هذا البروتوكول يوفر طريقة لإنشاء أنسنة الفئران (هو جين تاو-مجموعة موردي المواد النووية) عن طريق حقن أحياناً من الخلايا الجذعية المكونة للدم البشري في الإشعاع مكيفة الولدان الفئران مجموعة موردي المواد النووية. الماوس هو جين تاو-مجموعة موردي المواد النووية هو عرضه للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية والعلاج المضاد للفيروسات الرجعية اندماجي (عربة) ويخدم كنموذج مناسب الفيزيولوجية المرضية للتحقيقات النسخ المتماثل وزمن انتقال فيروس نقص المناعة البشرية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
أنسنة إيماءة/نظام/IL2rγفارغة الماوس (هو جين تاو-مجموعة موردي المواد النووية) نموذج للنسخ المتماثل من فيروس نقص المناعة البشرية والدراسات الكمون
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
القواعد الأخلاقية والتحديات التقنية للبحوث في علم الأمراض البشرية وعلم المناعة والتنمية العلاجية قد وضعت نماذج حيوانية صغيرة في ارتفاع الطلب. مع تشابه شديد الجينية والسلوكية للبشر، هي الحيوانات الصغيرة مثل الماوس مرشحا جيدا لنماذج الأمراض البشرية، يمكن من خلالها لخص أعراض شبيهة بالإنسان والردود. علاوة على ذلك، يمكن تغيير الخلفية الوراثية الماوس لاستيعاب المطالب المتنوعة. إيماءة/نظام/IL2rγ الماوسفارغة (مجموعة موردي المواد النووية) واحدة من سلالات الماوس المناعة الأكثر استخداماً؛ فإنه يسمح انجرافتمينت بالخلايا الجذعية المكونة للدم البشري و/أو الأنسجة البشرية والتطور اللاحق لنظام المناعة البشرية الفنية. وهذا معلما حاسما في فهم التشخيص والفيزيولوجيا المرضية للإنسان-خاصة بأمراض مثل فيروس نقص المناعة البشرية/الإيدز، ومساعدة في البحث عن علاج. هنا، نحن تقرير بروتوكول مفصل لتوليد نموذج ماوس أنسنة مجموعة موردي المواد النووية (هو جين تاو-مجموعة موردي المواد النووية) بزرع الخلايا الجذعية المكونة للدم في ماوس مجموعة موردي المواد النووية الولدان مكيفة الإشعاع. يظهر نموذج الفأر هو جين تاو-مجموعة موردي المواد النووية تطوير نسب متعددة لزرع الخلايا الجذعية البشرية والقابلية للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية-1 الفيروسية. كما أنه يلخص الخصائص البيولوجية الرئيسية استجابة للعلاج المضاد للفيروسات الرجعية اندماجي (عربة).
المقدمة
لإنشاء نماذج حيوانية مناسبة للأمراض التي تصيب الإنسان هو المفتاح لإيجاد علاج، نماذج الحيوانات المناسبة منذ فترة طويلة تم متابعتها وتتحسن مع مرور الوقت. وقد وضعت سلالات متعددة من نماذج مورين المناعة التي تسمح انجرافتمينت من الخلايا البشرية و/أو الأنسجة واللاحقة تنفيذ مهام أنسنة1،2. مثل هذه النماذج الماوس أنسنة حاسمة بالنسبة للتحقيقات المتعلقة بالأمراض الخاصة بالإنسان3،،من45.
متلازمة نقص المناعة المكتسب (الإيدز) الناتجة عن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية (HIV) مثال واحد. قبل إنشاء نماذج ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ جميع الإجراءات ورعاية الحيوان وفقا لبروتوكولات استعرضت ووافقت على "رعاية الحيوان المؤسسية" بمدينة الأمل واستخدام اللجنة (IACUC) أجراها الباحث الرئيسي لهذه الدراسة (الدكتور جون روسي، 12034 # إياكوك). تم الحصول على أنسجة الكبد الأجنة البشرية من "الموارد المتقدمة في العلوم البيولوجية" (ألاميدا، كاليفورنيا)، منظمة غير ربحية، وفقا للوائح الاتحادية والولائية. المورد الخاصة به المجلس استعراض المؤسسية (IRB) وهي متوافقة مع متطلبات حماية البشرية من هذا الموضوع. ببمكس البشرية المعزولة من عينات الدم المحيطي المهملة من المانحين صحي مجهول "من الأمل الدم المانحة وسط المدينة" (دوارتي، كاليفورنيا)، مع تحديد لا فيما يتعلق بالعمر، أو العرق، أو الجنس، أو الأصل العرقي. الاتحاد ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وكثيراً ما يتم تحليل التدفق الخلوي التحقق من صحة نقاء هسكس معزولة، وتقييم مستويات engraftment، الشخصية الاستجابات المناعية للعدوى الفيروسية، واستقصاء فعالية عربة. لوحة جسم نموذجي يحتوي على 4-6 أجسام المسمى فلوريسسينتلي الفردية؛ وهكذا، سيتوميتير تدفق مع الليزر متعددة وتشكيله واسعة من المرشحات أمر حاسم لتحقيق نتائج دقيقة.
للتحقق من صحة انجرافتمينت الأولية، عدد الخلايا CD45 + البشرية يمكن أن تتراوح من 20% إلى 80%، ويجب أن تظهر مجمو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الفئران المناعة انجرافتيد مع خلايا/الأنسجة البشرية موجودة الخصائص الفسيولوجية شبيهة بالإنسان وقيمة هائلة لدراسات علم الأمراض والفيزيولوجيا المرضية، وعلم المناعة بشأن الأمراض الخاصة بالإنسان. بين عدة سلالات من الفئران المناعة، الموافقة. Cg-بركدكإخضاعهاIl2rgtm1Wji النموذجي (مجموعة موردي المواد النووية) هو أشد العوز نظراً لعدم وجود الحصانة الفطرية والتكيف على السواء، فضلا عن أبلاتيد الخاصة بالماوس سيتوكين الإشارات3،12،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفون بالكشف عن لا تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
هذا العمل كان تدعمه معاهد الصحة الوطنية [منح الأرقام R01AI29329 و R01AI42552 و R01HL07470 J.J.R.] والمعهد الوطني للسرطان من "المعاهد الوطنية للصحة" [المنحة رقم P30CA033572 لدعم المدينة "علم الجينوم التكاملية في الأمل" ، الصيدلة التحليلية، والنوى الخلوي تحليلية]. وحصل الكاشف التالية عن طريق المعهد الوطني لبحوث الإيدز المعاهد الوطنية للصحة ومرجع برنامج كاشف، شعبة من الإيدز، نييد، الصحة: فيروس "ال فيروس نقص المناعة البشرية".
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مجموعة CD34 MicroBead Kit ، | MiltenyiBiotec | 130-046-703 | |
| CryoStor CS2 | تقنيات الخلايا الجذعية | 07932 | |
| NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wji < / sup>< / em> | مختبر جاكسون | 005557 | طلب المربين بدلا من الفئران التجريبية |
| IsoFlo | Patterson Veterinary | 07-806-3204 | اطلب من خلال منشأة حيوانية ، عنصر مقيد |
| مطهر Clidox | فيشر سيسنتيفيك | NC9189926 | |
| ويسكودين | فيشر سيسنتيك | 19-818-419 | |
| حقنة / إبرة هاميلتون 80508 | المصنوع حسب الطلب | ||
| (K2EDTA) أنبوب | جمع الدم BD Bioscience | 367843 | |
| (الهيبارين) BD | Bioscience | 365965 | |
| أنبوب شعري (Heparinized) | فيشر Sicentific | 22-362574 | |
| تحلل خلايا الدم الحمراء عازلة | سيجما ألدريتش | 11814389001 | |
| QIAamp طقم الحمض النووي الريبي الفيروسي الصغير | Qiagen | 52906 | |
| TaqMan Fast VIrus 1-step Master Mix | Thermofisher | 4444434 | |
| HIV-1 P24 ELISA (مجموعة 5 ألوحات) | PerkinElmer | NEK050B001KT | |
| IgG من مصل الإنسان | Sigma Aldrich | I4506-100MG | |
| IgG من مصل الفأر | Sigma Aldrich | I5381-10MG | |
| BB515 ماوس مضاد للإنسان CD45 (استنساخ HI30) | BD Biosciences | 564586 | RRID: AB_2732068 ، LOT 6347696 |
| PE-Cy7 ماوس مضاد للإنسان CD3 (استنساخ SK7) BD | Biosciences | 557851 | RRID: AB_396896 ، LOT 6021877 |
| Pacific Blue Mouse Anti-Human CD4 (استنساخ RPA-T4) BD | Biosciences | 558116 | RRID: AB_397037 ، LOT |
| 6224744 BUV395 ماوس مضاد للإنسان CD8 (استنساخ RPA-T8) | BD Biosciences | 563795 | RRID: AB_2722501 ، LOT |
| 6210668 APC-Alexa Fluor 750 Mouse Anti-Human CD14 (TuK4) ThermoFisher | MHCD1427 | RRID: AB_10373536 ، LOT 1684947A | |
| PE Mouse Anti-Human CD19 (SJ25-C1) | ThermoFisher | MHCD1904 | RRID: AB_10373382 ، LOT 1725304B |
المراجع
- Greiner, D. L., Hesselton, R. A., Shultz, L. D. SCID mouse models of human stem cell engraftment. Stem cells. 16 (3), 166-177 (1998).
- Rongvaux, A., et al. Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model. Nature. 32 (4), 364-3....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
