 نانومتر) للأسفار أحمر (λم = 640 nm) يحدث في حول درجة الحموضة 9.7 من خلال توازن مرحلة انتقالية (الشكل 1). أم BSA-Au(III) في جيش صرب البوسنة المختلفة لنسب المولى الاتحاد الأفريقي ويرد في الشكل 2، وهذه البيانات يوضح كيفية تغيير نسب المولى غلة نفس الموجه الانبعاثات عند أطوال موجية مختلفة من الإثار.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
مركبات BSA-Au(III) أعدت على درجة الحموضة 12 يحمل الأسفار أحمر في انبعاثات الطول موجي λم= 640 nm عندما متحمس مع الأشعة فوق البنفسجية (الأشعة فوق البنفسجية) الخفيفة λالسابقين= 365 نانومتر (الشكل 1A). ظهور ومضان أحمر هو عملية بطيئة، وسوف يستغرق بضعة أيام في درجة حرارة الغرفة زيادة في شدة قصوى وقدرها. يعمل رد فعل على 37 درجة مئوية سوف تسفر عن النتائج المثلى، على الرغم من ارتفاع درجة الحرارة يمكن استخدامها لإنتاج ومضان أحمر أسرع. يمكن أن يحدث تدهور لا يمكن إصلاحه من.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
المطران تعترف بالدعم من صندوق المبادرة الخاصة الهبات ديوك، ويلز فارغو الصندوق، مؤسسة PhRMA، فضلا عن أموال بدء التشغيل من جامعة كارولينا الشمالية، شارلوت.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ألبومين مصل الأبقار (BSA) ، 96٪ | سيجما ألدريتش | A5611 | |
| كلوريد الذهب (III) ثلاثي الهيدرات ، 99.9٪ | سيجما ألدريتش | 520918 | |
| كلوريد النحاس (II) ، 99.999٪ | سيجما ألدريتش | 459097 | |
| كلوريد النيكل (II) سداسي هيدرات ، 99.9٪ | سيجما ألدريتش | 654507 | |
| N-إيثيل ماليميد (NEM) ، >99.0٪ | سيجما ألدريتش | 4259 | |
| تريس (2-كربوكسي إيثيل) فوسفين هيدروكلوريد (TCEP) ، >98.0٪ | سيجما ألدريتش | C4706 | |
| هيدروكسيد الصوديوم ، >98.0٪ | سيجما ألدريتش | S8045 | |
| اليوريا ، 99.5٪ | كيمي-إمبلكس الدولي | 30142 | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسبات (PBS) | كورنينج | MT21040CV | |
| بيكربونات الأمونيوم، 99.5٪ | سيجما ألدريتش | 9830 |
المراجع
- Xie, J., Zheng, Y., Ying, J. Y. Protein-Directed Synthesis of Highly Fluorescent Gold Nanoparticles. Journal of the American Chemical Society. 131, 888-889 (2009).
- Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. Gold Nanoparticles in Chemical and Biological Sensing. Chemical Reviews. 112, 2739-2779 (2012).
- Zhang, Y., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
