بروتوكول شكلي للتقييم الموضوعي للسلوك الكيسة أثناء التزجيج والخطوات الاحترار

Summary

وهنا يقدم بروتوكول الوقت الفاصل بين شكلي لمتابعة كثافة انكماش الكيسة والتوسع في الطاقة المتجددة خلال التدخلات بريفيتريفيكيشن والانتعاش بعد انتهاء الاحترار. من الممكن في مختبرات الإخصاب في المختبر مجهزة بالمجاهر الوقت الفاصل بين تطبيق البروتوكول ويوصي بتطوير طريقة التزجيج الكيسة الأمثل.

Abstract

توضح هذه المقالة طريقة noninvasive الكيسة مورفوميتري استناداً إلى الوقت الفاصل بين التصوير الميكروفيلمي للرصد الدقيق لحجم الكيسة تغيير خلال المراحل الفردية قبل وبعد عمليات التزجيج. يمكن أن تكون الطريقة مفيدة في البحث عن توقيت المثلى الكيسة التعرض لتركيزات مختلفة من المنتجة عن طريق مراقبة انكماش الكيسة وإعادة-التوسع في مختلف قبل والتزجيج بعد انتهاء مراحل. يمكن أن يكون الأمثل مع هذه المنهجية، البروتوكول التزجيج الكيسة. لمظهر أفضل من فائدة هذا الأسلوب شكلي، تتم مقارنة البروتوكولين إعداد الكيسة مختلفة التزجيج؛ واحد مع استخدام blastocoel اصطناعية الانهيار وآخر دون هذا التدخل قبل التزجيج. كل التغييرات في الحجم blastocysts متبوعاً بالوقت الفاصل بين التصوير الميكروفيلمي ويقاس بأدوات برامج تحرير الصور. يتم أخذ القياسات كل 20 ثانية في مراحل بريفيتريفيكيشن وكل 5 دقائق في فترة ما بعد الاحترار. يتم عرض التغييرات أبعاد الكيسة كل وحدة وقت رسومياً في الرسومات التخطيطية لخط. وتبين النتائج مرحلة بريفيتريفيكيشن الموازنة طويلة فيها الكيسة سليمة ينكمش أولاً وثم ببطء الغيارات blastocoel، دخول التزجيج مع blastocoel مملوءة بسائل. الكيسة أنهار مصطنع لا يزال في مرحلته منكمش يمر بمرحلة الموازنة كاملة. وخلال مرحلة التزجيج، أيضا لا يتغير حجمه. حيث يظهر مورفوميتري الكيسة حجم ثابت من blastocysts مصطنع أنهار خلال الخطوة بريفيتريفيكيشن، ويبدو أن هذه المرحلة يمكن أن يكون أقصر. وينص البروتوكول على وصف العديد من معلمات إضافية النسبية للسلوك الكيسة أثناء وبعد تجميد بناء على سرعة وكثافة التغييرات في الحجم، وعدد تقلصات blastocoel الجزئي أو الكلي الكيسة ينهار، والوقت إجمالي blastocoel re-توسع أو الوقت الفقس.

Introduction

تجميد الأجنة البشرية برييمبلانتيشن من برنامج الإخصاب في الأنابيب (التلقيح الصناعي) في الوقت الحاضر ممارسة روتينية في معظم مختبرات التلقيح الاصطناعي. الجنين بطيء تجميد الأسلوب بدأ استخدامها سريرياً في عام 1985، مع إدخال المنتجة محددة والمجمدات الكمبيوتر التي تسيطر عليها، مما مكن التبريد التي تسيطر عليها من الأجنة وصولاً إلى-7 درجة مئوية، وعندما حملت نويات الثلج (البذور) في المحيطة كريوبروتيكتيفي متوسطة¹. بالتبريد المستمر، أن ينمو بلورات الثلج، مما تسبب في هايبروسمولاليتي الكسر السائل المتبقية، وبالتالي فالجفاف وتقلص الخلايا الجنينية. -30 درجة مئوية أو-80 درجة مئوية، أن سقطت الأجنة في النيتروجين السائل لتخزين أطول. ويمكن ملاحظة ما كان يح....

Protocol

جميع الأساليب الموصوفة هنا عليها اللجنة الوطنية للأخلاقيات الطبية في 19 أبريل 2016 (رقم 0120-204/2016 – 2).

1-إنشاء نظام تسجيل المجهر

1. إيقاف تشغيل لوحة تدفئة المجهر.
2. قبل أي علاج، أخذ لقطة الكيسة تحت مجهر مقلوب مجهزة بالكاميرا. تذكر أن تقوم بملاحظة التكبير التي تم تسجيلها في الكيسة.

2-اختيار وبريبريباريشن من بلاستوسيستس التزجيج

1. حدد فقط blastocysts يوم 5 أو 6 يوم كامل الموسعة لنعد مع على الأقل عدد قليل من الخلايا (ICM) كتلة الخلية الداخلية وتروفيكتوديرم متماسكة.
2. للمعالجة بالليزر بلاستوسيستس مع blastocoel منهارة، موجه الموضوع الكيسة إلى نبضة ليزر قصيرة (0.4-0.7 مللي) حفرة....

Results

في تظاهرة، أظهرنا مورفوديناميكس الكيسة في بريفيتريفيكيشن واحدة فقط ومرحلة ما بعد الاحترار. فرق في حجم الكيسة نهاية مرحلة الموازنة، وفي بداية فترة نقاهة في الثقافة المتوسطة أظهرت كثافة انكماش الجنين، الذي، في الواقع، كثافة للحفاظ على الجنين ضد تبلور الجليد.

الكيسة سليمة كما يمكن ملاحظة ذلك من الشكل 1 و الفيديو 1، لم ينهار تماما في الحل الموازنة. بلاستوكول التعاقد جزئيا فقط، ولكن في غ.......

Discussion

بروتوكول لمراقبة مورفوديناميكس الكيسة أثناء وبعد تجميد يمكن أيضا تنفذ باستخدام أدوات البرمجيات من الشركات المصنعة الأخرى والصكوك المماثلة. الوقت الفاصل بين أنظمة معدلة لعلم الأجنة السماح بالرصد المستمر للتنمية الجنين. وكان الغرض من هذا العمل لإدخال التحديد الكمي للسلوك الكيسة أثناء إعداد بلاستوسيستس التزجيج وبعد عن الاحترار. وقد تم ذلك بهدف قياس التغيرات في التشكل في مقياس الوقت. ويمكن تحليل النتائج التي تم الحصول عليها من هذه القياسات رياضيا ومقارنة مع نتائج أخرى. بين المعلمات التي يمكن اتباعها من قبل بروتوكول وصف التغي.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
المجهر المقلوب Eclipse TE2000-U	نيكون, اليابان	/
نظام الليزر Saturn 5	, Origio, الدنمارك	/
الكاميرا الرقمية DC1	أدوات البحث, أوريجيو, الدنمارك	/
الكاميرا الرقمية DC2	أدوات البحث, أوريجيو, الدنمارك	/
البحث Cronus 3.7	, أوريجيو, الدنمارك	/	برنامج تسجيل المجهر
حاضنة مع 6٪ CO2 ، 5٪ O2	Binder ، ألمانيا	/
Primo Vision المجهر	Vitrolife ، السويد	16600
Primo Vision Capture software	Vitrolife ، السويد	16608	برنامج تسجيل الفاصل الزمني
Adobe Photoshop CS6 Extended Software	Adobe Systems Incorporated ، الولايات المتحدة الأمريكية	/	برنامج تحليل
الفيديو VirtualDub	أفيري لي	/	برامج تحرير
الفيديو Microsoft Office Excell	مايكروسوفت ، الولايات المتحدة الأمريكية	/	محرر جداول البيانات
PrimoVision طبق ثقافة	Vitrolife ، السويد	16604
G2-plus متوسط	Vitrolife ، السويد	10132	وسط زراعة أجنة مرحلة الكيسة الأريمية
ألبومينات المصل البشري	في الجسم الحضالبي ، السويد	10064
زيت البارافين	في الجسم الزجاجي ، السويد	10029
حل التوازن المتوسط	إيرفين العلمية ، أيرلندا	90131
محلول التزجيج المتوسط	إيرفين العلمية ، أيرلندا	90132
محلول الذوبان المتوسط	إيرفين العلمية ، أيرلندا	90134
محلول التخفيف المتوسط	إيرفين العلمية ، أيرلندا	90135
الغسيل وسط	إيرفين العلمية ، أيرلندا	90136
قش تزجيج HSV	نظام CryoBio ، فرنسا	025246 ، 025249 ، 025250 ، 025248
النيتروجين	السائل /
وعاء التبريد Biosafe 120 MD & beta ؛	Cryotherm ، ألمانيا	229286
Cryo tank	Cryotherm ، ألمانيا
ملقط	/	/
مقصات	/	/
Pippete للتلاعب بالكيسة الأريمية	Gynetics ، بلجيكا	ID275 / 10	قطر 275 وميكرو ؛ م
ماصة لتعرية البويضات	Vitromed ، ألمانيا	V-DEN-135	قطر 135 & مايكرو ؛ m
Pipettor EZ-Grip	Research Instruments	7-72-2802
مؤقت الفاصل الزمني الرقمي Assistent	Glaswarenfabrik Karl Hecht	41977010
IBM SPSS Statistics 21	IBM، الولايات المتحدة الأمريكية	/	برنامج التحليل الإحصائي
متجرد الأسلاك ذاتي	الضبط Knipex، ألمانيا	1262180