نقدم هنا، أسلوب الذي تنتج الفخاخ الضخمة خارج الخلية العَدلات (شبكات) العَدلات منخفض الكثافة البشرية (LDN)، تعافي من سائل الغسل البريتوني بعد العملية الجراحية، وفخ كفاءة الخلايا السرطانية الحرة التي تنمو في وقت لاحق.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نقدم هنا، أسلوب الذي تنتج الفخاخ الضخمة خارج الخلية العَدلات (شبكات) العَدلات منخفض الكثافة البشرية (LDN)، تعافي من سائل الغسل البريتوني بعد العملية الجراحية، وفخ كفاءة الخلايا السرطانية الحرة التي تنمو في وقت لاحق.
تفعيل العَدلات الإصدار العَدلات خارج الخلية الفخاخ (شبكات)، الذي يمكن التقاط وتدمر الميكروبات. تشير الدراسات الأخيرة إلى أن شبكات متورطة في عمليات الأمراض المختلفة، مثل الانبثاث المرض وتجلط الدم والأورام الذاتية. وهنا نعرض تقنية مفصلة في المختبر للكشف عن النشاط الصافي أثناء محاصرة الخلايا السرطانية الحرة، التي تنمو بعد الإلحاق لشبكات. أولاً، جمعنا العَدلات منخفض الكثافة (LDN) من سائل الغسل البريتوني بعد العملية الجراحية من المرضى الذين خضعوا لاباروتوميس. استزراع القصيرة الأجل من LDN أسفرت عن تشكيل صافي الضخمة التي كانت تصور مع الأخضر الفلوريسنت النووية وكروموسوم كونتيرستين. بعد الحضانة المشتركة لخطوط الخلايا البشرية سرطان المعدة MKN45 "و" أوكوم-1 "و" نوجك-4 مع الشباك، حوصر العديد من الخلايا السرطانية بالشباك. في وقت لاحق، المرفقات ألغى تماما بتدهور شبكات مع "الوقت الفاصل بين أولاً الدناز" الفيديو كشفت أن الخلايا السرطانية قد وقعت في شرك الشباك لم يمت ولكن بدلاً من ذلك نما بقوة في ثقافة مستمرة. يمكن تطبيق هذه الأساليب للكشف عن التفاعلات لاصقة بين الشباك وأنواع مختلفة من الخلايا والمواد.
عادة يتم فصل polymorph العَدلات النووية في تعميم الدم من الخلايا وحيدات النوى من خلال أسلوب إعداد التدرج الكثافة. بيد أن بعض العَدلات المعروف العَدلات منخفض الكثافة (LDN)، مع تعمل CD11b(+)، CD15(+)، CD16(+)، و CD14(-)، المنقي يشترك مع الخلايا وحيدات النوى. العدد النسبي ل LDN زيادة كبيرة في مختلف الحالات المرضية بما في ذلك أمراض المناعة الذاتية1،2، الانتان3و4،السرطان5. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن LDN فئة متميزة فينوتيبيكالي ووظيفيا من العَدلات6. تجدر الإشارة إلى أن LDN في تعميم الدم أكثر احتمالاً لإنتاج العَدلات الفخاخ خارج الخلية (شبكات) من الكثافة الطبيعية العَدلات2،7. شبكات الهياكل الشبيهة بالويب تتألف من الأحماض النووية، هيستونيس، البروتياز، والبروتينات الحبيبية وسيتوسوليك، وأنهم يمكن أن كفاءة الأجهزة وتدمير8من مسببات الأمراض.
في الآونة الأخيرة، أظهرت شبكات لالتقاط ليس فقط الجراثيم، ولكن أيضا الصفائح الدموية وتعميم الخلايا السرطانية التي يمكن أن تساعد في خثرة تشكيل9 والورم الانبثاث10،11. ومع ذلك، أن الآليات الجزيئية وراء لاصقة التفاعلات بين شبكات والصفائح الدموية أو الخلايا السرطانية لا تزال غير واضحة. في الآونة الأخيرة، كشفت مقايسة التصاق في المختبر أن خلايا سرطان الدم النقوي (K56212) وخلايا سرطان الرئة (A54913) إرفاق إلى شبكات عبر integrins β1 و β3. الكتاب يستخدم صافي رصيد المعزولة من العَدلات وتنشيطه بواسطة phorbol 12-ميريستاتي 13-خلات (سلطة النقد الفلسطينية) ك الركيزة التصاق14. على الرغم من أن هذا الفحص يتيح الكشف عن التفاعل الحقيقي مع مكونات صافي في غياب العَدلات، والقول ما إذا كان "الخلية الحرة الأوراق المالية الصافية" معزول بواسطة الطرد المركزي عالية السرعة يحتفظ بنية الجزيئية متطابقة لشبكات إنتاج في فيفو. في الآونة الأخيرة، وجدنا أن السائل البريتوني الغسل بعد عملية جراحية في البطن الواردة LDN ناضجة كثيرة، وإنشاء شبكات واسعة النطاق، وتعلق على الخلايا السرطانية تسبب الانبثاث البريتوني15. في هذه الدراسة، درسنا بنجاح التصاق الخلايا السرطانية لشبكات سليمة دون أي تلاعب المادية. وهنا نعرض تفاصيل تقنية للكشف عن التفاعلات لاصقة بين شبكات وخلايا الورم مجاناً.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أقرت "المؤسسية استعراض مجلس جيتشي الطبية جامعة" LDN وتم الحصول عليها من المرضى المسجلين في هذه الدراسة.
1-عزل LDN من لافاجيس التجويف البطني والكشف عن صافي
2-تلطيخ الخلايا السرطانية مع الصبغ الأحمر نيون خلية رابط
3-تحليل ورم الخلية الانضمام إلى شبكات
4-الوقت الفاصل تحليل أشرطة الفيديو للخلايا السرطانية المحاصرين
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في ثقافة 2 ساعة، LDN CD66b(+) المستمدة من الغسل البريتوني السوائل أظهرت سلسلة هياكل ملطخة بصبغة الفلورسنت الأخضر للنووي وكروموسوم (الشكل 1B)، بينما CD66b(-) الخلايا وحيدات النوى لم (الشكل 1). بيد عند الثقافات LDN كانت pretreated مع 100 الدناز U/mL، بنية مميزة قد دمرت (الشكل 1)، مما يشير إلى أنها كانت تتألف من الحمض النووي خارج الخلية طردوا من العَدلات. عندما كانت مثقف LDN على ألواح البلاستيك دون طلاء...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وأفادت الدراسات السابقة أن تعمم الخلايا السرطانية يمكن المحاصرين بركائز الصافية في فيفو10،11. أظهرت خلايا سرطان الثدي المنتشر لحفز العَدلات والحث على تشكيل شبكات، التي تساعد في نمو الخلايا السرطانية في الجهاز الهدف17. وبالإضافة إلى ذلك، وجدنا أن الثقافات القصيرة الأجل من LDN من سائل الغسل بعد العملية الجراحية أنتج شبكات واسعة النطاق التي يمكن إيقاع كفاءة الخلايا السرطانية دون مواصلة تحفيز15. هذه الملاحظات ت...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.
ونشكر السيدة ج. شينوهارا وندا أولاً للأعمال الفنية والكتابية. أيضا، ونحن نشكر الدكتور شيرو ماتسوموتو وهرتا هيدينوري كوراشينا كينتارو كازويا تاكاهاشي لتعاونها من أجل اكتساب عينة في غرفة العمليات. وأيد هذا العمل معونات "البحث العلمي" من وزارة التعليم والعلوم، الرياضة، والثقافة اليابانية والجمعية اليابانية "النهوض بالعلم" (10606 ك 17).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Ficoll-Paque PLUS | GE Healthcare ، السويد | 17-1440-02 | |
| StraightFrom & trade ؛ الدم الكامل CD66b MicroBeads | Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا | 130-104-913 | |
| Fc block | Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا | 130-059-901 | |
| MACS Rinsing Solution | Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا | 130-091-222 | |
| MACS BSA Stock Solution | Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا | 130-091-376 | |
| LS Columns | Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا | 130-041-306 | |
| MACS فاصل مغناطيسي | Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا | 130-042-501 | |
| SYTOX محلول بقعة الحمض النووي الأخضر 5 ملي مولار في DMSO | Thermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية | S7020 | |
| PKH26 مجموعة ربط الخلايا الفلورية الحمراء لوضع العلامات على غشاء الخلية العامة | Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | P9691 | |
| المخفف C | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | CGLDIL | |
| متوسط | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | R8758 | |
| Dulbecco ' s النسر المعدل متوسط الارتفاع الجلوكوز (DMEM) | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | D5796 | |
| Dulbecco ' s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS) | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | D8537 | |
| 0.5 مول / لتر محلول EDTA (درجة الحموضة 8.0) | nacalai tesque ، اليابان | 06894-14 | |
| مصل الأبقار الجنيني ، مؤهل ، معتمد من وزارة الزراعة الأمريكية مناطق | gibco من قبل Life Technologies ، المكسيك | 10437-028 | |
| ألبومين مصل البقر المجفف بالتجميد ، & ge ؛ 96٪ (الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز) | سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | A2153 | |
| البنسلين ستربتومايسين | لايف تكنولوجيز اليابان | 15140-122 | |
| البلازموسين الوقائي | InvivoGen ، سان دييغو ، كاليفورنيا - الولايات المتحدة الأمريكية | ant-mpp | |
| DNase I | Worthington ، Lakewood NJ) | LS002138 | |
| MICROPLATE المطلي ب Poly-L-Lysine 6Well | IWAKI ، اليابان | 4810-040 | |
| بولي إل ليسين مطلي ب MICROPLATE 24Well | IWAKI ، اليابان | 4820-040 | |
| المجهر المجسم الفلوريسين | BX8000 ، Keyence ، أوساكا اليابان | BZ-X710 | |
| نظام مراقبة خلية العرض الكامل | نيكون ، كاناغاوا ، اليابان | BioStudio (BS-M10) | |
| MKN45 خط خلايا سرطان المعدة البشري | Riken ، Tukuba Japan | N / A | |
| NUGC-4 خط خلايا سرطان المعدة البشري | Riken ، Tukuba Japan | N / A | |
| OCUM-1 خط خلايا سرطان المعدة البشري | مدينة أوساكا ، اليابان | غير | هدية من الدكتور م. ياشيرو |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.