هنا، نحن تصف 3 نماذج الإصابة الزرد الكبار واستخدامها مجتمعة مع العلاج بالعقاقير المثبطة للمناعة. نقدم التوجيه على تصوير لتجديد الأنسجة وكشف تمعدن العظام فيه.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نماذج الإصابة الزرد الكبار دراسة آثار البردنيزولون في تجديد أنسجة العظام
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الزرد قادرون على تجديد الأجهزة المختلفة، بما في ذلك الملاحق (زعانف) بعد بتر الأطراف. وهذا ينطوي على تجديد العظام، والتي ريجرووس خلال أسبوعين تقريبا بعد الإصابة. وعلاوة على ذلك، الزرد قادرون على شفاء العظام سريعاً بعد تريبانيشن الجمجمة، وإصلاح الكسور التي يمكن إدخالها بسهولة إلى أشعة الزعنفة عظمى الزرد. تمثل هذه فحوصات الإصابة ممكن نماذج تجريبية لاختبار تأثير المخدرات التي تدار على سرعة تشكيل العظام. هنا، نحن تصف استخدام هذه النماذج إصابة 3 واستخدامها مجتمعة مع العلاج جلوكوكورتيكويد المنهجية، التي تمارس الآثار المثبطة وكآبته العظام. نحن توفير سير عمل حول كيفية التحضير للمعالجة المثبطة للمناعة في الزرد الكبار وتوضح كيفية إجراء البتر زعنفة، تريبانيشن كالفاريال العظام والكسور زعنفة، ووصف كيف يؤثر استخدام الكورتيزون كلا تشكيل العظام خلايا الاوستيوبلاستس وخلايا لنسب الوحيدات/بلعم كجزء من الحصانة الفطرية في أنسجة العظام.
المقدمة
الزرد تمثل نموذجا حيوان قوية لدراسة التنمية الفقاريات والمرض. وهذا يرجع إلى أن هم الحيوانات الصغيرة التي تتكاثر في شكل جيد للغاية وأن على الجينوم التسلسل الكامل وقابلة للتلاعب1. وتشمل المزايا الأخرى خيار القيام بتصوير العيش المتواصل في مراحل مختلفة، بما في ذلك التصوير في فيفو الزرد الكبار2، والقدرة على أداء شاشات المخدرات عالية الإنتاجية في الزرد اليرقات3. بالإضافة إلى ذلك، الزرد تملك قدرة التجدد عالية في مجموعة متنوعة من الأجهزة والأنسجة بما في ذلك العظام، وهكذا تكون بمثابة نظام مفيد لدراسة أمراض الهيكل العظمى وإصلاح4،5.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد أقر جميع الأساليب الموصوفة هنا درسدن لانديسديريكتيون (السماح بالأرقام: "من الألف إلى الياء" د 24-9168.11-1/2008-1، "من الألف إلى الياء" 24-9168.11-1/2011-52، "من الألف إلى الياء" 24-9168.11-1/2013-5، "من الألف إلى الياء" 24-9168.11-1/2013-14، "من الألف إلى الياء" DD24.1--5131/354/87).
1-إعداد مواد وحلول
ملاحظة: بريدنيسولون، مثل الكورتيزون الأخرى، يؤدي إلى الكبت المناعي. وبالتالي، يجب اتخاذ الاحتياطات للوقاية من العدوى في الحيوانات المعالجة أثناء التجربة. لهذا الغاية، اﻷوتوكﻻف الزجاج وير و 'أسماك المياه' (أي المياه التي تستخدم في تربية الكبار الزرد) قبل البدء التجربة.
- حساب عدد الزرد التي ستس....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقد استخدم البروتوكول المعروضة هنا مرارا وتكرارا للحث على تكوين العظام السريع أثناء التجديد الزرد زعنفة والجمجمة10،،من1116. في تركيبة مع الأسلوب الذي عرضت الإدارة البردنيزولون، يمكن متابعة الدراسات المتعلقة بالآثار في البردنيزولون أثناء تجديد العظام. على سبيل المثال، يمكن إجراء دراسات بشأن تكوين العظام وتمعدن في تجديد. البردنيزولون، كسائر19،الكورتيزون
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد أثبتت الزرد مفيدة في الهيكل العظمى للبحث فيما يتعلق بالعديد. طفرات مختارة تحاكي جوانب أمراض البشرية مثل تكون العظم الناقص أو الفصال العظمى23،24،25،،من2627، واليرقات وكذلك جداول تستخدم تحديد المجمعات الابتنائية العظام في جزيء صغير شاشات7،،من2829. علاجات الزرد بالأد.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
كان يؤيد هذه الدراسة بمنحه مقدمة من مركز "درسدن العلاجات التجدد" ("الزرد كنموذج لكشف آليات فقدان العظام التي يسببها جلوكوكورتيكويد") وعلاوة على ذلك بمنحه قدرها الأوقيانوغرافية الألمانية (ترانسريجيو 67، المشروع 387653785) للمفتاح الخارجي. ونحن ممتنون جداً كاثلين يان وتشيكورو Avinash للتوجيه والمساعدة على أداء trepanation كالفاريا وكسور في أشعة الزعنفة عظمى. تجارب صممت، وتنفيذها وتحليلها من قبل كجم وكيه. FK كتب المخطوطة. كما نود أن نشكر لامبرت كاترين وكوداك نيكول، وأعضاء آخرين من مختبرات نوف والعلامة التجارية للمساعدة التقنية ومناقشة. كما يذهب شكرنا لماريكا فيشر ويتكا ميتشلينج لرعاية الأسماك الممتازة ونوف هنرييت وكوري جوش لتصحيح التجارب المطبعية المخطوط.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| بريدنيزولون | سيجما ألدريتش | P6004 | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | سيجما ألدريتش | D8418 | |
| إيثيل -3-أمينوبنزوات ميثان سولفونات (MS-222) | سيجما ألدريتش | A5040 | |
| ملقط حاد | Aesculap | BD027R | |
| ملقط دقيق | دومون | 91150-20 | |
| مشرط | 5518059 | ||
| Agarose | Biozym | 840004 | |
| (0.3 مم × 13 مم) | BD Beckton Dickinson | 30400 | |
| Micro | Cell Point Scientific | 67-1000 | موزعة e.< / em> بواسطة Harvard Apparatus |
| Steel Burrs (0.5 & micro; م القطر) | أدوات العلوم | الدقيقة 19007-05 | |
| Artemia ssp.< / em> | Sanders | 425GR | |
| ماصة باستور (بلاستيك ، باستيت) | Alpha Labs | LW4111 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Alizarin red S مسحوق | Sigma-Aldrich | A5533 | |
| Alcian blue 8 GX | سيجما ألدريتش | A5268 | |
| كالسين | سيجما ألدريتش | C0875 | |
| التربسين | سيجما ألدريتش | T7409 | |
| مجهر مجسم | لايكا | MZ16 FA | مع كاميرا QIMAGING RETIGA-SRV |
| مجهر مجسم | أوليمبوس | MVX10 | مع كاميرا أوليمبوس DP71 أو DP80 |
المراجع
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).
- Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish. Nature Protocols.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
