Method Article

التصور للهجرة الخلية عرضية في تيكتوم الألياف الضوئية النامية في الفرخ

DOI:

10.3791/58506

⸱

October 24th, 2018

 ,  , 
1Department of Neuroanatomy and Embryology, School of Medicine, Fukushima Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف لنا طرق وضع العلامات الفلورية عرضية ترحيل الخلايا انهانسر، ولتصوير الوقت الفاصل بين حركة خلية مسماة في ثقافة مسطحة-جبل من أجل تصور ترحيل الخلية السلوك في تيكتوم الألياف الضوئية النامية في الفرخ .

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الوقت الفاصل بين التصوير وسيلة قوية لتحليل سلوك الخلية ترحيل. بعد خلية الفلورسنت وسم، يمكن أن تسجل حركة الخلايا المسماة في الثقافة تحت المجهر الفيديو. لتحليل الهجرة الخلية في الدماغ، ثقافة شريحة يستخدم عادة لمراقبة الهجرة الخلية موازية للمقطع شريحة، مثل الهجرة الخلية شعاعي. ومع ذلك، يمكن الحصول على معلومات محدودة من أسلوب ثقافة شريحة لتحليل الهجرة الخلية عمودي إلى قسم الشريحة، مثل الهجرة الخلية عرضية. نقدم هنا، البروتوكولات للوقت الفاصل بين التصوير لتصور الهجرة الخلية عرضية في تيكتوم الألياف الضوئية النامية في الفرخ. مزيج من وسم الخلية انهانسر في ovo وثقافة مسطحة-جبل لاحقة على إدراج الثقافة الخلية تمكن من كشف ترحيل حركة الخلية في الطائرة الأفقي. وعلاوة على ذلك، لدينا أسلوب يسهل الكشف عن سلوك الخلية الفردية والعمل الجماعي لمجموعة من الخلايا على المدى الطويل. يمكن تطبيق هذا الأسلوب يحتمل أن تكون للكشف عن تغيير متسلسلة المسمى فلوري-البنية الصغرى، بما في ذلك استطالة محواري في تشريد الأنسجة أو الخلايا العصبية في الأنسجة غير العصبية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

دراسة الهجرة الخلية تحرز تقدما مع تقدم تقنية التصوير الحي. بعد خلية الفلورسنت وسم، يمكن أن تسجل حركة الزمانية للخلايا المسماة في صحن الثقافة أو في فيفو تحت المجهر الفيديو. في دراسة التنمية العصبية، تم تحليل التغيرات المورفولوجية لترحيل الخلايا أو التمطيط محاور عصبية استخدام الوقت الفاصل بين التصوير. للتصوير بفعالية، من الضروري لتطبيق أسلوب مناسب لإعداد وضع العلامات وأنسجة الخلية الفلورسنت، استناداً إلى الغرض من التجربة والتحليل. لتحليل الهجرة الخلية في الدماغ، ثقافة شريحة تستخدم عادة لمراقبة الهجرة الخلية موازية للمقطع شريحة، مثل خلية شعاعي الهجرة1،،من23. كما يستخدم ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. انهانسر في Ovo

  1. تحضير التعبير بلازميد الحمض النووي للعلامات الفلورية في تركيزات عالية. عزل الحمض النووي من 200 مل ثقافة البكتيرية بواسطة الأسلوب تحلل القلوية باستخدام أعمدة شاردة-الصرف وفقا للبروتوكول الخاص بالشركة المصنعة (جدول المواد). مزيج بكاجس-اجفب وبكاجس-متشيرينوك بتركيز 4 ميكروغرام/ميليلتر كل نهائي.
    ملاحظة: قد تكون خالية من الذيفان تنقية الحمض النووي بلازميد المفضل انهانسر.
  2. احتضان بيض الدجاج خصبة أفقياً في 38 درجة مئوية في الرطوبة النسبية 70%.
  3. بعد يومين، القضاء على 5 مل الزلال (البيض) من الجانب أشار البيض باستخدام محقنة 20 مل مع إبرة قياس 18 وختم ثقب الإبرة مع الشريط.
  4. قص الجزء العلوي من وعاء....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويبين الشكل 2 الهجرة عرضية سطحية تصور في ثقافة مسطحة يشن في وقت المنقضي (0، 9، 18، ح 27) بعد بداية التسجيل. فيلم 1 فيلم الوقت الفاصل بين 10 دقيقة--الفترات الزمنية خلال فترة 28 ساعة و 50 دقيقة. الإطار المحدد للتركيز على الخلايا المهاجرة من المسمى الزاوية السفلية اليسرى من الإطار إلى الفضاء غير مسمى (الشكل 3A). حركة كتلة من الخلايا المهاجرة (التجارة والنقل؛ واللوحة اليسرى العلوية، فيلم

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكول هو موضح أعلاه هو الأمثل للكشف عن الهجرة الخلية في الطبقات السطحية6،8. كان قابلاً للكشف عن الطبقة الوسطى الهجرة تيارات (فيلم 5)6،7، فقط عن طريق تحويل توقيت انهانسر (E5.5 إلى E4.5) وظهور ثقافة والتصوير (E7.0 إلى E6.0).

الإجراء قدم تتكون من خلية وسم انهانسر في ovoوالثقافة جبل مسطحة والوقت الفاصل بين التصوير [كنفوكل] (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا العمل وأيده عدد المنح كاكينهي JSPS 15 ك 06740 إلى Y.W.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<قوية>مواد< / قوية> NucleoBond
Xtra Midi Plus EFMACHEREY-NAGEL740422.5طقم تنقية الحمض النووي بلازميد خال من السموم
20 مل حقنةTERUMOSS-20ESZ
18 إبرة قياسTERUMONN-1838R
Fast GreenWako061-00031
100x البنسلين والستربتومايسينجيبكو15140-122
أنبوب شعريزجاجي NarishigeG-1
إدراج ثقافة الخلاياMilliporeMillicell CM-ORG
LamininSIGMAL2020طلاء الثقافة إدراج
معهد الببتيد poly-L-Lysine3075طلاء من إدراج
طبق القاع الزجاجيماتسوناميD11130H
أوبتي-ميمجيبكو31985-070وسط ثقافة
F12جيبكو11765-054مزرعة متوسطة
مصل بقري الجنينجيبكو12483
مصل كتكوتثقافة جيبكو16110082متوسط ثقافة
10xHBSSجيبكو14065-056
سكين الجراحة المجهريةتعاون التخصصات الجراحية72-1501
NameCompanyCatalog NumberComments
Equipment
Curved مقصAS ONENO.11
معالج الماصةالدقيقة SUTTER INSTRUMENTP97 / IVF
من نوع الملقطBEXLF646P3x3
مولد النبضBEXCUY21EXالثقب الكهربائي
المجهر المجسمLeicaMZ16F
مجهر مضان مقلوبOlympusIX81
تحكمالغازتوكينMIGM / OL-2
وحدة التحكم في درجة الحرارةTokai HitMI-IBC
وحدة ليزر متحدة البؤرأوليمبوسFV300
الداخلية متوسط

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Marín, O., Rubenstein, J. L. R. Cell migration in the forebrain. Annual Reviews of Neuroscience. 26, 441-483 (2003).
  2. Nadarajah, B., Alifragis, P., Wong, R. O. L., Parnavelas, J. G. Neuronal migration in the developing cerebral cortex: Observations based on real-time ima....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Tangential Cell MigrationChick Optic TectumTime lapse ImagingIn Ovo ElectroporationFlat mount CultureConfocal MicroscopyCell Culture InsertFluorescent LabelingNeuronal Cell MigrationParticle Tracking

Related Articles