Method Article

تحديد وتوصيف النسيجي، وتشريح للماوس الفصوص البروستاتا لفي المختبر كروي 3D نماذج الثقافة

DOI:

10.3791/58397

⸱

September 18th, 2018

 ,  ,  , 
1Department of Urology, SUNY Upstate Medical University, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology, SUNY Upstate Medical University, 3Laboratory of Comparative Pathology, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, 4Boulder BioPATH, Inc

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الفئران المهندسة وراثيا نماذج مفيدة للتحقيق وآليات سرطان البروستاتا. نقدم هنا بروتوكولا لتحديد وتشريح البروستاتا الفصوص من ماوس الجهاز البولي التناسلي والتفريق بينهم على أساس في علم الأنسجة، وعزل والثقافة خلايا البروستاتا الأولية في المختبر الماغنيسيوم لتحليلات المتلقين للمعلومات.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نماذج الماوس المهندسة وراثيا (جيمس) تكون بمثابة نماذج قبل سريرية فعالة للتحقيق في معظم أنواع السرطانات البشرية، بما في ذلك سرطان البروستاتا (PCa). فهم التشريح وعلم الأنسجة البروستاتا الماوس مهم لكفاءة استخدام والتوصيف الصحيح لمثل هذه النماذج الحيوانية. وقد البروستاتا الماوس أربع متميزة أزواج من الفصوص، كل منها خصائصها. يوضح هذا المقال الأسلوب السليم للتشريح وتحديد الماوس الفصوص البروستاتا لتحليل الأمراض. بعد التشريح، خلايا البروستات يمكن كذلك مثقف في المختبر لفهم الميكانيكية. منذ الماوس خلايا البروستات الابتدائية تميل إلى فقدان خصائصها الطبيعية عندما مثقف في المختبر، ونحن مخطط هنا طريقة لعزل الخلايا وتنمو كالثقافات كروي ثلاثي الأبعاد، والتي فعالة للحفاظ على الفسيولوجية خصائص الخلايا. يمكن استخدام هذه الثقافات ثلاثي الأبعاد لتحليل مورفولوجيا الخلايا ومستويات السلوك في ظروف قرب الفسيولوجية، والتحقيق في تعديل وتعريب البروتينات الرئيسية وسبل المشاركة في تنمية وتطور المرض، ويبحث في ردود على العلاج بالعقاقير.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ما فتئت تسعى الأوساط العلمية توضيح الآلية المعقدة للتنمية البشرية السرطان لعدة عقود. حين يبدأ تحديد اللاعبين الرئيسيين المحتملين وأهداف المخدرات مع خلايا المريض ودراسات الأنسجة، تطبيق متعدية الجنسيات مثل هذه النتائج غالباً ما يتطلب استخدام نماذج حيوانية قبل الإكلينيكية. استخدام الفئران المهندسة وراثيا نماذج (جيممس) للسرطانات البشرية نموذج ارتفع مطردا منذ إقامة "الماوس نماذج من البشر سرطانات الكونسورتيوم" (NCI-ممهكك)، لجنة الذي سعى إلى وصف وتوحيد الصفات المميزة للسرطان الماوس نماذج للعلماء في جميع أنحاء العالم1،2. نماذج الماوس تفي بالحاجة إلى الدراسات الميكانيكية في الدراسات ما قبل السريرية لمعظم أنواع السرطان،....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجريت جميع التجارب الماوس الموصوفة هنا وفقا للمبادئ التوجيهية الواردة في البروتوكولات وافق IACUC المؤسسي في جامعة ولاية نيويورك شمال ولاية الجامعة الطبية.

1-تشريح الجهاز البولي التناسلي (UGS)

ملاحظة: يتم عرض التخطيطي في الشكل 1.

  1. Euthanize ماوس C57BL/6 ذكور عمره 3 أشهر باستخدام أسلوب القتل الرحيم استنشاق أول أكسيد الكربون2 أو تقنية أخرى تمت الموافقة عليها.
    ملاحظة: الفئران تتراوح أعمارهم ما بين 3 و 12 شهرا يمكن أن تستخدم بنجاح لهذه التجربة. الفئران الأكبر سنا (> 6 أشهر) سوف يكون على الأرجح المزيد من الدهون حول UGS، التي سوف تحتاج إلى أن يتم مسح. من الصعب غالباً ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن التعرف على الفصوص البروستاتا الماوس وتشريح استخدام مواقعها بالنسبة للحويصلات ومجرى البول. البروستاتا الماوس يتكون من 4 أزواج من الفصوص الواقعة دورسالي وبطنيا إلى الحويصلات ومجرى البول. الشكل 4a و 4b (أعلى) إظهار آراء الظهرية والبطني البروستاتا سليمة، جنبا إلى جنب مع الحويصلات ومجرى البول. تظهر لوحات السفلي (الشكل 4 ج ود 4) الفصوص المختلفة المحددة للهوية. يمكن فصل الفصوص من الفئران صغيرات 3 أ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتلخص هذه الورقة طرق تشريح البروستات الماوس وتحديد الهوية من الفصوص الفردية. ووصف أيضا هو بروتوكول لاستزراع خلايا البروستات الماوس في ثقافة 3D للتحليل في المختبر .

خطوة حاسمة في تشريح البروتوكول هو حصاد UGS كامل من الماوس (1) وفصل الأجهزة الفردية تحت مجهر تشريح. أنسجة البروستاتا صغير جداً وتحيط بها بقية UGS؛ وهكذا، فإنه من المستحيل عمليا حصاد الجهاز مباشرة من تجويف الجسم لدى شراء جميع أزواج أربعة من الفصوص سليمة. ومن ثم فمن المهم أن حصاد UGS كامل من الماوس ومن ثم الانتقال لاستخراج الب.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل المنحة من المعهد الوطني للسرطان، R01CA161018 إلى LK.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
الأدوات الجراحية للفأر (طقم تشريح الفأر)أدوات الدقة العالميةMOUSEKIT
مجهر
RPMI متوسطThermofisher 11875093
العلمي (DMEM + 10٪ FBS)Thermofisher Scientific11965-084
مصل الأبقار الجنينيThermofisher Scientific10438018
PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات)17018029 Thermofisher Scientific10010031
كولاجينازThermofisher Scientificاصنع مخزونا 10x (10 مجم / مل) في RPMI ، وتعقيم المرشح ، وتخزينه عند -20 درجة ؛ C
Trypsin-EDTA (0.05٪) ThermofisherScientific25300054
DNase ISigma-Aldrich10104159001  ROCHE
المحاقن والإبرفيشر Scientific
Fisherbran  مصافي الخلايا المعقمة ، 40 مو ؛ مفيشر Scientific22-363-547
PrEGM BulletKit LonzaCC-3166أضف جميع المكونات ، aliquot وتخزينها عند -20 درجة مئوية.
مصفوفة غشاء MatrigelThermofisher ScientificCB-40234
Dispase II مسحوقThermofisher Scientific17105041صنع مخزون 10x (10 مجم / مل) في PrEGM ، وتعقيم المرشح ، وتخزينه عند -20 درجة ؛ ج
تشريحالوسيط

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Marks, C. L. Mouse Models of Human Cancers Consortium (MMHCC) from the NCI. Cancer Research. 65 (9 Supplement), 242-243 (2005).
  2. Marks, C. Mouse Models of Human Cancers Consortium (MMHCC) from the NCI. Disease Models & Mechanisms. 2 (3-4)....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mouse Prostate LobesProstate Dissection3D Spheroid CultureCell IsolationTissue DigestionBasement MembraneExtracellular MatrixProstate Epithelial CellsOrganoid FormationBeta Catenin Staining

Related Articles