Method Article

قياس التغيرات الحادة في نشاط العصب متعاطفة الكلوي ردا على الجهاز العصبي المركزي التلاعب في الفئران تخديره

DOI:

10.3791/58205

⸱

September 11th, 2018

 , 
1Department of Biobehavioral Health Science, College of Nursing, University of Illinois at Chicago, 2Department of Anesthesiology, Medical College of Wisconsin and Zablocki VA Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أساليب لقياس استجابات متعاطفة والقلب والأوعية الدموية إلى الجهاز العصبي المركزي (CNS) التلاعب هامة للنهوض بعلم الأعصاب. تم تطوير هذا البروتوكول لمساعدة العلماء بقياس وتقدير التغيرات الحادة في نشاط العصب متعاطفة الكلوي (رسنا) في الفئران تخديره (غير--البقاء على قيد الحياة).

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشاط العصب متعاطفة الكلوي (رسنا) ومتوسط الضغط الشرياني من المعالم الهامة في أبحاث القلب والأوعية الدموية والاستقلال الذاتي؛ ومع ذلك، هناك موارد محدودة توجيه العلماء في تقنيات لقياس وتحليل هذه المتغيرات. ويصف هذا البروتوكول أساليب لقياس رسنا ومتوسط الضغط الشرياني في تخديره من الفئران. ويشمل البروتوكول أيضا النهج للوصول إلى الدماغ خلال تسجيلات رسنا للتلاعب الجهاز العصبي المركزي (CNS). ومتوافق مع تقنية تسجيل رسنا دوائية، أوبتوجينيتيك، أو التحفيز الكهربائي للجهاز العصبي المركزي. النهج مفيد عند محقق سيتم قياس الاستجابات اللاإرادي (دقيقة إلى ح) القصيرة الأجل في تجارب غير البقاء على قيد الحياة لربط تشريحيا بنوي الجهاز العصبي المركزي. ليس المقصود بالنهج التي ستستخدم للحصول على تسجيلات المزمن (البقاء على قيد الحياة) من رسنا في الفئران. التصريف في رسنا، بلغ متوسط تصحيح رسنا، ويمكن أن يكون الضغط الشرياني يعني كمياً وتحليلها كذلك استخدام الاختبارات الإحصائية حدودي. كما يتم وصف الأساليب للحصول على وصول وريدي وتسجيل الضغط الشرياني يعني تيليميتريكالي، وتثبيت الدماغ للتحليل النسيجي في المستقبل في هذه المادة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إعلام الاكتشافات قبل الإكلينيكية حول التحكم اللاإرادي لنظام القلب والأوعية الدموية استراتيجيات إدارة الاضطرابات مثل ارتفاع ضغط الدم وفشل القلب، وأمراض الكلي المزمنة. فرط النشاط العصبي الودي وانخفاض نغمة القلب تحفيزه تسهم في ارتفاع ضغط الدم (BP)1. تدفق متعاطفة الكلوي المزمن مرتفعة يعزز إفراز الكاتيكولامينات ويقلل من تدفق الدم الكلوي، مع عواقب ضارة على أنظمة القلب والأوعية الدموية/كلوي2،3. لتحديد المسارات العصبية الحيوية المؤدية إلى اختلال وظيفي اللاإرادي، دراسات في القوارض هامة لتحديد كيفية تنظيم الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي (CNS) متعاطفة مع المعلمات. والغرض من هذا البروتوكول توفير معلومات تقنية حول قياس نشاط العصب متعاطفة الكلوي (رسنا) وشركة بريتيش بتروليوم وتحديد الأساليب لقياس التغييرات الحادة متعاطفة مع ردا على الجهاز العصبي المركزي التلاعب في الفئران تخديره.

قياسات رسنا (عدم بقاء) الحادة (دقيقة دائم إلى ح) مفيدة عند العلماء سيتم التحقيق في الجهاز العصبي المركزي عقاقيري، كهربائياً، أو تخديره أوبتوجينيتيكالي في الفئران لتحديد المهام لنواة محددة. باستخدام هذه الأساليب، هياكل مثل نواة الانفرادي، رمادي بيرياكويدوكتال، تيجمينتوم بيدونكولوبونتيني، ولب فينترولاتيرال روسترال تم التحقيق لتحديد المسارات العصبية الحيوية تنظيم معلمات متعاطفة مع4، 5،،من67. هذا النهج مهم لتحديد أهداف الجهاز العصبي المركزي التحقيق في نماذج المزمن من خلل اللاإرادي8،9. لإكمال هذه التجارب، يتطلب المختبر لحام الحديد ومجهر جراحي، الإطار ستيريوتاكسيك، ميكروليكترودي مكبر للصوت وجهاز الصوت. اعتماداً على العوامل الموجودة في المختبر التي تسهم في الضوضاء الكهربائية، قد تتطلب مجال تسجيل/الجراحية فاراداي قفص/أسس حزام للحد من الضوضاء الكهربائية في تسجيل رسنا. إذا كان تحليل الدماغ سوف يتطلب تثبيت الأنسجة، غطاء المضخة والأبخرة نضح مطلوبة. البيانات يمكن أن تكون رقمية وتسجيلها باستخدام عدة الفسيولوجي البرمجيات والبيانات اقتناء (محول تناظري رقمي) وحدات4،5، مع تحليل مختلف الخيارات والتوافق لإدراج إشارات القياس البعدي .

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الأساليب الموصوفة بموافقة "اللجنة الرعاية المؤسسية الحيوان" في جامعة إلينوي في شيكاغو.

1-خلق أقطاب رسنا ثنائي القطب

  1. لإنشاء مسرى، قص قطعتين من أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ كل حوالي 18 مم في الطول. قطع قطعة واحدة من البولي إثيلين (PE-50) الأنابيب حوالي 15 ملم منذ وقت طويل. تغذية كل قطعة من الأسلاك في الأنبوب، ترك السلك بارزة من كلا الطرفين.
  2. إزالة العزل من نهايات الأسلاك؛ قطع الأسلاك يترك 2-3 مم أسلاك المكشوفة. في نهاية واحدة، تجعيد دبابيس الذكور عبر الأسلاك المكشوفة. دبابيس بشكل أمن إلى الأسلاك لحام وتأمين الدبابيس داخل قطاع موصل من تغطية الاتصال مع الإيبوكسي.
    ملاحظة: نهج بديل أن يتجنب لحام استخدام مقاطع التمساح الاتصال/الإفراج السريع.
  3. على الطرف المقابل من مسرى، إزالة العزل من نهايات الأسلاك، يترك 2-3 مم أسلاك المكشوفة. ينحني هذا الجزء من الأسلاك لإنشاء "V" صغيرة على شكل خطاطيف في أسلاك الأغلفة.
    ملاحظة: هذا هو الجزء القطب التي ستكون على اتصال العصب متعاطفة الكلوي. من المهم أن ختم هذا النهاية الحيلولة دون دخول الأنبوب سوائل. سيليكون أو الإيبوكسي فعالة يمكن استخدامها.

2-إدارة التخدير وتحضير المواقع الجراحية

  1. إدارة التخدير للفئران "سبراغ داولي" ذكور (سن 9-11 أسبوعا، يزن 150-400 جرام). إدارة بينتوباربيتال الصوديوم 50 مغ/كغ عن طريق حقنه داخل (IP). تقييم طائرة مستقرة للتخدير أثناء الجراحة، تحقق منعكس تو-رشة كل 15 دقيقة وإعادة جرعة التخدير حسب الحاجة.
    ملاحظة: استخدمت الصوديوم بينتوباربيتال (نيمبوتال) في الدراسات السابقة لتحقيق طائرة المطرد للتخدير دون التدخل مع تحوير رسنا4،،من56. هذا البروتوكول هو لجراحة غير البقاء على قيد الحياة، حتى لا يكون هناك لا استرداد/ما بعد-التعاونية فترة الرصد.
  2. إعداد موقع الجراحية وفقا للمبادئ التوجيهية لرعاية الحيوان المؤسسية (أي. ويحلق الفئران في البطن والظهر، ورئيس؛ وتطهير الجلد بمحلول بوفيدون 10%؛ وتطبيق مواد التشحيم العين؛ ووضع الفئران على وسادة تدفئة). الحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية خلال التجارب.

3-كانولاتي على المنوال فخذي (للوصول عن طريق الحقن الوريدي)

  1. إضافة الهيبارين إلى 0.9% سالين معقم (لتحقيق 20 وحدة/مل). ملء حقنه 1 مل مع المياه المالحة هيبارينيزيد عن طريق إبرة ز 22. قم بتوصيل 15 سم أنابيب PE-50 إبرة وأنابيب التعبئة مع الحل.
  2. مع الفئران الكذب مستلق، إنشاء شق أفقي 2 سم في المنطقة الاربية. استخدام القطن ذات الرؤوس قضيب تطبيق، تشريح النسيج الضام لكشف فخذي الوريد والشريان. إجراء الشق مفتوحة، أما تطبيق مرنة هوك واحد-الإقامة الجراحية المضمونة إلى الحقل الجراحي مع الحرير الشريط أو استخدام هيموستاتس الصغيرة.
  3. استخدم هيموستاتس لثني طرف إبرة ز 22 بزاوية 90 درجة ليكون بمثابة مقدم قسطرة10.
  4. تصور هذه السفن تحت المجهر. فصل بلطف بالوريد والشريان باستخدام الملقط منحنية. مكان اثنين 12 سم الطويلة الحرير 5-0 خياطة تحت الوريد (واحد القاصي وواحد الدانية)؛ ضع الخياطة بنفس الطريقة تحت الشريان.
    1. التعادل خياطة القاصي (أسفل) أوككلودي في السياق؛ تأمين حواف هذا الخياطة للحقل الجراحي باستخدام الشريط الحرير أو هيموستاتس الصغيرة. اجذب الوريد مشدود ولكن ليس مع القوة الكثير أن السفينة سوف المسيل للدموع. ضع على المنوال عمودي على يد الجراح المهيمنة.
  5. استخدم عقده نصف أوفيرهاند فضفاضة في خياطة الدانية إلى أوككلودي بإيجاز على المنوال. مع ملقط مرقئ حساسة، المشبك برفق هذا الخياطة أوككلودي تدفق الدم. اضغط الإبرة ز 22 مع نصيحة بنت في اليد غير المهيمنة. نتصافح الأنبوب مع الملقط استخدام اليد المهيمنة.
  6. ثقب حفرة صغيرة في الوريد مع المقدم القسطرة (الخطوة 3، 3) وإدراج الأنبوب PE-50 (قبل مليئة بالمياه المالحة هيبارينيزيد) في السفينة؛ استخدام إبرة بنت للحفاظ على فتح في فتح السفينة والمساعدة في تحديد المواقع غيض القسطرة في السفينة10.
    1. الإفراج عن خياطة الدانية ولطف استواء 0.2 مل من المحلول الملحي هيبارينيزيد في هذا السياق؛ النهوض بالقسطرة. تحقق من عودة الدم من الوريد لضمان التوظيف السليم. إكمال عقده الدانية، ومع التعادل خياطة البعيدة، وتأمين الأنابيب داخل الوريد.
  7. استخدام access الوريدي أثناء التجارب لإدارة التخدير تكميلية أو الأدوية وجمع الدم. إدراج رابط 3-الطريقة إذا سيكون من الضروري الحقن الوريدي العادية وأخذ عينات من الدم. تحقق المؤذية تو-رشة العاكسة كل 15 دقيقة تيتراتي التخدير.

4-كانولاتي شريان فخذي لرصد متوسط الضغط الشرياني

  1. تصور الشريان تحت المجهر. مشابهة للطريقة المستخدمة ل cannulation وريدي، ربط خياطة القاصي (3.4 خطوة) أوككلودي الشريان؛ تأمين حواف خياطة هذا الحقل الجراحي مع الشريط الحرير ووضع الشريان عمودي على يد الجراح المهيمنة.
  2. الوصول إلى الشرايين في حالة استخدام نظام محول طاقة/ضخ الضغط
    1. قم بتوصيل محول طاقة/أنابيب الضغط كيس مالحة 0.9% 500 مل. تدفق الأنابيب مع المياه المالحة، إزالة جميع فقاعات، ووضع الكيس داخل كيس ضغط محفز للضغط على النظام.
    2. كما هو موضح في "الخطوة 3، 1"، ملء حقنه 1 مل مع المياه المالحة هيبارينيزيد عن طريق إبرة ز 22 وتوصيل 15 سم PE-50 الإبرة (تدفق الأنابيب مع المالحة هيبارينيزيد).
    3. استخدم عقده نصف فضفاضة في خياطة الدانية لفترة وجيزة أوككلودي الشريان. عقد المقدم القسطرة (الخطوة 3.3) في اليد غير المهيمنة. عقد تلميح القاصي من PE-50 مع السفينة cannulation الملقط في اليد المهيمنة. ثقب حفرة في الشريان مع الإبرة ز 22 بنت وإدراج القنية في السفينة.
    4. الإفراج عن خياطة الدانية، دافق بلطف 0.2 مل من المحلول الملحي هيبارينيزيد في الشريان وتقدم القسطرة قدر الإمكان. فحص للدم الشرياني العودة لضمان التوظيف السليم. إكمال عقده الدانية، ومع التعادل خياطة البعيدة، وتأمين الأنابيب داخل الشريان. قم بتوصيل خط الشرياني محول طاقة/أنابيب الضغط.
      ملاحظة: يمكن مسجلة الجزء القاصي من الأنابيب إلى اللكتات للفئران لتأمين الخط الشرياني. وقد وصف نهج بديل للسفينة cannulation يسبرسن et al.؛ ولا يشمل 11 على البروتوكول يختلف باستخدام الكامشات لنشر الشق، الغراء بدلاً من خياطة لتأمين الأنابيب، والنهج المقدم إبرة بنت.
  3. الوصول إلى الشرايين إذا كان استخدام القياس عن بعد
    1. فحص القسطرة الضغط الاستشعار تحت تكبير عالية قبل cannulation الشرياني. ضمان أن القسطرة خالية من الفقاعات/الحطام وغضروف سليمة بين بالسائل (الدانية) وشغل جل مكونات (القاصي). قبل كل غرس، عبوة الجل على الحافة البعيدة للقسطرة. قم بتشغيل جهاز الإرسال باستخدام مغناطيس؛ رصد BP أثناء عملية جراحية لتحمل موضع الكمال.
    2. استخدم عقده نصف أوفيرهاند فضفاضة في خياطة الدانية لفترة وجيزة أوككلودي شريان فخذي. عقد المقدم القسطرة (الخطوة 3.3) في اليد غير المهيمنة. عقد غيض قنية لوحدة القياس عن بعد مع السفينة cannulation الملقط لتجنب تشريد جل من الحافة.
    3. ثقب حفرة في الشريان مع الإبرة ز 22 بنت وإدراج القنية في الشريان استخدام الملقط كانولاتيون السفينة لتجنب تشريد جل من الحافة. تقدم قنية قدر الإمكان. استخدام العلاقات خياطة الدانية والبعيدة، تأمين القسطرة الضغط.
    4. شد جسم زرع القياس عن بعد داخل الجناح المجاور للشق، وإغلاق هذا الشق باستخدام خياطة نايلون 4-0 في إبرة قطع. إيقاف تشغيل أجهزة القياس عن بعد بالمغناطيس في ختام فترة التسجيل الحفاظ على عمر البطارية.

5-موقف الفئران في إطار الجراحة ستيريوتاكسيك للوصول إلى المخ

  1. تحرك بلطف الفئران في موقف المعرضة في إطار عملية جراحية ستيريوتاكسيك.
  2. ضع الفئران بين القضبان الإذن، وضبط شريط القاطعة لتحقيق التكافؤ في ذروة أمداً وبريجما. تحديد المواقع قد تعتمد على سلالة الفئران، والوزن، ومواقع لأهداف الجهاز العصبي المركزي.
  3. جعل شق مشرط روستروكاودال 2 سم من خلال خط الوسط لفروة الرأس. استخدام القطن ذات الرؤوس قضيب تطبيق، إيمانا راسخا إزالة النسيج الضام من سطح الجمجمة. تطبيق بيروكسيد الهيدروجين في الجمجمة للمساعدة في تصور بريجما، لامدا، وخط الوسط خياطة الجروح.
  4. استخدام أطلس الدماغ الفئران بدليل استهداف12، وحفر لدغ ثقب العظم، الحجم للوصول إلى القطب، من خلال الجمجمة.

6-عزل الأعصاب متعاطفة الكلوي

  1. قم بتوصيل السلك الكهربائي رسنا (الخطوات 1، 1، 1-3) إلى 10 العاشر ما قبل مكبر للصوت ومكبر للصوت ميكروليكترودي.
  2. عزل الأعصاب الكلي من خلال شق خلف الصفاق قبل أو بعد، يتم تأمين الفئران في الإطار ستيريوتاكسيك. ضع أقطاب رسنا بمجرد الفئران في الإطار ستيريوتاكسيك. جعل شق مشرط تمتد من 4-5 سم تحت الأضلاع باتجاه والذيلية، قليلاً الجانبي للعمود الفقري. تشريح بلانت شق لتصور العضلات باراسبينال.
  3. استخدام مقص لجعل شق روستروكاودال سطحية جداً 1-2 سم حيث يلتقي الدهون في العضلات. استخدام القطن ذات الرؤوس قضيب تطبيق، تنتشر الدهون بعيداً عن العضلات لتصور الكلي. من المهم عدم إدخال مساحة البريتوني.
  4. استخدام الكامشات للفصل الكلي بلطف من العضلات باراسبينال لتصور شريان كلوي والشريان الاورطي البطني. لا تمتد هذه السفن مفرطة لتجنب إتلاف الأعصاب الكلوية. استخدام وسادة شاش القطن 2 "x 2" غارقة في المياه المالحة لحماية الكلي من الإصابة.
  5. إطار التكبير عالية، تحديد الأعصاب الكلوية في جيب شق. الحزم العصبية مرئية بسهولة في الزاوية اليمنى التي شكلتها الشريان الاورطي والشريان الكلوي. الأعصاب الكلوية تتبع عن كثب شريان كلوي من الشريان الاورطي إلى الكليتين.
  6. حدد جزء من الحزمة العصبية التي سيتم وضعها على مسرى التسجيل. تشريح الألياف العصبية من الأنسجة المحيطة بها/السفينة باستخدام الملقط تشريح الصغرى بلطف.
  7. تأمين السلك الكهربائي رسنا في حامل (على سبيل المثال-، إحدى قصاصات التمساح يعلق على موقف دعم). أقل الكهربائي على مستوى الجزء العصبية. استخدام ربط عصب لرفع جزء العصب الكلوي على مسرى بلطف دون تمتد على العصب.
    ملاحظة: يجب أن يقوم العصب داخل كل "V" على شكل خطاف في أسلاك الأغلفة، موازية للعصب. يجب أن لا تلمس الأسلاك الكهربائي الأنسجة، الدم، أو أخرى سوائل الليمفاوية.
  8. ملء الشق مع الزيوت المعدنية للحيلولة دون أن تصبح جافة العصب متعاطفة الكلوي المكشوفة. استخدام قصاصة تأريض مع نهاية واحدة على الجلد للشق وأخرى مرفقة قفص فاراداي.
  9. توجيه إشارة إلى مكبرات الصوت باستخدام عالية ومنخفضة-تمرير التصفية (10 هرتز و 3 كيلو هرتز). ضبط كسب ما يصل إلى 10 ك. تضمين جهاز صوت تقييم نمط انفجار رسنا. استخدام معدلات أخذ العينات تتراوح بين 2,000 10,000 هرتز4،5،6،،من78. استخدام معدل أخذ عينات زيادة عند تلاعب بالجهاز العصبي المركزي هو الافتراض تتسبب في الاستجابات السريعة/موجز متعاطفة.

7-تسجيل البيانات

  1. تقييم جودة التسجيل رسنا باستحضار باروريفليكس مع حقن بلعه 1 مل من المحلول الملحي أو 10 ميكروغرام/مل فينيليفريني (في 0.1 مل) عن طريق الوريد. كما هو موضح في الشكل 1، ينبغي زيادة BP التسريب وتمنع رسنا. زيادة في متوسط الضغط الشرياني من 60-80 مم زئبق كاف سيمباثوينهيبيشن الكلوي4،،من1314.
  2. ضبط موضع الأقطاب لتحسين الإشارة إذا لزم الأمر. إعادة تموضع مطلوب إذا كان العصب ليس على اتصال بكلا خطاطيف على مسرى، أو إذا كان أي سوائل الأنسجة أو الدم أو الليمفاوية على اتصال بالأسلاك.
    ملاحظة: الحاجة إلى إعادة تموضع تستند إلى خصائص الإفرازات العصب السمعي.
    1. إذا رشقات نارية رسنا لا تحدث دورياً مع دورة القلب، وإذا كان هناك أي تدخل في التسجيل، ثم إعادة بعناية مسرى.
    2. كما الحركات التنفسية يمكن أن تؤثر أيضا على جودة التسجيل رسنا، تحسين الإشارة بتحريك بلطف مسرى في موقف حيث حركات العضلات عدم تعطيل الكهربائي أثناء التنفس.
  3. حالما يتم الحصول على إشارة واضحة، تأمين مسرى رسنا في مكان بسحب الزيوت المعدنية وتطبيق هلام السليكا لتغطية الاتصال العصب/القطب في جيب شق. لا تقم بتحريك الفئران قبل الجل وحددت تماما.
  4. تنفيذ البروتوكولات التلاعب بالجهاز العصبي المركزي أثناء تسجيل رسنا باستمرار ويعني الضغط الشرياني. إذا تم استخدام ميكروينجيكتور/بولسير للتلاعب جذع الدماغ، يمكن إدخال إشارة منطق من هذا الجهاز إلى تسجيلات رسنا/BP لتوثيق توقيت التلاعب الجهاز العصبي المركزي.
  5. عند الانتهاء من هذه التجربة، تحديد مستوى الضوضاء بسحق العصب الدانية إلى أقطاب تسجيل بين هلام السليكا وعضلة العمود الفقري. سجل على الأقل 30 ثانية لهذه القيمة "صفر" رسنا4،،من56. كنهج بديل لتحديد الضوضاء، إدارة عائقا ganglionic المفعول القصير الأمد مثل الأتروبين "أو" هيكساميثونيوم "أو" تشلوريسونداميني "أو" بينتولينيوم طرطرات8،،من1516، 17.
  6. بعناية إزالة مسرى رسنا وإزالة أي آثار لجل السليكا من أقطاب الأسلاك. حفظ الكهربائي لإعادة استخدامها. إيقاف تشغيل جهاز الإرسال القياس عن بعد وإزالته، مع الحرص على عدم الأضرار غيض القسطرة.

8-القتل الرحيم (نضح ترانسكاردياك)

  1. تحديد مواقع التلاعب الجهاز العصبي المركزي عن طريق حقن الأصباغ أو فلوروتشروميس، خلق آفات كهربائياً، أو عن طريق الكشف عن التعبير ج-المنحدر.
  2. إذا كان تحليل الدماغ سوف يتطلب التثبيت، إعداد الفئران لنضح ترانسكاردياك. تقييم منعكس تو-قرصه لضمان بقاء الفئران عميق أنيسثيتيزيد. يقدم التخدير تكميلية إذا لزم الأمر. إجراء نضح ترانسكاردياك من بارافورمالدهيد مثبت في غطاء دخان.
    تنبيه: طماع الجلد/العين مهيجة.
  3. إدراج أنابيب ضخ نضح ورئيس الوزراء مع المحلول الملحي العادي 0.9 في المائة.
  4. جعل شق الوحشي 5-6 سم عن طريق الجلد وجدار البطن مباشرة تحت القفص الصدري وفتح تجويف الصدر. فصل الكبد بعناية من الحجاب الحاجز. إجراء شق صغير في الحجاب الحاجز باستخدام مقص حادة منحنية. حقن 0.1 مل الهيبارين مباشرة في البطين الأيسر.
  5. تمرير إبرة التروية في البطين الأيسر (إبرة تزقيمية فولاذ المقاوم للصدأ ويعمل جيدا لهذه الخطوة) بأي ثقب في القلب أو بقطع شق صغير باستخدام مقص حاد وتمرير تزقيمية مدتها إبرة عن طريق حتى التلميح مرئياً من خلال جدار الشريان الاورطي (لكن يجب أن لا تصل إلى قوس الاورطي). استخدام قصاصة الجراحية أو الكهربائية لتأمين الإبرة في المكان.
  6. باستخدام مضخة تسريب، تدير المحلول الملحي العادي 0.9% (درجة حرارة الغرفة). فور إنشاء شق 2-3 مم في الاذين الأيمن لإنشاء منفذ شطف المالحة. لا تقطع الشريان الاورطي تنازلي. يستمر الشطف المالحة اللون التغييرات الكبد من الأحمر/براون إلى أصفر باهت، ضخ ما يقرب من 400 مل أكثر من 2-3 دقيقة.
  7. إيقاف المضخة. التبديل بيرفوساتي لمثبت (على سبيل المثال.، بارافورمالدهيد 10% فورمالين أو 4 في المائة)؛ صب 400 مل أكثر من 2-3 دقيقة إزالة الدماغ وتخزين العينة في حل مثبت بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية قبل نقل الأنسجة إلى السكروز 30% (30 مل سكروز المذاب في 100 مل من 0.1 م مخزنة الفوسفات المالحة) لمدة 3 أيام على الأقل، أو حتى المصارف الدماغ ، كريوبروتيكشن قبل كريوجينيتيك تمزيقها18.

9-تحليل البيانات

  1. كامل-موجه تصحيح رسنا الخام للحصول على القيم المطلقة. كامل-موجه تصحيح قطعة s 10 إشارة الضوضاء الخام. من المهم أن استبعاد أي من الدراسات التي تأثرت انخفاض نسبة الإشارة إلى الضوضاء. في دراسات قياس رسنا، طبقت المحققين معايير مسبقاً مثل اشتراط إشارة إلى نسب الضوضاء تتجاوز19،،2:1 إلى 6:11720.
  2. حساب المتوسط تصحيح رسنا لقطاعات غير متداخلة (µV) وطرح التقدير الضوضاء (µV). اعتماداً على أهداف التجربة، قد حدد المحققون فترات مثل 10 s (الشكل 1) أو حساب س. 1 يعني باستخدام خيارات التحليل الموجي في البرنامج الفيزيولوجي أو تصدير البيانات إلى جداول البيانات لحساب المتوسطات ل الفواصل الزمنية المحددة.
  3. لتطبيع عبر مختلف الحيوانات، التعبير عن قيم لمزيد من التحليل كتغيير المائة من خط الأساس. استخدام إحصاءات بارامتريه لإجراء المقارنات بين المجموعة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويبين الشكل 1 تسجيل عينة من الفئران تخديره نيمبوتال رسنا وشركة بريتيش بتروليوم. حقن الوريد فينيليفريني واستخدمت للحث على زيادة في متوسط الضغط الشرياني واستحضار باروريفليكس وعابر4،سيمباثوينهيبيشن6. لتحديد مقدار رسنا، تصحيح رسنا الخام ومتوسط غير متداخلة الأجزاء s 10؛ طرح تقدير الضجيج من كل مقطع.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتشمل الخطوات الحاسمة لقياس رسنا: (1) تجنب تمتد من شريان كلوي والأعصاب عند فصل الكلي من العضلات باراسبينال وعند وضع الجزء العصب على أقطاب تسجيل، (2) بعناية تشريح ألياف العصب الكلوي من الأنسجة المحيطة بها/السفينة، (3) ضمان أن أسلاك الكهربائي خالية من الأنسجة والدم، أو السوائل الليمفاوية ومنع (4) العصب من الجفاف عن طريق تطبيق الزيوت المعدنية للعصب الكلوي وهلام السليكا إلى وحدة العصب الكهربائي. لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها، من المهم التأكد من أن نظام تسجيل يستند على نحو كاف. للحصول على إشارة واضحة إلى رسنا، يمكن تعديل موقف الق...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أن م. فينك عضو في "المجلس الاستشاري للعملاء" "بيانات العلوم الدولية".

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذه الدراسة المعهد الوطني "أبحاث التمريض" (K99/R00NR014369).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أنظمة أسلاك الفولاذ المقاومللصدأ AM ؛ Sequim ، WA791000RSNA قطب
كهربائي بولي إيثيلين (PE-50) أنابيبVWR ؛ رادنور ، PA63019-048RSNA الكهربائي ؛ قنية السفينة
موصل دبوس مصغرأنظمة AM ؛ Sequim ، WA520200أداة العقص الكهربائي RSNA
Daniels Manufacturing Corp. ؛ أورلاندو ، فلوريداM22520RSNA القطب
الكهربائي موصل الشريطأمفينول. بلدة كلينتون ، MI221-2653RSNA القطب
الكهربائي JB Kwik EpoxyJ-B Weld ، نوابض الكبريت ، TX8270RSNA الكهربائي
سيليكونPermatex ؛ هارتفورد ، CT2222RSNA قطب
الهيبارين الصوديوم. عن طريق الحقن (10 مل قارورة ، 1000 U / مل)KV إمدادات بيطرية ؛ ديفيد سيتي ، NEP03466سالكية الخط الوريدي
فينيليفرين حمض الهيدروكلوريك ؛ عن طريق الحقن (1 مل قارورة ؛ 10 مجم / مل)جراحية للأنجيوتنسين ؛ بروكتون ، ماساتشوستس950-6312اختبار تثبيط الودي الكلوي
بقامات جراحية مرنة أحادية الخطافجهاز هارفارد. هوليستون ، ماساتشوستس72-2595
الشريط الجراحي الحريري3M ، مينيابوليس ، مينيسوتا1538-0إبر الإقامات الجراحية الآمنة
، 20 جمسيجما ألدريتش ؛ سانت لويس ، ميزوريZ192554-100EAقنية الوعاء
دومون # 7 ملقط منحنيأدوات العلوم الجميلة ؛ فوستر سيتي ، كاليفورنيا11274-20قنية السفن
5-0 أربطة خياطة حريريةبرينتري العلمية. Braintree ، MASUT-S 106قنية الأوعية
ملقط مرقئ دقيقRoboz Surgical Instrument Co. ؛ Gaithersburg ، MDRS-7117قنية الأوعية الدموية وجراحة RSNA
ملقط مرقئ كريلأدوات العلوم الجميلة ؛ فوستر سيتي ، كاليفورنيا13004-14إبرة الانحناء
جهاز إرسال القياس عن بعدعلوم البيانات الدولية ؛ مينيابوليس ، مينيسوتاPA-10متوسط مراقبة الضغط الشرياني (القياس عن بعد)
إعادة هلام حقنةعلوم البيانات الدولية ؛ مينيابوليس ، مينيسوتا276-0038-001إعادة استخدام جهاز الإرسال (القياس عن بعد)
محول الضغط القابل للتصرفTranspac ؛ سان كليمنتي ، كاليفورنياMI-1224متوسط مراقبة الضغط الشرياني
مصفاة ضغط الكفة الشفافةMILA International Inc. ؛ فلورنسا ، كنتاكي2281339يعني مراقبة الضغط الشرياني
ملقط قنية الأوعيةأدوات العلوم الجميلة ؛ فوستر سيتي ، كاليفورنيا00574-11إدخال القسطرة
نايلون أحادي الشعيرات السوداء 4-0 خياطة على إبرة القطع العكسيةMcKesson Medical Surgical ؛ سان فرانسيسكو ، كاليفورنياS661GXجهاز إرسال القياس عن بعد الآمن
استقبال القياسعن بعد علوم البيانات الدولية ؛ مينيابوليس ، مينيسوتاRPC-1متوسط مراقبة الضغط الشرياني (القياس عن بعد) LabChart
Pro (برنامج) ، PowerLab (أجهزة الاستحواذ) ADInstruments ؛ كولورادو سبرينغز ، COML846 ، مصفوفة MX2 2.0 (متوافقة مع القياس عن بعد لعلوم البيانات الدولية)3 خيارات للبرامج / أجهزة الاستحواذ
SciWorks (البرمجيات) ، DataWave (أجهزة الاستحواذ)DataWave Technologies ، Loveland ، CON / A
Spike 2 (برنامج) ، Micro1401-3Cambridge Electronic Design Ltd. ، لندن المملكة المتحدة1401-3
Micro-drillشركة روبوز للأدوات الجراحية ؛ Gaithersburg ، MDRS-6300جراحة الجهاز العصبي المركزي
إطار الجراحة التجسيميةStoelting ؛ وود ديل ، IL51600CNS جراحة
مضخم القطب الكهربائي الدقيق مع أنظمة AM المكبرة 10X؛ Sequim ، WA1800-2RSNA تسجيل
أدوات العلومRehazards ؛ فوستر سيتي ، كاليفورنيا17009-07جراحة RSNA
ملاقطأدوات العلوم الدقيقة. فوستر سيتي ، كاليفورنيا11251-10جراحة RSNA
ذات الخطاف الصغير؛ فوستر سيتي ، كاليفورنيا10064-14جراحة RSNA
الزيوت المعدنيةفيشر العلمي ؛ والثام ، ماساتشوستس8042-47-5جراحة RSNA
مراقبة الصوتAM ؛ Sequim ، WA3300جراحة RSNA
هلام السيليكاواكر ، ميونيخ ؛ ألمانياRT601A-BRSNA جراحة
مشابك كهربائية تايكوللإلكترونيات. شافهاوزن ، سويسراEB0283-000تأريض أو تأمين إبرة التروية
مقص بون ، نقاط مستقيمة / حادةشركة Roboz Surgical Instrument Co ؛ Gaithersburg ، MDRS-5840Perfusion
Gavage إبرةجهاز هارفارد ؛ هوليستون ، ماساتشوستس75-0286
مضخة التروية ماسترفلكسكول بارمر ؛ فيرنون هيلز ، إلينوي7524-10Perfusion
Masterflex أنابيب سيليكون معالجة بالبلاتينCole-Parmer ؛ فيرنون هيلز ، إلينوي96410-15التروية
الفورمالين (محلول مخزن 10٪ ؛ 4 لتر)سيجما ألدريتش ؛ سانت لويس ، ميزوريHT501128
التروية السكروزسيجما ألدريتش ؛ سانت لويس ، ميزوريS0389الحماية بالتبريد
إمدادات شق الدموية خيوط جهاز الدقيقة تشريح دقيقة أدوات العلوم الدقيقةأنظمة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mancia, G., Grassi, G. The autonomic nervous system and hypertension. Circulation Research. 114 (11), 1804-1814 (2014).
  2. Kannan, A., Medina, R. I., Nagajothi, N., Balamuthusamy, S. Renal sympathetic nervous system and the effects of denervation on renal arteries. World Journal of Cardiology. 6 (8), 814-823 (2014).
  3. Johns, E. J., Kopp, U. C., DiBona, G. F. Neural control of renal function. Comprehensive Physiology. 1 (2), 767(2011).
  4. Fink, A. M., Dean, C., Piano, M. R., Carley, D. W. The pedunculopontine tegmentum controls renal sympathetic nerve activity and cardiorespiratory activities in Nembutal-anesthetized rats. PLoS One. 12 (11), e0187956(2017).
  5. Dean, C. Endocannabinoid modulation of sympathetic and cardiovascular responses to acute stress in the periaqueductal gray of the rat. American Journal of Physiology, Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 300 (3), R771-R779 (2011).
  6. Seagard, J. L., et al. Anandamide content and interaction of endocannabinoid/GABA modulatory effects in the NTS on baroreflex-evoked sympathoinhibition. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (3), H992-H1000 (2004).
  7. Ferreira, C. B., Cravo, S. L., Stocker, S. D. Airway obstruction produces widespread sympathoexcitation: Role of hypoxia, carotid chemoreceptors, and NTS neurotransmission. Physiological Reports. 6 (3), (2018).
  8. Stocker, S. D., Muntzel, M. S. Recording sympathetic nerve activity chronically in rats: Surgery techniques, assessment of nerve activity, and quantification. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 305 (10), H1407-H1416 (2013).
  9. Miki, K., Kosho, A., Hayashida, Y. Method for continuous measurements of renal sympathetic nerve activity and cardiovascular function during exercise in rats. Experimental Physiology. 87 (1), 33-39 (2002).
  10. Huetteman, D. A., Bogie, H. Direct blood pressure monitoring in laboratory rodents via implantable radio telemetry. Methods in Molecular Biology. 573, 57-73 (2009).
  11. Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), 3496(2012).
  12. Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. , Academic Press. Sydney/New York. (2014).
  13. Scislo, T. J., Augustyniak, R. A., O'Leary, D. S. Differential arterial baroreflex regulation of renal, lumbar, and adrenal sympathetic nerve activity in the rat. American Journal of Physiology. 275, R995-R1002 (1998).
  14. Kopp, U. C., Jones, S. Y., DiBona, G. F. Afferent renal denervation impairs baroreflex control of efferent renal sympathetic nerve activity. American Journal of Physiology, Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 295 (6), R1882-R1890 (2008).
  15. Guild, S. J., et al. Quantifying sympathetic nerve activity: problems, pitfalls and the need for standardization. Experimental Physiology. 95 (1), 41-50 (2010).
  16. Stocker, S. D., Hunwick, K. J., Toney, G. M. Hypothalamic paraventricular nucleus differentially supports lumbar and renal sympathetic outflow in water-deprived rats. Journal of Physiology. 15 (563 Pt 1), 249-263 (2005).
  17. Stocker, S. D., Gordon, K. W. J. Glutamate receptors in the hypothalamic paraventricular nucleus contribute to insulin-induced sympathoexcitation. Neurophysiology. 113 (5), 1302-1309 (2015).
  18. Saponjic, J., Radulovacki, M., Carley, D. W. Injection of glutamate into the pedunculopontine tegmental nuclei of anesthetized rat causes respiratory dysrhythmia and alters EEG and EMG power. Sleep and Breathing. 9 (2), 82-91 (2005).
  19. DiBona, G. F., Jones, S. Y. Dynamic analysis of renal nerve activity responses to baroreceptor denervation in hypertensive rats. Hypertension. 37 (4), 1153-1163 (2001).
  20. Kunitake, T., Kannan, H. Discharge pattern of renal sympathetic nerve activity in the conscious rat: spectral analysis of integrated activity. Journal of Neurophysiology. 84 (6), 2859-2867 (2000).
  21. Machado, B. H., Bonagamba, L. G. Microinjection of L-glutamate into the nucleus tractus solitarii increases arterial pressure in conscious rats. Brain Research. 576 (1), 131-138 (1992).
  22. Murakami, M., et al. Inhalation anesthesia is preferable for recording rat cardiac function using an electrocardiogram. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 37 (5), 834-839 (2014).
  23. Nakamura, T., Tanida, M., Niijima, A., Hibino, H., Shen, J., Nagai, K. Auditory stimulation affects renal sympathetic nerve activity and blood pressure in rats. Neuroscience Letters. 416 (2), 107-112 (2007).
  24. Bardgett, M. E., McCarthy, J. J., Stocker, S. D. Glutamatergic receptor activation in the rostral ventrolateral medulla mediates the sympathoexcitatory response to hyperinsulinemia. Hypertension. 55 (2), 284-290 (2010).
  25. Brozoski, D. T., Dean, C., Hopp, F. A., Seagard, J. L. Uptake blockade of endocannabinoids in the NTS modulates baroreflex-evoked sympathoinhibition. Brain Research. 1059 (2), 197-202 (2005).
  26. Barman, S. M. What can we learn about neural control of the cardiovascular system by studying rhythms in sympathetic nerve activity? International Journal of Psychophysiology. 103, 69-78 (2016).
  27. Charkoudian, N., Wallin, B. G. Sympathetic neural activity to the cardiovascular system: integrator of systemic physiology and interindividual characteristics. Comprehensive Physiology. 4 (2), 825-850 (2014).
  28. Malpas, S. C. Sympathetic nervous system overactivity and its role in the development of cardiovascular disease. Physiological Reviews. 90 (2), 513-557 (2010).
  29. Chen, W. W., Xiong, X. Q., Chen, Q., Li, Y. H., Kang, Y. M., Zhu, G. Q. Cardiac sympathetic afferent reflex and its implications for sympathetic activation in chronic heart failure and hypertension. Acta Physiologica. 213 (4), 778-794 (2015).
  30. Linz, D., et al. Modulation of renal sympathetic innervation: Recent insights beyond blood pressure control. Clinical Autonomic Research. , Epub ahead of print (2018).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Renal Sympathetic Nerve ActivityMean Arterial PressureCentral Nervous SystemAnesthetized RatsRSNA RecordingStereotaxic SurgeryBaroreflex AssessmentTelemetry ImplantationNerve DissectionAutonomic Regulation

Related Articles