يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التوليف وتوصيف للمشيمة شوندروتن سلفات (بلكسا)-استهداف المحتوى الدهني-بوليمر جسيمات نانوية

7.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/58209

⸱

سبتمبر 18, 2018

 ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 2Guangdong Key Laboratory of Nanomedicine, CAS Key Lab for Health Informatics, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 3Department of Chemistry, Guangdong Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا، بروتوكولا لتوليف كبريتات شوندروتن المشيمة بربط الببتيد (بلكسا-BP)-مترافق دهن البوليمر جسيمات نانوية عبر خطوة واحدة سونيكاتيون وبيوكونجوجاتي تقنيات. وتشكل هذه الجسيمات أداة جديدة للتنفيذ الهادف للتداوي للأورام البشرية الأكثر والمشيمة تروفوبلاستس لعلاج السرطان والاضطرابات المشيمية.

الملخص

طريقة علاجية فعالة سرطان يقلل ويزيل الأورام مع الحد الأدنى من السمية الشاملة. جسيمات نانوية نشطة تستهدف تقدم نهجاً واعداً لعلاج السرطان. يتم التعبير عن كبريتات شوندروتن المشيمية glycosaminoglycan (بلكسا) على مجموعة واسعة من الخلايا السرطانية و trophoblasts المشيمة، والبروتين الملاريا على وجه التحديد يمكن ربط VAR2CSA بلكسا. يمكنك ربط كبريتات شوندروتن المشيمية عنها بربط ببتيد (بلكسا-BP)، المستمدة من البروتين الملاريا VAR2CSA، أيضا على وجه التحديد بلكسا على الخلايا السرطانية والمشيمة تروفوبلاستس. ومن ثم، يمكن استخدام جسيمات نانوية بلكسا-بي بي-مترافق كأداة لإيصال الأدوية المستهدفة للسرطانات البشرية والمشيمة تروفوبلاستس. في هذا البروتوكول، يصف لنا طريقة لتجميع جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق محملة ميتوتريكسات (بلكسا-دنبس)؛ وتتألف الطريقة تقنيات خطوة وبيوكونجوجاتي sonication واحد. وبالإضافة إلى ذلك، يرد وصف أساليب عدة لوصف بلكسا-دنبس، بما في ذلك تحديد الخصائص الفيزيائية الكيميائية والخلوية امتصاص الخلايا المشيمية تشوريوكارسينوما (JEG3)،.

المقدمة

طريقة علاجية فعالة سرطان يقلل ويزيل الأورام مع الحد الأدنى من السمية الشاملة. ومن ثم استهداف الورم الانتقائي هو المفتاح لاستكشاف أساليب علاجية ناجحة. جسيمات نانوية فرصة واعدة لعلاج السرطان، وسيعزز فعالية المخدرات التجميعات الجزيئية مع مختلف المجموعات الوظيفية والتقليل من الآثار الجانبية المرتبطة به1،2. وعلاوة على ذلك، تستخدم نظم نانوحبيبات أساسا الاستهداف السلبي والإيجابي للتوصل إلى الهدف الأورام3.

استهداف السلبي يستغل الخصائص الفطرية جسيمات نانوية وزيادة نفاذية والاستبقاء (EPR) تأثيرات للوصول إلى الخلايا السرطانية. الدهنية الموجبة قد استخدمت بنجاح لتسليم المخدرات السرطان المختلفة للأورام في التطبيقات السريرية4،،من56. على الرغم من التأثير العلاجي الفعال السرطان المحتملة، بتركيز منخفض من المخدرات في منطقة الورم وعدم قدرة على التمييز بين الخلايا السرطانية من أنسجة طبيعية هي القيود الرئيسية اثنين من جسيمات نانوية الاستهداف السلبي7.

استراتيجيات الاستهداف النشط الاستفادة ضد مستضد ومستقبلات يجند والتفاعلات الأخرى التعرف الجزيئي لتسليم المخدرات على وجه التحديد إلى أورام8. وأعرب عن كبريتات شوندروتن المشيمية glycosaminoglycan (بلكسا) هو على نطاق واسع في معظم الخلايا السرطانية والمشيمة تروفوبلاستس. وعلاوة على ذلك، البروتين الملاريا VAR2CSA تحديداً ربط بلكسا9،10. ومن ثم فإن VAR2CSA يمكن أن يكون أداة لاستهداف الخلايا السرطانية البشرية. ومع ذلك، عندما يتم مترافق VAR2CSA للجسيمات النانوية، قد تحد من البروتين كامل طول الاختراق من جسيمات نانوية في الخلايا السرطانية. في الآونة الأخيرة، فقد اكتشفنا ببتيد ملزمة بلكسا (بلكسا-BP)، المستمدة من البروتين الملاريا VAR2CSA. جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق الرهينة بسرعة إلى خلايا تشوريوكارسينوما وميتوتريكسات زيادة كبيرة (دوكس) نشاط السرطان في فيفو11؛ هذه الجزيئات أيضا على وجه التحديد المستعبدين إلى trophoblasts المشيمة ويمكن أن تستخدم كأداة لإيصال الأدوية المستهدفة ل المشيمة12.

جسيمات نانوية بوليمر الدهن تتكون من قذيفة أحادي الطبقة الدهنية ونواة البوليمرية مسعور وتمثل شركة جديدة لإيصال الأدوية. جسيمات نانوية هذه الجمع بين مزايا الدهنية ونانوكاريرس البوليمرية، مثل حجم نانوحبيبات يمكن السيطرة عليها وعالية توافق مع الحياة، والإفراج عن المخدرات مستمرة، وتحميل المخدرات عالية الكفاءة (LE) والاستقرار الممتاز13. في هذا العمل، استخدمنا أسلوب sonication خطوة واحدة لتجميع جسيمات نانوية بوليمر الدهن. هو سريعة وملائمة ومناسبة للارتقاء بهذا الأسلوب وقد استخدمت على نطاق واسع لإعداد جسيمات نانوية دهن البوليمر لدينا مجموعة11،14 وغيرها15،،من1617،18 .

هيدروكلوريد كاربودييميدي 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) (EDC) كاربودييميدي شعبية المستخدمة كعامل كروسلينكينج للتصريف الجزيئات الحيوية التي تحتوي على كاربوكسيلاتيس والامينات19. بالإضافة إلى تنمية الصادرات، N-هيدروكسيسولفوسوكسينيميدي (NHS) هو الأكثر شيوعاً الكاشف التصريف في المياه السطحية ونانوحبيبات الاقتران ردود فعل20،21. يمكن تقليل عدد ردود فعل الجانب الصحي ويعزز الاستقرار والغلة إستر وسيطة22،23.

هنا، نحن وصف بروتوكول لتوليف جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة. أولاً، يتم وصف التوليف sonication خطوة واحدة لتحميل دوكس الدهن-بوليمر جسيمات نانوية (DNPs). ثم، يتم عرض أسلوب بيوكونجوجاتي تنمية الصادرات/دائرة الصحة الوطنية لتوليد جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق. أيضا يمكن هذا الأسلوب بيوكونجوجاتي متزاوجة الببتيدات إلى جسيمات نانوية والأجسام المضادة الأخرى. وأخيراً، يصف لنا المقايسة خصائص و في المختبر الفيزيائية المستخدمة لتوصيف جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة. ونحن نعتقد أن هذه الجسيمات النانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة يمكن أن تشكل نظاما فعالاً للتنفيذ الهادف من المخدرات إلى أمراض السرطان معظم البشرية وتسليم الحمولات المستهدفة للمشيمة لعلاج الاضطرابات المشيمية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-إعداد حلول الأسهم

  1. إعداد محلول مائي من الإيثانول 4% بإذابة 4 مل إيثانول المطلق مع 100 مل الماء عالي النقاوة. مخزن الحل عند 4 درجة مئوية.
    ملاحظة: يتم تعريف الماء عالي النقاوة كالماء دون الملوثات مثل البكتيريا، والجسيمات، وأيونات، أو نوكليسيس. تم الحصول على الماء عالي النقاوة من نظام لتنقية مياه مع مقاومة مستهدفة لتصل إلى 18.2 mΩ·cm، مما يعني انخفاض التلوث أنيونى.
  2. إعداد 1 ملغ/مل فول الصويا الليسيثين الأسهم الحل بإذابة 20 ملغ ليستين فول الصويا في 20 مل محلول مائي من الإيثانول 4%. مخزن الحل الأسهم ليستين فول الصويا في 4 درجات مئوية.
  3. إعداد 25 ملغ/مل الحل الأسهم (2000)-COOH دسبي-شماعة بإذابة 100 مغ من دسبي-شماعة-COOH في 4 مل محلول مائي من الإيثانول 4%. مخزن الحل الأسهم عند-20 درجة مئوية.
  4. إعداد 10 ملغ/مل الحل دوكس الأسهم بإذابة 50 مغ دوكس في 5 مل الماء عالي النقاوة. تخزين الحل دوكس الأسهم عند 4 درجة مئوية في الظلام.
  5. إعداد 2 مغ/مل حل بلجا الأسهم بإذابة 20 ملغ بلجا في 10 مل من الاسيتو الانيتريل. تخزين حل بلجا الأسهم عند 4 درجة مئوية.
    تنبيه: الاسيتو الانيتريل القابلة للاشتعال والسامة. تعمل مع الرعاية في غطاء دخان، وارتداء المعدات الشخصية المناسبة، مثل معاطف المعمل ونظارات السلامة وقفازات مطاط.
  6. تحضير م 0.1 2-(morpholino) اثانيسولفونيك أسهم حمض (مس، pH 6.0) حل بتذويب ز 2.17 من مس في 100 مل الماء عالي النقاوة. مخزن الحل الأسهم عند 4 درجة مئوية.

2-تجميع دنبس

ملاحظة: لتجنب تدهور الضوئية دوكس، أجريت جميع العمليات في الظلام.
تم توليفها جسيمات نانوية التي سبق الإبلاغ عنها خطوة واحدة sonication أسلوب11،،من1314.

  1. أضف 3 مل محلول مائي من الإيثانول 4% إلى أنبوب الطرد مركزي معقم 10 مل. ثم إضافة 90 ميكروغرام من فول الصويا الليسيثين الحل الأسهم وميكروغرام 210 من الحل الأسهم دسبي-شماعة-COOH 750 ميكروغرام من الحل دوكس الأسهم إلى 3 مل محلول مائي من الإيثانول 4%.
  2. ضع الأنبوب الطرد المركزي في حمام الثلج، ومكان حمام الجليد على معالج بالموجات فوق الصوتية.
  3. مع حقنه 1 مل، "الماصة؛" 2 مغ الحل الأسهم بلجا dropwise (1 s قطره/4-6) في أنبوب الطرد المركزي. وفي الوقت نفسه، sonicate الأنبوبة باستخدام معالج بالموجات فوق الصوتية في تردد من 20 كيلو هرتز وسعه ناتج نسبة 30 في المائة لمدة 5 دقائق توليف في دنبس.
    ملاحظة: لتوليف جزيئات موحدة مع أحجام صغيرة، السرعة الذي هو مقطر حل بلجا في الأنبوب يجب أن تكون بطيئة، وينبغي تجنب توليد فقاعة.
  4. تنقية دنبس واسطة الغسيل الحل أعلاه في 0.1 م مس المخزن المؤقت (pH 6.0) 3 مرات باستخدام عامل تصفية جهاز الطرد مركزي (موكو، كاتشين 10). أجهزة الطرد المركزي في 4 درجات مئوية و 1000 × ز لمدة 3 دقائق في كل مرة. وأخيراً، ينبغي أن يظل حوالي 1 مل من مس--حل جسيمات نانوية.
    ملاحظة: هذا نقطة توقف مقبولة في الإجراءات. إذا لم يكن المستخدمة إلى متزاوجة الببتيدات، يمكن تنقيته جسيمات نانوية من المخزن المؤقت لبرنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4)، ويمكن تخزين دنبس المنقاة في 4 درجات مئوية في الظلام.

3-تصريف الببتيدات إلى دنبس

  1. تفعيل إستر
    1. إضافة 0.4 ملغ الصادرات (تركيز نهائي 2 مم) إلى 1 مل دنبس.
    2. إضافة 0.24 ملغ من المستشفيات العامة إلى رد فعل (تركيز نهائي 2 مم).
      ملاحظة: لسهولة إضافة الكمية الصحيحة لتنمية الصادرات، والمستشفيات العامة، حل أسهم قد تكون مستعدة إذا حلت الكواشف واستخدامها على الفور.
    3. خلط مكونات رد فعل جيدا، ووضع رد فعل على شاكر؛ السماح بالرد على 30 دقيقة-1 ح في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
  2. رد أمين
    1. زيادة درجة الحموضة العازلة إلى 7.2-7.5 باستخدام برنامج تلفزيوني (20 ×، ودرجة الحموضة 7.4).
    2. إضافة 0.5 ملغ من استهداف بلكسا الببتيد (بلكسا-شركة بريتيش بتروليوم، ادفكدينفدتكيكفلاجكليفسفهيجكك) في حل رد فعل.
      ملاحظة: قبل الإضافة، حل الببتيدات في الاسيتو الانيتريل 20%. إذا لم ديسولفابل الببتيدات، قد سونيكيشن في سونيكاتور حمام مفيدة.
    3. مزيج الحل جيد، ومن ثم ضع على شاكر؛ السماح بأن رد الفعل على المضي قدما في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها في الظلام.
    4. ضع الحل المتقارنة في أكياس الغسيل الكلوي (موكو، دا 3,500) دياليزي وتنقية بلكسا-دنبس استخدام المخزن المؤقت لبرنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4) في درجة حرارة الغرفة 24 ساعة في الظلام.
      ملاحظة: بدلاً من ذلك، تنقية يمكن أداء كما في الخطوة 2، 4 للحصول على دنبس بلكسا.
    5. بالنسبة لتطبيقات ثقافة الخلية، تصفية الحل أعيد تشكيلها من خلال عامل تصفية المحاقن معقمة 0.22 ميكرون لإزالة رواسب المحتملة.

4-توصيف دهن بلكسا المستهدفة-بوليمر جسيمات نانوية

  1. قياس حجم نانوحبيبات هيدرودينامية استخدام تشتت الضوء الحيوي (DLS)
    1. جسيمات نانوية مخفف بالماء عالي النقاوة (تمييع 50-fold). تحميل 500 ميليلتر من العينة ومبومو وفقا لتعليمات الصك المحتمل DLS أو زيتا.
      ملاحظة: إمكانية زيتا والترعة DLS يمكن أن تختلف استناداً إلى مواصفات هذا الصك.
    2. بعد الانتهاء من القياس، تسجيل قطر الجسيمات ومؤشر بوليديسبيرسيتي (حزب النضال الديمقراطي الإندونيسي) وزيتا المحتملة. متوسط النتائج التي تم الحصول عليها من 4 تكرار القراءات، وحساب الانحراف المعياري.
  2. مجهر إلكتروني (TEM)
    ملاحظة: لوحظ تيم مورفولوجية جسيمات نانوية بطريقة سلبية وصمة عار. 24
    1. جسيمات نانوية مخفف بالماء عالي النقاوة (تمييع 400-fold). إضافة 20 ميليلتر من العينة على شبكة تيم، والسماح للجلوس لمدة 5 دقائق.
    2. إضافة 100 ميليلتر من حمض فوسفوتونجستيك 2% (w/v) والسماح للجلوس للحد الأدنى 2 الفتيل بعيداً الحبرية.
    3. الجاف للشبكة تيم في درجة حرارة الغرفة.
    4. تعيين الجهد تسارع ال 80 كيلو فولت، وتكبير الصورة إلى × 100,000 لتصور جسيمات نانوية.
  3. تحديد كفاءة التغليف (هة) ولو
    1. إنشاء المنحنى المعياري. حل دوكس في الماء عالي النقاوة لإعداد حلول دوكس خمسة تركيزات مختلفة: 1 ميكروغرام/مل، 5 ميكروغرام/مل، 10 ميكروغرام/مل، 50 ميكروغرام/مل و 100 ميكروغرام/مل. قياس امتصاص الحلول دوكس في 480 نانومتر مع مطياف الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة. إنشاء منحنى قياسي استناداً إلى التركيزات دوكس.
    2. تمييع 25 ميليلتر من جسيمات نانوية مع 500 ميليلتر من الماء عالي النقاوة. قياس الامتصاص في 480 نانومتر مع مطياف الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة. حساب تركيزات المخدرات بواسطة المنحنى القياسي.
    3. حساب LE استخدام المعادلة التالية:
      جنيه = ((كمية من المخدرات في جسيمات نانوية)/(إجمالي وزن المواد)) × 100%.
    4. حساب هة استخدام المعادلة التالية:
      EE = ((كمية من المخدرات في جسيمات نانوية) (يضاف كمية من المخدرات)) × 100%.
  4. قياس كفاءة التصريف باستخدام المقايسة (اتفاق التعاون الأساسي) حمض بيسينتشونينيك 25 , 26 , 27
    1. "الماصة؛" 25 ميليلتر من حلول الببتيد القياسية (الجدول 1) أو بلكسا-دنبس في آبار الميكروسكوبية في مكررة. إضافة 200 ميليلتر من الكاشف العامل لكل بئر، ومزيج لوحة جيدا على شاكر طبق لمدة 30 ثانية.
    2. تغطية اللوحة، واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
    3. قياس امتصاص في 562 نانومتر على قارئ لوحة. استخدام المنحنى القياسي الذي تم إنشاؤه لحساب تركيزات بلكسا دنبس بلكسا.
    4. حساب كفاءة التصريف باستخدام المعادلة التالية:
      كفاءة التصريف = ((المبلغ من الببتيد في جسيمات نانوية) (يضاف مبلغ الببتيد)) × 100%.
فيالحجم مخفف (ميكروليتر)الحجم والمصدر من الببتيد (ميكروليتر)التركيز النهائي الببتيد (ميكروغرام/مل)
A0300 للأسهم1000
ب250250 قنينة إضعاف500
ج250250 لتمييع القنينة ب250
د250250 من قنينة C تمييع125
ه300200 لتمييع قنينة د50
و250250 لتمييع فيال ه25
ز400100 تمييع القنينة و5
ح50000

الجدول 1. إعداد الببتيدات القياسية

5-الأسفار مجهرية تقييم امتصاص نانوحبيبات بلكسا المستهدفة في الخلايا تشوريوكارسينوما (JEG3)

  1. بذور الخلايا على لوحات 12-جيدا العقيمة في 1.0 × 104 خلايا/جيدا مع كامل DMEM/F12 (كدميم/F12، التي تحتوي على 1% البنسلين/ستربتوميسين و 10% الجنيني البقري المصل (FBS)). السماح للخلايا أن تنمو إلى التقاء 60% في 37 درجة مئوية و 5% CO2 تحت الظروف الرطبة.
  2. قم بإزالة الوسائط، وإضافة 1 مل الإعلام الطازجة الباردة مع محتوى مصل منخفضة (5% FBS) ودنبس أو بلكسا-دنبس (5 ميكروغرام من مكافئ دوكس).
  3. احتضان الخليط من الخلايا، وجسيمات نانوية في 4 درجات مئوية عن ح 1.
  4. وبعد الحضانة، قم بإزالة الوسائط وتغسل الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني. ثم أضف 1 مل من جديد كدميم/F12، واحتضان الخلايا في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  5. إزالة كدميم/F12، وتغسل الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني.
  6. إضافة 2 مل من البرد 4% بارافورمالدهيد (منهاج عمل بيجين)، واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة إصلاح الخلايا.
  7. إزالة منهاج عمل بيجين. تغسل الخلايا مع 2 مل من برنامج تلفزيوني مرة واحدة. أضف 1 مل من برنامج تلفزيوني يتضمن DAPI (1 ميكروغرام/مل) لنواة تلطيخ، واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
  8. نضح في برنامج تلفزيوني، وتغسل الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني.
  9. إضافة المتوسطة المتصاعدة، والصورة الأسفار مع مجهرية الأسفار، باستخدام قنوات الأخضر والأزرق لتصور دوكس ونوى، على التوالي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في هذا البروتوكول، تعتبر بلجا، دسبي-شماعة-COOH، وفول الصويا الليسيثين البوليمر الممثل، المتقارن الدهن-شماعة-COOH والدهن، على التوالي. ويتضح تركيب جسيمات نانوية بوليمر دهن بلكسا المستهدفة عن طريق خطوة واحدة أسلوب sonication وأسلوب تنمية الصادرات/دائرة الصحة الوطنية في الشكل 1. أولاً، في ظل الظروف سونيكيشن، منظم ليستين فول الصويا، بلجا ودسب-شماعة-COOH تجميع ذاتي للنموذج الأساسي-شل دنبس. نواة تتكون من بلجا ومغلفة دوكس، shell يتكون من دسب-شماعة-COOH، ويق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هذا البروتوكول يوفر طريقة فعالة واستنساخه لتوليف بوليمر دهن بلكسا-بي بي-مترافق جسيمات نانوية. الأسلوب سونيكيشن خطوة واحدة لإعداد جسيمات نانوية دهن البوليمر سريعة واستنساخه وتختلف أساليب نانوبريسيبيتيشن النموذجية التي تشمل التدفئة أو فورتيكسينج أو التبخر. ومن ثم، الأسلوب المتقدمة يقلل كثيرا من الوقت التوليف. وبالإضافة إلى ذلك، بيوكونجوجاتي الصادرات/دائرة الصحة الوطنية المستخدمة في هذا البروتوكول تقنية شائعة المستخدمة ومريحة متزاوجة الببتيدات والأجسام المضادة للجسيمات النانوية. ولذلك، المزيج من الأسلوب سونيكيشن خطوة واحدة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

X.F. و B.Z. من المخترعين في البراءات PCT/CN2017/108646 و 201710906587.6 المقدمة من سيت الذي يغطي أسلوب التوليف نانوحبيبات بلكسا المستهدفة وتطبيق. تم الكشف عن لا تضارب محتمل في المصالح مؤلفين آخرين.

شكر وتقدير

أيد منح هذا العمل من البحوث الرئيسية الوطنية وبرنامج التنمية في الصين (2016YFC1000402) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية (81571445 و 81771617) ومؤسسة العلوم الطبيعية بمقاطعة قوانغدونغ (2016A030313178) إلى X.F. وصندوق البحوث الأساسية شنتشن (JCYJ20170413165233512) إلى X.F.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
plCSA الببتيدشنغهاي GLBiochem 573518لتخليق الببتيد
الإيثانولالمطلق سينوفارم10009218لتخليق الجسيمات النانوية
ليسيثين فول الصوياأفانتي441601للجسيمات النانوية لتخليق الجسيمات النانوية
DSPE-PEG-COOH880125 Avanti Polar Lipidsلتخليق
الجسيمات النانويةدوكسوروبيسينJK113424لتخليق الجسيمات النانوية
الأسيتونيتريلشنغهاي لينغفنغ1008621لتخليق الجسيمات النانوية
PLGAسيجما ألدريتش719897 لتخليق الجسيمات النانوية
معالج بالموجات فوق الصوتيةSonicsVCX130لتخليق الجسيمات النانوية
مرشح الطرد المركزي (MWCO 10 كيلو دالتون)ميليبورUFC801024لأجهزة الطرد المركزي لتنقية الجسيمات النانوية
Sigma3-18KSلتنقية الجسيمات النانوية
2- [مورفولينو] حمض الإيثان سلفونيك (MES)سيجما ألدريتشM3671لاقتران الببتيد
1-إيثيل -3- (3-ثنائي ميثيل أمينوبروبيل) هيدروكلوريد كاربوديميد (EDC)سيجما ألدريتش3450لاقتران الببتيد
N-hydroxysuccinimide (NHS)Sigma-Aldrich56480لاقتران الببتيد
أكياس غسيل الكلىالطيف132592Tلتنقية الجسيمات النانوية
PBSHycloneSH30028.01لزراعة الخلايا
10 مل أنابيب الطرد المركزي ، البولي بروبيلينعلاء الدينS-025لتخليق الجسيمات النانوية
أنابيب الطرد المركزي 15 مل ، 430791 البولي بروبلينCorningلمختلف التطبيقات
0.22 & م مرشح حقنة معقمةميليبورSLGV033RBلتنقية الجسيمات النانوية
حقنة 1 مل ، بولي بروبيلينBD328421لتخليق الجسيمات النانوية
Malvern ZetasizerMalvernNano ZSلمحلل حجم الجسيمات
حمضلشبكة TEM
TEM EMCNBZ10024aل TEM
مطياف UV-VISLeageneDZ0035لإرسال TEM

المجهر الإلكتروني		JEOLJEM-100CXIIلمحلل حجم الجسيمات
كاشف BCA AThermo Fisher Scientific23228لفحص
BCA كاشف BCA BThermo Fisher Scientific23224لفحص BCA
لوحات 96 بئرCorning3599ل BCA
قارئ لوحةThermo Fisher ScientificMultiskan & trade ؛ GOلفحص BCA
لوحات 12 بئراCorning3513لزراعة الخلايا
JEG3بنك الخلية التابع للأكاديمية الصينية للعلومTCHu195المشيمة البشرية
DMEM / F12HycloneSH30272.01مصل
الأبقار الجنينية الخالي من الأحمر (FBS)GIBCO10100لزراعة الخلايا
البنسلين / الستربتومايسينGIBCO15070063لزراعة الخلايا
المجهر الفلوريأوليمبوسCKK53لامتصاص الخلوي
بارافورمالدهيدشنغهاي Lingfeng1372021لامتصاص الخلوي
DAPISangon BiotechA606584لامتصاص الخلوي
تصاعد متوسطالعمرP36961لامتصاص الخلوي
الكيميائية الفوسفوتونغستيك الفحص

المراجع

  1. Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
  2. Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
  3. Jabir, N. R., et al. An overview on the current status of cancer nanomedicines. Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).
  4. Pillai, G. Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development. SOJ Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).
  5. Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future. Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458(2016).
  6. Dasari, S., Tchounwou, P. B. Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action. European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).
  7. Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis. Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).
  8. Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).
  9. Salanti, A., et al. Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein. Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).
  10. Seiler, R., et al. An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer. European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).
  11. Zhang, B., et al. Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment. Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).
  12. Zhang, B., et al. Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice. Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).
  13. Zhang, L., et al. Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform. ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).
  14. Zheng, M., et al. Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy. ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).
  15. Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -M. J., Zhang, L. Quick synthesis of lipid− polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method. Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).
  16. Gu, L., et al. Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin. Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).
  17. Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).
  18. Shi, T., et al. Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma. European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).
  19. Grabarek, Z., Gergely, J. Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters. Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).
  20. Hadjipanayis, C. G., et al. EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma. Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).
  21. Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy. Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).
  22. Jennings, M., Nicknish, J. Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein. Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).
  23. Staros, J. V. N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers. Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).
  24. Valencia, P. M., et al. Single-step assembly of homogenous lipid− polymeric and lipid− quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing. ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).
  25. Altintas, I., et al. Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells. Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).
  26. Maya, S., et al. Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells. Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).
  27. Deepagan, V. G., et al. In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles. Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).
  28. Totaro, K. A., et al. Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates. Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).
  29. Sinz, A. Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions. Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).
  30. Zhang, B., et al. LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma. Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).
  31. Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements. Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).
  32. Chu, Y., et al. Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

PLGA
التوليف وتوصيف للمشيمة شوندروتن سلفات (بلكسا)-استهداف المحتوى الدهني-بوليمر جسيمات نانوية
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.